CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Visceral Leishmaniasis (VL) is a public health problem worldwide. The urban transmission of Leishmania infantum (L. infantum) has been growing the prevalence of asymptomatic carriers of this parasite in large center. Occurrence of L. infantum transmission by blood transfusion has been reporting around the world, therefore it is important to evaluate the possibility of blood products as a potential risk for Leishmania transmission in endemic urban center. The aim of this study was to determine the prevalence of asymptomatic carriers of L. infantum among blood donors of Hemocenter of CearÃ. It was used buffy coat of 438 blood donors, from May through November 2011. The positive samples for HIV, Hepatitis B and C, syphilis, HTLV, and Chagasâ disease were excluded from the study, resulting in 351 samples. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and plasma were separated through Histopaque centrifugation. For detection of the parasite, PBMC were used to perform the microculture in NNN medium and conventional PCR. Anti-leishmanial antibodies were detected through ELISA. The prevalence of L infantum in blood donors of asymptomatic carriers was high (16.5%), with 43 (12.2%) by serology and 15 (4.3%) by PCR. The DNA sequencing confirmed to be the genus Leishmania in 6 samples analyzed. Promastigote was not detected in micro cultures. The risk of LV transmission by blood transfusion exists. In Brazil, the blood banks do not performed routine screening for Leishmania, thus, the recommendation to include screening for Leishmania or the use of pathogen inactivation technology appears to be essential in endemic areas of VL. / A Leishmaniose Visceral (LV) à considerada um problema de saÃde pÃblica mundial. Com a urbanizaÃÃo da Leishmania infantum (L. infantum), tem sido mais crescente o nÃmero de portadores assintomÃticos, em grandes centros. Em diversos lugares do mundo, tem sido relatada a ocorrÃncia de transmissÃo de L. infantum por transfusÃo sanguÃnea, como nas Ãreas de transmissÃo, os portadores assintomÃticos representam um grande contingente, à importante avaliar a possibilidade dos hemoderivados serem um risco em potencial, para a transmissÃo sanguÃnea de Leishmania. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalÃncia de infecÃÃo assintomÃtica por L. infantum em doadores de sangue do Hemocentro do CearÃ. Para estabelecer a prevalÃncia de LV entre doadores de sangue, foi avaliado creme leucocitÃrio de 438 doadores de sangue, de maio a novembro de 2011. As amostras positivas para HIV, Hepatite B e C, SÃfilis, HTLV I e II e DoenÃa de Chagas, na triagem do Hemoce, foram excluÃdas do estudo nos resultados finais, resultando um numero amostral de 351. As amostras foram centrifugadas em HistopaqueÂ, para separaÃÃo das cÃlulas mononucleares do sangue perifÃrico (CMSP) e do plasma. As CMSP foram utilizadas para a realizaÃÃo de microculturas, em meio NNN, e tambÃm para o PCR convencional. O plasma foi utilizado para a sorologia anti-Leishmania por ELISA, empregando o antÃgeno de promastigotas de L. chagasi. A prevalÃncia de doadores assintomÃticos foi de 16,5%, sendo 43 (12,2%) pela sorologia e 15 (4,3%) pelo PCR. Foi realizado o sequenciamento do DNA de parte das amostras positivas no PCR. Destes, 6 amostras foram sequenciados o DNA e todas confirmaram ser do gÃnero Leishmania. NÃo foi isolado promastigota de nenhuma cultura. A possibilidade de risco de transmissÃo de LV por transfusÃo existe. Nos bancos de sangue do Brasil nÃo à realizada triagem de rotina para Leishmania, deste modo, parece ser essencial à recomendaÃÃo de incluir a triagem para Leishmania, nos bancos de sangue de Ãreas endÃmicas de LV.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most common malignancy of childhood. It is a hematologic malignant neoplasm derived from undifferentiated young lymphoid lineage cells that accumulate and replace the normal population of blood cells. The Aurora kinase genes A, B and C are involved in cell cycle and encode proteins of great importance in the regulation of the mitosis process - separation of sister chromatids during metaphase / anaphase. The aim of this study was to evaluate the AURKA and AURKB genes in pediatric patients with ALL-B treated at Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS). This was a cross-sectional, observational and analytical study and 30 patients were enrolled. The sex, age, and laboratory data profile were obtained from medical records of patients diagnosed at HIAS. The analysis of mutations in AURKA and AURKB genes was performed by the fluorescence in situ hybridization technique (FISH) using probes specific for each gene. Statistical analysis was performed using GraphPad Prism 5 and used 5% significance level for all tests. Of all children 53.33% were male and 46.67% female, with age ranging from 1 to 16, and average of 7.1 years. Using the FAB classification, 86.67% of patients had ALL-L1 and 13.33% had ALL-L2. According to the EGIL classification, 33.33% were pre-B ALL and 66.67% were common ALL. The mean hemoglobin levels, hematocrit, white blood cells and platelet counts were, respectively, 7.50 g/dL, 22.80%, 69.494/mm3 and 56.439,64/mm3. 73.33% of the children studied had some type of numerical or structural karyotipic abnormality. Regarding the risk classification, 26.67% were favorable, 40% intermediate and 33.33% unfavorable risk. Patients with unfavorable karyotype had a higher white blood cell count (p = 0.0025), and the analysis of other parameters was not significant. Monosomy and polysomy of AURKA gene and polysomy of AURKB gene were observed. Some kind karyotypic change was observed in approximately 50% of cases, the more frequent change was in AURKB. Most patients with abnormal AURKB gene presented a favorable karyotype, and white blood cell and platelet counts less altered. The study of AURKA and AURKB genes showed that these genes may be markers of genomic instability and that AURKB seems more involved in the pathogenesis of childhood ALL, being also a good prognostic factor. / A leucemia linfÃide aguda (LLA) à a neoplasia mais frequente na infÃncia. à uma neoplasia hematolÃgica maligna derivada de cÃlulas linfocitÃrias indiferenciadas com acÃmulo de cÃlulas jovens e substituiÃÃo da populaÃÃo normal de cÃlulas sanguÃneas. Os genes Aurora quinase A, B e C estÃo envolvidos no ciclo celular e codificam proteÃnas de grande importÃncia na regulaÃÃo do processo de mitose - separaÃÃo das cromÃtides irmÃs durante a metÃfase/anÃfase. O objetivo desse estudo foi avaliar os genes AURKA e AURKB em pacientes pediÃtricos portadores de LLA-B tratados no Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS). Tratou-se de um estudo transversal, observacional e analÃtico. A amostra utilizada no estudo foi de 30 pacientes. O perfil de sexo, idade e dados laboratoriais foi obtido em prontuÃrios dos pacientes e no serviÃo de diagnÃstico do HIAS. A anÃlise de mutaÃÃes nos genes AURKA e AURKB foi pela tÃcnica de FluorescÃncia por HibridizaÃÃo in Situ (FISH), com o uso de sondas especÃficas para cada gene. A anÃlises estatÃstica foi realizada no GraphPad Prism 5 e teve nÃvel de significÃncia de 5% para todos os testes. Do total de crianÃas 53,33% foram do sexo masculino e 46,67% do sexo feminino, com faixa de idade variando de 1 a 16 anos, e mÃdia de 7,1 anos. Quanto a classificaÃÃo FAB, 86,67% dos pacientes eram portadores de LLA-L1 e 13,33% de LLA-L2. Na classificaÃÃo EGIL, 33,33% eram LLA prÃ-B e 66,67% eram LLA-comum. Os valores mÃdios de hemoglobina, hematÃcrito, leucÃcitos e plaquetas foram, respectivamente, 7,50 g/dL, 22,80%, 69.494/mm3 e 56.439,64/mm3. O cariÃtipo de 73,33% das crianÃas estudadas apresentou algum tipo de alteraÃÃo numÃrica ou estrutural. Em relaÃÃo à classificaÃÃo de risco, 26,67% foram favorÃveis, 40% intermediÃrios e 33,33% desfavorÃveis. Na relaÃÃo entre parÃmetros hematolÃgicos e classificaÃÃo de risco, pacientes com cariÃtipo desfavorÃvel apresentaram leucometria mais elevada (p=0,0025), as anÃlises com os outros parÃmetros nÃo foram significantes. No estudo de AURKA e AURKB foi possÃvel observar monossomia e polissomia do gene AURKA e polissomia do gene AURKB. Dos pacientes com algum tipo de alteraÃÃo no cariÃtipo, foi observada alteraÃÃo em algum dos genes em aproximadamente 50% dos casos, sendo a alteraÃÃo no AURKB mais frequente. A maioria dos pacientes com alteraÃÃo no gene AURKB apresentou cariÃtipo favorÃvel, assim como leucometria e contagem de plaquetas menos alteradas. O estudo dos genes AURKA e AURKB mostrou que esses genes podem ser iniciadores no processo de instabilidade genÃmica das cÃlulas leucÃmicas e que a AURKB parece estar mais envolvida na patogÃnese da LLA infantil, assim como fator de bom prognÃstico.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Wound healing is a complex and dynamic process involving an integrated action of several cell types, extracellular matrix and soluble mediators such as cytokines, which serve to recover the integrity of damaged anatomical structure. Natural products are the basis for many biotechnological inputs, as they are biologically active compounds with great potential for therapeutics and can provide molecular basis for many drugs in the clinics. Combretum leprosum Mart. is a native species of Caatinga, important biome in the Brazilian semiarid region, being popularly used in Brazil for the treatment of many diseases such as skin diseases. This study aimed to investigate the pro-healing potential of the ethanol extract (EECL) and the bioactive triterpene 3&#946;, 6 &#946;, 16 &#946;-trihydroxylup-20 (29) ene (CLF-1) isolated from leaves of C. leprosum. Cell migration assay was performed using fibroblasts, which were treated with CLF-1 (1.75 Âg / ml and 2.5 Âg / ml) and analyzed after 0, 6 and 24 hours. Skin wounds (1 cm2) were induced in the dorsal region of mice (n = 30) and were treated with daily topical application (100Âl) according to the group: saline, EECL (100&#956;g / ml) and CLF-1 (100&#956;g / ml) for 12 days. The results showed that CLF-1 did not show toxicity to fibroblasts and further increased cell proliferation and migration so that a significant increase on injury closing percentage was observed using both concentrations (1.75 mg / ml vs 2.5 mg / mL,) compared to control (p <0.05). Within 24 hours, there was also a significant increase in the rate of migration comparing CLF-1 at 2.5 ug / ml and control group (p<0.05). For the in vivo analysis, on the 2nd post surgical day (PS), the lesions treated with EECL and CLF-1 showed moderate presence of vessels in granulation tissue progressing to the dermis, as well as a slight inflammatory infiltrate. It was also observed that, on the 7th PS day, the animals treated with CLF-1 showed moderate angiogenesis, whereas animals treated with saline showed cell proliferation and migration into the wound. Furthermore, on the 12th day PS, the animals treated with EECL and CLF-1 showed complete closing of the injury, while those receiving saline exhibited open wounds. Thus, it was concluded that EECL and CLF-1 showed pro-healing effects, as well as a possible anti-inflammatory action and additional research is needed to elucidate its mechanisms in the wound healing process. / A cicatrizaÃÃo cutÃnea à um processo complexo e dinÃmico que envolve uma aÃÃo integrada de vÃrios tipos celulares, matriz extracelular e mediadores solÃveis como citocinas, que tem por finalidade a recuperaÃÃo da integridade da estrutura anatÃmica danificada. Produtos naturais sÃo a base para diversos insumos biotecnolÃgicos, pois sÃo compostos biologicamente ativos com grande potencial terapÃutico, e que podem formar bases moleculares para muitas drogas em uso clÃnico. Combretum leprosum Mart. à uma espÃcie nativa da Caatinga, bioma importante na regiÃo do semiÃrido brasileiro, sendo esta espÃcie popularmente utilizada no Brasil para o tratamento de diversas doenÃas, tais como doenÃas de pele. O presente estudo investigou o potencial prÃ-cicatrizante do extrato etanÃlico (EECL) e do triterpeno bioativo 3&#946;, 6 &#946;, 16 &#946;-trihydroxylup-20 (29)-eno (CLF-1) isolado das folhas de C. leprosum. Para isto, o ensaio de migraÃÃo de cÃlulas foi realizado com fibroblastos, que foram pÃs tratados com CLF-1 (1,75 &#956;g/mL e 2,5 &#956;g/mL) e analisados em 0, 6 e 24 horas. Feridas cutÃneas (1 cm2) foram realizadas na zona dorsal de camundongos (n=30) e em seguida foram tratadas com uma aplicaÃÃo tÃpica diÃria (100 &#956;l) de acordo com o grupo: salina, EECL (100&#956;g/mL) e CLF-1 (100&#956;g/mL) durante 12 dias. Os resultados demonstraram que CLF-1 nÃo apresentou toxicidade aos fibroblastos e, ainda, em 6 horas estimulou a proliferaÃÃo e migraÃÃo celular, de modo que observou-se um aumento significativo na porcentagem de fechamento em ambas concentraÃÃes (1,75 &#956;g/mL e 2,5 &#956;g/mL) em relaÃÃo ao controle (p<0,05). Em 24 horas, verificou-se tambÃm aumento significativo na taxa fechamento quando comparado CLF-1 2,5 &#956;g/mL em relaÃÃo ao controle (p<0,05). Na avaliaÃÃo in vivo, observou-se no 2 dia pÃs cirÃrgico (P.C.), que as lesÃes tratadas com EECL e CLF-1 mostraram presenÃa moderada de vasos no tecido de granulaÃÃo, progredindo na derme, bem como apresentaram um leve infiltrado inflamatÃrio. Observou-se, ainda, que no 7 dia P.C. os animais tratados com CLF-1 demonstraram moderada angiogÃnese, enquanto que os animais tratados com salina apresentaram proliferaÃÃo e migraÃÃo celular em direÃÃo ao leito da ferida. Ademais, no 12 dia P.C., os animais tratados com EECL e CLF-1 apresentaram o fechamento completo da lesÃo, enquanto os que receberam salina, apresentaram, ainda, feridas abertas. Desta forma, foi possÃvel concluir que o EECL e o CLF-1 apresentaram efeitos prÃ-cicatrizante, bem como uma possÃvel aÃÃo anti-inflamatÃria e investigaÃÃes adicionais sÃo necessÃrias para elucidar o mecanismo de aÃÃo no processo de cicatrizaÃÃo cutÃnea.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Leishmania braziliensis from antimony-resistant patient is able to induce high levels of IL-4 and Arginase in mice, contributing to the increased virulence of the strain and the severity of the disease. CXCL10 is a chemokine that recruits and activates Th1 cells, NK, macrophages, dendritic cells and lymphocytes B. The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of CXCL10 in the infection by strain of L. braziliensis refractory to treatment with antimony. BALB/c mice (n=64) were infected intradermally in the right ear 107 promastigotes (20 Âl), and after appearance of lesions (5 week), the animals were divided into four groups (16/group): 1. Control untreated; 2.Glucantime (100mg/kg/day, I.M.); 3.CXCL10 (100 ng/10&#956;L, I.M.); 4.Glucantime+CXCL10 (100ng/10ÂL+100mg/kg/day, I.M.). The animals were treated for 7 days, followed by weekly measurements of lesions, and were euthanized in the first and fourth week post-treatment (w.p.t) for the evaluation of some parameters: parasite burden (lesions, and draining lymph node-LN), production of the cytokines IFN-&#947;, IL-4, IL-10 and TGF-&#946; (LN) and histological changes (lesions). The results showed CXCL10 and Glucantime induced, early as the first s.p.t., non-ulcerated lesions that regressed significantly (0.35  0.07, 0.047  0.27, p <0.05) compared to controls (0.63  0.12) and Glucantime (0.56  0.12). This was associated with a significant decrease in parasite load observed in CXCL10 and CXCL10 + Glucantime groups, in the lymph node (1.17x103  0.85x103, 2.05x103  1.50x103, respectively) compared to control (3.2x104  1.97x104) and Glucantime (1.18x105  1.12x105). Regarding to cytokines, CXCL10 treated animals showed high levels of IFN-&#947;, IL-10 and TGF-&#946;, and low IL-4 production. In contrast, was observed in the control and Glucantime groups increased production of IL-4. These data also corroborate the histopathological findings showing that animals treated with CXCL10, with or without Glucantime, showed a non-exacerbated inflammation, with absence of necrosis, lower parasitism, granulomas and cellular infiltrate with more activated macrophages, many lymphocytes and few plasma cells, compared to control and Glucantime. In conclusion, CXCL10 and the association CXCL10+Glucantime induced minor injuries, lesions non-ulcerated, with decreased earlier parasite load, leading to the resolution of the disease through an immune response with high IFN-&#947; and low IL-4 production, and with the control of inflammation mediated by IL-10 and TGF-&#946;. / Leishmania braziliensis proveniente de paciente resistente ao antimÃnio à capaz de induzir altos nÃveis de IL-4 e de Arginase em camundongos, contribuindo para a maior virulÃncia da cepa e gravidade da doenÃa. CXCL10 à uma quimiocina que recruta e ativa cÃlulas Th1, NK, macrÃfagos, cÃlulas dendrÃticas e linfÃcitos B. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vivo o efeito de CXCL10 na infecÃÃo por cepa de L. braziliensis refratÃria ao tratamento com antimÃnio. Camundongos BALB/c (n=64) foram infectados por via intradÃrmica na orelha direita, 107 promastigotas (20ÂL) e apÃs o aparecimento das lesÃes (5a sem), os animais foram divididos em quatro grupos (16 animais/grupo): 1. Controle nÃo tratado; 2. Glucantime (100mg/kg/dia, I.M); 3. CXCL10 (100ng/10ÂL, I.M.); 4. Glucantime+CXCL10 (100ng/10ÂL + 100mg/kg/dia, I.M.). Os animais foram tratados por 7 dias, acompanhados com medidas semanais das lesÃes e eutanasiados na 1 e 3 semanas pÃs-tratamento (s.p.t.) para a avaliaÃÃo de alguns parÃmetros: carga parasitÃria (lesÃes e linfonodo de drenagem-LN), produÃÃo das citocinas IFN-&#947;, IL-4, IL-10 e TGF-&#946; (linfonodo) e alteraÃÃes histolÃgicas (lesÃes). Os resultados mostraram que CXCL10 e CXCL10+Glucantime induziram, jà a partir da 1a s.p.t, lesÃes nÃo ulceradas e que regrediram significativamente (0,35Â0,07; 0,047Â0,27; p<0,05), quando comparado ao Controle (0,63Â0,12) e ao Glucantime (0,56Â0,12). Isso foi relacionado com a importante diminuiÃÃo da carga parasitÃria observada nos grupos CXCL10 e CXCL10+Glucantime, no LN (1,17x103  0,85 x 103; 2,05x103  1,50x103, respectivamente) quando comparado ao Controle (3,2x104  1,97x104) e ao Glucantime (1,18x105  1,12x105). Em relaÃÃo Ãs citocinas, o tratamento com CXCL10 mostrou altas concentraÃÃes de IFN-&#947;, IL-10 e TGF-&#946;, e baixa produÃÃo de IL-4. Em contrapartida, nos grupos Controle e Glucantime, foi observada maior produÃÃo de IL-4. Esses dados corroboram tambÃm com os achados histopatolÃgicos que mostraram que os animais tratados com CXCL10, associado ou nÃo ao Glucantime, apresentaram uma inflamaÃÃo nÃo exacerbada, com ausÃncia de necrose, menor parasitismo, presenÃa de granulomas e infiltrado celular com mais macrÃfagos ativados, muitos linfÃcitos e poucos plasmÃcitos, em relaÃÃo ao Controle e ao Glucantime. Em suma, CXCL10 e a associaÃÃo CXCL10+Glucantime induziram lesÃes menores, nÃo ulceradas, com diminuiÃÃo da carga parasitÃria mais precocemente, conduzindo à resoluÃÃo da doenÃa atravÃs de uma resposta imunolÃgica com alta produÃÃo de IFN-&#947; e baixa produÃÃo de IL-4, e controle da inflamaÃÃo modulado por IL-10 e TGF-&#61538;.

To identify high-risk HPV genotypes in liquid-based cytology smears(SurePathÂ) with diagnosis of squamous atypia and squamous carcinoma. METHODS: This was a cross-sectional study using 165 liquid-based cytology with squamous atypia and 149 without atypia. HPV genotyping by real-time PCR was performed on this material. The material was processed by COBAS 4800 System (Roche), which has three detection channels: HPV 16, HPV 18, and HPV HR (other twelve high-risk genotypes). RESULTS:We analyzed 75 cases of ASC-US, 62 LSIL, 8 ASC-H, 12 HSIL and 8 squamous carcinomas. The average age was 32.2 years in the group without atypia, 31.1 years for ASC-US and LSIL, 41.2 years for ASC-H and HSIL and 43.1 years for SCC. There were 112 positive cases for HPV (68%) in the group with atypia: 72% positive for HPV AR, 18% of HPV16 and 10% of HPV 18. Only in ASC-US group, HPV positive and negative frequency was similar (1:1). In the others, the amount of HPV positive cases surpassed negative ones. In the group of Cytology without atypia were found 40 positive cases for HPV (26%): 68% positive for HPV AR probe, 17% of HPV18 and 15% of HPV16. Detections by a single probe predominated in both groups (88% and 84%). In the group with atypia the most prevalent combination was HPV16 and HPV HR (57%); and in cases without atypia was HPV18 and HPV HR (68%) and there was a single positive case for three channels in this group. CONCLUSIONS: The prevalence of other 12 high-risk HPV genotypes (not 16 and 18), was frequent in cytology with and without squamous atypia, associated or not with genotypes 16 and 18. The connection of squamous atypia with HPV 16 and HPV HR was significant. The data obtained are in agreement with the literature regarding the existence of heterogeneity in the distribution of different genotypes and their most frequent association as the level of atypia. / Identificar genÃtipos de HPV de alto risco em citologias em meio lÃquido com diagnÃstico de atipias escamosas e carcinoma escamoso. MÃTODOS: Foi realizado estudo de corte transversal utilizando 165 citologias em meio lÃquido com atipias escamosas e 149 sem atipias. Nesse material foi realizado genotipagem do HPV por PCR em tempo real. O material foi processado pelo Sistema Cobas 4800 (Roche), que apresenta trÃs canais de detecÃÃo, para HPV 16, HPV 18, e HPV AR (outros doze genÃtipos de HPV de alto risco). RESULTADOS: Foram analisados 75 casos de ASC-US, 62 LSIL, 8 ASC-H, 12 HSIL e 8 carcinomas escamosos. A mÃdia etÃria foi de 32,2 anos no grupo sem atipias, 31,1 anos para ASC-US e LSIL, 41,2 anos para ASC-H e HSIL e 43,1 anos para CEC. Houve 112 casos positivos para HPV (68%) no grupo com atipias, sendo 72% de positividade para HPV AR, 18% de HPV 16 e 10% de HPV 18. Somente nos casos de ASC-US a frequÃncia de HPV positivo e negativo foi semelhante (1:1). Nas demais, a quantidade de casos HPV positivo ultrapassou a de negativos. No grupo de citologias sem atipias, foram encontrados 40 casos positivos para HPV (26%), sendo 68% de positividade para a sonda HPV AR, 17% de HPV 18 e 15% de HPV16. Predominaram detecÃÃes por uma Ãnica sonda em ambos os grupos (88% e 84%). No grupo com atipias, a combinaÃÃo mais presente foi HPV AR e 16 (57%); e nos casos sem atipias, foi HPV AR e 18 (68%) e houve um Ãnico caso positivo para os trÃs canais neste grupo. CONCLUSÃES: A prevalÃncia de outros 12 genÃtipos de alto risco de HPV (que nÃo 16 e 18), foi frequente, em citologias com e sem atipias escamosas, associados ou nÃo aos genÃtipos 16 e 18. A relaÃÃo de atipias escamosas com HPV 16 e HPV AR foi significativa. Os dados obtidos estÃo em concordÃncia com a literatura quanto à existÃncia de uma heterogeneidade na distribuiÃÃo dos diversos genÃtipos e sua associaÃÃo mais frequente conforme o nÃvel de atipia.

Infection with hepatitis B virus (VHB) is a serious public health problem. An estimated 450 million chronic carriers worldwide, where at least 600,000 people die annually from diseases related to hepatitis B. Viral load, HBe seroconversion-antiHBe, and specific genotype and viral mutations are acquired factors influence the progression of the disease. The aim of this study was to investigate the prevalence of VHB resistance mutations associated with antiviral and evaluate the genotype distribution in a sample of 142 patients with chronic hepatitis B, treated in the State of Cearà referral hospitals. Patients were considered reactive serum HBsAg for at least six months. Serological tests were performed by electrochemiluminescence (EQL), ABBOTT laboratory for HBsAg, HBeAg and anti-HBe. The results of the serological screening showed that all samples: 142 (100%) were reactive serum HBsAg (IgG), 87 (61.0%) were negative to serum and serum HBeAg to anti-HBe reagent, 55 (39, 0%) are seroreactive for HBe and serum non-reactive for anti-HBe. The quantitation of viremia (viral load) was performed by real time PCR (QPCR) in LACEN-EC. The viral load varied between the limits (2067 IU / ml to 3.41 billion IU / ml), with a median of 70 403 IU / ml. Eighty-eight (62%) of all samples were submitted to analysis of mutations associated with treatment and genotyping the Hepatitis laboratory of the FIOCRUZ-RJ, screened for sequencing as quality criteria and routine laboratory biosafety this. The identification of genotypes in the population studied showed the following distribution: F: 47 (53.4%) of A: 34 (38.6%), the D: 4 (4.6%), E: 2 ( 2.3%) and G 1 (1.1%). And the following mutations were detected: L180M (n = 10 / 9.9%), M204V (n = 8 / 7.9%), M204I (n = 4/4%), G173L (n = 1/1%) , T169L (n = 1/1%), T184I (n = 1/1%), L80V (n = 1/1%) while 74.3% showed no change. In the study it was observed that the F genotype (53.4%) was the most prevalent in the research population of Indian origin, followed by genotype (38.6%) due to migration of African slaves. And, the higher frequency of the detected mutations are associated with nucleoside inhibitors and nucleotides, especially lamivudine. / A infecÃÃo pelo vÃrus da hepatite B (VHB) à um grave problema de saÃde pÃblica. Estimam-se em 450 milhÃes os portadores crÃnicos no mundo, em que pelo menos 600 mil pessoas morrem anualmente por doenÃas relacionadas com o vÃrus da hepatite B. A carga viral, soroconversÃo HBe â anti-HBe, genÃtipo e mutaÃÃes virais especÃficas e adquiridas sÃo fatores que influenciam a progressÃo dessa doenÃa. O objetivo do presente estudo foi investigar a prevalÃncia de mutaÃÃes de resistÃncia do VHB associada aos antivirais e avaliar a distribuiÃÃo genotÃpica numa amostragem de 142 pacientes com hepatite B crÃnica, atendidos nos hospitais de referÃncia do Estado do CearÃ. Foram realizadas sorologias por eletroquimioluminescÃncia (EQL), laboratÃrio ABBOTT para HBsAg, HBeAg e anti-HBe. O resultado da triagem sorolÃgica no total das amostras mostrou que: 142 (100%) foram sororeagentes para HBsAg (IgG), 87(61,0%) foram soro nÃo reagentes para HBeAg e soro reagentes para anti-HBe, 55(39,0%) sÃo soros reagentes para HBe e soro nÃo reagente para anti-HBe. A quantificaÃÃo da viremia (carga viral) foi realizada por PCR em tempo real (QPCR), no LACEN-CE. A carga viral variou entre os limites de (2.067 UI/mL a 3.410.000.000 UI/mL), com mediana de 70.403 UI/mL. Oitenta e oito (62%) do total das amostras foram submetidas à pesquisa de mutaÃÃes associadas ao tratamento e genotipagem no laboratÃrio de hepatites da FIOCRUZ-RJ, triadas para sequenciamento conforme critÃrios de qualidade e biosseguranÃa de rotina desse laboratÃrio. A identificaÃÃo dos genÃtipos na populaÃÃo estudada apresentou a seguinte distribuiÃÃo: F: 47 (53,4%), A: 34 (38,6%), D: 4(4,6%), E: 2(2,3%) e genÃtipo G: 1(1,1%). E as seguintes mutaÃÃes foram detectadas: L180M (n=10 / 9,9%), M204V (n=8 / 7,9%), M204I (n=4 / 4%), G173L (n=1 / 1%), T169L (n=1 / 1%), T184I (n=1 / 1%), L80V (n=1 / 1%) enquanto que 74,3% nÃo apresentaram mutaÃÃes. No estudo foi observado que o genÃtipo F(53,4%) foi o mais prevalente na populaÃÃo pesquisada de origem indÃgena, seguido do genÃtipo A (38,6%) devido à migraÃÃo de escravos africanos. E, que a maior frequÃncia das mutaÃÃes detectadas està associada a inibidores de nucleosÃdeos e nucleotÃdeos, principalmente a lamivudina.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A hansenÃase à uma doenÃa granulomatosa, infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium leprae. Trata-se de uma infecÃÃo crÃnica com amplo espectro de respostas imunes celulares em humanos. Possui alto poder infectante e baixo poder patogÃnico. Este estudo tem como objetivo quantificar e comparar leucÃcitos e subpopulaÃÃes de linfÃcitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD3+CD4+), T citotÃxicos (CD3+CD8+), B (CD19+) e NK (CD3-CD16+CD56+) em sangue perifÃrico de indivÃduos com hansenÃase e controles saudÃveis. Os pacientes foram provenientes do Centro de Dermatologia D. LibÃnia, Fortaleza-CE, Brasil. A determinaÃÃo do nÃmero de linfÃcitos em cada subpopulaÃÃo foi realizada por citometria de fluxo. A anÃlise estatÃstica foi realizada pelo programa GraphPad Prism 5.0 para Windows com significÃncia estabelecida para valores de p<0,05. à um estudo do tipo caso controle de carÃter observacional, realizado a partir da anÃlise do sangue perifÃrico de indivÃduos com diagnÃstico de hansenÃase e de indivÃduos saudÃveis. A populaÃÃo de pacientes com hansenÃase, sem tratamento foi composta de 15 pessoas. A populaÃÃo de controles saudÃveis foi composta por 29 pessoas. As mÃdias das contagens de LinfÃcitos NK (CD3-CD16+CD56+) no grupo de pacientes com hansenÃase e nos controles saudÃveis, dadas em cÃlulas/mm3, foram, 147(Â113,4) e 378,1 (Â231,7) respectivamente, p = 0,0008. As mÃdias das contagens de LinfÃcitos B (CD19+) no grupo de pacientes com hansenÃase e nos controles saudÃveis, dadas em cÃlulas/mm3, foram, 233,3 (Â85,89) e 115,3 (Â53,01) , respectivamente, p < 0,0001. NÃo foram encontradas diferenÃas estatÃsticas significantes entre as amostras de leucÃcitos, de linfÃcitos T CD3+, linfÃcitos T CD4+ e linfÃcitos T CD8+. Os dados do presente estudo sinalizam que as cÃlulas NK parecem desempenhar papel de relevÃncia na resposta ao M. leprae. O linfÃcito B jà ocupa papel de destaque na resposta imunolÃgica ao M. leprae, sobretudo nas formas lepromatosas, e este estudo reforÃa a importÃncia destas cÃlulas. / Leprosy is an infectious and granulomatous disease caused by Mycobacterium leprae. The aim of this study was to quantify and compare levels of leucocytes and lymphocyte subpopulations (CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD19+, CD3-CD16+CD56+) in peripheral blood of patients with leprosy and healthy controls. Patients were followed at Centro de Dermatologia D. LibÃnia, Fortaleza-CE, Brasil. Flow cytometry was used to determine numbers of lymphocytes. Statistical analisys was done with GraphPad Prism 5.0 software for windows. P values under 0.05 were considered siginificant.This was an observational case-control study. Fifteen leprosy patients without treatment were evaluated and 29 healthy individuals were included in control group. NK cells (CD3-CD16+CD56+) mean in leprosy patients was 147(Â113,4) and in controls was 378,1 (Â231,7). Comparisson stablished a p value of 0.0008. B lymphocytes (CD19+) mean in leprosy patients was 233,3 (Â85,89) and in controls was 115,3 (Â53,01), with p < 0,0001 . No differences were observed in CD3+ T lymphocytes, CD4+ T lymphocytes and CD8+ T lymphocytes. This study suggests that NK cells may play a role in innate response to M. leprae.

A hansenÃase à uma doenÃa infecto-contagiosa, causada pelo Mycobacterium leprae, bacilo intracelular obrigatÃrio. Devido o aumento na incidÃncia de casos novos em menores de 15 anos e ao potencial incapacitante da doenÃa, principalmente em pacientes paucibacilares e com formas neurais, à necessÃrio o emprego de ferramentas de detecÃÃo da presenÃa do bacilo, visando ao diagnÃstico no inÃcio da doenÃa ou detecÃÃo de infecÃÃo subclÃnica em contactantes de casos. Este estudo teve como objetivo investigar a possibilidade de infecÃÃo subclÃnica nos contactantes &#8805;5 e <15 anos de casos novos, detectados no Centro de Dermatologia Dona LibÃnia, no municÃpio de Fortaleza-CearÃ. Participaram deste estudo, 69 casos Ãndices e 101 contactantes menores de 15 anos. Atà o momento, nenhum estudo buscou a detecÃÃo subclÃnica da infecÃÃo em contatos de casos novos de hansenÃase, atendidos em uma Unidade de ReferÃncia. O material coletado foi analisado atravÃs de trÃs tÃcnicas: determinaÃÃo do Ãndice BaciloscÃpico, de acordo com o Guia de Procedimentos TÃcnicos de Baciloscopia em HansenÃase do MinistÃrio da SaÃde-2010; detecÃÃo molecular de DNA de M. leprae, em secreÃÃo nasal, colhidas com swabs previamente umedecidos em tampÃo Tris-EDTA. A extraÃÃo do DNA foi realizada utilizando o Dneasy Blood and Tissue kit Qiagen, mantido a -20ÂC, para posterior amplificaÃÃo. Foram utilizados os iniciadores RLEP-R1e RLEP-R2 para a regiÃo especÃfica RLEP. A reaÃÃo de PCR ocorreu em termociclador utilizando o kit Ilustraâ Pure Taq Ready-to-go PCR beads GE HEALTHCARE; anÃlise de ML-Flow, teste imunocromatogrÃfico para a detecÃÃo da IgM para PGL-1, na qual foi adotada a tÃcnica de coleta do sangue total, fazendo-se uma punctura no dedo indicador esquerdo ou direito. Avaliando a positividade das trÃs tÃcnicas usadas no estudo, obtivemos frequÃncia de 16,1% para PCR de DNA, 1,98% para Ãndice BaciloscÃpico na secreÃÃo nasal e 33,7% para ML-Flow. A PCR de DNA de M. leprae aliada à sorologia de anticorpos anti-PGL-1 se mostram como ferramentas sensÃveis e especÃficas, podendo auxiliar no monitoramento dos contatos com maior risco de desenvolver a doenÃa, principalmente na infÃncia. A detecÃÃo do M. leprae na mucosa nasal reflete a presenÃa do bacilo neste sÃtio, que pode tornar-se uma fonte de infecÃÃo ou transmissÃo. Esta informaÃÃo aliada à investigaÃÃo da soropositividade ao anti-PGL-1 reforÃam o diagnÃstico de infecÃÃo subclÃnica, inclusive com a possibilidade da presenÃa do bacilo em outros sÃtios, como por exemplo, pele e/ou nervos. / Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae, obligate intracellular bacillus. Due to the increase in the incidence of new cases in juveniles under 15 years and the debilitating potential of the disease, especially in paucibacillary patients and neural forms, it is necessary to use detection tools of the presence of the bacillus, in order to diagnose the onset of the disease or subclinical infection detection contacts of cases. This study aimed to investigate the possibility of subclinical infection in contacts &#8805;5 and <15 years of new cases, detected in Dona Libania Dermatology Centre, in Fortaleza-Ceara. Participated in this study, 69 index cases and 101 contacts under 15 years. Until now, no study sought subclinical detection of contacts of new leprosy cases treated at a Reference Unit. The collected material was analyzed using three techniques: determination of bacterial index, according to the Procedural Guidelines of Bacilloscopy Technical Leprosy of the Ministry of Health-2010; molecular detection of M. leprae DNA in nasal secretion, collected with pre-humidified swabs in Tris-EDTA buffer. The DNA extraction was performed using the DNeasy Blood and Tissue Kit Qiagen, held at -20ÂC, for subsequent amplification. The RLEP-R1 e RLEP-R2 primers were used for the specific region RLEP. The PCR reaction occurred in a thermocycler using the kit Ilustraâ Pure Taq Ready-to-go PCR beads GE HEALTHCARE; ML-Flow analysis, immunoassay for the detection of IgM PGL-1, which was adopted collection technique of whole blood, making up a puncture on the right or left forefinger. Measuring the positivity of the three techniques used in the study, we obtained the frequencies of 16.1% for PCR DNA, 1.98% for bacterial index in nasal secretion and 33.7% for ML-Flow. The M. leprae DNA PCR combined with serology of anti-PGL-1 antibodies show how sensitive and specific tools, which can assist in monitoring contacts at greater risk of developing the disease, especially in childhood. The detection of M. leprae in the nasal mucosa reflects the presence of this site bacillus, which can become a source of infection or transmission. This information combined with the investigation of seropositivity anti-PGL-1 strengthen the diagnosis of subclinical infection, including the possibility of the presence of bacillus in other sites, for example, skin and/or nerves.

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a global health problem and is associated with chronic liver disease, especially in the cirrhotic phase. This tumor can be preceded by precursor lesions, namely low and high grade dysplastic nodules, and regenerative nodules, typical of cirrhosis. The current study evaluated the immunohistochemical expression of VEGF and angiopoietin-2 in HCC and precursor lesions is a single institution series of liver explants between 2013-2015 using tissue microarray methods. Immunohistochemical variables were correlated with angiogenesis and prognostic parameters. 107 nodules from 67 patients were studied, including 26 HCC and 5 dysplastic nodules. There was no significant epidemiologic difference between HCC, dysplastic nodules and regenerative nodule groups. Angiopoietin-2 was significantly more expressed in HCC nodules when compared with regenerative lesions (p < 0,0001*). VEGF and Ang-2 expression correlated with each other (p=0,006) and with number of unpaired arteries within nodules (p=0,03 â VEGF) and with the percentage of CD34 positive sinusoids (p < 0,0001 â VEGF and p< 0,007 â Ang-2). There was no significant correlation between any of the immunohistochemical parameters with clinical staging, number of gross lesions and histologic grade in cases of HCC. Angiopoietin-2 had a sensitivity of 54% and 96,25% of specificity for HCC diagnosis, and VEGF had a sensitivity of 69,23% and specificity of 31,25%. Our study shows that Ang-2 may be a good marker for HCC diagnosis when compared to others that are routinely used for this purpose. VEGF is not a good marker due to its lack of specificity, although other studies showed that it may be associated with prognostic parameters. Finally, our data reinforce the importance of angiogenesis evalutation in the development of HCC and its potential applicability as a diagnostic tool. / O carcinoma hepatocelular (CHC) constitui um problema de saÃde global e està relacionado a hepatopatias crÃnicas em fase de cirrose. Esta neoplasia à geralmente precedida por lesÃes precursoras denominadas nÃdulos displÃsicos de baixo grau (LGDN) e alto grau (HGDN), os quais por sua vez sÃo provenientes dos nÃdulos regenerativos (NR) tÃpicos da cirrose. Este trabalho avaliou a expressÃo imuno-histoquÃmica dos marcadores VEGF e Angiopoietina-2 no CHC e nas lesÃes precursoras de explantes de pacientes cirrÃticos transplantados no Hospital Geral de Fortaleza nos anos de 2013 a 2015, correlacionando esta expressÃo a outros parÃmetros de angiogÃnese e prognÃsticos. Foram incluÃdos no estudo 107 nÃdulos de 67 pacientes com CHC e/ou lesÃes precursoras para confecÃÃo de âtissue microarrayâ (TMA). NÃo houve diferenÃas demogrÃficas entre os pacientes com CHC e nÃdulos displÃsicos ou regenerativos. O marcador Angiopoietina-2 apresentou diferenÃa de imunoexpressÃo entre as classes de nÃdulos (p < 0,0001*), sendo maior nos pacientes com CHC. Os marcadores VEGF e Angiopoietina-2 mostraram correlaÃÃo significativa entre si (&#961;=0,006) e com outros parÃmetros, tais como nÃmero de artÃrias (p=0,03 para VEGF) e positividade à imuno-histoquÃmica para CD34 (p < 0,0001 para VEGF e p = 0,007 para Ang-2). NÃo houve associaÃÃo entre os marcadores avaliados e parÃmetros utilizados para determinaÃÃo de estadiamento e prognÃstico do CHC, tais como tamanho, nÃmero de lesÃes no explante e grau histolÃgico. A Angiopoietina-2 apresentou sensibilidade de 54% e especificidade de 96,25% para o diagnÃstico de malignidade, enquanto o VEGF apresentou sensibilidade de 69,23% e especificidade de 31,25%. Nosso estudo mostrou que a angiopoietina-2 representa um bom marcador para o diagnÃstico do CHC quando comparado aos que sÃo utilizados atualmente, enquanto o VEGF, embora tenha apresentado correlaÃÃo com parÃmetros prognÃsticos em outros estudos, nÃo se mostra um bom marcador por sua baixa especificidade. Por fim, os dados reforÃam a importÃncia de melhor avaliaÃÃo da angiogÃnese no desenvolvimento do CHC e seu papel no diagnÃstico anatomopatolÃgico destas lesÃes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cÃncer gÃstrico à a quarta neoplasia mais comum em todo o mundo, representando a segunda causa de mortalidade por cÃncer. Apesar do tratamento com cirurgia e quimioterapia, a sobrevida global em cinco anos de pacientes com cÃncer gÃstrico permanece baixa. Uma possÃvel explicaÃÃo para ineficÃcia da terapia à a presenÃa de cÃlulas-tronco cancerosas, uma subpopulaÃÃo de cÃlulas tumorais que apresentam caracterÃsticas de cÃlulas-tronco. Estas cÃlulas, assim como as cÃlulas tronco embrionÃrias, sÃo consideradas imortais, podem se auto-renovar e se transformar em qualquer cÃlula do corpo. VÃrios marcadores, incluindo CD44 e CD133, tÃm sido relatados como marcadores de cÃlulas-tronco, normais e cancerosas, e utilizados para isolar cÃlulas cancerosas de tumores sÃlidos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a expressÃo de CD44 e de CD133, no cÃncer gÃstrico primÃrio e metÃstases linfonodais, atravÃs de imunohistoquÃmica, e relacionÃ-la com as variÃveis clÃnico-patolÃgicas de tipo histolÃgico, sexo, idade, localizaÃÃo anatÃmica, dimensÃo do tumor, invasÃo angiolinfÃtica, infiltraÃÃo perineural, classificaÃÃo TNM (TN) e acometimento linfonodal. Este estudo foi desenvolvido a partir de um conjunto de 72 casos de adenocarcinoma gÃstrico, dos Arquivos do ServiÃo de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Cearà (DPML-UFC). Utilizou-se a tÃcnica de tissue microarray asociada à imunohistoquÃmica com anticorpo monoclonal anti-CD44 e policlonal anti-CD133. Foram considerados positivos os casos que apresentaram uma ou mais cÃlulas com imunomarcaÃÃo citoplasmÃtica e/ou membranar. Foi observado que 30% das amostras foram positivas para o CD44. NÃo foram encontradas diferenÃas estatisticamente significantes entre as variÃveis clÃnico-patolÃgicas estudadas e a imunoexpressÃo de CD44. A imunoexpressÃo do CD133 foi positiva em 24% das amostras. O grau de invasÃo do tumor apresentou dados com tendÃncia estatisticamente significante (p=0,0505), de forma inversa. Nas demais variÃveis, nÃo foi encontrada nenhuma diferenÃa estatisticamente significante. A imunoexpressÃo de CD133 na mucosa histologicamente normal foi maior do que no tumor primÃrio e na metaplasia intestinal, com diferenÃa estatÃstica significante (p=0,0159 e p=0,0058, respectivamente). A imunoexpressÃo de CD133 no adenocarcinoma gÃstrico tipo intestinal foi significativamente maior na mucosa histologicamente normal do que na metaplasia (p=0,0260). A frequÃncia da expressÃo desses marcadores à muito variÃvel, e mesmo nas amostras consideradas positivas, o percentual de cÃlulas coradas tambÃm à variÃvel, e em geral muito baixo. / Gastric cancer is the fourth most common cancer worldwide, accounting for the second leading cause of cancer mortality. Despite treatment with surgery and chemotherapy, the overall five-year survival of patients with gastric cancer remains low. One possible explanation for the ineffectiveness of therapy is the presence of cancer stem cells, a subpopulation of tumor cells that have stem cell characteristics. It has been reported that these, as well as embryonic stem cells, are immortal, can self-renew and to differentiate to be transformed in any cell type in the body. Several markers, including CD44 and CD133, have been reported as stem cell markers in both normal and cancerous cells and have been used to isolate cancer cells from solid tumors. The aim of this study was to evaluate the expression of CD44 and CD133 in primary gastric cancer and lymph node metastases by immunohistochemical and to relate it to clinicopathologic variables as histological type, gender, age, anatomical site, tumor size, angiolymphatic invasion, infiltration perineural, TNM classification (TN) and lymph node involvement. This study was developed from a set of 72 cases of gastric adenocarcinoma, from the Archives of Pathology and Forensic Medicine of the Federal University of Cearà Service (DPML-UFC). Tissue microarray and immunohistochemistry were utilized, with anti-CD44 monoclonal antibody and polyclonal anti-CD133. The cases with one or more cells with cytoplasmic and / or membrane immunostaining were considered positives. It was observed that 30% of the samples were positive for CD44. No statistically significant differences were found between the clinical and pathological variables studied and the immunoreactivity of CD44. Regarding the immunoreactivity of CD133, the present study showed that 24% of samples were positive. The degree of tumor invasion presented data showing a statistically significant trend (p = 0.0505), in reverse. The other variables, we found no statistically significant difference. The immunoreactivity of CD133 in histologically normal mucosa was higher than in the primary tumor and intestinal metaplasia, with statistically significant difference (p = 0.0159 and p = 0.0058, respectively). The CD133 immunostaining in intestinal type gastric carcinoma was significantly higher than in the histologically normal mucosal metaplasia (p = 0.0260). The frequency of expression of these markers is highly variable, and even in the samples considered positive, the stained cells percentage is also variable, and very low overall.