Muitas espécies do gênero Aristolochia (Familia Aristolochiaceae) têm sido usadas na medicina tradicional e folclórica como medicamentos e tônicos, as quais demonstravam atividades farmacológicas de interesse clínica e medica como anti-hemorrágica, anti-parasita, antibacteriano, antifúngico, analgésico, antitumoral entre outras. Visando a obtenção de mais informações sobre essas plantas e na procura por substâncias com efeitos antiofídicos, neste trabalho avaliou-se à ação de extratos aquoso, metanólico e de acetato de etila de folhas e caule contra as ações tóxicas da peçonha de Bothrops asper, ambos procedentes do Panamá e contra o efeito miotóxico da peçonha de Bothrops jararacussu e das miotoxinas BthTX-I (isolada de B. jararacussu) e Mtx-II (isolada de B. asper). O extrato das folhas em acetato de etila apresentou a melhor inibição da atividade fosfolipásica da peçonha de B. asper, demonstrando inibição de 45%, 35% e 33% nas proporções de 1:5, 1:10 e 1:30 (m/m), respectivamente. Enquanto que, o extrato de caule em acetato de etila demonstrou maior eficácia na neutralização da atividade coagulante, e, além disso, inibiu 96%, 92% e 87% do edema, da miotoxicidade e hemorragia induzidas pela peçonha de B. asper, respectivamente. Os percentuais diferenciados na neutralização das ações tóxicas da peçonha de Bothrops asper, revelam diferentes perfis do potencial antiofídico de Aristolochia sprucei. Um dos componentes bioativos foi isolado do extrato de caule desta planta por CLAE, e a caracterização química, por ressonância magnética nuclear, demonstrou ser o ácido aristolóquio que inibiu a atividade miotóxica das peçonhas de B. jararacussu e de B. asper em 80% e 85% e assim como a atividade miotóxica da BthTX-I e Mtx-II em 64% e 60%, respectivamente. A atividade hemolítica indireta da peçonha de B. asper foi inibida em 43% pelo o ácido aristolóquio. A análise dos espectros de dicroísmo circular e os estudos de interação por modelagem molecular sugerem que o ácido aristolóquio forma um complexo com a Mtx-II de B. asper inibindo sua atividade. A ligação do ácido aristoloquio com as miotoxinas (MjTX-1, BthTX-II) modificou a forma e a intensidade dos espectros de dicroísmo circular da miotoxina e induziu alterações na porcentagem dos diversos domínios que constituem a estrutura secundária desta miotoxina. Os resultados obtidos confirmam que os extratos de A. sprucei possuem propriedades antiofídicas e sugerem a necessidade de aprofundar estudos que permitam utilizar com segurança os extratos e o principio ativo isolado como suplementos dos antisoros para aumentar a eficácia na neutralização dos efeitos tóxicos locais da peçonha das serpentes. / A lot of species of genus Aristolochia (Familia Aristolochiacheae) have been used in traditional medicine and folk, such as medicaments and tonics, which show pharmacological activities of clinic and medical interest, like antihemorragic, antiparasitic, antibacterial, antifungic, analgesic, antitumoral between others. Expecting to get more information about these plants and in the search by substances with antiophidic effects, in this work was evaluated the action of aqueous, metanolic and ethyl acetate extracts from leaves and stems of Aristolochia sprucei against the toxic action of Bothrops asper venom, both native from Panamá and against the myotoxic effect of Bothrops jararacussu venom and BthTX1 (isolated from B. jararacussu) and Mtx-II (isolated from Bothorps asper). The leaves extracts in ethyl acetate showed the best inhibition registered of PLA2 activity of venom de B. asper showing inhibition of 45 %, 35 % and 33 %, in proportion (m/m) of 1:5, 1:10 and 1:30 respectively. As regards to stem extract in ethyl acetate, it showed high efficacy in neutralization of coagulant activity, besides It inhibited 96 %, 92 % and 87 % of edema, myotoxicity and hemorrhage induced by B. asper venom, respectively. One of bioactives components was isolated from stem extract of this plant by CLAE and the chemical characterization by nuclear magnetic resonance, this showed that the compound is the aristolochic acid. This compound inhibited the myotoxic activity of B. jararacussu and B. asper venom in 80 % and 85 %, so like myotoxic activity of BthTx-I and MTx-II in 64 % and 60 % respectively. The indirect hemolytic activity of B. asper venom was inhibited in 43 % by the aristolochic acid. The analyze of spectrum of circular dichroism and the studies of interaction by molecular modelagem suggest that the aristolochic acid forms a complex 1:1 with the miotoxin inhibiting their activity. The joint of aristolochic acid with the miotoxins (MjTX-1, BthTx-II) changes the way and the intensity of spectra from dichroism circular of miotoxin and It induced alteration in percentage of several domains that constitute a secondary structure from this toxin. The results obtained confirm that the extracts of A. sprucei have antiophidic properties and it suggest the necessity of deepen studies that allow to use with safety the extracts and the isolated active principle, like antiserum supplements to increase the efficacy in the neutralization of local toxics effects of snakes venoms.

Muitas espécies do gênero Aristolochia (Familia Aristolochiaceae) têm sido usadas na medicina tradicional e folclórica como medicamentos e tônicos, as quais demonstravam atividades farmacológicas de interesse clínica e medica como anti-hemorrágica, anti-parasita, antibacteriano, antifúngico, analgésico, antitumoral entre outras. Visando a obtenção de mais informações sobre essas plantas e na procura por substâncias com efeitos antiofídicos, neste trabalho avaliou-se à ação de extratos aquoso, metanólico e de acetato de etila de folhas e caule contra as ações tóxicas da peçonha de Bothrops asper, ambos procedentes do Panamá e contra o efeito miotóxico da peçonha de Bothrops jararacussu e das miotoxinas BthTX-I (isolada de B. jararacussu) e Mtx-II (isolada de B. asper). O extrato das folhas em acetato de etila apresentou a melhor inibição da atividade fosfolipásica da peçonha de B. asper, demonstrando inibição de 45%, 35% e 33% nas proporções de 1:5, 1:10 e 1:30 (m/m), respectivamente. Enquanto que, o extrato de caule em acetato de etila demonstrou maior eficácia na neutralização da atividade coagulante, e, além disso, inibiu 96%, 92% e 87% do edema, da miotoxicidade e hemorragia induzidas pela peçonha de B. asper, respectivamente. Os percentuais diferenciados na neutralização das ações tóxicas da peçonha de Bothrops asper, revelam diferentes perfis do potencial antiofídico de Aristolochia sprucei. Um dos componentes bioativos foi isolado do extrato de caule desta planta por CLAE, e a caracterização química, por ressonância magnética nuclear, demonstrou ser o ácido aristolóquio que inibiu a atividade miotóxica das peçonhas de B. jararacussu e de B. asper em 80% e 85% e assim como a atividade miotóxica da BthTX-I e Mtx-II em 64% e 60%, respectivamente. A atividade hemolítica indireta da peçonha de B. asper foi inibida em 43% pelo o ácido aristolóquio. A análise dos espectros de dicroísmo circular e os estudos de interação por modelagem molecular sugerem que o ácido aristolóquio forma um complexo com a Mtx-II de B. asper inibindo sua atividade. A ligação do ácido aristoloquio com as miotoxinas (MjTX-1, BthTX-II) modificou a forma e a intensidade dos espectros de dicroísmo circular da miotoxina e induziu alterações na porcentagem dos diversos domínios que constituem a estrutura secundária desta miotoxina. Os resultados obtidos confirmam que os extratos de A. sprucei possuem propriedades antiofídicas e sugerem a necessidade de aprofundar estudos que permitam utilizar com segurança os extratos e o principio ativo isolado como suplementos dos antisoros para aumentar a eficácia na neutralização dos efeitos tóxicos locais da peçonha das serpentes. / A lot of species of genus Aristolochia (Familia Aristolochiacheae) have been used in traditional medicine and folk, such as medicaments and tonics, which show pharmacological activities of clinic and medical interest, like antihemorragic, antiparasitic, antibacterial, antifungic, analgesic, antitumoral between others. Expecting to get more information about these plants and in the search by substances with antiophidic effects, in this work was evaluated the action of aqueous, metanolic and ethyl acetate extracts from leaves and stems of Aristolochia sprucei against the toxic action of Bothrops asper venom, both native from Panamá and against the myotoxic effect of Bothrops jararacussu venom and BthTX1 (isolated from B. jararacussu) and Mtx-II (isolated from Bothorps asper). The leaves extracts in ethyl acetate showed the best inhibition registered of PLA2 activity of venom de B. asper showing inhibition of 45 %, 35 % and 33 %, in proportion (m/m) of 1:5, 1:10 and 1:30 respectively. As regards to stem extract in ethyl acetate, it showed high efficacy in neutralization of coagulant activity, besides It inhibited 96 %, 92 % and 87 % of edema, myotoxicity and hemorrhage induced by B. asper venom, respectively. One of bioactives components was isolated from stem extract of this plant by CLAE and the chemical characterization by nuclear magnetic resonance, this showed that the compound is the aristolochic acid. This compound inhibited the myotoxic activity of B. jararacussu and B. asper venom in 80 % and 85 %, so like myotoxic activity of BthTx-I and MTx-II in 64 % and 60 % respectively. The indirect hemolytic activity of B. asper venom was inhibited in 43 % by the aristolochic acid. The analyze of spectrum of circular dichroism and the studies of interaction by molecular modelagem suggest that the aristolochic acid forms a complex 1:1 with the miotoxin inhibiting their activity. The joint of aristolochic acid with the miotoxins (MjTX-1, BthTx-II) changes the way and the intensity of spectra from dichroism circular of miotoxin and It induced alteration in percentage of several domains that constitute a secondary structure from this toxin. The results obtained confirm that the extracts of A. sprucei have antiophidic properties and it suggest the necessity of deepen studies that allow to use with safety the extracts and the isolated active principle, like antiserum supplements to increase the efficacy in the neutralization of local toxics effects of snakes venoms.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Este trabalho descreve o estudo fitoquÃmico de Solanum campaniforme (Solanaceae), visando o isolamento e elucidaÃÃo estrutural de novos constituintes quÃmicos bioativos, bem como o estudo do padrÃo de fragmentaÃÃo por espectrometria de massas seqÃencial com ionizaÃÃo por electrospray (IES-EM/EM) dos alcalÃides obtidos. A investigaÃÃo quÃmica realizada com o extrato etanÃlico das folhas da referida espÃcie, atravÃs de mÃtodos cromatogrÃficos, incluindo CLAE (fase reversa), resultou no isolamento e identificaÃÃo de dezenove substÃncias, sendo quatro derivados fenÃlicos: Ãcido cafÃico (SC-1), Ãster etÃlico do Ãcido cafÃico (SC-2), canferol-3-O-rutinosÃdeo (SC-3) e tiramina (SC-4), e quinze alcalÃides esteroidais: 22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-ona (SC-5), 22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-ona (SC-6), 3,9-dihidroxi-22,23-epoxi-9,10-seco-solanida-1,3,5(10)-trieno (SC-7), 12-acetiloxi-(25S)-22N-espirosol-4-en-3-ona (SC-8), (25S)-2N-espirosol-1,4-dien-3-ona (SC-9), (25S)-22N-espirosol-4-en-3-ona (SC-10), 22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-ona (SC-11), 22,23-epoxi-10-epi-solanida-1,4,9-trien-3-ona (SC-12), 12-hidroxi-(25S)-22N-espirosol-4-en-3-ona (SC-13), 22,23-epoxi-solanida-4-en-3-ona (SC-14) e 22,23-epoxi-solanida-4-en-3-ona (SC-15), (E)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-imina (SC-16), (E)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-imina (SC-17), (Z)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-imina (SC-18) e (Z)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-imina (SC-19). Com exceÃÃo dos alcalÃides SC-9 e SC-10, os quais estÃo sendo relatados como produtos naturais pela primeira vez, todos os demais sÃo inÃditos. As substÃncias isoladas tiveram suas estruturas elucidadas por mÃtodos espectromÃtricos (IV, EM e RMN 1H e 13C 1D e 2D), alÃm de comparaÃÃo com dados da literatura. O padrÃo de fragmentaÃÃo dos alcalÃides foi estabelecido com base nos experimentos EM/EM e os dados obtidos foram usados na anÃlise de desreplicaÃÃo destes compostos no extrato etanÃlico bruto das folhas da espÃcie em estudo. O potencial citotÃxico dos alcalÃides majoritÃrios (SC-5 a SC-7) foi avaliado frente Ãs linhagens de cÃlulas tumorais humanas: cÃlon (HCT8), mama (MDA-MB-435), leucemia (HL60) e cÃrebro (SF295), porÃm mostraram-se inativos. Estes compostos tambÃm foram investigados quanto as suas propriedades antiofÃdicas frente ao veneno de Bothrops pauloensis, mostrando significativos efeitos anti-miotÃxico, anti-hemorrÃgico e anti-necrosante. AlÃm disso, foi avaliado o efeito da tiramina sobre o metabolismo de animais com dislipidemia e obesidade, a qual apresentou efeito terapÃutico relacionado à reduÃÃo dos nÃveis de colesterol. / Este trabalho descreve o estudo fitoquÃmico de Solanum campaniforme (Solanaceae), visando o isolamento e elucidaÃÃo estrutural de novos constituintes quÃmicos bioativos, bem como o estudo do padrÃo de fragmentaÃÃo por espectrometria de massas seqÃencial com ionizaÃÃo por electrospray (IES-EM/EM) dos alcalÃides obtidos. A investigaÃÃo quÃmica realizada com o extrato etanÃlico das folhas da referida espÃcie, atravÃs de mÃtodos cromatogrÃficos, incluindo CLAE (fase reversa), resultou no isolamento e identificaÃÃo de dezenove substÃncias, sendo quatro derivados fenÃlicos: Ãcido cafÃico (SC-1), Ãster etÃlico do Ãcido cafÃico (SC-2), canferol-3-O-rutinosÃdeo (SC-3) e tiramina (SC-4), e quinze alcalÃides esteroidais: 22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-ona (SC-5), 22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-ona (SC-6), 3,9-dihidroxi-22,23-epoxi-9,10-seco-solanida-1,3,5(10)-trieno (SC-7), 12-acetiloxi-(25S)-22N-espirosol-4-en-3-ona (SC-8), (25S)-2N-espirosol-1,4-dien-3-ona (SC-9), (25S)-22N-espirosol-4-en-3-ona (SC-10), 22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-ona (SC-11), 22,23-epoxi-10-epi-solanida-1,4,9-trien-3-ona (SC-12), 12-hidroxi-(25S)-22N-espirosol-4-en-3-ona (SC-13), 22,23-epoxi-solanida-4-en-3-ona (SC-14) e 22,23-epoxi-solanida-4-en-3-ona (SC-15), (E)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-imina (SC-16), (E)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-imina (SC-17), (Z)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-imina (SC-18) e (Z)-N-[8â(4-hidroxifenil)etil]-22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-imina (SC-19). Com exceÃÃo dos alcalÃides SC-9 e SC-10, os quais estÃo sendo relatados como produtos naturais pela primeira vez, todos os demais sÃo inÃditos. As substÃncias isoladas tiveram suas estruturas elucidadas por mÃtodos espectromÃtricos (IV, EM e RMN 1H e 13C 1D e 2D), alÃm de comparaÃÃo com dados da literatura. O padrÃo de fragmentaÃÃo dos alcalÃides foi estabelecido com base nos experimentos EM/EM e os dados obtidos foram usados na anÃlise de desreplicaÃÃo destes compostos no extrato etanÃlico bruto das folhas da espÃcie em estudo. O potencial citotÃxico dos alcalÃides majoritÃrios (SC-5 a SC-7) foi avaliado frente Ãs linhagens de cÃlulas tumorais humanas: cÃlon (HCT8), mama (MDA-MB-435), leucemia (HL60) e cÃrebro (SF295), porÃm mostraram-se inativos. Estes compostos tambÃm foram investigados quanto as suas propriedades antiofÃdicas frente ao veneno de Bothrops pauloensis, mostrando significativos efeitos anti-miotÃxico, anti-hemorrÃgico e anti-necrosante. AlÃm disso, foi avaliado o efeito da tiramina sobre o metabolismo de animais com dislipidemia e obesidade, a qual apresentou efeito terapÃutico relacionado à reduÃÃo dos nÃveis de colesterol. / This work describes the phytochemical investigation of Solanum campaniforme (Solanaceae), aiming the isolation and structural elucidation of new bioactive chemical constituents, as well as the study of their fragmentation pattern under electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) of the isolated alkaloids. The chemical investigation performed with the ethanol extract from leaves of this species by chromatographic methods, including HPLC (reverse phase), resulted in the isolation and identification of nineteen compounds, being four of them phenol derivatives: caffeic acid (SC-1), caffeic acid ethyl ester (SC-2), kaempferol-3-rutinoside (SC-3) and tyramine (SC-4), and fifteen steroidal alkaloids: 22,23-epoxy-solanida-1,4,9-trien-3-one (SC-5), 22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-one, (SC-6), 3,9-dihydroxy-22,23-epoxy-9(10)-seco-solanida-1,3,5(10)-triene (SC-7), 12-acetoxyl-(25S)-22N-spirosol-4-en-3-one (SC-8), (25S)-22N-spirosol-1,4-dien-3-one (SC-9), (25S)-22-N-spirosol-4-en-3-one (SC-10), 22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-one (SC-11), 22,23-epoxy-10-epi-solanida-1,4,9-trien-3-one (SC-12), 12-hydroxy-(25S)-22N-spirosol-4-en-3-one (SC-13), 22,23-epoxy-solanida-4-en-3-one (SC-14) and 22,23-epoxy-solanida-4-en-3-one (SC-15), (E)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4,9-trien-3-imine (SC-16), (E)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-imine (SC-17), (Z)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4,9-trien-3-imine (SC-18) and (Z)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-imine (SC-19). Except the alkaloids SC-9 and SC-10, which are being reported as natural products for the first time, all others are unknowns. The structure of all isolated compounds were elucidated by spectral) methods (IR, HR-ESI-MS, 1H and 13C NMR 1D and 2D and by comparison with literature data. The fragmentation pattern of the alkaloids was established based on MS/MS experiments and the data were used for the dereplication these compounds present in the crude ethanol extract from leaves of S. campaniforme. The cytotoxic potencial of the main alkaloids (SC-5 and SC-7) was evaluated against the human tumor cell lines (HCT8, MDA-MB-435, HL6 and SF295), however, no one showed any activity. The antiophidic properties of the same compounds were also investigated against Bothrops pauloensis venom, showing anti-myotoxic, anti-hemorrhagic and anti-necrosis effects. In addition, was evaluated the effect of tyramine on the metabolism of animals with dyslipidemia and obesity, which exhibited therapeutic effect associated to reduction of the cholesterol levels / This work describes the phytochemical investigation of Solanum campaniforme (Solanaceae), aiming the isolation and structural elucidation of new bioactive chemical constituents, as well as the study of their fragmentation pattern under electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) of the isolated alkaloids. The chemical investigation performed with the ethanol extract from leaves of this species by chromatographic methods, including HPLC (reverse phase), resulted in the isolation and identification of nineteen compounds, being four of them phenol derivatives: caffeic acid (SC-1), caffeic acid ethyl ester (SC-2), kaempferol-3-rutinoside (SC-3) and tyramine (SC-4), and fifteen steroidal alkaloids: 22,23-epoxy-solanida-1,4,9-trien-3-one (SC-5), 22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-one, (SC-6), 3,9-dihydroxy-22,23-epoxy-9(10)-seco-solanida-1,3,5(10)-triene (SC-7), 12-acetoxyl-(25S)-22N-spirosol-4-en-3-one (SC-8), (25S)-22N-spirosol-1,4-dien-3-one (SC-9), (25S)-22-N-spirosol-4-en-3-one (SC-10), 22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-one (SC-11), 22,23-epoxy-10-epi-solanida-1,4,9-trien-3-one (SC-12), 12-hydroxy-(25S)-22N-spirosol-4-en-3-one (SC-13), 22,23-epoxy-solanida-4-en-3-one (SC-14) and 22,23-epoxy-solanida-4-en-3-one (SC-15), (E)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4,9-trien-3-imine (SC-16), (E)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-imine (SC-17), (Z)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4,9-trien-3-imine (SC-18) and (Z)-N-[8â(4-hydroxyphenyl)ethyl]-22,23-epoxy-solanida-1,4-dien-3-imine (SC-19). Except the alkaloids SC-9 and SC-10, which are being reported as natural products for the first time, all others are unknowns. The structure of all isolated compounds were elucidated by spectral) methods (IR, HR-ESI-MS, 1H and 13C NMR 1D and 2D and by comparison with literature data. The fragmentation pattern of the alkaloids was established based on MS/MS experiments and the data were used for the dereplication these compounds present in the crude ethanol extract from leaves of S. campaniforme. The cytotoxic potencial of the main alkaloids (SC-5 and SC-7) was evaluated against the human tumor cell lines (HCT8, MDA-MB-435, HL6 and SF295), however, no one showed any activity. The antiophidic properties of the same compounds were also investigated against Bothrops pauloensis venom, showing anti-myotoxic, anti-hemorrhagic and anti-necrosis effects. In addition, was evaluated the effect of tyramine on the metabolism of animals with dyslipidemia and obesity, which exhibited therapeutic effect associated to reduction of the cholesterol levels