Memoria para optar al título de Químico / Se sintetizaron sales de fosfonio derivadas del ácido gálico con potencial actividad biológica, por medio de dos estrategias sintéticas. La primera ruta está compuesta de 3 pasos, donde la esterificación se realizó a través de la formación del haluro de acilo correspondiente, obteniendo como producto final la sal de fosfonio derivada del ácido gálico con los hidroxilos fenólicos bencilados. La segunda ruta consiste en una esterificación directa a partir del ácido gálico utilizando la esterificación de Steglich. Se informan resultados de viabilidad y respiración del adenocarcinoma mamario de ratón TA3 por la acción de los productos finales, confirmando su capacidad citotóxica en células tumorales. / Derivatives phosphonium salts from gallic acid with biological activity potential were synthesized by means of two synthetic strategies. The first path consist of three steps where the esterification was performed through the formation of the acyl halide, obtaining as a final product the derivative phosphonium salt from gallic acid with the benzylated phenolic hydroxyl. The second route involves a direct esterification from gallic acid using Steglich esterification. Results on viability and respiration by these final products are reported, confirming their ability to inhibit the growth mouse mammary adenocarcinoma TA3 cell line. / Fondecyt

Memoria para optar al Título de Bioquímico / Se ha descrito que los ésteres derivados del ácido gálico poseen efecto citotóxico sobre las células tumorales. En este trabajo se analizaron los mecanismos de muerte celular, inducidos por los compuestos catiónicos lipofílicos derivados del ácido gálico: galato de octil trifenilfosfonio, galato de decil trifenilfosfonio, undecil galato de trifenilfosfonio y lauril galato de trifenilfosfonio [C8TPP+, C10TPP+, C11TPP+ y C12TPP+, respectivamente]. Para ello se utilizaron las líneas celulares de adenocarcinoma mamario de ratón TA3 y de leucemia linfoblástica aguda humana CCRF/CEM, con sus respectivas variantes multiresistentes TA3-MTX-R y CEM/C2. Estas células fueron tratadas con distintas concentraciones (0,5, 15, 30 y 50 μM) de los cationes lipofílicos, durante 2 y 4 horas y al cabo de estos periodos se determinó la viabilidad celular. El tratamiento con los cationes C10TPP+ y C12TPP+ produjo una disminución significativa de la viabilidad de las células tumorales; sin embargo, los cationes C8TPP+ y C11TPP+ no produjeron efectos significativos. Las microfotografías obtenidas por microscopía electrónica de transmisión evidenciaron alteraciones profundas en la ultraestrucutura mitocondrial de las células TA3 provocadas por el catión C12TPP+. Más aún, el tratamiento con los cationes C10TPP+ y C12TPP+ produjo la sobrexpresión del gen pro-apoptótico gadd45α, en todas las líneas celulares y en la mayoría de las condiciones ensayadas; la expresión del gen bax no fue afectada; el gen gabarap se sobrexpresó sólo en las líneas celulares CCRF/CEM y CEM/C2, y en dos de las condiciones ensayadas. Estos resultados en conjunto muestran que tanto C10TPP+ como C12TPP+ son los compuestos citotóxicos más potentes, y que la muerte celular ocurriría principalmente a través de la inducción de la vía intrínseca de apoptosis, y en menor porcentaje estaría dada por autofagia / It has been reported that esters of Gallic acid have cytotoxic effects on cancer cells. In this work we analyzed the mechanisms of cell death induced by lipophilic cation derivatives of Gallic acid: octyl triphenylphosphonium gallate decyl triphenylphosphonium gallate, undecyl triphenylphosphonium gallate, and dodecyl triphenylphosphonium gallate [C8TPP+, C10TPP+, C11TPP+ and C12TPP+, respectively]. Cell lines used in this study were: TA3 (mouse mammary adenocarcinoma) and CCRF/CEM (human acute lymphocytic leukemia) and their multiresistant variants TA3 MTX-R and CEM/C2, respectively. These cell lines were treated with increasing cations concentrations (0,5, 15, 30 and 50 μM) of lipophilic compounds during 2 and 4 h and then screened for viability. The treatment of cells with C10TPP+ and C12TPP+ decreased the cell viability, whereas that C8TPP+ and C11TPP+ did not affect it. Hence, we investigated the mitochondrial toxicity of the lipophilic cation using Transmission Electron Microscopy. Our results indicated changes in the mitochondrial ultrastructure provoked by C12TPP+ treatment in TA3 cells. Moreover, Real Time RT-PCR analysis for cell death related genes (gabarap, bax and gadd45α) expression, revealed that C10TPP+ and C12TPP+ up-regulated pro-apoptotic gene gadd45α in all cell lines and in almost all assay conditions, while Bax gene expression was not affected. Gabarap was up-regulated but not in all cell lines and only in a few assay conditions. Taking account these results, we may conclude that C10TPP+ and C12TPP+ were the most potent cytotoxic compounds. The principal mechanism of cell death seems to be through the induction of the intrinsic route of the apoptosis, but also a percentage of autophagy occurs.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Obtiene el ácido gálico mediante el aislamiento de hongos nativos a partir de las vainas de tara procedente de los departamentos de Ayacucho, Huaraz y Lima, durante 7 días de evaluación mediante el Método de Cámara Húmeda. Consiguiendo, un total de 34 cepas fúngicas aisladas de las vainas de tara, de las cuales el 76.47% lo representa las cepas del género Aspergillus y el 23.53% del género Penicillium. Del total de cepas fúngicas aisladas se seleccionaron aquellas que presentaron mayor capacidad en el uso de ácido tánico, siendo para ello previamente sembradas en Agar Czapeks Dox suplementado con 1% de ácido tánico a nivel in vitro, evaluando a lo largo de 5 días el radio de crecimiento. Siendo así seleccionadas las cepas de Aspergillus aisladas de las vainas de tara procedentes del departamento de Huaraz identificadas como: HRTAS-02 y HRTAS-09 con radio de crecimiento de 3.5 cm. y 3.25 cm. respectivamente, al primer día de evaluación. Así mismo, se realizó la caracterización física y química del polvo de vaina de tara procedente del departamento de Ayacucho debido a que presenta el mayor contenido de taninos, lo cual se demuestra mediante el método titrimétrico obteniendo el 65.68% de taninos. Los resultados obtenidos se compararon con el método de hidrolisis química ácida en la cual se obtuvo una concentración de 73.01 mg/l de ácido gálico. Siendo el 73.34% la conversión de los taninos presentes en el polvo de vaina de tara a ácido gálico obtenido a partir del método de fermentación enzimática. / Tesis

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Enología / Los polifenoles son compuestos generados a partir del metabolismo secundario de las plantas que presentan entre otras, actividad antibacteriana. Entre los polifenoles se encuentra el ácido gálico (no flavonoide) y la catequina (flavonoide). Helicobacter pylori es una bacteria Gram negativa, de forma bacilar espiralada, microaerofílica, flagelada, neutrófila, que habita en la capa mucosa que recubre el epitelio del estómago humano. Se estima que el 50% de la población mundial está infectada con la bacteria, alcanzando un 73% de prevalencia en la población en Chile. Ésta está relacionada con enfermedades como gastritis, úlceras y es un factor de alto riesgo para adquirir cáncer gástrico. Las terapias de erradicación de H. pylori consisten en el uso de antibióticos que no siempre son exitosas. Por esta razón, es necesario investigar tratamientos alternativos contra la infección por H. pylori. Diversas investigaciones muestran que constituyentes de Vitis vinifera y del vino tendrían efecto sobre la bacteria. El propósito de este trabajo fue estudiar el efecto antibacteriano del ácido gálico y de la catequina sobre Helicobacter pylori y Escherichia coli, como microorganismo control dados los diversos estudios que afirman que los polifenoles presentes en el vino tendrían efecto anti-Escherichia coli. La metodología consistió en cultivar las bacterias en medio líquido o en medio sólido, suplementados con rangos de dosis de ácido gálico y/o catequina. La actividad antibacteriana de los polifenoles en medio líquido se evaluó midiendo la DO600 de los cultivos y contabilizando las CFU/mL. Además, se midió el diámetro del halo de inhibición del crecimiento de las bacterias en medios sólidos, suplementados con los polifenoles en forma individual o en conjunto. También se evaluó la cinética de inhibición por parte de estos compuestos sobre el crecimiento bacteriano. Los resultados indican que tanto ácido gálico como catequina presentan actividad bactericida sobre ambas bacterias, siendo más efectivo el ácido gálico (el cual inhibe el crecimiento con concentraciones, dosis y tiempos de exposición menores que la catequina). La bacteria más sensible a los dos polifenoles es H. pylori. El efecto sinérgico resultó ser variable, relacionado fuertemente con las dosis de ácido gálico y catequina. / The purpose of this work was to study the antibacterial effect of gallic acid and catechin on H. pylori using E. coli as a control microorganism because various studies suggest that wine polyphenols show anti-Escherichia coli effects. The methodology consisted in growing bacteria in liquid (Trypticase soy broth or Luria Bertani) or agar (Trypticase soy agar or Luria Bertani agar) media. The culture media were supplemented with increasing doses of gallic acid and/or catechin, to generate the various conditions. In liquid medium, OD600 and CFU/mL were scored. In addition, diameters of the halo of growth inhibition produced by the two compounds either individually or together were also measured. Finally, both compounds were also determined kinetics of inhibition of bacterial growth. The results indicate that both polyphenols have antibacterial activity on both bacteria and that gallic acid is more effective, because inhibits growth at concentrations, doses and times less than catechin. H. pylori was most sensitive bacteria to both polyphenols and the synergistic effect between both polyphenols was observed but it was strongly depend upon doses of gallic acid and catechin.