Universiẗat, Diss., 2005--Würzburg.

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Resumo: O leite e seus derivados são bons meios para o desenvolvimento de microorganismos patogênicos e deteriorantes, exigindo cuidados rigorosos com a ordenha, processamento e armazenamento. Entre os vários grupos de bactérias que podem ser desenvolvidas em leite refrigerado cru, Yersinia enterocolitica, um enteropatógeno invasivo para humanos, é uma delas. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante a apendicite. Para avaliar a prevalência de Yersinia enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, pelas análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Yersinia enterocolitica pelas provas microbiológicas. A análise de PCR revelou seis (6) amostras positivas para Yersinia enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, presente em cepas virulentas e avirulentas. Portanto, ainda que o patógeno estudado não represente um risco potencial nas amostras de leite analisadas neste estudo, foram observados diversos fatores de risco nas fazendas visitadas e uma grande contaminação da microbiota presente no leite, podendo-se afirmar que a qualidade do leite cru em tanques de expansão das fazendas avaliadas é de risco para a saúde públi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-02-15T14:41:07Z No. of bitstreams: 1 PGCA15MA190.pdf: 885818 bytes, checksum: 21660458cb53ec0336571690a0d7c0f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-15T14:41:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA190.pdf: 885818 bytes, checksum: 21660458cb53ec0336571690a0d7c0f7 (MD5) Previous issue date: 2015-12-04 / Yersinia enterocolitica is a Gram-negative bacterium and belongs to the family Enterobacteriaceae. It is an emerging pathogen already been detected worldwide. As a psychrotrophic bacteria, it becomes important risk factor for the consumer. Because of the importance of Y. enterocolitica, and great pork production in Santa Catarina Midwest region aimed to determine the presence of Y. enterocolitica in pigs slaughtered in the region. To this material were collected from 44 pigs, such as tonsils, submandibular lymph nodes, mesenteric lymph nodes, inguinal lymph nodes and head meat, totaling 220 samples. In the laboratory, samples were prepared with selective enrichment broth PSB homogenized for 2 minutes and further incubated at a temperature between 22 and 25 ° C with stirring for 72 hours, the sample of the broth was PSB Exhaust striated surface Agar CIN. Colonies characteristics were confirmed with "Serum Yersinia enterocolitica Poly", and biochemical test Bactray I and II. Y. enterocolitica was isolated in 6 samples from tonsils, 3 mesenteric lymph nodes, submandibular lymph nodes 2, 1 inguinal lymph node and 1 sample collected of the head meat, totaling 13 positive samples (5.91%) of the 220 collected. In eleven of carcasses (25%) was isolated from Y. enterocolitica at least one of the locations analyzed. The results showed that Y. enterocolitica is present in clinically healthy herd of animals of the Midwest of Santa Catarina and that there were housing the contamination in a meat sample head suggesting a risk to consumer health if they eat contaminated meat with this pathogen / Yersinia enterocolitica é uma bactéria Gram negativa e pertencente à família Enterobacteriaceae. Trata-se de um patógeno emergente e já detectado em todo o mundo. Por ser uma bactéria psicrotrófica, torna-se importante fator de risco para o consumidor. Devido a importância de Y. enterocolitica, e a grande produção de carne suína na região do meio oeste catarinense, objetivou-se determinar a presença de Y. enterocolitica em suínos abatidos em frigoríficos da região. Para isso foram coletados materiais de 44 suínos, como tonsilas, linfonodos submandibulares, linfonodos mesentéricos, linfonodos inguinais e carne da cabeça, totalizando 220 amostras. No laboratório, as amostras foram preparadas com caldo de enriquecimento seletivo PSB, homogeneizadas por 2 minutos e após incubadas em temperatura entre 22 e 25ºC, por 72h com agitação, a amostra do Caldo PSB foi estriada por esgotamento em superfície de Agar CIN. Colônias características foram confirmadas com o “Soro Yersinia enterocolitica Poli”, e com teste bioquímico Bactray I e II. Y. enterocolitica foi isolada em 6 amostras de tonsilas, 3 de linfonodos mesentéricos, 2 de linfonodos submandibulares, 1 de linfonodo inguinal e 1 de amostra coletada da carne de cabeça, totalizando 13 amostras positivas (5,91%) das 220 coletadas. Em onze carcaças, (25%) Y. enterocolitica foi isolada em pelo menos um dos locais analisados. Os resultados mostraram que Y. enterocolitica está presente no rebanho de animais clinicamente saudáveis da região meio oeste de Santa Catarina e que houve contaminação da carcaça em uma amostra de carne da cabeça o que sugere um risco para a saúde dos consumidores se ingerirem carne contaminada com esse patógeno

Le bacille de la peste, Yersinia pestis, a une vie parasitaire au cours de laquelle il oscille le plus souvent d’un hôte mammifère à l’autre par l’intermédiaire des puces, et plus rarement par voie aéroportée. Comme tel, Yersinia pestis doit rapidement ressentir et répondre aux variations brutales de son environnement afin se maintenir dans la nature. C’est pourquoi, nous avons étudié le rôle des systèmes de régulation à deux composants dans la peste compte tenu que ces systèmes sont connus pour avoir un rôle clef dans l’adaptation des bactéries aux changements environnementaux. En plus du système PhoP-PhoQ dont l’importance chez le mammifère et la puce a été précédemment révélée, nous avons découvert que quatre systèmes sont requis pour le cycle de la peste. Plus particulièrement, l'un d'entre eux permet une colonisation optimale du tube digestif de la puce alors que les 3 autres systèmes sont impliqués dans la production de biofilm, un processus indispensable à une transmission optimale du bacille par les puces. Nous avons aussi découvert que le système OmpR-EnvZ est l’unique système, en plus du système PhoP-PhoQ, requis pour la production de la peste bubonique, septicémique et pulmonaire. Nos travaux, menés in vitro, ex-vivo et in vivo suggèrent que le rôle du système OmpR-EnvZ serait de protéger la bactérie contre les effecteurs toxiques sécrétés par les polynucléaires neutrophiles dans les tissus et, ceci tout au long du processus infectieux. / Plague bacillus, Yersinia pestis has a parasitic lifestyle in which it is mainly transmitted between mammilian hosts through the bite of infected fleas, and in rare cases through infected droplets. Thus, Yersinia pestis must rapidly sense and respond to wide and brutal changes of its environment in order to survive. We aimed at decipher the role of two component regulatory systems in plague, as they are known to be key players in bacterial adaptation to the environment. In addition to the already described PhoP-PhoQ system, we found out that four systems are required for plague cycle. We showed that one of these systems is important for an optimal colonization of the flea's digestive tract, while the three others are required for biofilm production, an essential step in the bacillus transmission by the fleas. We also found out that OmpR-EnvZ, in addition to PhoP-PhoQ, is the only one to be important to produce bubonic, septicemic and pulmonary plague. Our in vitro, ex-vivo and in vivo works suggest that the OmpR-EnvZ system would be to protect bacterial against toxic effectors that are produced by polymorphonuclear leukocytes all along the infectious process.

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-03-15T13:03:38Z No. of bitstreams: 1 PGCA16MA207.pdf: 1011799 bytes, checksum: cc3f945283e9dbd2cb016b09c05e7f70 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-15T13:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA16MA207.pdf: 1011799 bytes, checksum: cc3f945283e9dbd2cb016b09c05e7f70 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Capes / Yersinina enterocolitica is a Gram-negative bacteria with zoonotic potential. It is associated with the occurrence of enteric diseases in humans. Pigs are considered the main source of Y. enterocolitica and the bacteria is mainly found in the pig’s palatine tonsils. The objective of this study was to evaluate the occurrence of pathogenic Y. enterocolitica in palatine tonsils of healthy pigs from Santa Catarina, during the slaughter process. In order to achieve this goal, a multiplex PCR technique was performed so as to detect the presence of virulence genes (ail, yadA and virF). This technique was compared to quantitative real time PCR (qPCR), only for the ail gene. Palatine tonsils were randomly collected from 400 pigs from four federally inspected slaughterhouses of the state of Santa Catarina. One positive sample was found for the three studied virulence genes, which were confirmed by DNA sequencing. The analysis of partial sequences of the three virulence genes identified three unique amino acid changes, one in the virF gene and two in YadA gene. This sample had 11.058.398 molecules/μL detected by qPCR. By comparing the two techniques, qPCR was 100 times more sensitive than standard PCR. This result shows low occurrence of pathogenic Y. enterocolitica in healthy pigs from federally inspected slaughterhouses in Santa Catarina / Yersinia enterocolitica é uma bactéria Gram-negativa emergente que possui potencial zoonótico e está associada a quadros de infecção alimentar em humanos. Os suínos são considerados o principal reservatório de Y. enterocolitica, abrigando-a principalmente nas tonsilas. Tendo em vista a carne suína como uma das mais consumidas no mundo e a importância deste agente zoonótico, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de Y. enterocolitica patogênica em tonsila de suínos no momento do abate no estado de Santa Catarina. Para isto, foi utilizada uma PCR convencional multiplex que detecta a presença de genes de virulência (ail, yadA e virF) e comparou-se esta técnica com a PCR quantitativa em tempo real (qPCR), somente para o gene ail. Foram coletadas aleatoriamente tonsilas de 400 suínos provenientes de quatro frigoríficos com inspeção federal em diferentes regiões do estado. Foi realizado o sequenciamento do DNA dos genes amplificados das amostras positivas na cPCR e posteriormente foi feita a análise filogenética. Apenas uma amostra foi positiva para os três genes pesquisados na PCR convencional, os quais foram confirmados por sequenciamento. A análise das sequências parciais dos três genes de virulência identificou três mudanças de aminoácidos exclusivas, sendo uma no gene virF e duas no gene yadA. Na qPCR esta amostra apresentou 11.058.398 moléculas/μL. Ao comparar as duas técnicas, a qPCR foi 100 vezes mais sensível que a PCR convencional. Isso demonstra uma baixa ocorrência de Y. enterocolitica patogênica em suínos sadios ao abate em frigoríficos com inspeção federal em Santa Catarina