Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-19T13:27:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 406149 bytes, checksum: 4512c9710f3dc585f44f6e1d4b401f97 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T13:27:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 406149 bytes, checksum: 4512c9710f3dc585f44f6e1d4b401f97 (MD5) Previous issue date: 2001-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram conduzidos testes para avaliar a atividade inseticida de amidas sintéticas análogas à piperina, utilizando a espécie Spodoptera frugiperda como inseto-modelo para estes estudos. A criação de S. frugiperda foi mantida à base de dieta artificial. Inicialmente foram realizados bioensaios que consistiram na aplicação tópica de 0,5 μL das seguintes amidas, pertencentes a dois grupos diferentes: 1) N-alquil-3-(3,4-metilenodioxifenil)-(E)-prop-2- enamidas, que são as amidas: N-isopropil-3-(3,4-metilenodioxifenil-(E)-prop- 2enamida [1], N-isopentil-3(3,4-etilenodioxifenil)-(E)-prop-2-enamida [2], N- hexill-3-(3,4-metilenodioxifenil)-(E)-prop-2-enamida [3], N-pentil-3-(3,4- metiledioxfenil)-(E)-prop-2-enamida [4] e N-dodecil-3(3,4-metilenodioxi- fenil)-(E)-prop-2-enamida [5]; e 2) N-alquil-(3,4-metilenodioxifenil)-amidas, que são as amidas N-isopropil-(3,4-metilenodioxifenil) amida [6], N-isopentill- (3,4-metilenodioxifenil) amida [7], N-hexil-(3,4-metilenodioxifenil) amida [8], N-butil-(3,4-metilenodioxifenil) amida [9], N-etil-(3,4-metilenodioxifenil) amida [10] e N-pentil-(3,4-metilenodioxifenil) amida [11]; além do butóxido de piperonila, com ampla faixa de concentrações de cada amida em larvas de 3 o instar para obtenção de faixas de respostas, que serviram de referencial na preparação dos bioensaios definitivos de dose-resposta. Após esses, um segundo bioensaio foi então realizado, a fim de verificar o efeito de doses mais baixas dos compostos mais promissores ao longo do desenvolvimento do inseto, avaliando os seguintes parâmetros: mortalidade larval (corrigida para a testemunha), ganho de peso em função do tempo, sobrevivência durante o período larval, duração do período larval e dieta assimilada (diferença entre a dieta consumida e fezes). A metodologia de aplicação foi a mesma descrita anteriormente, utilizando acetona como solvente e depositando 0,5 μL das amidas N-isopropil-(3,4-metilenodioxifenil)-amida [6], N-isopentil-(3,4- metilenodioxifenil)-amida [7] e N-hexil-(3,4-metilenodioxifenil)-amida [8] e do butóxido de piperonila, aplicadas nas seguintes concentrações sobre os insetos, 5,0, 1,0, 0,5, 0,1 e 0,05 mg/mL, correspondentes às doses 1.344,0, 268,8, 134,4, 26,88 e 13,44 ppm, respectivamente. As amidas [6], [7] e [8], sintetizadas e avaliadas pelos ensaios de aplicação tópica, apresentaram efeito inseticida para a espécie S. frugiperda. O butóxido de piperonila apresentou baixa toxicidade, além de não comprometer significativamente a sobrevivência larval nas doses utilizadas, ao contrário do que foi observado para as outras amidas. Além da mortalidade das larvas, foram observadas também, quando aplicada a dose de 268,8 ppm, anomalias morfológicas, além de prolongamento dos instares de S. frugiperda. Em relação ao ganho de peso dos insetos expostos às três amidas e ao butóxido de piperonila, foram constatadas diferenças significativas entre os tratamentos. Os resultados dos testes com dieta assimilada apresentaram diferenças significativas com base nas superposições das barras de erro-padrão, sendo a amida [6] a que apresentou o menor valor do assimilado nas doses de 26,88 e 134,4 ppm e a amida [7], a que apresentou o menor valor do assimilado em relação às outras, na dose de 1.344,0 ppm. / Tests were carried out to assess the insecticide activity of synthetic amides derived from piperine using the species Spodoptera frugiperda as insect model for these studies. S. frugiperda was mass reared in laboratory conditions using an artificial diet. At first, bioassays were carried out with topical application of 0.5 μL of each insecticide solution in 3rd instar larvae. We used a broad range of concentrations to be used for establishing dose- response bioassays. After these, a second bioassay was carried out to assess the subtle effects of the most promising insecticide compounds. The following parameters were evaluated in this study final larval mortality (corrected for the control), weight gain, survival during the larval period, duration the larval period and absorbed diet. The insecticides were also topically applied in this second experiment, as previously described, using acetone as solvent and the following concentrations of N-isopentyl-(3,4-methylenodioxiphenyl)-amide, N-isopropyl-(3,4-methylenodioxiphenyl))-amide, N-hexyl-(3,4-methylenodioxiphenyl))-amide, besides piperonyl butoxide: 5.0, 1.0, 0.5,0.1, and 0.05 mg/mL. These four were most toxic amides towards S. frugiperda observed in the first experiment. Among them, piperonyl butoxide was the less toxic compound while the others showed similar and lighter toxicity to this insect species. The toxic effect of these compounds followed the same trend observed for acute toxicity with piperonyl butoxide showing lower larval toxicity than the other three amides which resemble each other and showed greater insecticide effect. There were significant differences in weight gain when the different insecticides were used, but this does not seem to be related weith their acute and sublettal. There was difference in absorbed diet per insect exposed to each compound, with piperonyl butoxide showing higher values and a peak of diet absorption seem to occur when insects are exposed to doses 26.88 and 134.4 ppm, showing lower in the dose de 1,344.0 ppm.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-03T16:36:35Z No. of bitstreams: 1 monete_r_gomes_ioc_bcs_0002_2010.pdf: 4408396 bytes, checksum: dc300c2a3e79c9521a3d4a99c18e5e9d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-03T16:36:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monete_r_gomes_ioc_bcs_0002_2010.pdf: 4408396 bytes, checksum: dc300c2a3e79c9521a3d4a99c18e5e9d (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Leishmania major, Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi (Tritryps) são protozoários unicelulares que causam a leishmaniose, a doença do sono e a doença de Chagas, respectivamente. Essas doenças causam ônus econômicos principalmente em regiões subtropicais e tropicais. Atualmente, não existem vacinas comercialmente disponíveis e não há tratamento eficaz para tais doenças. Isso se deve ao fato dos fármacos disponíveis apresentarem muitos efeitos colaterais e estarem propensas ao desenvolvimento de resistência. A maioria desses fármacos foi descoberta através da seleção de um grande número de compostos contra parasitas íntegros. Porém, nos últimos anos, uma nova abordagem vem ganhando espaço sob o termo de “desenho racional de fármacos”. Este termo representa a busca por compostos contra alvos moleculares específicos, visando diferenças bioquímicas e fisiológicas entre o parasita e o hospedeiro. A era pós-genômica gerou uma grande quantidade de informações que permitem a identificação ótima de novos alvos. Neste contexto, a partir de dados públicos dos genomas de Tritryps, reconstruímos as vias de processamento da informação genética (com ênfase nas vias de replicação e reparo, transcrição e tradução) nesses organismos, para adquirir uma melhor representação das enzimas envolvidas nestes processos. Estas análises permitiram estudos comparativos para identificar candidatos a novos alvos terapêuticos. Em nossa metodologia utilizamos a ferramenta AnEnPi (http://bioinfo.pdtis.fiocruz.br/AnEnPi/) para buscar nas seqüências genômicas por enzimas análogas. Utilizando os dados provindos do KEGG, primeiro houve uma etapa de clusterização das estruturas primárias de todas as enzimas desse banco de dados anotadas com o mesmo EC. Para isso utilizou-se uma pontuação (score) de similaridade no Blastp de 120, como parâmetros de corte. Encontramos 830 grupos de ECs com mais de um cluster e 1430 com um único cluster. Após isso, foi realizado um passo de reanotação. Para isto, foi rodado um novo Blastp, assumindo como ponto de corte um e-value de 10e-20, entre todas as proteínas preditas nos genomas de cada Tritryp contra todos os clusters. Desses dados geramos mapas das vias de interesse para esses organismos e os comparamos aos mapas que o KEGG disponibiliza como padrão. Identificamos alguns casos de analogia nestas vias entre seres humanos e Tritryps que podem vir a ser utilizados como novos alvos terapêuticos para o desenvolvimento de fármacos contra esses parasitas. Foi feita a modelagem por homologia de um análogo (6.1.1.-, de T. brucei), utilizando a ferramenta MHOLline. Além disso, buscamos no banco de alvos terapêuticos para doenças negligenciadas, TDRTARGETS (http://tdrtargets.org/), pelos ECs identificados como possíveis novos alvos, e não encontramos nenhuma ocorrência. Tal fato pode indicar que com a metodologia aplicada conseguimos identificar novos candidatos a alvos terapêuticos contra estes parasitas. Em análises futuras, vamos testar e-values mais restritivos na etapa de reanotação, para assim, testar o potencial de reanotação da ferramenta. / Leishmania major, Trypanos oma brucei e Trypanosoma cruzi (Tritryps) are unicellular protozoa that cause leishmaniasis, sleeping sickness and Chagas disease, respectively. These diseases cause economic burden mainly in subtropical and tropical regions. Currently, there are no commer cially available vaccines and no effective treatment for such diseases. This is because the available drugs present many side effects and are willing to develop resistance. Most of these drugs were discovered through the screening of large numbers of compo unds against whole parasites. However, a new approach has been gaining ground under the term "rational drug design", recently. This term represents the search for compounds against specific molecular targets, aiming physiological and biochemical difference s between parasites and hosts. The post - genomic era generated a lot of information that allow optimal identification of new targets. In this context, from public data of the Tritryps’ genomes, we reconstructed the genetic information processing pathway (wi th emphasis on replication and repair, transcription and translation) of these organisms, to obtain a better representation of enzymes involved in these processes. These analyses allowed comparative studies to identify candidates for new therapeutic target s. In our methodology we used the AnEnPi tool ( http://bioinfo.pdtis.fiocruz.br/AnEnPi/ ) to search the genomes for analogous enzymes. Using the data coming from KEGG, there was first a clustering step of the primary structures of all enzymes annotated with the same EC in this database. For this we used a Blastp similarity score of 120 as threshold. We found 830 groups of ECs with more than one cluster and 1430 with only one cluster. After that, we performed a reannotation step. For this task a new Blastp was done, assuming an e - value cutoff of 10e - 20 , among all pr edicted proteins, from each Tritryp genome, against all clusters. From these data we generated maps, for Tritryps, of the pathways of interest and compared them to the KEGG standard maps. We identified some cases of analogy in these pathways between humans and Tritryps that may be used as new therapeutic targets for developing drugs against these parasites. The homology modeling was done for an analog (6.1.1. - , T. brucei ), using the tool MHOLline. Furthermore we also searched in the therapeutic targets data base for neglected disease, TDRTARGES (http://tdrtargets.org/), for the ECs identified as possible new targets, and no occurrences were found. This may indicate that with the methodology applied we managed to identify new candidates for therapeutic targets against these parasites. In further analysis, we will test more restrictive e - values on the reannotation step to test the potential of reannotation of the tool.