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AvaliaÃÃo da atividade antiinflamatÃria e antioxidante das cÃpsulas do extrato seco e da afrormosina, isoflavonÃide, obtidos de Amburana cearensis A C Smith. / Evaluation of anti-inflammatory and antioxidant activity of capsules of dried extract and afrormosin, isoflavonoid, obtained from Amburana cearensis AC Smith.Amanda de AraÃjo Lopes 29 November 2010 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A casca do caule de Amburana cearensis A C Smith, conhecida popularmente como cumaru, à utilizada para o tratamento de doenÃas respiratÃrias como bronquite e asma. Estudos farmacolÃgicos anteriores mostraram as atividades antiinflamatÃria, antioxidante e antinociceptiva do extrato e molÃculas isoladas do cumaru: incluindo cumarina (CM) e amburosÃdeo A (AMB). Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi realizar uma avaliaÃÃo preliminar da citotoxicidade, e investigar o potencial antiinflamatÃrio e antioxidante da cÃpsula do extrato seco de A. cearensis (CESAC) e da Afrormosina (AFM), com determinaÃÃo do possÃvel mecanismo de aÃÃo. Para tanto, as cÃpsulas foram produzidas a partir do extrato seco (spray-dryer) padronizado pelo teor de AMB e CM por CLAE. A citotoxicidade foi investigada em neutrÃfilo humano (2,5 x 106 cÃlulas/mL) atravÃs dos testes de exclusÃo ao corante azul de tripan, LDH, MTT e avaliaÃÃo do padrÃo de morte celular pelo corante laranja de acridina/brometo de etÃdio. A AFM (10, 50 e 100 Âg/mL) nÃo mostrou citotoxicidade, enquanto que a CESAC (10, 100 e 200 Âg/mL) aumentou o nÃmero de cÃlulas em apoptose e necrose. A CESAC (100-400 mg/kg, v.o.) inibiu o edema de pata em camundongos, o acÃmulo de cÃlulas e os nÃveis de TBARS-MDA no peritÃnio, induzidos por carragenina. No lavado broncoalveolar de ratos desafiados com ovalbumina, a CESAC reduziu o acÃmulo de cÃlulas, bem como a produÃÃo de TBARS-MDA e nitrito/nitrato, alÃm de restabelecer os nÃveis de GSH. Tanto a CESAC (5, 10, 25, 50, 100 e 200 Âg/mL), quanto AFM (3; 6; 12,5; 25; 50 e 100 Âg/mL) reduziram a ativaÃÃo de neutrÃfilos humano induzida por fMLP (em atà 65 % e 66 %, respectivamente) ou PMA (em atà 72 % e 86 %, respectivamente). AlÃm disso, estes inibiram em atà 70 % aproximadamente a atividade de mieloperoxidase, porÃm apenas a CESAC inibiu a atividade da elastase (6-88 % inibiÃÃo). A adiÃÃo de CESAC ou AFM à suspensÃo de neutrÃfilos reduziu tambÃm os nÃveis de TNFα. O CESAC e a AFM mostraram atividade inibitÃria do metabolismo oxidativo de neutrÃfilos mensurado atravÃs de ensaios de quimioluminescÃncia dependente de luminol (QL lum) e lucigenina (QL luc). / The stem bark of Amburana cearensis AC Smith, popularly known as cumaru, is used to treat respiratory diseases like bronchitis and asthma. Previous pharmacological studies showed the anti-inflammatory, antinociceptive and antioxidant, and / or muscle relaxant activities of the the extract and isolated molecules from cumaru, including coumarin (CM) and amburoside A (AMB). Given the above, the objective of this study was to conduct a preliminary assessment of cytotoxicity, and investigate the anti-inflammatory and antioxidant potential of the capsule of the dryed extract from A. cearensis (CESAC) and afrormosin (AFM) to determine the possible mechanism of action. For this, the capsules were produced from the dried extract (spray-dryer), standardized by the content of CM and AMB by HPLC. Cytotoxicity was investigated in human neutrophil (2.5 x 106 cells / mL) through the tests of the exclusion dye trypan blue, LDH, MTT and evaluation of the pattern of cell death by acridine orange / ethidium bromide. AFM (10, 50 and 100 Âg / mL) showed no cytotoxicity, while CESAC (10, 100 and 200 Âg / mL) increased the number of apoptotic and necrotic cells. The CESAC (100-400 mg / kg, po) inhibited the paw edema in mice, the accumulation of cells and MDA-TBARS levels in the peritoneum induced by carrageenan. In bronchoalveolar lavage of mice challenged with ovalbumin, the CESAC reduced the accumulation of cells, as well as production of TBARS, MDA and nitrite / nitrate, and restore the levels of GSH. Both CESAC (5, 10, 25, 50, 100 and 200 Âg / mL), and AFM (3, 6, 12.5, 25, 50 and 100 Âg / mL) reduced the activation of human neutrophils induced by fMLP ( up to 65% and 66%, respectively) or PMA (up to 72% and 86%, respectively). Moreover, they inhibited by 70% about the activity of myeloperoxidase, but only CESAC inhibited elastase activity (6-88% inhibition). The addition of AFM or CESAC in suspension of neutrophils also reduced the levels of TNFα. The CESAC and AFM showed the inhibitory activity of neutrophil oxidative metabolism measured by tests of luminol- (CL lum) and lucigenin-dependent (CL luc) chemoluminescence.
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