Hepatocellular carcinoma (HCC) is the third commonest cancer worldwide. However HCC is considered to be highly resistant to chemotherapy. Gene therapies aimed to regulate Bd-2 proteins may sensitize HCC cells to chemotherapy. Studies have demonstrated that Bid/tBid are crucial in hepatocyte apoptosis. Bid also plays important roles in the development and chemotherapeutic sensitivity of HCC. The objective of this study is to test effect of Ad/AFPtBid and chemotherapeutic agents in combination on an orthotopic HCC model. / In conclusion, (1) Ad/AFPtBid can specifically target and effectively suppress the AFP-producing HCC. (2) Ad/AFPtBid can significantly sensitize HCC to 5-FU, their combination can significantly increase the anti-tumor effectiveness. (3) Ad/AFPtBid shows little toxicity in vivo. (4) The complementary effect of tBid and 5-FU on different phases of the cell cycle may explain the better therapeutic result if both are used to treat HCC. (5) The elucidation of phase specific effect of tBid points to a possible therapeutic option that combines tBid with different phase specific agents to treat HCC. / It is well established that many apoptosis inducers act in a cell cycle-specific fashion. This leads us to hypothesize that tBid might have phase specific effect. So, we tested the susceptibility of Hep3B cells at 00/01, S or G2/M phases to tBid. The results revealed that tBid significantly reduced Hep3B cells in G0/G1 phase, increased cells in G2/M phase. On the contrary, 5-FU arrested Hep3B cells in G0/G1 phase, and significantly reduced cells in G2/M phase. The levels of cell cycle-related proteins were altered in line with the result of the cell cycle. This suggests Hep3B cells in G0/G1 phase may be more susceptible to tBid. The complementary effects tBid and 5-FU on different phases of the cell cycle may explain the better therapeutic result if both are used to treat HCC. / The mice bearing orthotopic HCC tumors were treated with Ad/AFPtBid alone or in combination with 5-FU/Dox. Serum AFP levels were measured to mornitor tumor progression. The mice were killed four weeks after treatment. Liver tissues were subjected to immunohistochemical staining of proliferation cell nuclear antigen (PCNA) and TUNEL staining. Another batch of mice was observed for survival rate over a six month period. In addition, possible side effects of Ad/AFPtBid were tested in BALB/c mice. Results demonstrated that Ad/AFPtBid significantly inhibited Hep3B tumor growth. The combination of Ad/AFPtBid with 5-FU was more effective in tumor regression than either agent alone. However, the combination of Ad/AFPtBid with Dox treatment failed to demonstrated better effect than Dox treatment alone because the mice that received Dox exhibited serious weight loss. Tumor tissues from Ad/AFPtBid alone or combination treatment groups showed a decrease in cells positive for PCNA, and an increase in apoptosis by TUNEL staining, indicating that Ad/AFPtBid induced tumor regression through its pro-apoptotic effect. Inflammatory cell infiltration was also increased. Furthermore, Ad/AFPtBid did not suppress the hepatic tumor formed by non-AFP producing SK-HEP-1 or DLD-1. Finally, Ad/AFPtBid and 5-FU in combination results in better survival rate. No acute toxic effect of Ad/AFPtBid was observed. / Ma, Shihong. / "December 2009." / Adviser: CHEN Gong George. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 72-01, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2010. / Includes bibliographical references (leaves 114-138). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. Ann Arbor, MI : ProQuest Information and Learning Company, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

Au cours d'une étude sur le contrôle transcriptionnel du gène de l'alpha-foetoprotéine, le laboratoire s'était intéressé aux facteurs de transcription de la famille SP/KLF et S. Scohy avait découvert une séquence définissant un nouveau membre: SP6.<p><p>Afin de déterminer la structure du gène chez la souris, nous avons isolé un fragment génomique contenant la totalité du gène et nous l'avons séquencé. Une analyse informatique de cette séquence, l'isolement d'ESTs ainsi qu'une expérience d'extension d'amorce, nous ont permis d'affirmer que le gène Sp6 murin possède deux exons, générant une protéine de 376 acides aminés à partir d'un ATG repéré au début de l'exon 2.<p>En même temps, des travaux réalisés sur un gène nommé epiprofin ont été publiés (Nakamura et al. 2004). Ce gène s'est avéré correspondre au gène Sp6 car il code pour la même protéine. Les exons 2 sont en effet identiques, seuls les exons 1 diffèrent.<p>Nos études sur l'expression du gène Sp6 ont indiqué qu'elle est ubiquiste mais que c'est durant le développement embryonnaire, et surtout pendant les stades les plus tardifs de celui-ci, qu'il est le plus exprimé. Cette expression se localise surtout au niveau des dents, de l'épithélium olfactif, du cerveau, des bourgeons de membres et des follicules pileux de l'embryon. A l'état adulte, l'expression de Sp6 se réduit fortement dans tous les tissus; seuls les poumons présentent un taux d'expression relativement important.<p>Ce travail a également permis de mettre en évidence l'existence d'un transcrit non-codant issu d'une transcription antisens du locus Sp6 et dont le premier exon inclu la totalité de l'exon 2 du gène Sp6. Nous l'avons appelé Sp6os et avons montré que son expression est absente dans de nombreux tissus et est très faible dans les tissus où on détecte le transcrit. Une comparaison de l'expression des transcrits Sp6 et Sp6os nous a permis d'imaginer un rôle pour Sp6 dans le développement et une possible modulation de son activité, par Sp6os, dans certains tissus.<p><p>Afin de préciser la fonction du locus Sp6, nous l'avons invalidé chez la souris. Les mutants Sp6-/- se sont avérés viables mais présentent des anomalies dans tous les tissus où Sp6 est le plus fortement exprimé. En effet, ils n'ont ni pelage, ni vibrisse et montrent des anomalies des dents, des membres et des poumons. Nous avons également noté une dérégulation importante de l'apoptose (et parfois aussi de la prolifération cellulaire) chez ces souris Sp6-/-. / Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire / info:eu-repo/semantics/nonPublished