Made available in DSpace on 2014-06-12T18:03:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3708_1.pdf: 2384941 bytes, checksum: eb88b5415a7535a2dd1ff4be7f2c1781 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Sistemas de expressão heteróloga em Saccharomyces cerevisiae têm sido descritos, porém apresentam algumas desvantagens quando utilizados em linhagens industriais: (1) a marca de seleção é baseada em supressão de auxotrofia ou resistência a compostos químicos; (2) a marca de seleção nem sempre é excisável; (3) o alvo de integração geralmente não é multicópia; (4) os vetores ainda possuem seqüência bacteriana. Neste trabalho, construímos um novo sistema para modificação de linhagens industriais de S. cerevisiae que obedecem aos requisitos para utilização de OGM s na indústria: linhagem modificada sem marca de resistência a antibióticos, não portadora de seqüências de origem bacteriana e seqüências integradas derivadas de organismos GRAS (Generally recognized as safe). Este sistema pFB, composto por dois vetores pFB-LAC4 e pFB-LAC12, combina o método de seleção por complementação metabólica para lactose com a utilização do DNA ribossomal como alvo de integração por recombinação homóloga resultando num sistema de modificação com seleção limpa (ecologicamente correta), de integrações estáveis e re-utilizável numa mesma linhagem. Este sistema permite a modificação genética de linhagens industriais de S. cerevisiae para expressão heteróloga e/ou modificações de vias metabólicas permitindo o melhoramento ou introdução de vias bioquímicas nestas linhagens.