Estima-se que, em 2013, cerca de 382 milhões de pessoas eram portadoras de diabetes mundialmente. Já o diabetes mellitus do tipo 1 (DMT1) representa de 5-10% desse total de casos, cujo tratamento atual se pauta na administração de insulina exógena. Contudo, desde a publicação do protocolo de Edmonton, o transplante de ilhotas pancreáticas se apresenta como nova técnica no tratamento para o DMT1, inclusive obtendo a independência de insulina em alguns casos. Apesar disso, a escolha do sítio receptor ainda é essencial para diminuir efeitos adversos e permitir o acompanhamento do enxerto. Nesse sentido, destaca-se o transplante de ilhotas para a câmara anterior do olho, pois permite, além do restabelecimento do controle glicêmico, o estudo da fisiologia dos enxertos in vivo. Dessa forma, o objetivo foi estabelecer metodologia de isolamento e transplante de ilhotas de alta reprodutibilidade e baixo custo, utilizando a câmara anterior do olho como sítio receptor. O isolamento foi realizado via injeção de solução de colagenase (1 mg/mL via ducto colédoco) em camundongos machos C57BL/6 hígidos de 8 semanas de idade e posterior transplante dessas ilhotas para camundongos machos da mesma espécie com diabetes induzido por injeção de aloxana (60 mg/kg, i.v.). Esses camundongos foram submetidos a infusão de aproximadamente 250 equivalentes de ilhotas (IEQs) para a câmara anterior do olho e tiveram sua glicemia e alteração de massa corpórea acompanhadas por 14 dias após o transplante. Também foi realizado teste de tolerância a glicose via injeção de solução de glicose (2g/kg i.p.) e realização da curva glicêmica. Obteve-se, na etapa de padronização, que a adição de 0,5% (%p/v) de albumina de soro bovino à solução de colagenase foi capaz de aumentar o número de IEQs isolados por animal. Quanto ao transplante, obteve-se que 50% dos animais submetidos à técnica tiveram diminuição significativa na sua glicemia (172,5 ± 6,4 mg/dL), quando comparados com o grupo controle diabético (582,8 ± 27,5 mg/dL) (p < 0,05). Entretanto, todos os animais tiveram aumento significativo da massa corpórea no período de acompanhamento e glicemia de jejum significativamente menor que os animais diabéticos (p < 0,05). Ademais, a curva glicêmica dos animais que tiveram transplante considerado bem sucedido, no teste de tolerância a glicose, se aproxima da curva do grupo controle sadio. Conclui-se que o modelo de transplante de ilhotas pancreáticas para a câmara anterior do olho foi bem estabelecido neste projeto, confirmado pelos resultados que evidenciam o transplante de ilhotas funcionais capazes de reduzir sensivelmente a glicemia e promover o ganho de peso em camundongos diabéticos. / It is estimated that, in 2013, around 382 million people had diabetes worldwide. Of that number, 5-10% represented cases of T1DM, which treatment is based in the administration of exogenous insulin. However, since the Edmonton protocol was published, islet transplantation presented itself as novel technique for T1DM treatment, achieving insulin independence in some cases. Although, recipient site choice is still essential to diminish side effects and enable graft follow up. In that sense, transplantation to the anterior chamber of the eye stands out, since it allows, beyond the reestablishment of glycemic control, study of islet physiology in vivo. That way, the objective was to establish a low cost and high reproducible model of islet isolation and transplantation, using the anterior chamber of the eye as receptor site. Islet isolation was made by injection of collagenase solution (1 mg/mL via common bile duct) in 8 week old healthy male C57BL/6 mice and followed by transplantation of these islets to male mice of the same age and species with diabetes induced by alloxan injection (60 mg/kg i.v.). These mice were subject of 250 islet equivalents (IEQs) infusion to the anterior chamber of the eye and had their blood glucose and change in body mass monitored for 14 days after transplantation. A glucose tolerance test (GTT) was also made, by injection of glucose solution (2g/kg i.p.) and a glycemic curve was plotted. In the standardization period, was observed that the addition of 0,5% (%w/v) bovine serum albumin is capable of increasing the number of IEQs isolated from each animal. About the transplants, was obtained that 50% of animals subject to transplantation had their blood glucose decreased significantly (172,5 ± 6,4 mg/dL), when compared to the diabetic control group (582,8 ± 27,5 mg/dL) (p < 0,05). However, all animals subject to the procedure had significant body mass increase, when compared to the same control group and fasting blood glucose significantly lower than diabetic animals (p < 0,05). Moreover, the glycemic curve of animals, who had their transplantation considered successful, was similar to that found in healthy control animals, in the GTT. We conclude that the model of transplant to the anterior chamber of the eye is well established in this project, which is confirmed by results that shows transplantation of functional islets, capable of promoting a significant decrease in blood glucose and an increase in total body mass in diabetic animals.

O diabetes mellitus (DM) é uma doença com prevalência e morbidade elevadas em todo o mundo, sendo que o DM1 é responsável por 5-10% dos casos. A vitamina D, hormônio de ação pleiotrópica, pode melhorar o curso do DM1, embora os mecanismos não estejam completamente elucidados. Dessa forma, ampliar o conhecimento sobre a ação desse hormônio pode auxiliar no prognóstico, bem como na compreensão dos possíveis mecanismos envolvidos na prevenção do DM. Neste trabalho, foram avaliados os efeitos fisiológicos da suplementação de vitamina D (800 UI/dia/sete dias; via oral) em camundongos machos (n=31; linhagem C57BL/6) distribuídos em quatro grupos: Controle + Água (CA; n=9); Controle + Vitamina D (CV; n=9); Diabético + Água (DA; n=6) e Diabético + Vitamina D (DV; n=7). Os camundongos tornados diabéticos (aloxana, 60 mg/Kg, intravenosa), quando comparados aos controles, exibiram redução do peso corporal e concentrações plasmáticas de glicose mais elevadas durante o período experimental de 10 dias (características do estado insulinopênico). Entretanto, a suplementação com vitamina D não alterou essa condição. Camundongos tornados diabéticos, em relação aos controles, exibiram redução do peso corporal (p<0,05) e concentrações plasmáticas de glicose (p<0,001) mais elevadas durante o período experimental. Animais suplementados com vitamina D apresentaram, em relação aos controles, níveis de 25(OH)D mais elevados (CA vs CV, p<0,001; DA vs DV, p<0,001). Níveis séricos maiores de ureia (CA vs DA, p<0,05; CA vs DV, p<0,01; CV vs DA, p<0,05; CV vs DV, p<0,01) e creatinina (CA vs DA, p<0,001; CA vs DV, p<0,001; CV vs DA, p<0,001; CV vs DV, p<0,001), espessamento da cápsula de Bowman, hipertrofia glomerular e destruição de hepatócitos foram observados em camundongos diabéticos em relação aos controles. Entretanto, a suplementação com vitamina D não alterou estas condições. O grupo DA apresentou menor nível sérico de albumina em relação aos grupos CA (p<0,05) e CV (p<0,05); níveis inferiores de hemoglobina (p<0,05) e hematócrito (p<0,05) em relação ao grupo DV; e menor leucometria (p<0,05) e mononucleares sanguíneos (p<0,05) em relação ao grupo CA. Os resultados sugerem que a vitamina D possa influenciar a resposta imunológica em animais diabéticos, modulando hematócrito, hemoglobina, bem como os níveis séricos de albumina / Diabetes mellitus (DM) is a disease with high prevalence and morbidity worldwide, and the DM1 is responsible for 5-10% of cases. The vitamin D hormone pleiotropic action, can improve the course of T1DM, although the mechanisms are not fully elucidated. Thus, better understanding the action of this hormone can aid in prognosis as well as in understanding the possible mechanisms involved in the prevention of diabetes. We evaluated the physiological effects of vitamin D (800 IU/day/seven days, v.o.) in male mice (n=31, C57BL/6 strain) divided into four groups: Control + Water (CW, n=9); Control Vitamin D + (CV n=9); Diabetic + Water (DW, n=6) Diabetic + Vitamin D (VD, n=7). The mice induced-diabetes by alloxan (60 mg/kg, i.v.), when compared to controls, exhibited reduced body weight and plasma glucose concentrations were higher during the experimental period of 10 days (features insulinopenic state). However, vitamin D supplementation did not alter this condition. Diabetic mice, compared to controls, exhibited reduced body weight (p<0,05) and plasma glucose concentrations (p <0.001) higher during the trial period. Animals supplemented with vitamin D showed higher levels of 25 (OH) D than controls (CW vs CV, p <0,001; DW vs DV, p<0,001). Higher serum urea (CW vs. DW, p <0,05; CW vs DV, p <0,01; CV vs DA, p <0,05; CV vs DV, p <0,01) and creatinine (CW vs. DW, p <0,001; CW vs DV, p <0,001; CV vs DW, p <0,001; CV vs DW, p <0,001), thickening of Bowman\'s capsule, glomerular hypertrophy and destruction of hepatocytes were observed in diabetic mice compared to controls. However, vitamin D supplementation did not alter these conditions. The DW group showed lower serum albumin compared to CW (p<0,05) and CV (p<0,05) groups; lower hemoglobin (p<0,05) and hematocrit (p <0,05) compared to the DV group; and lower leukocyte counts compared to CW (p <0,05) and mononuclear blood (p <0,05) compared to the CW group. The results suggest that Vitamin D may influence the immune response in diabetic animals, modulating hematocrit, hemoglobin and serum albumin

O diabetes mellitus (DM) é uma doença com prevalência e morbidade elevadas em todo o mundo, sendo que o DM1 é responsável por 5-10% dos casos. A vitamina D, hormônio de ação pleiotrópica, pode melhorar o curso do DM1, embora os mecanismos não estejam completamente elucidados. Dessa forma, ampliar o conhecimento sobre a ação desse hormônio pode auxiliar no prognóstico, bem como na compreensão dos possíveis mecanismos envolvidos na prevenção do DM. Neste trabalho, foram avaliados os efeitos fisiológicos da suplementação de vitamina D (800 UI/dia/sete dias; via oral) em camundongos machos (n=31; linhagem C57BL/6) distribuídos em quatro grupos: Controle + Água (CA; n=9); Controle + Vitamina D (CV; n=9); Diabético + Água (DA; n=6) e Diabético + Vitamina D (DV; n=7). Os camundongos tornados diabéticos (aloxana, 60 mg/Kg, intravenosa), quando comparados aos controles, exibiram redução do peso corporal e concentrações plasmáticas de glicose mais elevadas durante o período experimental de 10 dias (características do estado insulinopênico). Entretanto, a suplementação com vitamina D não alterou essa condição. Camundongos tornados diabéticos, em relação aos controles, exibiram redução do peso corporal (p<0,05) e concentrações plasmáticas de glicose (p<0,001) mais elevadas durante o período experimental. Animais suplementados com vitamina D apresentaram, em relação aos controles, níveis de 25(OH)D mais elevados (CA vs CV, p<0,001; DA vs DV, p<0,001). Níveis séricos maiores de ureia (CA vs DA, p<0,05; CA vs DV, p<0,01; CV vs DA, p<0,05; CV vs DV, p<0,01) e creatinina (CA vs DA, p<0,001; CA vs DV, p<0,001; CV vs DA, p<0,001; CV vs DV, p<0,001), espessamento da cápsula de Bowman, hipertrofia glomerular e destruição de hepatócitos foram observados em camundongos diabéticos em relação aos controles. Entretanto, a suplementação com vitamina D não alterou estas condições. O grupo DA apresentou menor nível sérico de albumina em relação aos grupos CA (p<0,05) e CV (p<0,05); níveis inferiores de hemoglobina (p<0,05) e hematócrito (p<0,05) em relação ao grupo DV; e menor leucometria (p<0,05) e mononucleares sanguíneos (p<0,05) em relação ao grupo CA. Os resultados sugerem que a vitamina D possa influenciar a resposta imunológica em animais diabéticos, modulando hematócrito, hemoglobina, bem como os níveis séricos de albumina / Diabetes mellitus (DM) is a disease with high prevalence and morbidity worldwide, and the DM1 is responsible for 5-10% of cases. The vitamin D hormone pleiotropic action, can improve the course of T1DM, although the mechanisms are not fully elucidated. Thus, better understanding the action of this hormone can aid in prognosis as well as in understanding the possible mechanisms involved in the prevention of diabetes. We evaluated the physiological effects of vitamin D (800 IU/day/seven days, v.o.) in male mice (n=31, C57BL/6 strain) divided into four groups: Control + Water (CW, n=9); Control Vitamin D + (CV n=9); Diabetic + Water (DW, n=6) Diabetic + Vitamin D (VD, n=7). The mice induced-diabetes by alloxan (60 mg/kg, i.v.), when compared to controls, exhibited reduced body weight and plasma glucose concentrations were higher during the experimental period of 10 days (features insulinopenic state). However, vitamin D supplementation did not alter this condition. Diabetic mice, compared to controls, exhibited reduced body weight (p<0,05) and plasma glucose concentrations (p <0.001) higher during the trial period. Animals supplemented with vitamin D showed higher levels of 25 (OH) D than controls (CW vs CV, p <0,001; DW vs DV, p<0,001). Higher serum urea (CW vs. DW, p <0,05; CW vs DV, p <0,01; CV vs DA, p <0,05; CV vs DV, p <0,01) and creatinine (CW vs. DW, p <0,001; CW vs DV, p <0,001; CV vs DW, p <0,001; CV vs DW, p <0,001), thickening of Bowman\'s capsule, glomerular hypertrophy and destruction of hepatocytes were observed in diabetic mice compared to controls. However, vitamin D supplementation did not alter these conditions. The DW group showed lower serum albumin compared to CW (p<0,05) and CV (p<0,05) groups; lower hemoglobin (p<0,05) and hematocrit (p <0,05) compared to the DV group; and lower leukocyte counts compared to CW (p <0,05) and mononuclear blood (p <0,05) compared to the CW group. The results suggest that Vitamin D may influence the immune response in diabetic animals, modulating hematocrit, hemoglobin and serum albumin

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertao_Final[1].pdf: 848491 bytes, checksum: 6fe1a8632b97df927b7abf789ceb1fc5 (MD5) Previous issue date: 2011-06-27 / This study was to compare the effects the action diabetogenic of alloxan in different doses, through its administration intraperitoneally (ip) in Wistar rats. The animals were distributed randomly four in experimental groups: experimental control group (GC), consisting of 30 rats subjected to injection (ip) of sodium chloride solution 0.9%; Group 1 (G1), 2 (G2) and 3 (G3) consisting of 60 rats each, subject to injection (ip) alloxan 2% at doses of 120, 150 and 200 mg/kg, respectively. Were evaluated during 15 days, on the following parameters: blood glucose, weight, water intake, dietary intake, urination chemical examination of urine (glucose, ketone bodies, and other parameters). It was concluded that the dose of 120 mg/kg alloxan at 2% (ip), when compared to the doses was most efficient, compared to the objectives of this study, it induced diabetes in a larger number of animals and promoted a low percentage of deaths. / Este estudo teve por objetivo comparar os efeitos da ação diabetogênica da aloxana em diferentes doses, por meio da sua administração intraperitoneal (ip) em ratos Wistar. Os animais foram distribuídos, aleatoriamente, em quatro grupos experimentais: grupo controle (GC), constituído por 30 ratos submetidos à injeção (ip) de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo 1 (G1), 2 (G2) e 3 (G3) constituídos por 60 ratos cada, submetidos à injeção (ip) de aloxana 2% nas doses de 120, 150 e 200mg/kg, respectivamente. Foram avaliados durante 15 dias, quanto aos seguintes parâmetros: glicose sanguínea, peso, ingestão hídrica, ingestão alimentar, volume urinário, exame químico da urina (glicose, corpos cetônicos e outros parâmetros). Concluiu-se que, a dose de 120mg/kg de aloxana a 2% (ip), quando comparada às demais doses foi a mais eficiente, frente aos objetivos deste estudo, pois induziu o diabetes em um maior número de animais e promoveu um baixo percentual de óbitos.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gloriane.pdf: 339722 bytes, checksum: 49acd72d8b81935d6eac075d17d943ac (MD5) Previous issue date: 2012-09-26 / The aim of this study was to monitor the induction of experimental diabetes mellitus in female Wistar rats by intraperitoneal administration of alloxan in different doses and dose to assess which provides the highest incidence of diabetes with lower death rates. Four experimental groups of 30 animals each as follows: control group (CG) received intraperitoneal (ip) solution of sodium chloride 0.9% and group G80, G120 and G200, received via (ip) diluted in 2% alloxan solution physiological doses of 80, 120 and 200mg/kg respectively. We evaluated blood glucose, temperature, weight, water intake, food intake and percentage of deaths at different times. It is concluded that all doses of alloxan administered intraperitoneally after 24 hours of fasting were able to induce diabetes mellitus and monitoring of temperature, glucose and dehydration of the animals during the first week, was paramount to the success of induction, and 120mg/kg dose of the most effective in achieving greater number of diabetic animals and lower incidence of deaths. / O objetivo deste trabalho foi monitorar a indução experimental do diabetes mellitus em ratos Wistar fêmeas, pela administração intraperitoneal de aloxana em diferentes doses e avaliar qual dose estabelece a maior incidência de diabetes com menor índice de óbitos. Quatro grupos experimentais com 30 animais em cada um sendo: grupo controle (GC) recebeu via intraperitoneal (ip) solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo G80, G120 e G200, receberam via (ip) aloxana 2% diluída em solução fisiológica nas doses de 80, 120 e 200mg/Kg respectivamente. Avaliou-se glicemia, temperatura, peso, ingestão hídrica, ingestão alimentar e percentual de óbitos em diferentes momentos. Conclui-se que todas as doses de aloxana administrada pela via intraperitoneal após 24 horas de jejum foram capazes de induzir o diabetes mellitus e o monitoramento da temperatura, glicemia e desidratação dos animais na primeira semana, foi de suma importância para o sucesso da indução, sendo a dose de 120mg/Kg a mais eficaz para obtenção de maior número de animais diabéticos e menor incidência de óbitos.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertao_Final[1].pdf: 848491 bytes, checksum: 6fe1a8632b97df927b7abf789ceb1fc5 (MD5) Previous issue date: 2011-06-27 / This study was to compare the effects the action diabetogenic of alloxan in different doses, through its administration intraperitoneally (ip) in Wistar rats. The animals were distributed randomly four in experimental groups: experimental control group (GC), consisting of 30 rats subjected to injection (ip) of sodium chloride solution 0.9%; Group 1 (G1), 2 (G2) and 3 (G3) consisting of 60 rats each, subject to injection (ip) alloxan 2% at doses of 120, 150 and 200 mg/kg, respectively. Were evaluated during 15 days, on the following parameters: blood glucose, weight, water intake, dietary intake, urination chemical examination of urine (glucose, ketone bodies, and other parameters). It was concluded that the dose of 120 mg/kg alloxan at 2% (ip), when compared to the doses was most efficient, compared to the objectives of this study, it induced diabetes in a larger number of animals and promoted a low percentage of deaths. / Este estudo teve por objetivo comparar os efeitos da ação diabetogênica da aloxana em diferentes doses, por meio da sua administração intraperitoneal (ip) em ratos Wistar. Os animais foram distribuídos, aleatoriamente, em quatro grupos experimentais: grupo controle (GC), constituído por 30 ratos submetidos à injeção (ip) de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo 1 (G1), 2 (G2) e 3 (G3) constituídos por 60 ratos cada, submetidos à injeção (ip) de aloxana 2% nas doses de 120, 150 e 200mg/kg, respectivamente. Foram avaliados durante 15 dias, quanto aos seguintes parâmetros: glicose sanguínea, peso, ingestão hídrica, ingestão alimentar, volume urinário, exame químico da urina (glicose, corpos cetônicos e outros parâmetros). Concluiu-se que, a dose de 120mg/kg de aloxana a 2% (ip), quando comparada às demais doses foi a mais eficiente, frente aos objetivos deste estudo, pois induziu o diabetes em um maior número de animais e promoveu um baixo percentual de óbitos.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gloriane.pdf: 339722 bytes, checksum: 49acd72d8b81935d6eac075d17d943ac (MD5) Previous issue date: 2012-09-26 / The aim of this study was to monitor the induction of experimental diabetes mellitus in female Wistar rats by intraperitoneal administration of alloxan in different doses and dose to assess which provides the highest incidence of diabetes with lower death rates. Four experimental groups of 30 animals each as follows: control group (CG) received intraperitoneal (ip) solution of sodium chloride 0.9% and group G80, G120 and G200, received via (ip) diluted in 2% alloxan solution physiological doses of 80, 120 and 200mg/kg respectively. We evaluated blood glucose, temperature, weight, water intake, food intake and percentage of deaths at different times. It is concluded that all doses of alloxan administered intraperitoneally after 24 hours of fasting were able to induce diabetes mellitus and monitoring of temperature, glucose and dehydration of the animals during the first week, was paramount to the success of induction, and 120mg/kg dose of the most effective in achieving greater number of diabetic animals and lower incidence of deaths. / O objetivo deste trabalho foi monitorar a indução experimental do diabetes mellitus em ratos Wistar fêmeas, pela administração intraperitoneal de aloxana em diferentes doses e avaliar qual dose estabelece a maior incidência de diabetes com menor índice de óbitos. Quatro grupos experimentais com 30 animais em cada um sendo: grupo controle (GC) recebeu via intraperitoneal (ip) solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo G80, G120 e G200, receberam via (ip) aloxana 2% diluída em solução fisiológica nas doses de 80, 120 e 200mg/Kg respectivamente. Avaliou-se glicemia, temperatura, peso, ingestão hídrica, ingestão alimentar e percentual de óbitos em diferentes momentos. Conclui-se que todas as doses de aloxana administrada pela via intraperitoneal após 24 horas de jejum foram capazes de induzir o diabetes mellitus e o monitoramento da temperatura, glicemia e desidratação dos animais na primeira semana, foi de suma importância para o sucesso da indução, sendo a dose de 120mg/Kg a mais eficaz para obtenção de maior número de animais diabéticos e menor incidência de óbitos.