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Desenvolvimento e validação de metodologia analítica para identificação e doseamento de medicamentos anti-esquistossomose / Development and validation of analytical methodology for identification and dosing of medicines anti - schistosomiasis.Santos, Elenice Luduvina da Silva 19 January 2016 (has links)
A esquistossomose ou bilharziose, é uma doença produzida por trematódeos do gênero Schistosoma. Dentre as 19 espécies reconhecidas, cinco infectam primariamente o homem: S. mansoni, S. haematobium, S. intercalatum, S. japonicum e S. Mekongi.O número de pessoas com infecção esquistossomótica, em todo o mundo, foi estimado em 200 milhões sendo sua maioria na Ásia e África. Na América do Sul e Caribe encontram-se vários milhões de casos sendo uma estimativa de mais de seis milhões de casos no Brasil. Os fármacos utilizados para o tratamento desta enfermidade são o praziquantel e o oxamniquina, sendo este último o princípio ativo do produto Mansil® cápsulas produzido pela indústria farmacêutica Pfizer. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar métodos analíticos por eletroforese capilar (CE) e por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), rápidos, seletivos e confiáveis para a determinação de oxamniquina em formulações farmacêuticas e de sua impureza (uk-3883), quando houver. A separação cromatográfica foi realizada usando a coluna Thermo® Nucleosil C18 (150 mm x 4,6 mm x 5 µm), com fase móvel constituída por água acidificada com 0,1% ácido ortofosfórico:metanol (40:60 v/v), trabalhando com vazão de 1,0 mL min-1 e volume de injeção de 2 µL. A temperatura da coluna foi controlada em 20 ºC e a detecção foi realizada na região do UV em 254 nm. O tempo de retenção da oxamniquina foi de 1,9 min e da uk-3883 5,1 min. O método por eletroforese capilar de zona (CZE) foi desenvolvido utilizando capilar de sílica fundida de 20 cm (comprimento efetivo) x 50 µm d.i. e eletrólito constituído da solução tampão fosfato de sódio monobásico 30 mmol L-1, pH 2,5 ajustado com ácido orto-fosfórico 10%: metanol 18% v/v. Injeção hidrodinâmica 0,5 psi/3 s; voltagem aplicada de +25 kV, temperatura de 20 ºC e detecção no UV de 254 nm. Os métodos analíticos foram validados de acordo com os requerimentos vigentes da ANVISA, ICH e Farmacopéia Americana. Portanto, os métodos propostos demonstraram linearidade (R2>0,99), precisão (%DPR < 2%), exatidão (>98%, expressado em porcentagem de recuperação) e adequabilidade para a quantificação da oxamniquina em formas farmacêuticas comerciais. / Schistosomiasis or bilharzia, is a disease caused by trematodes of the gender Schistosoma. Among the 19 recognized species, five primarily infect humans: S. mansoni, S. haematobium, S. intercalatum, S. japonicum and S. mekongi. The number of people with schistosomiasis infection worldwide was estimated at 200 million being mostly living in Asia and Africa. In South America and the Caribbean are several million of cases and in Brazil it is stimated of more than six million of cases. The drugs used for the treatment of this disease is praziquantel and oxamniquine, the latter being the active principle of the Mansil® capsules produced by Pfizer pharmaceutical industry. This study aimed to develop and validate fast, selective and reliable analytical methods through capillary electrophoresis (CE) and high-performance liquid chromatography (HPLC), for the determination of oxamniquine in pharmaceutical formulations and its impurity (UK-3883) if any. The chromatographic separation was performed using a Thermo® Nucleosil C18 column (150 mm x 4.6 mm x 5 µm) the mobile phase was composed of water with 0.1% orthophosphoric acid: methanol (40:60 v/v); the flow rate was 1.0 ml min-1. The column temperature was controlled at 20 ° C and the detection was performed with UV detector at 254 nm. The retention time for oxamniquine and its impurity (uk-3883) were 1.9 and 5.1 minutes, respectively. The capillary zone electrophoresis method was developed using an uncoated fused-silica capillary of 20 cm effective length x 50 µm i.d. the electrolyte was composed of 30 mmol L-1 sodium phosphate monobasic buffer solution, pH 2.5 adjusted with ortho-phosphoric acid 10%: 18% methanol v(/v). Samples were injected hydrodynamically at 0.3 psi for 3 s, the detection was made by UV absorption at 254 nm, the capillary temperature was 20ºC and the applied voltage was +25 kV. Analytical methods were validated in accordance with the ANVISA, ICH and United States Pharmacopoeia guidelines. Therefore, the porposed methods showed linearity (R2>0,99), precision (%RSD <2%), accuracy (>98%, expressed as recovery percentage) and suitability for the quantification of oxamniquine in commercial dosage forms.
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Desenvolvimento e validação de metodologia analítica para identificação e doseamento de medicamentos anti-esquistossomose / Development and validation of analytical methodology for identification and dosing of medicines anti - schistosomiasis.Elenice Luduvina da Silva Santos 19 January 2016 (has links)
A esquistossomose ou bilharziose, é uma doença produzida por trematódeos do gênero Schistosoma. Dentre as 19 espécies reconhecidas, cinco infectam primariamente o homem: S. mansoni, S. haematobium, S. intercalatum, S. japonicum e S. Mekongi.O número de pessoas com infecção esquistossomótica, em todo o mundo, foi estimado em 200 milhões sendo sua maioria na Ásia e África. Na América do Sul e Caribe encontram-se vários milhões de casos sendo uma estimativa de mais de seis milhões de casos no Brasil. Os fármacos utilizados para o tratamento desta enfermidade são o praziquantel e o oxamniquina, sendo este último o princípio ativo do produto Mansil® cápsulas produzido pela indústria farmacêutica Pfizer. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar métodos analíticos por eletroforese capilar (CE) e por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), rápidos, seletivos e confiáveis para a determinação de oxamniquina em formulações farmacêuticas e de sua impureza (uk-3883), quando houver. A separação cromatográfica foi realizada usando a coluna Thermo® Nucleosil C18 (150 mm x 4,6 mm x 5 µm), com fase móvel constituída por água acidificada com 0,1% ácido ortofosfórico:metanol (40:60 v/v), trabalhando com vazão de 1,0 mL min-1 e volume de injeção de 2 µL. A temperatura da coluna foi controlada em 20 ºC e a detecção foi realizada na região do UV em 254 nm. O tempo de retenção da oxamniquina foi de 1,9 min e da uk-3883 5,1 min. O método por eletroforese capilar de zona (CZE) foi desenvolvido utilizando capilar de sílica fundida de 20 cm (comprimento efetivo) x 50 µm d.i. e eletrólito constituído da solução tampão fosfato de sódio monobásico 30 mmol L-1, pH 2,5 ajustado com ácido orto-fosfórico 10%: metanol 18% v/v. Injeção hidrodinâmica 0,5 psi/3 s; voltagem aplicada de +25 kV, temperatura de 20 ºC e detecção no UV de 254 nm. Os métodos analíticos foram validados de acordo com os requerimentos vigentes da ANVISA, ICH e Farmacopéia Americana. Portanto, os métodos propostos demonstraram linearidade (R2>0,99), precisão (%DPR < 2%), exatidão (>98%, expressado em porcentagem de recuperação) e adequabilidade para a quantificação da oxamniquina em formas farmacêuticas comerciais. / Schistosomiasis or bilharzia, is a disease caused by trematodes of the gender Schistosoma. Among the 19 recognized species, five primarily infect humans: S. mansoni, S. haematobium, S. intercalatum, S. japonicum and S. mekongi. The number of people with schistosomiasis infection worldwide was estimated at 200 million being mostly living in Asia and Africa. In South America and the Caribbean are several million of cases and in Brazil it is stimated of more than six million of cases. The drugs used for the treatment of this disease is praziquantel and oxamniquine, the latter being the active principle of the Mansil® capsules produced by Pfizer pharmaceutical industry. This study aimed to develop and validate fast, selective and reliable analytical methods through capillary electrophoresis (CE) and high-performance liquid chromatography (HPLC), for the determination of oxamniquine in pharmaceutical formulations and its impurity (UK-3883) if any. The chromatographic separation was performed using a Thermo® Nucleosil C18 column (150 mm x 4.6 mm x 5 µm) the mobile phase was composed of water with 0.1% orthophosphoric acid: methanol (40:60 v/v); the flow rate was 1.0 ml min-1. The column temperature was controlled at 20 ° C and the detection was performed with UV detector at 254 nm. The retention time for oxamniquine and its impurity (uk-3883) were 1.9 and 5.1 minutes, respectively. The capillary zone electrophoresis method was developed using an uncoated fused-silica capillary of 20 cm effective length x 50 µm i.d. the electrolyte was composed of 30 mmol L-1 sodium phosphate monobasic buffer solution, pH 2.5 adjusted with ortho-phosphoric acid 10%: 18% methanol v(/v). Samples were injected hydrodynamically at 0.3 psi for 3 s, the detection was made by UV absorption at 254 nm, the capillary temperature was 20ºC and the applied voltage was +25 kV. Analytical methods were validated in accordance with the ANVISA, ICH and United States Pharmacopoeia guidelines. Therefore, the porposed methods showed linearity (R2>0,99), precision (%RSD <2%), accuracy (>98%, expressed as recovery percentage) and suitability for the quantification of oxamniquine in commercial dosage forms.
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ContribuiÃÃo para a padronizaÃÃo quÃmica de espÃcies do gÃnero Plectranthus: derivatizaÃÃo e validaÃÃo de mÃtodos analÃticos para a quantificaÃÃo de marcadores quÃmicos / Contribution to the chemical standardization of genus Plectranthus species: derivation and validation of the quantification analytical methods of chemical markersLeandro Bezerra de Lima 22 April 2013 (has links)
Plectranthus grandis (Cramer) Willense, à uma planta medicinal conhecida popularmente no Cearà como boldo-grande, utilizada pela populaÃÃo em substituiÃÃo a P. barbatus (boldo), que apresenta atividade gastroprotetora jà comprovada para a planta e para alguns diterpenos isolados, validando cientificamente desta forma seu uso popular. Este trabalho descreve os procedimentos analÃticos utilizados e resultados obtidos, visando contribuir para a padronizaÃÃo quÃmica de quatro espÃcies de Plectranthus. Os diterpenos barbatusina e 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina foram isolados atravÃs de tÃcnicas cromatogrÃficas, sendo possÃvel desenvolver um mÃtodo de extraÃÃo seletiva para a barbatusina, o que possibilitou obter quantidade significativa desta substÃncia. Foram realizadas reaÃÃes de derivatizaÃÃo, obtendo-se a 3-hidroxi-3-desoxibarbatusina, que possui atividade gastroprotetora, in vivo, jà reportada na literatura, e a oxima da barbatusina, inÃdita na literatura, com atividade citotÃxica mais potente do que sua precursora. As elucidaÃÃes estruturais foram realizadas atravÃs de espectroscopia na regiÃo do infravermelho, RMN 1H e RMN 13C, em comparaÃÃo com dados da literatura. Utilizando CLAE-DAD desenvolveu-se mÃtodos para a quantificaÃÃo de barbatusina e 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina, em que foram encontrados parÃmetros adequados de linearidade (r2 > 0,99), para as duas substÃncias analisadas. O mÃtodo foi validado e apresentou linearidade (r2 = 0,9931 para a barbatusina e r2 = 0,9966 para a 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina), seletividade, precisÃo intra-dia (DPR < 2,8% para a barbatusina e DPR < 3,5% para a 3β-hidroxi-3-desoxibarbatusina), exatidÃo (recuperaÃÃo entre 81,7% e 115,1%). Os mÃtodos entÃo desenvolvidos foram aplicados aos extratos das folhas de P grandis, P. barbatus, P. amboinicus, P. ornatus. O potencial larvicida e citotÃxico das quatro espÃcies de Plectranthus foram avaliados, bem como dos compostos puros, apresentando promissora atividade citotÃxica para trÃs linhagens de cÃlulas tumorais. / Plectranthus grandis (Cramer) Willense is a medicinal plant popularly known in Cearà as boldo-grande, used by population in substitution of P. barbatus (boldo), it shows gastroprotective activity already proven for herb and for some isolated diterpenes, scientifically validating this way its popular use. This work describes the analytical procedures used and obtained results, aiming to contribute to chemical standardization of four Plectranthus species. Barbatusin and 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin diterpenes were isolated by chromatographic techniques, being possible to develop selective extration method of barbatusin, which enabled to obtain significant amount of this substance. Derivatization reactions were performed, getting 3-hydroxy-3-deoxobarbatusin, having gastroprotective activity, in vivo, already reported in the literature, and oxyimine product of barbatusin, unpublished in the literature, with cytotoxic activity more potent than its precursor. Estrutural elucidation were performed by infra-red spectroscopy, NMR 1H and NMR 13C, compared with literature data. Using HPLC-DAD, methods were developed for quantification of barbatusin and 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin, in wich suitable parameters have been found of linearty (r2 > 0,99), for both analytes. The method was validated and presented linearty (r2 = 0,9931 for barbatusin and r2 = 0,9966 for 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin), selectivity, within-day precision (RSD < 2,8% for barbatusin and RSD < 3,5% for 3β-hydroxy-3-deoxobarbatusin), accuracy (recovery between 81,7% a 115,1%). The methods so developed have been applied to the leaves extracts of P. grandis, P. barbatus, P. amboinicus and P. ornatus. The larvicidal and cytotoxic potential of the four Plectranthus species were evaluated, as well as the purà compounds, showing promising cytotoxic activty for three strains of tumor cells.
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