Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T19:11:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prado_Mairado_D.pdf: 14853217 bytes, checksum: f86be389a870042c299930884a318e11 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a interação entre as diferentes substâncias químicas auxiliares, utilizadas em endodontia, e seus efeitos nas etapas do tratamento endodôntico. Métodos: Soluções de hipoclorito de sódio (NaOCl) a 0,16%, 1%, 2,5% e 5,25%, clorexidina 2% solução e gel, EDTA 17%, ácido cítrico 10% e ácido fosfórico 37% foram utilizadas isoladamente ou associadas entre si na proporção 1:1. As mesmas foram analisadas quimicamente por espectrometria de massa; e microbiologicamente pelo método de difusão em ágar, contra diferentes patógenos. Adicionalmente, foram avaliados onze protocolos de irrigação em relação à formação de smear layer química por microscopia eletrônica de varredura. Por fim, foram avaliados 9 protocolos de irrigação associados a dois diferentes sistemas de obturação, guta-percha/ AH Plus e Resilon/ Real Seal SE, em relação à microinfiltração coronária e à resistência de união da dentina aos materiais obturadores. Resultados: O NaOCl, em todas as concentrações, associado à clorexidina em ambas as formulações, levou à formação de precipitado, assim como a associação entre a clorexidina e o EDTA e entre clorexidina e solução salina. Todas as associações avaliadas apresentaram algum grau de inibição contra os patógenos testados. Irrigação intermediária, com 10 mL de água destilada, entre as soluções de NaOCl e clorexidina, não foram capazes de inibir a formação de smear layer química, assim como irrigações com EDTA e ácido cítrico. Dos diferentes protocolos de irrigação avaliados, aqueles que apresentaram uma irrigação final com solução de clorexidina 2% tiveram níveis reduzidos de microinfiltração coronária. Em relação à resistência de união à dentina, no sistema obturador guta-percha/AH Plus, os grupos em que se utilizou as associações NaOCl/ácido fosfórico e clorexidina/EDTA apresentaram maiores valores de resistência de união, ao passo que no sistema Resilon/Real Seal SE, os maiores valores foram encontrados nos grupos clorexidina/ácido fosfórico. A utilização da clorexidina como irrigante final não afetou negativamente os sistemas obturadores avaliados. Conclusões: A interação entre as substâncias químicas auxiliares pode levar à formação de precipitados. As diferentes substâncias químicas auxiliares, quando associadas, possuem atividade antimicrobiana. Irrigações intermediárias entre as diferentes substâncias químicas auxiliares são necessárias para reduzir ou até mesmo impedir a formação de precipitados, visualizados na superfície dentinária como uma smear layer química. Durante o preparo químicomecânico, as diferentes substâncias químicas auxiliares geram modificações na superfície dentinária que influenciam na microinfiltração coronária e na resistência de união dos sistemas obturadores guta-percha/AH Plus e Resilon/Real Seal SE / Abstract: Introduction: The aim of the present study was to evaluate the interaction among different chemical auxiliary substances used in endodontics and their effects on different steps of endodontic treatment. Methods: 0.16%, 1%, 2.5% and 5.25% sodium hypochlorite solutions (NaOCl), 2% chlorhexidine solution and gel, 17% EDTA, 10% citric acid, 37% phosphoric acid, distilled water, and saline solution were used both associated with each other (1:1 ratio) and not associated. The solutions were chemically examined with mass spectrometry. They were microbiologically examined using the Agar Diffusion Method, against different pathogens. In addition, eleven protocols were analyzed in regards to chemical smear layer with scanning electron microscopy. Finally, nine irrigation protocols (associated with two filling systems, i.e. gutta-percha/AH Plus and Resilon / Real Seal SE) were examinated regarding coronal microleakage and were examined as well regarding their bond strength with dentin. Results: NaOCl, at all concentrations, associated with both chlorhexidine formulations, led to precipitate formation, similar to the association between chlorhexidine/EDTA, and the chlorhexidine/saline solution association. All associations had some degree of inhibition against the evaluated pathogens. Intermediate flush, with 10 mL of distilled water, between NaOCl and chlorhexidine did not inhibit chemical smear layer formation, similar to intermediate flushes with EDTA and citric acid. Among the different irrigation protocols that were evaluated, when final flush with 2% chlorhexidine was present, the lowest levels of coronal microleakage were found. Regarding the bond strength to dentin, in the gutta-percha/AH Plus system, the groups with NaOCl/phosphoric acid and chlorhexidine/EDTA associations showed higher bond strength values. In the Resilon/Real Seal SE system, the highest values were found in the chlorhexidine/phosphoric acid groups. The use of chlorhexidine as a final flush did not negatively affect the filling systems evaluated. Conclusions: The interaction among the auxiliary chemical substances may lead to precipitate formation. The association between the different substances has antimicrobial activity. Intermediate flushes are necessary to reduce or even avoid the formation of chemical smear layer on the dentin surface. During the chemo-mechanical preparation, the various auxiliary chemical substances used do modify the dentine surface. These modifications have influence in the coronal microleakage and in the bond strength of the filling systems gutta-percha/AH Plus and Resilon / Real Seal SE / Doutorado / Endodontia / Doutora em Clínica Odontológica

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-18Bitstream added on 2014-06-13T20:27:55Z : No. of bitstreams: 1 bier_cas_dr_arafo.pdf: 458795 bytes, checksum: df3d3967d50d9e31912505515f745092 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desse estudo foi a avaliação da liberação de íons cálcio, do pH e da adesividade de alguns cimentos utilizados em Endodontia: Sealapex (G1), Sealer 26 (G2), Acroseal (G3), Epiphany (G4), MTA Branco (G5), Endo CPM Sealer (G6). Após a espatulação, os materiais foram inseridos em tubos de polietileno medindo 1,5 mm de diâmetro interno e 1 cm de comprimento com ambas extremidades abertas e imersos em frascos de vidro contendo 10 mL de água ultra pura. Nos períodos de 2, 6, 12, 24 e 48 horas, 7, 14 e 28 dias foram realizadas as análises, sendo o tubo contendo o cimento transferidos para novo frasco a cada período. O pH e a liberação de íons cálcio foram avaliados, respectivamente por meio de pH metro e espectrofotometria de absorção atômica. Para a avaliação da adesividade dos cimentos endodônticos às paredes dentinárias, os canais radiculares de 28 dentes humanos uniradiculados foram dilatados com brocas de Gates Glidden número 1, 2 e 3 e brocas largo número 1, 3 e 5. As raízes foram cortadas em máquina de corte para confecção de discos de 2 mm de espessura. Durante o preparo e depois da secção os espécimes foram irrigados com solução de hipoclorito de sódio a 2,5% e com EDTA a 17 % para a remoção da smear layer. Após a divisão aleatória nos grupos experimentais, os espécimes foram secos e preenchidos com os cimentos endodônticos, sendo mantidos em estufa a 37oC e 95% de umidade relativa do ar por 48 hs. Em seguida, cada conjunto dentina/cimento endodôntico foi submetido ao teste push-out em uma máquina de ensaio mecânico e a tensão necessária para a remoção do cimento medida em Mega Pascal (MPa). Após a coleta dos dados estes foram submetidos à análise estatística de Análise Variância e teste Tukey, com nível de 5% de significância. Os maiores valores de pH foram obtidos pelos G6, seguido por G2 e G5 após 2 horas (P<0,05)... / The aim of this study was to evaluate in vitro the pH, calcium ion release and adhesiveness provide by 6 endodontic filling materials: Sealapex (G1), Sealer 26 (G2), Acroseal (G3), Epiphany (G4), White MTA (G5), Endo CPM Sealer (G6). After manipulation, the sealers (n=10) were placed in tubes with 10 mm-long and 1.5 mm in diameter and immediately immersed in a glass flask containing 10 ml of ultra pure water, which was hermetically sealed and stored at 37°C. At 2, 6, 12, 24 and 48 hr, and at 7, 14 and 28 days after mixing the tubes were moved to new flask with fresh solution and the water in which they were immersed was analyzed for pH with a pH meter and for released calcium by atomic absorption spectrophotometry. To evaluate the adhesiveness of the sealers to the root canal wall, 28 teeth were enlarged to size 5 Largo drill and cut in a cutting machine to create 2 mm thickness slices. During all this procedure the root canal was irrigated with sodium hypochlorite 2.5% and with EDTA 17% to remove the smear layer. The slices were randomly allocated to one of the groups, dried and filled with the sealers and kept in a controlled environment (37oC and 95% humidity) to allow the setting of the sealers. After that, the slice root/endodontic sealer was submitted to push out test in a mechanical testing machine and the results were expressed in Mega Pascal (MPa). The results obtained at each time were statistically evaluated. After 2 hours the uppermost pH was found in the G6, followed by G2 and G5 (P<0,05). From 6 h till 24 h the highest value were observed in groups G5, G6 and G2. After 48 hours, the pH of groups G5 and G6 were stood out. Finally from the 7th to 28th days of evaluation G2, G5 and G6 presented the utmost pH. With regards to calcium ions release in beginning periods the G6 was statistical significantly from the other groups until the 7th day (P<0.05)... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_MarciaHelenaMiranda_D.pdf: 20008968 bytes, checksum: 1a1bf9dc06053f021c3ee9e0591edd1e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A inibição da adesão de plaquetas ao subendotélio é fundamental na prevenção de agregação excessiva e de formação de trombos, sendo o óxido nítrico (NO) o principal mediador envolvido neste fenômeno. O objetivo deste estudo foi investigar o mecanismo de ação do NO na inibição da adesão de plaquetas humanas, procurando identificar os mecanismos dependentes e independentes de GMP cíclico (GMPc). Os ensaios de adesão foram realizados em placas de 96 poços recobertos com fibrinogênio, usando-se plaquetas lavadas (1,2 x 108 plaquetas/mL) obtidas de indivíduos sadios. Dependendo do protocolo experimental, as plaquetas não ativadas e ativadas com trombina (50 mU/mL) foram incubadas com SNP (0,1-1,0 mM) ou SIN-1 (0,1-1,0 mM), na ausência ou na presença de ODQ (inibidor da guanilato ciclase solúvel), SOD (seqüestrador do ânion superóxido) ou gaiato (antioxidante seqüestrador de peroxinitrito). A adesão foi avaliada aos 15 e 60 min de incubação, medindo-se a atividade da fostase ácida. Nossos resultados mostraram que as plaquetas se aderem significativamente ao fibrinogênio in vitro, sendo a resposta em 60 min maior do que em 15 min. O tratamento das plaquetas com SNP (0,1 e 1,0 mM) elevou significativamente os níveis de GMPc e reduziu a adesão plaquetána aos 15 e 60 min. A pré-incubação das plaquetas com ODQ impediu a elevação dos níveis de GMPc induzida pelo SNP (ambas as concentrações e tempos), e reverteu a inibição da adesão plaquetária observada com 0,1 mM de SNP Entretanto, o ODQ não modificou a inibição da adesão quando se usou 1,0 mM de SNP. Por outro lado, a pré-incubação das plaquetas com SOD ou gaiato reverteu significamente o efeito inibitório de 1 mM de SNP. Resultados semelhantes foram obtidos com o SIN-1 em todas as condições experimentais. No sentido de descartar que a inibição da adesão plaquetária proporcionada pelos doadores de NO não é decorrente de efeito citotóxico, realizamos ensaios de citotoxicidade (MTT). Nossos dados revelaram que o SNP não é tóxico à plaqueta em nenhuma das concentrações e condições usadas. Por outro lado, o SIN-1 mostrou-se tóxico na concentração de 1 mM, sendo este efeito citotóxico revertido pela pré-incubação das palquetas com SOD. Numa segunda etapa deste trabalho, passamos à investigação do componente independente de GMPc responsável pela inibição da adesão plaquetária em resposta ao SNP e SIN-1, dando ênfase à nitrotirosina. A incubação de plaquetas com SNP (0,1 mM) por 15 min não revelou nenhuma proteína nitrada, mas quando as plaquetas foram tratadas com concentração maior de SNP (1 mM) ou SIN-1, houve o aparecimento de uma nitração de proteína nos resíduos de tirosina com uma massa molecular aparente de 110 kDa, identificada como alfa-actinina-1. A nitração foi aumentada em plaquetas ativadas com trombina. Por outro lado, amostras de plaquetas tratadas com SNP ou SIN-1 (0,1 e 1 mM) por 60 min não mostraram nitração de proteína nos resíduos de tirosina. No conjunto, estes dados sugerem que o NO inibe a adesão de plaquetas não ativadas e ativadas, por mecanismos dependentes e independentes de GMPc sendo que a nitração da a-actinina 1 plaquetária, parece ser o principal mecanismo responsável pelo componente independente de GMPc. Paralelamente, observamos que em concentrações elevadas, o SIN-1 diminui a viabilidade e a atividade da fosfatase ácida das plaquetas devido à formação de ânion superóxido. / Abstract: The inhibition of platelet adhesion to the subendothelium by nitric oxide (NO) is essential in preventing excessive aggregation and thrombus formation The objective of this work was to investigate the mechanisms of the NO on inhibition of human platelet adhesion looking for identify of the cGMP-dependent and independent mechanisms Adhesion assay was carried out in the 96-well microtiter plates coated by fibrinogen, using washed platelet (1,2 x 108 plaquetas/mL) from healthy volunteers. Depending on the experimental protocols, non activated or thrombin (50 mU7ml_)-activated platelets were incubated with NO donors (SNP or SIN-1), guanylyl cyclase inhibitor (ODQ), O2" scavenger (SOD) and -(-) epigallocatechin gallate, and allowed to adhere to the wells for either 15 or 60 min at 37°C. Cell toxicity was estimated using the MTT assay by platelets after exposure to NO donors. Nitrated proteins were detected by immunobloting. Purification and identification of them were done by Western blotting analysis and mass spectrometry respectively. Significant platelet adhesion was achieved when non-activated and activated platelets were kept on plates for 15 min or 60. The adhesion was significantly increased when platelets were activated with of thrombin. SNP (0,001 - 1000 nM) inhibited significantly both non-activated and thrombm-stimulated platelet adhesion. The MTT reduction assay showed that the exposure of platelets to SNP (0 1 and 1 mM) caused any toxic effect. Pretreatment of platelets with ODQ nearly abolished SNP (0.1 mM)-mediated cGMP elevation and the inhibition of platelet adhesion, but failed to affect the inhibitory effect of SNP (1 mM) on cell adhesion. Pre-incubation of platelets with SOD, reversed the effect of SNP 1mM. Epigalocatechin gallate did not affect the effect of SNP at 0.1 mM: on the other hand, reduced this effect at 1mM SNP. SIN-1 (0,001 - 100 jiM) concentration-dependently inhibited both non-activated and thrombin-stimulated platelet adhesion. In the higher concentration (1 mM), the SIN-1 inhibited almost all platelet adhesion. Pretreatment of platelets with ODQ markedly reverted the increased the levels of cGMP as well as decreased the inhibition of platelet adhesion by SIN-1 at 0,1 mM. SOD did not change the SIN-1 (0,1 mM)- mediated platelet inhibition, but reverted the platelet inhibition in all another conditions. MTT assay showed that the SIN-1 at 1 mM caused toxic effect in the platelets, and this effect was restored by SOD ECG did not affect the effect of SIN-1, excepted in the small concentration, when the inhibitory effect of thrombin-activated platelets was decreased. Immunobloting indicated the presence of nitrated protein that was recognized as alpha-actinin 1. In conclusion, cGMP-dependent and -independent mechanisms contribute to inhibition of platelet adhesion by NO, and that the a-actinic nitration can be the most important c GMP-independent mechanism. Parallel of this, we observed that the high concentration of SIN-1 decreased the viability and acid phosphatase activity by formation of superoxide anion. / Doutorado / Doutor em Farmacologia