A presença de uma faixa adequada de mucosa ceratinizada (MC) é essencial para manutenção da homeostasia periodontal. Existem várias técnicas cirúrgicas com a finalidade de corrigir alterações mucogengivais, criando uma faixa de MC adequada nos casos em que está ausente ou insuficiente. O enxerto gengival livre (EGL) é uma das técnicas indicadas para criação de gengiva em áreas não estéticas. Outra opção é o uso de substitutos teciduais dentre eles, a matriz dérmica acelular (MDA), considerada uma alternativa para a criação de gengiva. O objetivo desse estudo foi analisar longitudinalmente (após 13 anos) os resultados obtidos após procedimentos cirúrgicos de EGL e MDA para a criação da faixa de MC. Foram comparados os dados intra e inter-grupos. Os dados iniciais e de 6 meses foram obtidos de um estudo prévio realizado na Disciplina de Periodontia da FOB-USP, em 2004. Vinte e dois pacientes foram incluídos e avaliados originalmente, sendo que 12 aceitaram participar desta avaliação longitudinal. Os parâmetros clínicos avaliados foram: recessão gengival (RG), profundidade de sondagem (PS); nível clínico de inserção (NCI); largura da mucosa ceratinizada (LMC) e espessura da mucosa ceratinizada (EMC). Além desses parâmetros, também foi feita uma análise atual da percepção estética pelos pacientes e por um profissional calibrado das áreas tratadas. Após 13 anos, ambos os tratamentos resultaram em aumento significante LMC e EMC, porém com resultados superiores para o grupo que recebeu EGL (p<0,05). Não houve diferenças entre os grupos para os parâmetros PS e NCI, contudo no grupo MDA, a profundidade da RG foi significantemente maior comparado ao EGL em longo prazo. No entanto, o grupo MDA apresentou resultados superiores em relação à percepção estética do profissional. / The presence of an adequate width of keratinized tissue (KT) is essential for the maintenance of periodontal homeostasis. There are several surgical techniques with the purpose of correcting mucogingival changes, creating a suitable KT width in cases where it is absent or insufficient. Free gingival graft (FGG) is one of the techniques used to create gingiva in non-esthetic areas. Another option is the use of tissue substitutes, the acellular dermal matrix (ADM) that is considered an alternative for the gingiva augmentation. The aim of this study was to longitudinally analyze (after 13 years) the outcomes obtained after surgical procedures of FGG and ADM for the KT augmentation. Intra and intergroup data were compared. Initial and 6- month data were obtained from a previous study conducted at the Discipline of Periodontics of Bauru School of Dentistry-University of São Paulo in 2004. Twentytwo patients were originally included and evaluated, and 12 accepted to participate in this longitudinal evaluation. Clinical parameters evaluated were: gingival recession (GR), probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), keratinized tissue width (KTW), soft tissue thickness (TT). In addition, esthetic perception was evaluated by patients and by a calibrated periodontist. After 13 years, both treatments resulted in a significant increase in KWT and TT, but with superior results for the FGG group (p <0.05). There were no differences between groups for PD and CAL, however in the ADM group, the depth of GR was significantly higher compared to FGG in long-term. However, esthetics perception by professional evaluation demonstrated superior outcomes for ADM group.

Objetivo: O presente estudo avaliou, clinica e histomorfometricamente, a matriz dérmica acelular (MDA) como barreira física na regeneração óssea guiada. Materiais e Métodos: Inicialmente foram extraídos, em seis cães, os quatro prémolares mandibulares bilateralmente. Após um período de seis semanas, foram analisadas a quantidade e qualidade de mucosa ceratinizada (Exame Clínico 1). Duas semanas depois, os animais foram submetidos a um segundo procedimento cirúrgico (Confecção do defeito e Regeneração Óssea Guiada ROG), no qual foi criado um defeito ósseo padronizado em cada lado da mandíbula. Sobre o defeito de um hemiarco, escolhido aleatoriamente, foi posicionada e fixada a membrana absorvível de copolímeros de ácido polilático e poliglicólico e carbonato trimetileno (Grupo Controle - GC) e no defeito do hemiarco oposto, a matriz dérmica acelular - MDA (Grupo Teste - GT). Imediatamente após a sutura, foram feitas tomadas radiográficas padronizadas através de raio-X digital, as quais foram novamente realizadas 8 e 16 semanas após a cirurgia de colocação das membranas. Após quatorze semanas de cicatrização, a quantidade e qualidade da mucosa ceratinizada foram novamente avaliadas (Exame Clínico 2). Dezesseis semanas depois da ROG os animais foram sacrificados e foi então realizado o preparo histológico das peças. A análise histomorfométrica, em microscopia óptica, avaliou a quantidade e qualidade de osso neoformado. A neoformação óssea também foi quantificada através das imagens radiográficas. Resultados: Em relação aos parâmetros clínicos, o GT e o GC apresentaram aumento na EMQ e redução na AMQ. Na análise radiográfica, após o período de 16 semanas, as radiografias de subtração apresentaram ganho médio de área radiopaca em relação ao defeito inicial de 83,38 % para o GT e de 83,68% para o GC. Houve um aumento progressivo da densidade radiográfica para ambos os grupos, sem diferenças estatisticamente significantes. Histologicamente, após 16 semanas o tecido ósseo apresentou características de um osso predominantemente maduro. Histomorfometricamente, a ANO correspondeu a 58,99% da ANT no GT e a 61 % da ANT no GC. A altura óssea máxima no GT foi de 7,21 ± 0,80 mm e no GC de 7,70 ± 1,21 mm. A porcentagem de osso cortical na ANO foi de 42,47 % no GT e 38,08 % no GC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos para nenhum destes parâmetros. Conclusão: A MDA atuou como barreira mecânica na ROG com resultados clínicos, radiográficos e histomorfométricos similares aos obtidos com a membrana absorvível. / Objective: The purpose of this study was to evaluate the acellular dermal matrix (ADM) as membrane for guided bone regeneration (GBR), comparing it to a bioabsorbable membrane. Material and Methods: In six dogs, the mandibular premolars were extracted. After 8 weeks, bone defects were surgically created bilaterally and the GBR was performed. Each side was randomly assigned to the control group (CG: bioabsorbable membrane made of glycolide and lactide copolymer) or test group (TG: ADM as a membrane). Immediately following GBR, standardized digital X-Ray radiographs were taken, and were repeated at 8 and 16 weeks post-operatively. Previously to the GBR and to euthanasia, clinical measurements of the width and thickness of the keratinized tissue (WKT and TKT, respectively) were performed. The dogs were sacrificed 16 weeks following GBR, and histomorphometric analysis was made. Area measurements of new tissue and new bone, and linear measurements of bone height were performed. Results: There were no statistically significant differences between groups for any histomorphometric measurement. Clinically, both groups showed an increase in the TKT and reduction program in the WKT. Radiographically, it could be observed an image suggestive of new bone formation in both groups 8 and 16 weeks following GBR. Conclusion: ADM acted as a mechanical barrier in GBR, with clinical, radiographic and histomorphometric results similar to those obtained with the bioabsorbable membrane.

A matriz démica acelular, MDA, figura dentre os biomateriais que têm por objetivo restaurar defeitos mucogengivais. A correção de defeitos mucogengivais a partir de constituintes autógenos são os procedimentos mais comumente usados, no entanto, em decorrência da quantidade insuficiente de tecido doador, esses procedimentos se tornam limitados. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, diferentes aspectos relacionados ao cultivo prévio de fibroblastos gengivais humanos em MDA. Fibroblastos gengivais humanos foram cultivados pela técnica do explante a partir de amostras de tecido gengival queratinizado removido de três pacientes saudáveis. A MDA foi cultivada com esses fibroblastos por períodos de 14 e 21 dias para posterior análise dos eventos de: adesão celular, proliferação e viabilidade. Os resultados mostraram que em 7 dias, os fibroblastos estavam aderidos, espraiados e dispersos sobre a superfície externa da MDA, em 14 dias formavam monocamada de células de morfologia alongada e quiescentes (Ki-67 negativos) em sua maioria, sendo apenas ocasionalmente observadas no interior da MDA. Em 21 dias a monocamada exibia menor densidade celular. Os resultados sugerem que o cultivo de fibroblastos em MDA em períodos de 14 dias permite boas condições de adesão e espraiamento das células sobre a matriz, porém, a alta densidade de fibras colágenas parece ser um fator limitante à migração celular. / Acellular Dermal Matrix, ADM, is a biomaterial that has been used in periodontal procedures to treat mucogingival defects. Mucogingival defects can be corrected by autogenous grafts that are the most common procedure used in periodontology, however, because of the limited source of donor\'s tissue this procedure became limited. The aim of this investigation was to verify, in vitro, different aspects related to human gingival fibroblasts seeding on to the ADM. Human gingival fibroblasts were established from explant cultures from the connective tissue of keratinized gingiva collected from three healthy patients. ADM was seeded with gingival fibroblasts for 14 and 21 days, and then cell adherence, proliferation and viability were analyzed. Results revealed that, at day 7, fibroblasts were adherent and spreading on the ADM surface, and were unevenly distributed, forming a discontinuous single cell layer, at day 14, a confluent fibroblastic monolayer lining ADM surface was noticed. At day 21, the cell monolayer exhibited a reduction in cell density. The results suggests that fibroblasts seeding on the ADM for 14 days can allow good conditions for cell adhesion and spread on the matrix, however, because of the high collagen fiber bundle density cell, migration inside the matrix was limited.

Orientador: Rosemary Adriana Chiérici Marcantonio / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Elizabeth Pimentel Rosetti / Banca: Washington Rodrigues Camargo / Banca: Giuseppe Alexandre Romito / Resumo: O propósito deste estudo foi avaliar histológica e histometricamente o resultado da utilização das matrizes de colágeno de Pericárdio Bovino (MPB) e Dérmica Acelular (MAD) no tratamento de deiscências ósseas criadas cirurgicamente em cães. Foram criados defeitos periodontais do tipo deiscência óssea na superfície vestibular dos 2os, 3os e 4os pré-molares inferiores de seis cães. Estes dentes foram divididos em 3 grupos: grupo I: MAD; grupo II: controle e grupo III: MPB, ambos com reposição coronária do retalho. Após 70 dias os animais foram sacrificados, os dentes retirados em bloco e processados histologicamente. Realizou-se análise histológica descritiva e histométrica, medindo-se a extensão do tecido epitelial, neoformação óssea e cementária e nível gengival para os grupos I, II e III. Os resultados demonstraram valores estatisticamente iguais para as medianas (em mm) dos valores de epitélio: 1,49, 1,91 e 1,82; cemento: 3,18, 3,09 e 3,31 respectivamente para os grupos I, II e III. Foi encontrada diferença estatisticamente significante em relação à neoformação óssea, com medianas (em mm) de 1,23, 1,82 e 1,62, respectivamente para os grupos I, II e III. Foi observado escasso infiltrado inflamatório. Com isso, pudemos concluir que as matrizes de MPB e MAD são materiais que permitem a reparação dos tecidos periodontais. / Abstract: The goal of this investigation was to compare, histologically and histometrically, the healing process of dehiscence-type defects treated by acellular dermal matrix (AD) and bovine pericardium matrix (PB). Six mongrel dogs were used. Buccal osseous deiscences were surgically created on mesial roots of the mandibular second, third and fourth premolars. The defects were randomly assigned to one of the treatments: AD, control and PB. After 70 days of healing, the dogs were sacrificed and the blocks were processed. The histometric parameters evaluated included: gingival level, epithelial length, new cementum and new bone. No statistically significant differences were found between PB, AD and control groups for epithelial length and new cementum parameters (p<0,05). Statistically significant differences were found between PB, AD and control groups for new bone (minor for AD). The presence of a slight inflammation was observed. Withim the limits of this study, it can be concluded that PB and AD showed good biocompatibility, but did not bring a complete periodontal tissue regeneration. / Doutor

Disease caused by Bordetella pertussis persists with rates increasing over the past decade in industrialized countries. A hindrance to vaccine development has been the lack of a clear serological correlate of protective immunity. Pertussis toxin (PTx), an AB-type toxin, is one of the bacteria’s major virulence factors and among the lead candidates for potential correlates. Of the numerous monoclonal antibodies (mAbs) binding PTx, the murine IgG2a mAb 1B7 is potently neutralizing in all in vitro assays and in vivo murine models of infection. 1B7 binds an epitope on the enzymatic S1-subunit of PTx with some linear elements but previous work was unable to more precisely define the epitope or determine its exact mechanism of protection. We characterize the epitope bound by 1B7 on PTx-S1 in molecular detail and define energetically important interactions between residues at the interface including six residues on PTx-S1 and six residues on 1B7. Using this information, a model of the 1B7-S1 interaction was developed, indicating a predominantly conformational epitope located on the base of S1 near S4. The location of this epitope is consistent with previous data and is shown to be conserved across several naturally occurring strain variants including PTx-S1A, B, D, and E in addition to the catalytically inactive 9K/129G variant. Using immunofluorescent microscopy, it was determined that 1B7’s unique mode of action lies in its ability to bind to the toxin and co-traffic into target cells. Upon endocytosis, 1B7 protects from PTx intoxication by redirecting its intracellular retrograde trafficking. In order to determine whether antibody responses are differently induced by infection or acellular vaccination, we analyzed sera from 30 adults with confirmed exposure to pertussis and 30 recent vaccinees. Natural infection resulted in significantly higher titers of anti-PTx-S1, 1B7-like, and 11E6-like antibodies, while overall anti-PTx titers were similar to vaccinated samples. We also observed a direct correlation between in vitro protection and the presence of 1B7-like and 11E6-like antibodies. Thus, natural infection elicits higher titers of protective antibodies indicating that the use of detoxified PTx in current acellular vaccines although highly immunogenic results in the elicitation of predominantly non-neutralizing antibodies. / text

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-14Bitstream added on 2014-06-13T21:06:14Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_ca_dr_arafo.pdf: 373237 bytes, checksum: 63181781c60cf9cb130f5b53b34e9b3d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O propósito deste estudo foi avaliar histológica e histometricamente o resultado da utilização das matrizes de colágeno de Pericárdio Bovino (MPB) e Dérmica Acelular (MAD) no tratamento de deiscências ósseas criadas cirurgicamente em cães. Foram criados defeitos periodontais do tipo deiscência óssea na superfície vestibular dos 2os, 3os e 4os pré-molares inferiores de seis cães. Estes dentes foram divididos em 3 grupos: grupo I: MAD; grupo II: controle e grupo III: MPB, ambos com reposição coronária do retalho. Após 70 dias os animais foram sacrificados, os dentes retirados em bloco e processados histologicamente. Realizou-se análise histológica descritiva e histométrica, medindo-se a extensão do tecido epitelial, neoformação óssea e cementária e nível gengival para os grupos I, II e III. Os resultados demonstraram valores estatisticamente iguais para as medianas (em mm) dos valores de epitélio: 1,49, 1,91 e 1,82; cemento: 3,18, 3,09 e 3,31 respectivamente para os grupos I, II e III. Foi encontrada diferença estatisticamente significante em relação à neoformação óssea, com medianas (em mm) de 1,23, 1,82 e 1,62, respectivamente para os grupos I, II e III. Foi observado escasso infiltrado inflamatório. Com isso, pudemos concluir que as matrizes de MPB e MAD são materiais que permitem a reparação dos tecidos periodontais. / The goal of this investigation was to compare, histologically and histometrically, the healing process of dehiscence-type defects treated by acellular dermal matrix (AD) and bovine pericardium matrix (PB). Six mongrel dogs were used. Buccal osseous deiscences were surgically created on mesial roots of the mandibular second, third and fourth premolars. The defects were randomly assigned to one of the treatments: AD, control and PB. After 70 days of healing, the dogs were sacrificed and the blocks were processed. The histometric parameters evaluated included: gingival level, epithelial length, new cementum and new bone. No statistically significant differences were found between PB, AD and control groups for epithelial length and new cementum parameters (p<0,05). Statistically significant differences were found between PB, AD and control groups for new bone (minor for AD). The presence of a slight inflammation was observed. Withim the limits of this study, it can be concluded that PB and AD showed good biocompatibility, but did not bring a complete periodontal tissue regeneration.

Orientador: José Carlos Souza Trindade Filho / Banca: Carlos Marcio Nóbrega de Jesus / Banca: Antonio Macedo Junior / Banca: Miguel Zeratti Filho / Banca: Wagner Eduardo Matheus / Resumo: Deformidades uretrais e estenoses severas geralmente requerem técnicas de uretroplastia com tecido adicional. Dentre as diversas possibilidades, destaca-se recentemente a utilização de matrizes acelulares desenvolvidas por bioengenharia. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento funcional e histológico da matriz acelular arterial heteróloga, quando implantada na uretra de coelhos. Para o preparo da matriz, a artéria aorta abdominal de suíno foi coletada e submetida a tratamento com SDS, sendo posteriormente armazenada em álcool 70º. Foram utilizados doze coelhos, machos, com peso médio de 3 kg, distribuídos por sorteio em dois grupos: (AO) - secção completa da uretra e implante de segmento tubular de matriz acelular de aorta, com 1 cm de extensão e (TT) - secção completa da uretra e sutura término-terminal. Uretrografia retrógrada foi realizada após 15 (M2) e 90 dias (M3), quando os animais foram eutanasiados. As radiografias foram analisadas quanto à presença de fístula e/ou estenose. A avaliação histopatológica por Hematoxilina-eosina, Tricrômico de Masson e Calleja caracterizou a presença de inflamação, hiperplasia epitelial, vasos sanguíneos, tecido conjuntivo, muscular e elástico nos diferentes grupos. Foram registrados 2 óbitos em cada grupo, sendo estes animais excluídos do estudo. Em M2, 36,3% de estenose foi observada nos animais do Grupo AO (p<0,05). Em M3, animais dos Grupos AO e TT apresentaram estenose, sendo que a diferença entre os grupos não foi significante (p>0,05). Maior porcetagem de fístula ocorreu no Grupo AO, em M3 (p<0,05). A avaliação macro e microscópica não nos permitiu identificar a região da matriz acelular nos animais deste grupo. Ausência de células gigantes tipo corpo estranho bem como maior presença de hiperplasia epitelial (p<0,001) e vasos sanguíneos (p<0,005) foram observadas nas lâminas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Severe urethral deformities and stenosis usually require urethroplasty with additional tissue. Among various possibilities, use of acellular matrix is a recent advance developed by bioengineering. The aim of this study was to evaluate the histological and functional behavior of heterologous acellular aortic matrix, when implanted in the urethra of rabbits. Abdominal aorta was taken from swine, processed with SDS and stored in alcohol, in order to obtain tubular acellular matrix. Twenty-four male rabbits, weighing 3 kg, were randomly divided in two groups: (AO)- complete urethral section and replacement with a 1 cm acellular aortc matrix tubular graft and (TT)- complete urethral section and end-to-end anastomosis. A retrograde urethrogram was performed at 15 (M2) and 90 (M3) days after surgery, when the animals were euthanized. The exams were analised for presence of fistula and/or strictures. Standard histological analysis with Hematoxylin-eosin, Masson's Trichrome and Calleja characterized the inflammation, epithelial hyperplasia, blood vessels, muscle fibers, collagen and elastic fibers content, in different groups. Two animals of each group died during the study and were excluded. In M2, 36.3% of strictures was observed in the animals of Group AO (p <0,05). In M3, strictures occurred in both groups, but this difference was not significant (p> 0,05). A greater percentage of fistula occurred in Group AO, in M3 (p <0,05). The gross and microscopic evaluations did not allow us to identify the acellular matrix region in this group. Absence of foreign body giant cells, increased presence of epithelial hyperplasia (p <0,001) and blood vessels (p <0,005) were observed. Muscle fibers were abundant in lamina propria of the animals in the Group TT (p <0,01). There was no statistical difference between the amount of elastic fibers in the two groups... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

The use of allograft bone is effective in the treatment of large bone loss following tumour removal or surgery. However, it is not osteogenic due to a lack of viable osteogenic cells and the remaining marrow material is potentially harmful to the recipient. Sterilisation techniques, such as gamma irradiation, are routinely used to improve the safety of these grafts; however this fails to remove the immunogenic material and may diminish the bones innate properties. Thus, wash techniques are being developed to remove the deleterious marrow, whilst retaining the native properties of the bone so that through tissue engineering, pre-osteogenic cells may be added to aid osseointegration. To this end, this study utilised a novel wash process (developed by the National Health Service Blood and Transplant Tissue services (NHSBT)) on whole human femoral heads, to assess the resulting material’s suitability as a biological scaffold for bone tissue engineering (BTE). Following the wash process, marrow removal efficiency was analysed by biochemical testing and histological assessment, and biocompatibility of fresh-frozen and washed human bone was assessed using extract cytotoxicity assays with BM-MSCs. The results showed a marrow removal efficiency of 99.5%, leaving a material with only 16.7 ng DNA/100mg of dry material, and which histologically displayed minimal cellular content demonstrating that this was an efficient wash process producing an acellular biological scaffold material (<50ng DNA/100mg bone). Extract cytotoxicity testing indicated the material was biocompatible. Uniaxial compression to failure was performed on 1cm3 cubes using bone samples from mirrored location of bilaterally halved femoral heads, with one half washed, whilst the other was fresh-frozen. A random orientated “clinical” model was also utilised, with samples processed as fresh-frozen, washed and irradiated for comparative assessment. There was no significant change in the mechanical strength of the washed material compared to fresh-frozen samples or between sterilisation types, suggesting the washed bone was mechanically comparable to existing bone allograft stock. BM-MSCs from both young (≤50 years) and old donors (≥70 years) were seeded on washed bone cubes from young and old donors, and cultured in standard or osteogenic media. Samples were analysed at 0, 14 and 28 day timepoints for cell viability, osteogenic gene expression, alkaline phosphatase activity and histological analysis. Results indicated significant fold increases in cell metabolism at day 14 and 28, in both medium types compared to day 0 (p≤0.001). QRT-PCR data showed increased expression of osteogenic markers RUNX2 (p≤0.001), osteopontin (p≤0.001) and osteocalcin (p≤0.001) in both standard and osteogenic media with significantly higher RUNX2 and osteocalcin in osteogenic medium samples at day 28. Expression of osteogenic genes was significantly higher in young donor cells seeded on the washed bone compared to old donor cells, as was expression in BM-MSCs cultured on old donor bone compared to young bone. This implies that the washed bone was able to induce osteogenic differentiation in BM-MSCs, that young donor cells were better able to differentiate than old, and that old donor bone was better able to induce osteogenic activity. Additionally, patient-matched BM-MSCs and ASCs, and BM-MSCs and BM-MNCs were seeded onto washed bone cubes and cultured for 28 days in standard or osteogenic media, with gene expression and metabolic activity assessed. The washed bone was able to induce osteogenic differentiation of ASCs. Moreover, BM-MNCs when cultured on washed bone also expressed osteogenic genes, indicative of osteogenic differentiation. These results indicate the efficacy of a novel wash process in producing a biological acellular scaffold suitable for bone tissue engineering. Interestingly, data also suggests that the age of the cell donor and bone donor may effect osteogenic differentiation of seeded cells which has significant implications clinically.

Fibroblastos gengivais desempenham um importante papel na regeneração de tecidos moles de proteção do periodonto. Alloderm® (MDA) é um substituto alógeno muito utilizado e estudado em periodontia. O objetivo do presente estudo foi avaliar, in vitro, se a MDA é uma matriz tridimensional adequada, através de sua resposta à cultura de fibroblastos gengivais e células neoplásicas; e, ainda, se os subprodutos da MDA influenciam o comportamento celular. Material e Métodos: Fibroblastos gengivais de cão (FGC) e fibroblastos gengivais humanos (FGH) foram obtidos pela técnica do explante a partir de tecido conjuntivo gengival de, respectivamente, três indivíduos e três cães saudáveis. As células FGC, FGH e B16F10 de melanoma murino foram cultivadas sobre a MDA por até 14 dias. Os seguintes parâmetros foram avaliados: presença, morfologia e distribuição de FGC, FGH e B16F10 por fluorescência direta; viabilidade de FGC e FGH por MTT; e o efeito do meio de cultura condicionado (MC) em MDA por 24 h na viabilidade celular de FGC por MTT. Os dados quantitativos foram submetidos aos testes estatísticos Mann-Whitney e Kruskal-Wallis, seguido pelo método de Dunn para comparações múltiplas (nível de significância: 5%). Resultados: A epifluorescência revelou que, em 12 h, FGH e FGC estavam aderidos à superfície da MDA em baixa densidade celular, exibindo morfologia poligonal com núcleos esféricos, enquanto que, aos 7 e 14 dias, essas células apresentavam com formato alongado, núcleos ovalados e citoesqueleto de actina com fibras de estresse. Aos 7 e 14 dias, FGC apresentavam-se distribuídos de forma desigual sobre a MDA, formando uma camada celular descontínua, sem aumento no número de células entre os períodos; FGH formaram uma monocamada celular na superfície da MDA, estando presentes em maior número após 14 dias de cultivo (p<0,05); e B16F10 exibiram um aumento no número de células de 12 h para 7 dias (p<0,05), apresentando-se dispostas em aglomerados celulares, principalmente na superfície da MDA, com a formação de camada contínua aos 14 dias. Notou-se maior número de células nas amostras cultivadas com B16F10, seguido por FGH e FGC aos 7 dias (p<0,05). Aos 14 dias, FGH e B16F10 estavam presentes em maior número, com diferença estatística significante em relação aos FGC (p<0,05). Foi observada maior porcentagem de células na superfície (p<0,05) do que no interior da MDA e essa proporção manteve-se estável durante os períodos avaliados para todos os tipos celulares. O ensaio de MTT indicou maior viabilidade celular nas amostras cultivadas com FGH comparado a FGC (p=0,024), aos 7 e 14 dias. Notou-se um decréscimo na viabilidade celular em culturas cultivadas em MC, com diferença estatística entre os grupos em 48 e 72 horas (p<0,05). Conclusão: Podemos concluir que fibroblastos gengivais e mesmo células altamente proliferativas, como B16F10, povoam apenas superficialmente a MDA e que FGC são afetados negativamente pelos subprodutos da MDA, reduzindo sua viabilidade. / Gingival fibroblasts play a central role in oral soft tissue regeneration. Alloderm® (Alloderm® - ADM) is the most used and studied allogeneic substitute. The aim of this investigation was to verify if ADM is a suitable threedimensional matrix, through its in vitro response to gingival fibroblasts and cancerous cells lineage and, also, if ADM end products affect cellular behavior. Methods: Canine gingival fibroblasts (CGF) and human gingival fibroblasts (HGF) cultures were established by the explant technique of gingival connective tissues of three dogs and three healthy patients, respectively. CGF, HGF and B16F10 cells of murine melanoma were seeded on ADM and grown for up to 14 days. The following parameters were assessed: presence, morphology and distribution of CGF, HGF e B16F10 by direct fluorescence; CGF and HGF viability by MTT; and the effect of culture medium conditioned (CM) in the MDA for 24 h on CGF viability by MTT. Quantitative data were submitted to Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests, followed by Dunn\'s method. Results: Epifluorescence revealed that CGF and HGF were adherent and exhibited a polygonal morphology at 12 h while at 7 and 14 days they were spread, exhibiting an elongated shape and the actin cytoskeleton assembled into stress fibers. CGF were unevenly distributed on ADM surface, showing no increase in cell number over the experimental periods; HGF formed a monolayer on the ADM surface, in a higher number at 14 days (p<0,05); B16F10 exhibited na increase in cell number in 7 days (p<0,05), and were mainly arranged in cell aggregates on the ADM, forming a continuous layer at 14 days. A higher percentage of cells on the ADM surface (p <0.05) compared to inside the matrix was observed for all cell types in all periods. MTT values indicated higher cell viability in samples cultured with HGF compared to CGF (p=0.024). A significantly lower cell viability for CGF grown in CM compared to cells grown in non conditioned medium at 48 and 72 h (p <0.05) was noticed. Conclusion: Gingival fibroblasts and even highly proliferative cells as B16F10 can be only superficially located on ADM and CGF are negatively affected by ADM end products, reducing its viability.

Pacientes com altos padrões de higiene bucal frequentemente procuram tratamento retração gengival (RG) bucal devido ao desgaste cervical, sensibilidade radicular e comprometimento estético. A lesão cervical (LCNC) é comumente gerada por técnicas inadequadas de escovação, compartilhando a mesma etiologia da RG. Muitas abordagens cirúrgicas diferentes foram descritas para o tratamento das RG. A associação de um enxerto ao retalho coronário avançado demonstrou o melhor resultado a longo prazo para o recobrimento radicular (RR). Mas substitutos para o enxerto autógeno devem ser estudados. Portanto, o objetivo deste ensaio clínico foi investigar a eficácia do enxerto de matriz dérmica acelular (EMDA) no RR de RG associada a uma lesão cervical restaurada anteriormente (GT) ou não (GC). Dezessete indivíduos com RG bilateral foram incluídos no estudo. Todos os pacientes foram tratados com a técnica do retalho estendido associada à EMDA. Todos os parâmetros clínicos foram avaliados no início e após 6 meses de pós-operatório. As médias de RR (GC: 70% ± 19 e TG: 72% ± 16; valor de p = 0,6604) não diferiram significativamente entre os grupos. Aos 6 meses, houve uma redução média na RG de 2,2mm (± 0,5), 2,4mm (± 0,5), no NCI de 1,9mm (± 1,3) e 2,1mm (± 1,2), para o GC e GT, respectivamente. . Além disso, a altura do MQ e a EMQ apresentaram um aumento para o período de acompanhamento. O ADMG é um substituto de sucesso para ETC para RR de LCNC. Mais estudos devem ser realizados para elucidar precisamente como a EMDA contribui nesses casos / Patients with high standards of oral hygiene frequently search for buccal gingival recession (GR) treatment due to cervical wear, root sensitivity and compromising aesthetics. The cervical lesion (NCCL) is commonly produced by improper toothbrushing techniques, sharing the same etiology of GR. Many different surgical approaches have been described. The association of a graft to the coronally advanced flap had demonstrated the best long-term outcome for root coverage. But, substitutes for the autogenous graft must be studied. Therefore, the aim of this clinical trial was to investigate the effectiveness of the acellular dermal matrix graft (ADMG) in root coverage associated with a previous restored cervical lesion or not. Seventeen individuals with bilateral GR were included in the study. At one side, the GR must present a previously restored cervical lesion, as the test group (TG). The contralateral arch, must present GR with an intact root surface (CG). All patients were treated with the extended flap technique associated with the ADMG. All clinical parameters were assessed at baseline and 6-months postoperative. Root coverage means (CG: 70% ±19 and TG: 72% ±16; p value = 0.6604) were not significant different between groups. At 6-months, there was a mean reduction in GR of 2.2mm (±0.5), 2.4mm (±0.5), in CAL of 1.9mm (±1.3) and 2.1mm (±1.2), for CG and TG, respectively. In addition, the KT height and KTT presented an increase for the follow up period. The ADMG is a successful substitute to CTG for root coverage of NCCL defects. More studies should be performed in order to elucidate precisely how the ADMG works in these cases