Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-22Bitstream added on 2014-06-13T20:21:54Z : No. of bitstreams: 1 marques_rg_dr_botfm.pdf: 1840214 bytes, checksum: cedd11ae72463d2d0bf0333d2d17eee2 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo desse trabalho foi desenvolver um modelo experimental de análise da motilidade do Trato gastrointestinal (TGI) com potencialidades para caracterizar a atividade elétrica e mecânica do estômago e do cólon de ratos normais, diabéticos induzidos pela aloxana e desnutridos, por restrição alimentar, utilizando a eletromiografia (EMG) e a biosusceptometria AC (BAC). Ratos adultos, machos, da linhagem Wistar foram distribuídos, por sorteio, em três grupos experimentais pareados: Grupo controle - constituído de 20 animais normais, sadios, não diabéticos; Grupo diabético - constituído de 20 animais diabéticos induzidos pela aloxana, não tratados; Grupo desnutrido - constituído de 20 animais desnutridos por restrição alimentar. Cada um destes três grupos experimentais foi subdividido, por sorteio, em dois subgrupos de ratos, compostos por 10 animais cada um, para serem avaliados e sacrificados em 2 momentos distintos do experimento, 1 mês e 6 meses de seguimento. As cirurgias de implantação do conjunto eletrodo/marcador magnético na serosa gástrica e do cólon, para obtenção dos registros elétricos e mecânicos, foram realizadas respectivamente após 1 mês e 6 meses de seguimento normal, diabético e de desnutrição. Os parâmetros avaliados foram: 1) Clínicos (peso corporal, ingestão hídrica, ingestão alimentar e diurese); 2) Laboratoriais (glicemia de jejum, hemoglobina glicosilada, insulina plasmática, proteínas totais e albumina); 3) Análise da atividade elétrica e mecânica do estômago e do cólon através da EMG e da BAC. 1) a média da frequência de contração gástrica não foi alterada significantemente entre os animais normais, desnutridos e diabéticos, tanto nas avaliações feitas pela BAC, como pela EMG; 2) a regularidade no sinal da atividade de contração gástrica em ratos diabéticos, no 1º mês de seguimento, e principalmente... / The objective of this study was to develop an experimental model for analyzing the motility of the gastrointestinal tract (TGI) with potential to characterize the electrical and mechanical activity of stomach and colon of normal rats, alloxan induced diabetic and undernourished by food restriction, using electromyography (EMG) and biosusceptometry AC (BAC). Adult male rats, lineage Wistar, were divided by sorting into three groups matched: Control group - consisting of 20 normal animals were healthy, nondiabetic; diabetic group - consisting of 20 rats with alloxan induced diabetic untreated; Malnourished group - consisting of 20 malnourished rats by dietary restriction. Each of these three groups was divided by sort into two subgroups of rats, consisting of 10 animals each to be evaluated and sacrificed at two different times of the experiment, 1 month and 6 months of follow up. A surgical implantation of electrode assembly / magnetic marker in gastric serosa and colonic to obtain electric and mechanical records , were held respectively at 1 month and 6 months of normal follow-up , diabetic and malnutrition. The parameters were evaluated: 1) Clinical (body weight, water intake, food intake and urine output), 2) Laboratory (fasting glucose, glycated hemoglobin, plasma insulin, total protein and albumin), 3) Analysis of electrical and mechanical activity of stomach and colon by EMG and the BAC. 1) the average frequency of gastric contraction was not altered significantly between the normal animals, malnourished and diabetic, both the assessments made by the BAC, as the EMG, 2) the regularity of signal activity of gastric contraction in diabetic rats, at 1 month follow-up, especially at 6 months, was greatly altered compared to normal rats and malnourished, with both techniques, 3) An increased the mean frequency and amplitude of contraction in the postprandial state, compared... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-08-03Bitstream added on 2014-06-13T20:49:28Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cam_me_rcla.pdf: 283240 bytes, checksum: f2295fc2f051898f12cfaa89473eabf2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O exercício físico tem sido recomendado na prevenção do diabetes mellitus não insulino dependente (NIDDM), mas os mecanismos envolvidos nessa intervenção ainda não são bem conhecidos. Modelos experimentais oferecem oportunidade para o estudo dessa questão. Ratos tratados com streptozotocina no período neonatal têm sido empregados como modelo de NIDDM, porém, pouco se sabe sobre o modelo de diabetes neonatal induzido por aloxana. Com o objetivo de analisar os efeitos metabólicos da administração neonatal de aloxana, ratos recém nascidos (2 e 4 dias), de ambos os sexos, receberam a droga (200 mg/Kg p.c.-i.p.). Como controles foram utilizados ratos injetados com veículo (tampão citrato). Aos 28, 60 e 90 dias de idade os animais foram avaliados quanto a: glicemia de jejum, glicemia após administração de glicose e tolerância à glicose oral (GTTo). Os resultados mostraram maior glicemia no GTTo (p>0,05) até os 60 dias nos grupos tratados com a droga, regredindo aos 90 dias em ambos os sexos. Aos 90 dias os animais foram sacrificados por decapitação. Ficou evidente que os machos que receberam a aloxana aos dois dias foram os mais prejudicados, mostrando os menores teores de insulina e razão proteína/DNA pancreáticos e os níveis mais elevados de A.G.L. sangüíneo (p<0,05). Concluindo, embora a intolerância à glicose seja transitória, a recuperação dos animais é incompleta, pois algumas alterações metabólicas persistem. Em outra série de experimentos, visando avaliar os efeitos do treinamento aeróbio sobre a manifestação das alterações metabólicas causadas pela aloxana, ratos recém nascidos (2 dias) receberam aloxana (200 mg/Kg de peso corporal) via intraperitoneal. Como controles foram utilizados ratos injetados com veículo (tampão citrato)... (Complete abstract, click electronic address below). / The present study was designed to analyse the metabolic effects of neonatal alloxan administration. Male and female newborn rats (2 and 4 days old) received alloxan (200 mg/Kg b.w.-i.p.). Vehicle injected rats were used as control. At 28, 60 and 90 days old the animals were evaluated with respect to: fasting glycemia, non-fasting glycemia and oral glucose tolerance (GTTo). The results showed higher glycemia during the GTTo (p>0,05) in the alloxan injected rats than in controls at the 60th day old, but not at the 90th day. At 90 days old, the animals were sacrified by decapitation. It was clearly demonstrated that the male rats receiving alloxan at the 2nd day of life were the most affected by the drug. They showed the lowest pancreatic insulin content and protein/DNA ratio and the highest serum F.F.A. levels (p<0,05). In conclusion, although the glucose intolerance is transitory, the animals rehabilitation is incomplete, since some metabolic alterations remain. In another series of experiment, to analyse the effects of aerobic physical training on the manifestation of the metabolic effects of alloxan, male newborn rats (2 days old) received alloxan (200 mg/Kg b.w.) intraperitoneally. Vehicle injected rats (citrate buffer) were used as control. After weaning, part of the alloxan treated rats were submitted to 1-h day-1, 5-day week-1 swimming, with an overload equivalent to 3% of the body weight. At 28, 60 and 90 days old the animals were submitted to a glucose (GTTo) and insulin (ITTsc) tolerance test. Forty eight hours after the last tolerance test, and to the trained animals, 48 hours after the last training, the animals were sacrificed by decapitation. Although the hyperglycaemia is transitory in the sedentary alloxan treated animals, some alterations remain: high serum F.F.A. levels, low pancreatic insulin content; which can be harmful to homeostasis maintenance. The rehabilitation... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4864_1.pdf: 777387 bytes, checksum: fc03ccafd05fbd3ac4803569ccb0e31e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Parkinsonia aculeta tem sido relatada na medicina popular como uma planta que é possuidora de ação no tratamento do Diabetes mellitus. A proposta desse estudo foi investigar a atividade dos extratos (hidroalcoólico e da fração aquosa) da P. aculeata em animais portadores de diabetes induzida por aloxana (150 mg/Kg) e em normoglicêmicos (NaCl 0,9%). Os extratos foram administrados nas concentrações de 250 mg/Kg e 125 mg/Kg e o veículo (água destilada, 5 mL/Kg) por via oral e diariamente durante 16 dias. Foram avaliados os níveis séricos de glicose, colesterol, triglicerídeos e colesterol-HDL, bem como os níveis urinários de glicose e uréia em 24h. Também foram avaliados o peso corporal, os níveis de comida e água ingestas, bem como o volume urinário em 24h. O peso do fígado, dos rins, do tecido adiposo epididimal e dos músculos esqueléticos: Soleus e Extensor Digitorius Longus (EDL) foram avaliadas, e, também, o conteúdo de glicogênio hepático. Com a finalidade de validação do modelo experimental foi realizado um grupo diabético tratado com insulina, que demonstrou, como esperado, significantes resultados na maior parte dos parâmetros metabólicos avaliados. No extrato hidroalcoólico de P. aculeata, onde os animais foram tratados com 125 mg/Kg, os resultados, nos animais diabéticos, demonstraram uma redução significante nos níveis de glicose sérica e urinária. O melhoramento no conteúdo do glicogênio hepático e uma redução no peso rins também foi encontrado. Nos animais normoglicêmicos tratados com o extrato, foi encontrado apenas um aumento significante no peso do EDL. Na fração aquosa de P. aculeata, os animais diabéticos tratados com 250 mg/Kg e 125 mg/Kg de extrato demonstraram uma redução significante da glicose sérica e urinária, de uréia urinaria, bem como nos níveis séricos de colesterol total, colesterol-HDL e triglicerídeos. Um melhoramento no conteúdo de glicogênio hepático e uma conservação no peso dos músculos esqueléticos: Soleus e EDL, bem como o significante decaimento na quantidade de líquido e comida ingestas; nos rins foi observada uma significante inibição da hipertrofia. Entretanto apenas nos animais diabéticos tratados com 125 mg/Kg da fração aquosa, foi encontrada uma redução significante no volume urinário, uma conservação no tecido adiposo epididimal, um resultado positivo no peso do fígado e no peso corporal. Os resultados significantes obtidos nos parâmetros avaliados sugerem que extrato hidroalcoólico e fração aquosa de P. aculeata têm ação hipoglicemiante positiva influenciando o metabolismo dos carboidratos

Pacientes diabéticos apresentam maior severidade e prevalência de doenças periodontais. Em ratos diabéticos, a doença periodontal induzida com ligaduras e inoculação de bactérias é mais severa. Contudo, na ausência de estímulos agressivos como ligaduras, a influência do diabetes sobre o periodonto de rato é pouco conhecida. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença e a progressão da doença periodontal por longos períodos apenas com a indução do diabetes. O diabetes foi induzido em ratos Wistar (n=25) pela administração endovenosa de 42mg/kg de aloxana e, juntamente com os animais controle (n=25), foram analisados nos períodos de 1, 3, 6, 9 e 12 meses. Os animais foram sacrificados tendo suas hemimandíbulas removidas, radiografadas e submetidas aos procedimentos histotécnicos. A mensuração da altura da crista óssea e dos valores de pixel foi realizada pelo programa ImageJ em radiografias previamente escaneadas. A altura da crista óssea nos animais diabéticos foi significativamente menor em relação ao grupo controle nos tempos de 3, 6, 9 e 12 meses (p<0,05 ANOVA). Contudo, não foram observadas diferenças na média dos valores de pixel entre os grupos controle e diabético em tempos correspondentes (p<0,05 ANOVA). A análise histológica apresentou redução na densidade em volume da fibras colágenas, fibroblastos e vasos sangüíneos. Observou-se aumento dos osteoclastos e células inflamatórias (p<0,05 ANOVA). Além disso, cáries rampantes foram detectadas no grupo diabético. Os resultados sugerem que o diabetes sem reposição hormonal, mesmo na ausência de fatores locais, promove alterações teciduais características do desenvolvimento da doença periodontal em ratos. Assim, o diabetes pode ser considerado como agente responsável pela indução, progressão e manutenção da doença periodontal em ratos. / Periodontal disease in diabetic patients present higher severity and prevalence, and increased severity of ligature-induced periodontal disease is verifyed in diabetic rats. However, in the absence of aggressive stimuli such as ligatures, the influence of diabetes over periodontal tissues of rat is unknown. The aim of this study was evaluate the stablishment and progression of periodontal diseases in rats only with the induction of diabetes. Diabetes was induced in Wistar rats (n=25) by endovenous administration of 42mg/kg of alloxan, and together with control animals (n=25), were analyzed at 1, 3, 6, 9 and 12 months after diabetes induction. The animals were sacrificed and the jaws removed, radiographed and submitted to the histopathological procedures. The measurement of alveolar bone crest height and pixel values was carried through the ImageJ program in scanned radiographs. It was observed a reduction in the height of the bone crest in the diabetic animals at the times of 3, 6, 9 and 12 months (p<0,O5 ANOVA). However, no differences in the average of pixel values between control and diabetic groups were observed (p<0,O5 ANOVA). The histopathological analyses of the diabetics animals showed reduction in collagen fibers, fibroblasts and blood vessels. In addition, it was observed an increase in in the number of osteoclasts and inflammatory cells (p<0,O5 ANOVA). Moreover, severe caries were detected in the diabetic group.The results suggest that diabetes without hormonal reposition, and in the absence of aggressive factors as ligatures, result in tissular alterations typical of periodontal diseases. In this way, diabetes can be considered the agent responsible for the induction, maintenance and progression of the periodontal disease.

Indivíduos diabéticos apresentam incidência elevada de doenças infecciosas. Isto pode estar relacionado às alterações na capacidade da resposta destes indivíduos aos agentes agressores. Em animais diabéticos, algumas destas alterações já foram descritas, assim como sua reversão pela administração de insulina. Este hormônio regula o metabolismo celular, modulando a atividade de proteínas e mediadores inflamatórios envolvidos neste processo. Sabemos que o lipopolissacarídeo (LPS) estimula, em macrófagos alveolares (MA) de animais não-diabéticos, a liberação do fator de necrose tumoral (TNF)-&#945; e do óxido nítrico (NO). O pré-tratamento deste MA com insulina inibiu todos estes efeitos. Assim, neste projeto, avaliamos o papel da insulina em MA e macrófagos peritoneais (MP) de camundongos, tornados diabéticos pela indução com aloxana (60 mg/kg, i.v.). Uma suspensão contendo 1x106 células foi estimulada com LPS (100 ng/mL) na presença ou não de insulina (1mU/mL). Realizamos a evolução temporal (0,5; 1; 3; 6; 24 horas) para a dosagem de NO, TNF-&#945; e interleucina (IL)-10. Nos tempos de maior produção destas citocinas (0,5 e 3 horas), também quantificamos IL-6, interferon (IFN)-&#947; e IL-4. Nossos resultados mostram que a produção/liberação dos mediadores imunes por MA e MP estimulados por LPS, quando tratados simultaneamente com insulina, tiveram uma redução. Assim, a produção/liberação de NO foi reduzida durante 0,5; 1; 3; 6, 24 horas, em MA e em MP; a liberação de TNF-&#945; foi reduzida durante 0,5 hora, em MP; a liberação de IL-6 foi reduzida durante 3 horas, em MA, e 0,5 hora, em MP. Estes dados mostram que a insulina reduziu a liberação destes mediadores inflamatórios, tanto para os MA quanto para os MP, durante o estímulo com LPS, de animais diabéticos já nos primeiros minutos de estímulo com LPS, com um pico de redução, na maioria das vezes, em 3 horas. / Diabetic patients exhibit high incidence of infectious diseases, at least in part, by due impaired immune response against aggressive agents. Lipopolysaccharide (LPS) triggers the releasing of tumor necrosis factor (TNF)-alpha and nitric oxide (NO) by alveolar macrophages (AM) of non-diabetic animals. The pretreatment using insulin inhibited of these cytokine release. The aim in the present study was to evaluate the insulin role on releasing of cytokines by MA and peritoneal macrophages (MP) of diabetic mouse. Resident AM and MP from diabetic (alloxan 60 mg/kg, i.v.) male C57BL/6 mice (CEUA/FCF/USP-339) stimulated by LPS (100 ng/mL). Insulin (1 mU/mL) insulin treatment was simultaneously with stimulus by LPS. Cytokines were measured by ELISA, and NO by Griess reaction. We performed a time course (0,5; 1; 3; 6; 24 hours), and measured NO, TNF-alpha and interleukin (IL)-10. We also measured IL-6, interferon (IFN)-&#947;, and IL-4 in 0.5 and 3 hours. Results were evaluated by analysis of variance (ANOVA) followed by multiple comparison Tukey-Kramer or the nonparametric Kruskal-Wallis test. P value were considered when <0.05. Before the induction of diabetes by alloxan injection in day 0 animals showed: weight (26±0,3 g) and blood glucose concentration (164±2,6 mg/dL) - and 10 days after the onset of the disease, diabetic mice presented a lower weight gain (24 ± 0,4 g*) and elevated blood glucose concentration (546±9,7 mg/dL*). An increase was seen NO release levels and TNF-alpha in the time course (Figure 1); an increase of IL-6 in 3 hours (Figure 3), and a decrease of IL-4 in 3 hours (Figure 5) after LPS stimulation of MA in diabetic animals. In MP, there was an increase of NO levels, and TNF-alpha in the time course (Figure 2); in 3 hours increased IL-6 levels (Figure 4) - under the same conditions. Insulin treatment under stimulation by LPS in MA reduced the levels of NO, IL-6, and TNF-alpha compared to the group stimulated by LPS. Regarding MP, insulin treatment also decreased NO levels, TNF-alpha, and IL-6. IL-4 levels produced by MP, and IFN-&#947; levels were not be detected in MA and MP under stimulation by LPS, or in the presence of hormone. These findings suggest that insulin reduce the release of these inflammatory mediators by both resident macrophages of diabetic animals concomitantly stimulation by LPS

Resumo: O objetivo desse trabalho foi desenvolver um modelo experimental de análise da motilidade do Trato gastrointestinal (TGI) com potencialidades para caracterizar a atividade elétrica e mecânica do estômago e do cólon de ratos normais, diabéticos induzidos pela aloxana e desnutridos, por restrição alimentar, utilizando a eletromiografia (EMG) e a biosusceptometria AC (BAC). Ratos adultos, machos, da linhagem Wistar foram distribuídos, por sorteio, em três grupos experimentais pareados: Grupo controle - constituído de 20 animais normais, sadios, não diabéticos; Grupo diabético - constituído de 20 animais diabéticos induzidos pela aloxana, não tratados; Grupo desnutrido - constituído de 20 animais desnutridos por restrição alimentar. Cada um destes três grupos experimentais foi subdividido, por sorteio, em dois subgrupos de ratos, compostos por 10 animais cada um, para serem avaliados e sacrificados em 2 momentos distintos do experimento, 1 mês e 6 meses de seguimento. As cirurgias de implantação do conjunto eletrodo/marcador magnético na serosa gástrica e do cólon, para obtenção dos registros elétricos e mecânicos, foram realizadas respectivamente após 1 mês e 6 meses de seguimento normal, diabético e de desnutrição. Os parâmetros avaliados foram: 1) Clínicos (peso corporal, ingestão hídrica, ingestão alimentar e diurese); 2) Laboratoriais (glicemia de jejum, hemoglobina glicosilada, insulina plasmática, proteínas totais e albumina); 3) Análise da atividade elétrica e mecânica do estômago e do cólon através da EMG e da BAC. 1) a média da frequência de contração gástrica não foi alterada significantemente entre os animais normais, desnutridos e diabéticos, tanto nas avaliações feitas pela BAC, como pela EMG; 2) a regularidade no sinal da atividade de contração gástrica em ratos diabéticos, no 1º mês de seguimento, e principalmente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to develop an experimental model for analyzing the motility of the gastrointestinal tract (TGI) with potential to characterize the electrical and mechanical activity of stomach and colon of normal rats, alloxan induced diabetic and undernourished by food restriction, using electromyography (EMG) and biosusceptometry AC (BAC). Adult male rats, lineage Wistar, were divided by sorting into three groups matched: Control group - consisting of 20 normal animals were healthy, nondiabetic; diabetic group - consisting of 20 rats with alloxan induced diabetic untreated; Malnourished group - consisting of 20 malnourished rats by dietary restriction. Each of these three groups was divided by sort into two subgroups of rats, consisting of 10 animals each to be evaluated and sacrificed at two different times of the experiment, 1 month and 6 months of follow up. A surgical implantation of electrode assembly / magnetic marker in gastric serosa and colonic to obtain electric and mechanical records , were held respectively at 1 month and 6 months of normal follow-up , diabetic and malnutrition. The parameters were evaluated: 1) Clinical (body weight, water intake, food intake and urine output), 2) Laboratory (fasting glucose, glycated hemoglobin, plasma insulin, total protein and albumin), 3) Analysis of electrical and mechanical activity of stomach and colon by EMG and the BAC. 1) the average frequency of gastric contraction was not altered significantly between the normal animals, malnourished and diabetic, both the assessments made by the BAC, as the EMG, 2) the regularity of signal activity of gastric contraction in diabetic rats, at 1 month follow-up, especially at 6 months, was greatly altered compared to normal rats and malnourished, with both techniques, 3) An increased the mean frequency and amplitude of contraction in the postprandial state, compared... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: César Tadeu Spadella / Coorientador: José Ricardo de Arruda Miranda / Banca: Bonifácio katsunori Takegawa / Banca: Erika Veruska Paiva Ortolan / Banca: Heloisa Galvão do Amaral Campos / Banca: Ricardo Brandt de Oliveira / Doutor

Pacientes diabéticos apresentam maior severidade e prevalência de doenças periodontais. Em ratos diabéticos, a doença periodontal induzida com ligaduras e inoculação de bactérias é mais severa. Contudo, na ausência de estímulos agressivos como ligaduras, a influência do diabetes sobre o periodonto de rato é pouco conhecida. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença e a progressão da doença periodontal por longos períodos apenas com a indução do diabetes. O diabetes foi induzido em ratos Wistar (n=25) pela administração endovenosa de 42mg/kg de aloxana e, juntamente com os animais controle (n=25), foram analisados nos períodos de 1, 3, 6, 9 e 12 meses. Os animais foram sacrificados tendo suas hemimandíbulas removidas, radiografadas e submetidas aos procedimentos histotécnicos. A mensuração da altura da crista óssea e dos valores de pixel foi realizada pelo programa ImageJ em radiografias previamente escaneadas. A altura da crista óssea nos animais diabéticos foi significativamente menor em relação ao grupo controle nos tempos de 3, 6, 9 e 12 meses (p<0,05 ANOVA). Contudo, não foram observadas diferenças na média dos valores de pixel entre os grupos controle e diabético em tempos correspondentes (p<0,05 ANOVA). A análise histológica apresentou redução na densidade em volume da fibras colágenas, fibroblastos e vasos sangüíneos. Observou-se aumento dos osteoclastos e células inflamatórias (p<0,05 ANOVA). Além disso, cáries rampantes foram detectadas no grupo diabético. Os resultados sugerem que o diabetes sem reposição hormonal, mesmo na ausência de fatores locais, promove alterações teciduais características do desenvolvimento da doença periodontal em ratos. Assim, o diabetes pode ser considerado como agente responsável pela indução, progressão e manutenção da doença periodontal em ratos. / Periodontal disease in diabetic patients present higher severity and prevalence, and increased severity of ligature-induced periodontal disease is verifyed in diabetic rats. However, in the absence of aggressive stimuli such as ligatures, the influence of diabetes over periodontal tissues of rat is unknown. The aim of this study was evaluate the stablishment and progression of periodontal diseases in rats only with the induction of diabetes. Diabetes was induced in Wistar rats (n=25) by endovenous administration of 42mg/kg of alloxan, and together with control animals (n=25), were analyzed at 1, 3, 6, 9 and 12 months after diabetes induction. The animals were sacrificed and the jaws removed, radiographed and submitted to the histopathological procedures. The measurement of alveolar bone crest height and pixel values was carried through the ImageJ program in scanned radiographs. It was observed a reduction in the height of the bone crest in the diabetic animals at the times of 3, 6, 9 and 12 months (p<0,O5 ANOVA). However, no differences in the average of pixel values between control and diabetic groups were observed (p<0,O5 ANOVA). The histopathological analyses of the diabetics animals showed reduction in collagen fibers, fibroblasts and blood vessels. In addition, it was observed an increase in in the number of osteoclasts and inflammatory cells (p<0,O5 ANOVA). Moreover, severe caries were detected in the diabetic group.The results suggest that diabetes without hormonal reposition, and in the absence of aggressive factors as ligatures, result in tissular alterations typical of periodontal diseases. In this way, diabetes can be considered the agent responsible for the induction, maintenance and progression of the periodontal disease.

Indivíduos diabéticos apresentam incidência elevada de doenças infecciosas. Isto pode estar relacionado às alterações na capacidade da resposta destes indivíduos aos agentes agressores. Em animais diabéticos, algumas destas alterações já foram descritas, assim como sua reversão pela administração de insulina. Este hormônio regula o metabolismo celular, modulando a atividade de proteínas e mediadores inflamatórios envolvidos neste processo. Sabemos que o lipopolissacarídeo (LPS) estimula, em macrófagos alveolares (MA) de animais não-diabéticos, a liberação do fator de necrose tumoral (TNF)-&#945; e do óxido nítrico (NO). O pré-tratamento deste MA com insulina inibiu todos estes efeitos. Assim, neste projeto, avaliamos o papel da insulina em MA e macrófagos peritoneais (MP) de camundongos, tornados diabéticos pela indução com aloxana (60 mg/kg, i.v.). Uma suspensão contendo 1x106 células foi estimulada com LPS (100 ng/mL) na presença ou não de insulina (1mU/mL). Realizamos a evolução temporal (0,5; 1; 3; 6; 24 horas) para a dosagem de NO, TNF-&#945; e interleucina (IL)-10. Nos tempos de maior produção destas citocinas (0,5 e 3 horas), também quantificamos IL-6, interferon (IFN)-&#947; e IL-4. Nossos resultados mostram que a produção/liberação dos mediadores imunes por MA e MP estimulados por LPS, quando tratados simultaneamente com insulina, tiveram uma redução. Assim, a produção/liberação de NO foi reduzida durante 0,5; 1; 3; 6, 24 horas, em MA e em MP; a liberação de TNF-&#945; foi reduzida durante 0,5 hora, em MP; a liberação de IL-6 foi reduzida durante 3 horas, em MA, e 0,5 hora, em MP. Estes dados mostram que a insulina reduziu a liberação destes mediadores inflamatórios, tanto para os MA quanto para os MP, durante o estímulo com LPS, de animais diabéticos já nos primeiros minutos de estímulo com LPS, com um pico de redução, na maioria das vezes, em 3 horas. / Diabetic patients exhibit high incidence of infectious diseases, at least in part, by due impaired immune response against aggressive agents. Lipopolysaccharide (LPS) triggers the releasing of tumor necrosis factor (TNF)-alpha and nitric oxide (NO) by alveolar macrophages (AM) of non-diabetic animals. The pretreatment using insulin inhibited of these cytokine release. The aim in the present study was to evaluate the insulin role on releasing of cytokines by MA and peritoneal macrophages (MP) of diabetic mouse. Resident AM and MP from diabetic (alloxan 60 mg/kg, i.v.) male C57BL/6 mice (CEUA/FCF/USP-339) stimulated by LPS (100 ng/mL). Insulin (1 mU/mL) insulin treatment was simultaneously with stimulus by LPS. Cytokines were measured by ELISA, and NO by Griess reaction. We performed a time course (0,5; 1; 3; 6; 24 hours), and measured NO, TNF-alpha and interleukin (IL)-10. We also measured IL-6, interferon (IFN)-&#947;, and IL-4 in 0.5 and 3 hours. Results were evaluated by analysis of variance (ANOVA) followed by multiple comparison Tukey-Kramer or the nonparametric Kruskal-Wallis test. P value were considered when <0.05. Before the induction of diabetes by alloxan injection in day 0 animals showed: weight (26±0,3 g) and blood glucose concentration (164±2,6 mg/dL) - and 10 days after the onset of the disease, diabetic mice presented a lower weight gain (24 ± 0,4 g*) and elevated blood glucose concentration (546±9,7 mg/dL*). An increase was seen NO release levels and TNF-alpha in the time course (Figure 1); an increase of IL-6 in 3 hours (Figure 3), and a decrease of IL-4 in 3 hours (Figure 5) after LPS stimulation of MA in diabetic animals. In MP, there was an increase of NO levels, and TNF-alpha in the time course (Figure 2); in 3 hours increased IL-6 levels (Figure 4) - under the same conditions. Insulin treatment under stimulation by LPS in MA reduced the levels of NO, IL-6, and TNF-alpha compared to the group stimulated by LPS. Regarding MP, insulin treatment also decreased NO levels, TNF-alpha, and IL-6. IL-4 levels produced by MP, and IFN-&#947; levels were not be detected in MA and MP under stimulation by LPS, or in the presence of hormone. These findings suggest that insulin reduce the release of these inflammatory mediators by both resident macrophages of diabetic animals concomitantly stimulation by LPS

Pacientes diabéticos apresentam alterações no sistema imunológico que promovem, em parte, maior suscetibilidade de infecções bacterianas. O tratamento com insulina melhora a sobrevida e reduz o número de infecções recidivas no paciente com diabetes mellitus do tipo 1 (DM1). Pouco se sabe sobre os efeitos do diabetes e a ação da insulina nos macrófagos. Neste trabalho, investigamos a proteína fosfatidilinositol-3-quinase (PI3K), proteína quinase B (Akt) e as quinases ativadas por mitógenos (MAPK) em macrófagos derivados de medula óssea (BMDM) e sua participação no estímulo por lipopolissacarídeo (LPS) na presença ou não do tratamento com insulina através da secreção dos mediadores inflamatórios fator de necrose tumoral (TNF)-&#945;, interleucina (IL)-6 e IL-10. Observamos que os BMDM de animais com DM1 apresentam aumento da expressão da subunidade catalítica PI3K p110alpha com redução na subunidade reguladora PI3K p55 e maior expressão da fosforilação das proteínas Akt (Serina-473 e Treonina-308), quinase regulada por sinal extracelular (ERK) 1/2 e quinase ativada por estresse/quinase Jun-amino-terminal (SAPK/JNK) MAPK. Observou-se alteração na concentração das citocinas TNF-&#945;, IL-6 e IL-10 no sobrenadante da cultura de BMDM dos animais diabéticos após estímulo com LPS, menor taxa de metabolismo mitocondrial, no entanto, sem resultar em morte celular, tampouco na expressão do receptor do tipo Toll 4 na membrana celular. Já o reestímulo destas células com LPS promoveu aumento na concentração de TNF-&#945; sem alteração das demais citocinas. Além disto, o tratamento com insulina, simultaneamente ao estímulo com LPS, dos BMDM oriundos de animais diabéticos aumentou a concentração de TNF-&#945;, IL-6, da fosforilação de p38, ERK 1/2 e SAPK/JNK MAPK, PI3K p55 e da Akt (Serina-473), o que não ocorreu nos BMDM dos animais não diabéticos sob a mesma condição. Este efeito foi abolido pela inibição farmacológica da PI3K e da ERK 1/2, resultando em novo aumento da concentração de TNF-&#945; e IL-6. A análise conjunta destes resultados indica que a insulina, através da modulação das vias PI3K, Akt, ERK 1/2 e SAPK/JNK, amplifica o aumento da concentração de TNF-&#945; e IL-6 sob estímulo com LPS. / Diabetic patients present alterations in the immune system that promote in part a greater susceptibility of bacterial infections. Insulin treatment improves survival and reduces the number of recurrent infections in patients with type 1 diabetes mellitus (DM1). Little is known about the effects of diabetes and the action of insulin on macrophages. In this work we investigated the phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) / protein kinase B (Akt) and mitogen-activated kinase (MAPK) proteins in bone marrow-derived macrophages (BMDM) and their participation in lipopolysaccharide (LPS) or treatment with insulin through the secretion of inflammatory mediators tumor necrosis factor (TNF) -&#945;, interleukin (IL) -6 and IL-10. We observed that BMDM of animals with DM1 increased PI3K p110alpha catalytic subunit expression with a reduction in the PI3K p55 regulatory subunit and increased expression of the phosphorylation of the Akt (Serine-473 and Threonine-308), extracellular signal regulated kinase (ERK) 1/2 and Jun-amino-terminal stress-kinase / kinase (SAPK / JNK) MAPK. Changes in the concentration of TNF-&#945;, IL-6 and IL-10 cytokines in the supernatant of the BMDM culture of diabetic animals after stimulation with LPS were observed, possibly due to a lower rate of mitochondrial metabolism, however, without resulting in cell death , so little in the expression of the Toll 4 receptor on the cell membrane. The re-stimulation of these cells with LPS promoted an increase in TNF-&#945; concentration without alteration of the other cytokines. In addition, insulin and simultaneously LPS stimulation of BMDM from diabetic animals increased the concentration of TNF-&#945;, IL-6, phosphorylation of p38, ERK 1/2 and SAPK / JNK MAPK, PI3K p55 and Akt (Serine-473), which did not occur in the BMDM of non-diabetic animals under the same condition. This effect was abolished by pharmacological inhibition of PI3K and ERK 1/2, resulting in a further increase in the concentration of TNF-&#945; and IL-6. The analysis of these results indicate that insulin by modulating the PI3K, Akt, ERK 1/2 and SAPK / JNK pathways amplifies the concentration levels of TNF-&#945; and IL-6 under stimulation with LPS.

Estima-se que, em 2013, cerca de 382 milhões de pessoas eram portadoras de diabetes mundialmente. Já o diabetes mellitus do tipo 1 (DMT1) representa de 5-10% desse total de casos, cujo tratamento atual se pauta na administração de insulina exógena. Contudo, desde a publicação do protocolo de Edmonton, o transplante de ilhotas pancreáticas se apresenta como nova técnica no tratamento para o DMT1, inclusive obtendo a independência de insulina em alguns casos. Apesar disso, a escolha do sítio receptor ainda é essencial para diminuir efeitos adversos e permitir o acompanhamento do enxerto. Nesse sentido, destaca-se o transplante de ilhotas para a câmara anterior do olho, pois permite, além do restabelecimento do controle glicêmico, o estudo da fisiologia dos enxertos in vivo. Dessa forma, o objetivo foi estabelecer metodologia de isolamento e transplante de ilhotas de alta reprodutibilidade e baixo custo, utilizando a câmara anterior do olho como sítio receptor. O isolamento foi realizado via injeção de solução de colagenase (1 mg/mL via ducto colédoco) em camundongos machos C57BL/6 hígidos de 8 semanas de idade e posterior transplante dessas ilhotas para camundongos machos da mesma espécie com diabetes induzido por injeção de aloxana (60 mg/kg, i.v.). Esses camundongos foram submetidos a infusão de aproximadamente 250 equivalentes de ilhotas (IEQs) para a câmara anterior do olho e tiveram sua glicemia e alteração de massa corpórea acompanhadas por 14 dias após o transplante. Também foi realizado teste de tolerância a glicose via injeção de solução de glicose (2g/kg i.p.) e realização da curva glicêmica. Obteve-se, na etapa de padronização, que a adição de 0,5% (%p/v) de albumina de soro bovino à solução de colagenase foi capaz de aumentar o número de IEQs isolados por animal. Quanto ao transplante, obteve-se que 50% dos animais submetidos à técnica tiveram diminuição significativa na sua glicemia (172,5 ± 6,4 mg/dL), quando comparados com o grupo controle diabético (582,8 ± 27,5 mg/dL) (p < 0,05). Entretanto, todos os animais tiveram aumento significativo da massa corpórea no período de acompanhamento e glicemia de jejum significativamente menor que os animais diabéticos (p < 0,05). Ademais, a curva glicêmica dos animais que tiveram transplante considerado bem sucedido, no teste de tolerância a glicose, se aproxima da curva do grupo controle sadio. Conclui-se que o modelo de transplante de ilhotas pancreáticas para a câmara anterior do olho foi bem estabelecido neste projeto, confirmado pelos resultados que evidenciam o transplante de ilhotas funcionais capazes de reduzir sensivelmente a glicemia e promover o ganho de peso em camundongos diabéticos. / It is estimated that, in 2013, around 382 million people had diabetes worldwide. Of that number, 5-10% represented cases of T1DM, which treatment is based in the administration of exogenous insulin. However, since the Edmonton protocol was published, islet transplantation presented itself as novel technique for T1DM treatment, achieving insulin independence in some cases. Although, recipient site choice is still essential to diminish side effects and enable graft follow up. In that sense, transplantation to the anterior chamber of the eye stands out, since it allows, beyond the reestablishment of glycemic control, study of islet physiology in vivo. That way, the objective was to establish a low cost and high reproducible model of islet isolation and transplantation, using the anterior chamber of the eye as receptor site. Islet isolation was made by injection of collagenase solution (1 mg/mL via common bile duct) in 8 week old healthy male C57BL/6 mice and followed by transplantation of these islets to male mice of the same age and species with diabetes induced by alloxan injection (60 mg/kg i.v.). These mice were subject of 250 islet equivalents (IEQs) infusion to the anterior chamber of the eye and had their blood glucose and change in body mass monitored for 14 days after transplantation. A glucose tolerance test (GTT) was also made, by injection of glucose solution (2g/kg i.p.) and a glycemic curve was plotted. In the standardization period, was observed that the addition of 0,5% (%w/v) bovine serum albumin is capable of increasing the number of IEQs isolated from each animal. About the transplants, was obtained that 50% of animals subject to transplantation had their blood glucose decreased significantly (172,5 ± 6,4 mg/dL), when compared to the diabetic control group (582,8 ± 27,5 mg/dL) (p < 0,05). However, all animals subject to the procedure had significant body mass increase, when compared to the same control group and fasting blood glucose significantly lower than diabetic animals (p < 0,05). Moreover, the glycemic curve of animals, who had their transplantation considered successful, was similar to that found in healthy control animals, in the GTT. We conclude that the model of transplant to the anterior chamber of the eye is well established in this project, which is confirmed by results that shows transplantation of functional islets, capable of promoting a significant decrease in blood glucose and an increase in total body mass in diabetic animals.