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Efeito da terapia fotodinâmica sobre biofilme de Enterococcus faecalis e estrutura dentinária / Effect of photodynamic therapy on Enterococcus faecalis biofilm and dentin structure

Alves, Denise Ramos Silveira 05 May 2016 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-19T11:13:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Denise Ramos Silveira Alves - 2016.pdf: 1503752 bytes, checksum: 84aa2ffe80e8b6013fb3b3cbdf580374 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-19T11:13:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Denise Ramos Silveira Alves - 2016.pdf: 1503752 bytes, checksum: 84aa2ffe80e8b6013fb3b3cbdf580374 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T11:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Denise Ramos Silveira Alves - 2016.pdf: 1503752 bytes, checksum: 84aa2ffe80e8b6013fb3b3cbdf580374 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-05-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Objective: Evaluate the effect of photodynamic therapy (PDT) on Enterococcus faecalis biofilm in infected root canals and on dentin structure. Methods: Twenty-one root canals of a sample of 24 extracted single-rooted human teeth were infected by E. faecalis for 60 days to form biofilm. The antimicrobial strategies tested were (n=3 in each group): root canal preparation using NiTi rotary instruments, 2.5% NaOCl and 17% EDTA irrigation, and PDT with 0.01% methylene blue (group I) or 0.01% malachite green (group II); root canal preparation using NiTi rotary instruments, 2.5% NaOCl and 17% EDTA irrigation, and PDT with 0.01% methylene blue (group III); PDT with 0.01% methylene blue without root canal preparation (group IV); root canal preparation using NiTi rotary instruments, 22.5% NaOCl and 17% EDTA irrigation, and no PDT (group V); 2.5% NaOCl irrigation with no root canal preparation, and 17% EDTA irrigation (group VI); positive control (group VII). Three roots were not infected and were used as negative controls (group VIII). Samples for microbiological tests were collected using three sterile paper points, later stored in BHI and incubated at 37o C for 48 hours at three time points: before (S1) and after (S2) root canal preparation, and after PDT application (S3). Bacterial growth was analyzed according to turbidity of culture medium, presence of bacteria, and spectrophotometric optical density (nm). Specimens were sectioned and prepared for SEM analysis of dentin structure. Results: Bacteria were found at S1, S2 and S3 in all experimental groups. Optical density of culture media at S2 and S3 in groups I, II and III were lower than at S1, but not statistically different. Optical density of culture media at S2 was 28.70% and 24.67% lower than at S1 in groups I and II; after PDT, optical density was 90.00% (group I) and 37.30% (group II) lower. In group III, it was 97.70% lower at S2 and an additional 92.00% lower after PDT. In group IV, optical density increase 3.2%. Dentin analysis after PDT revealed areas of melting and recrystallization, peritubular dentin projections, intertubular dentin erosion and fusion of dentinal tubule openings, which made dentin surface irregular. Some dentinal tubules were obliterated, and there were changes in the shape of their openings. Conclusion: PDT applied after root canal preparation using manual or rotary files was not effective in eliminating E. faecalis completely. PDT changed dentin structure and resulted in dentin melting and recrystallization, as well as in dentinal tubule erosion and obliteration. / Objetivo: Avaliar o efeito da terapia fotodinâmica sobre biofilme de Enterococcus faecalis em canais radiculares infectados e sobre a estrutura dentinária. Metodologia: O estudo foi desenvolvido em vinte e quatro dentes humanos unirradiculares extraídos, dos quais vinte e um canais radiculares foram infectados com E. faecalis por 60 dias para formação de biofilme. As estratégias antimicrobianas testadas foram (n=3): preparo do canal radicular com instrumentos rotatórios de NiTi/ NaOCl 2,5%/ irrigação final EDTA 17%, e TFD com azul de metileno 0,01% (Grupo I) ou verde malaquita 0,01% (Grupo II); preparo do canal radicular com instrumentos manuais de aço inox/ NaOCl 2,5%/ irrigação final EDTA 17% e TFD com azul de metileno 0,01% (Grupo III); TFD com azul de metileno 0,01% sem preparo prévio do canal radicular (Grupo IV); preparo do canal radicular com instrumentos rotatórios de NiTi/ NaOCl 2,5%/ irrigação final EDTA 17% sem emprego da TFD (Grupo V); irrigação com hipoclorito de sódio 2,5% sem preparo do canal radicular/ irrigação final EDTA 17% (Grupo VI); controle positivo (Grupo VII). Três espécimes não foram contaminados, sendo utilizados como controle negativo (Grupo VIII). Coletas microbiológicas foram realizadas, antes (CM1) e após (CM2) o preparo do canal radicular, e depois da aplicação da TFD (CM3), utilizando três pontas de papel absorventes esterilizadas, posteriormente armazenadas em BHI e a seguir , incubadas a 37o C por 48 horas. O crescimento bacteriano foi analisado pela turbidez do meio de cultura, sendo determinada a presença ou ausência de bactérias, e pela densidade óptica do meio de cultura, interpretada por espectrofotometria (nm). A seguir, os espécimes foram seccionados e preparados para análise da estrutura dentinária por meio de imagens de MEV. Resultados: A presença de bactérias foi verificada na CM1 , CM2 e CM3 de todos os grupos experimentais. As medidas da densidade óptica dos meios de cultura das CM2 e CM3 nos grupos experimentais I, II e III apresentaram redução quando comparada a CM1, porém não significativa estatisticamente. Nos Grupos I e II a densidade óptica do meio de cultura foi reduzida em 28.70% e 24,67% em CM2, respectivamente. Após a TFD, a redução da densidade óptica foi 90,00% (Grupo I) e 37,70% (Grupo II). No Grupo III, a redução da densidade óptica do meio de cultura foi de 97,70% na CM2, com redução adicional de 92,00% após TFD. No Grupo IV foi verificado aumento da densidade óptica do meio de cultura em 3,2%. A análise da dentina evidenciou, nos grupos submetidos à TFD, áreas de derretimento e recristalização, projeção da dentina peritubular, e regiões com erosão da dentina intertubular e união das entradas dos túbulos dentinários, tornando a superfície dentinária irregular. Obliteração de túbulos dentinários com alteração do contorno de suas entradas também foi verificada. Conclusão: A TFD, após preparo do canal radicular com sistema rotatório ou manual, não foi efetiva na eliminação completa de E. faecalis, e alterou a estrutura dentinária, determinando derretimento e recristalização de dentina, erosão e obliteração de túbulos dentinários.

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