Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-03-13T15:20:26Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Izabela_Rangel_Lima.pdf: 1174915 bytes, checksum: c599a74335603a70bc195a00a2a7c731 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Izabela_Rangel_Lima.pdf: 1174915 bytes, checksum: c599a74335603a70bc195a00a2a7c731 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES UFPE / Indigofera suffruticosa Mill (Fabaceae) ocorre em abundância no nordeste brasileiro e tem intenso uso popular no tratamento de infecções, inflamações e outros processos. Os estudos farmacológicos do extrato aquoso de folhas têm demonstrado atividades biológicas tais como: antiinflamatória, embriotóxica, antimicrobiana e antitumoral. Este trabalho foi desenvolvido para isolar a fração alcalóide de folhas de I. suffruticosa, investigar sua atividade antitumoral e estudar a histologia e a morfometria do tecido hepático de camundongos portadores de sarcoma 180. O material da pesquisa foi obtido a partir de um screening fitoquímico de folhas onde foram realizados os protocolos extrativos para identificar e isolar a fração alcalóide presente na espécie. Camundongos albinos suíços (Mus musculus), machos, adulto-jovens, 40 dias de idade, pesando em média 25 a 35g foram divididos em três grupos de 6 animais: G1 (portadores de sarcoma/salina), G2 (sem sarcoma/salina) e G3 (sarcoma/fração alcalóide). Nos grupos G1 e G3 foram injetados na área axilar direita uma suspensão de aproximadamente 0,3 ml de células do Sarcoma 180 (3x106 células/ml). Após 48 horas da implantação tumoral, a quimioterapia foi iniciada no grupo G3 com a fração alcalóide (25mg/kg.ip), G1 e G2 com salina (1.4ml/Kg). Após sete dias de tratamento os animais foram eutanaziados por deslocamento cervical, os tumores foram analisados e fragmentos de fígado foram utilizados para o estudo histológico e morfométrico. A fração alcalóide isolada, obtida do extrato aquoso de folhas de I. suffruticosa não reduziu significativamente o volume médio de Sarcoma 180 no grupo G3 comparado com G1. De acordo com o estudo histopatológico e morfométrico o tecido hepático de G2 e G3 apresentou arquitetura normal, quando comparado com G1 que mostrou congestão hepática. Esta pesquisa demonstrou que a fração alcalóide isolada de folhas de I. suffruticosa não inibiu o crescimento tumoral, por outro lado o estudo histológico, apresentou a arquitetura preservada do tecido hepático sugerindo um meio alternativo hepatoprotetor.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3110_1.pdf: 1163998 bytes, checksum: 6732b57654145248f4defb96522c579a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo objetivou desenvolver, caracterizar e avaliar a atividade antitumoral de nanocápsulas convencionais e furtivas contendo ácido úsnico, visando uma futura aplicação terapêutica. As nanocápsulas de PLGA e PLGA-PEG contendo ácido úsnico foram obtidas pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado e caracterizadas através da eficiência de encapsulação, pH, tamanho de partículas, índice de polidispersão, carga de superfície e estudo de liberação in vitro. A atividade antitumoral in vivo do ácido úsnico foi avaliada em camundongos machos Swiss, onde os animais receberam doses diárias de 15 mg / kg / dia de ácido úsnico encapsulado em nanocápsulas convencionais (NC-PLGA/AU) e furtivas (NCPLGA- PEG/AU) ou ácido úsnico (AU) em suspensão por 7 dias. O pH, o tamanho e o índice de polidispersão das partículas não tiveram variações significativas durante 60 dias para as nanocápsulas em suspensão armazenadas a 4ºC, comprovando a boa estabilidade dos nanocarreadores obtidos. Além disso, as nanocápsulas convencionais e furtivas apresentaram altas eficiências de encapsulação, próximas a 100% e as cargas de superfície variaram de -18,96 a -29,42. Os perfis de liberação do ácido úsnico a partir das nanocápsulas de PLGA e PLGA-PEG apresentaram um efeito burst abaixo de 15% e um perfil de liberação gradual e controlado até 12h, atingindo um máximo de fármaco liberado em torno de 60% do seu conteúdo inicial em 48h. Nos estudos in vivo a atividade antitumoral do ácido úsnico livre foi comprovada, porém, quando nanoencapsulado o ácido úsnico promoveu uma inibição da massa tumoral acima de 50%, quando comparado ao grupo controle, e de aproximadamente 26% quando comparado com o fármaco livre. Em suma, foram obtidas nanocápsulas furtivas estáveis e com boa atividade biológica indicando que estes nanocarreadores são uma alternativa para a utilização do ácido úsnico na terapia anticancerígena

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo93_1.pdf: 722430 bytes, checksum: e2b61e444fd61350d6a1eb8cd0ccdcc8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Apesar das investigações e estudos científicos sobre plantas com o uso medicinal, não se conhece muito sobre os princípios ativos e as extraordinárias qualidades curativas de muitas espécies vegetais. A Turnera ulmifolia L. é uma planta encontrada em diversas partes do mundo, com aplicação na medicina popular. No Brasil, conhecida como chanana ou albina esta planta é popularmente usada no combate a úlceras gástricas e duodenais. Este trabalho teve como objetivo o estudo da atividade antiinflamatória, antitumoral e citotóxica de extratos de Turnera ulmifolia L. Foram realizados testes fitoquímicos para as classes de compostos: flavonóides, cumarinas, alcalóides, saponinas e taninos. A atividade antiinflamatória foi avaliada pelo teste de peritonite induzida por carragenina, para o estudo da atividade antitumoral utilizou-se células de tumor carcinoma de Ehrlich as quais foram retiradas de animais doadores e implantadas na região axilar de camundongos albinos swis mus musculus,após 24 horas da implantação se deu início ao tratamento quimioterápico que teve duração de sete dias consecutivos, em seguida os animais foram sacrificados, retirados tumor, fígado, rim e baço para análise histopatológica e na atividade citotóxica foram utilizadas células de linhagem K562 (Eritroleucemia), Hep-2 (carcinoma epidermoide de laringe) e NCl H292 (carcinoma de pulmão) frente a diferentes concentrações dos extratos da planta. Através da análise dos resultados o teste de peritonite demonstrou que o extrato aquoso não apresenta significativa atividade antiinflamatória. Os cálculos de porcentagem de inibição tumoral, mostraram que a Turnera ulmifolia L. nas concentrações de 3 e 10mg/kg do extrato aquoso apresentam respectivamente, 67,16% e 52,97%. Para os extratos orgânicos a atividade inibitória foi de 68,59% para n-hexano e 31,7% para o Acetato de etila sobre o crescimento tumoral quando comparada ao grupo controle com p<0,05 de significância estatística. Os extratos aquoso, n-hexano, acetato de etila e n-butanol não promoveram citotoxicidade nas linhagens celulares testadas

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os hidrobenzofuranÃides obtidos da Tapirira guianensis sÃo derivados alquilados da ciclohexanona, que parecem ser possÃveis precursores dos lipÃdios fenÃlicos. O presente trabalho avaliou, inicialmente, a atividade dos nove hidribenzofuranÃides em linhagens de cÃlulas, onde a amostra SJC-8 mostrou a citotoxicidade mais elevada. Posteriormente, foram avaliados os possÃveis mecanismos pelo qual esta amostra desenvolve seu efeito citotÃxico. No teste de MTT em painel de linhagens adicionais a SJC-8 apresentou valores de CI50 variando de 0.3 a 6.2Âg/mL. No teste de toxicidade aguda em nÃuplios de artÃmia e de atividade hemolÃtica em eritrÃcitos de camundongos, a SJC-8 nÃo desenvolveu toxicidade e hemÃlise, respectivamente. O mecanismo de aÃÃo da SJC-8 foi, entÃo, estudado. A viabilidade das cÃlulas HL-60 foi afetada pela SJC-8 apÃs um perÃodo de exposiÃÃo de 24h, quando analisada por exclusÃo por azul de tripan. Nas menores concentraÃÃes nÃo houve aumento do nÃmero de cÃlulas nÃo-viÃveis, mas apenas uma reduÃÃo da proliferaÃÃo celular (aÃÃo citostÃtica), enquanto que nas duas maiores concentraÃÃes, houve reduÃÃo do nÃmero de cÃlulas viÃveis e aumento do nÃmero de cÃlulas nÃo-viÃveis (efeito citotÃxico), o que corrobora com os achados da analise morfolÃgica, onde observou-se um aumento do nÃmero de cÃlulas mortas. A atividade citotÃxica da SJC-8 està relacionada com a inibiÃÃo da sÃntese de DNA, como revelado pela incorporaÃÃo do BrdU, alÃm de poder estar envolvida com a inibiÃÃo da Topoisomerase 1. Submetida ao estudo de toxicogenÃtica pelo teste do cometa em HL-60, a SJC-8 elevou os Ãndices e freqÃÃncias de dano de maneira concentraÃÃo-dependente, sendo observados tipos de danos maiores nas concentraÃÃes mais elevadas. A administraÃÃo de SJC-8 (25 ou 50mg/kg/dia) inibiu o desenvolvimento de tumor sÃlido em camundongos transplantados com Sarcoma 180 em 12,3 e 59,8% respectivamente. A atividade antitumoral da SJC-8 està relacionada com a inibiÃÃo da proliferaÃÃo do tumor. A anÃlise histopatolÃgica mostrou de forma reversÃvel, que o fÃgado à o alvo de toxicidade da droga. De fato, a atividade antitumoral da SJC-8 esta relacionada com um efeito antiproliferativo direto nas cÃlulas tumorais, sendo possÃvel assim que esta amostra possa atuar como possÃvel protÃtipo de novos agentes antitumorais. / The hydrobenzofuranoids obtained from Tapirira guianensis are alkylated derivates of cyclo-hexanone, which appear to be precursors of phenolic lipids. The present study initially examined the activity of nine hydrobenzofuranoids in cell lines, where the compound SJC-8 showed the highest cytotoxicity. In later studies, the cytotoxicity of this sample was investigated with regard to the possible mechanism of action. In the MTT assay, SJC-8 showed IC50 values of 0.3 to 6.2Âg/mL in a panel of cell lines. In acute toxicity assays in artemia nauplii and hemolytic activity in mouse erythrocytes, SJC-8 did not demonstrate any toxicity or hemolysis, respectively. The mechanism of action of SJC-8 was then studied. SJC-8 affected cell viability in HL-60 after an exposure period of 24h, when determined by trypan blue exclusion. At lower concentrations, there was no increase in the number of non-viable cells but only a reduction in cell proliferation (cytostatic effect). However, at the two highest concentrations, there was a decrease in the number of viable cells and increase in number of non-viable cells (cytotoxic effect), which corroborate the findings of morphologic analysis showing an increase in the number of dead cells. The cytotoxicity of SJC-8 involves the inhibition of DNA synthesis, as revealed by inhibition of BrdU incorporation into DNA and of topoisomerase 1 activity. SJC-8 was tested for genotoxicity using the comet assay in HL-60 cells, and was found to cause an increase in the frequency of DNA damage in a concentration-dependent manner, where more severe damage was seen at higher concentrations of SJC-8. The administration of SJC-8 (25 or 50 mg/kg/day) inhibited solid tumor growth in mice transplanted with sarcoma 180, by 12.3 and 59.8%, respectively. The antitumor activity of SJC-8 is attributed to inhibition of tumor cell proliferation. Histopathologic analysis showed in a reversible manner that the liver is the target of drug toxicity. In conclusion, SJC-8 has antitumor activity where it has a direct antiproliferative effect on tumor cells, and may therefore serve as a prototype for new antitumor agents.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-05T13:19:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Anne Cecília da Cruz.pdf: 1272280 bytes, checksum: 6236134bc2affa7b3416cf930afc5838 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T13:19:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Anne Cecília da Cruz.pdf: 1272280 bytes, checksum: 6236134bc2affa7b3416cf930afc5838 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-08 / A maioria dos fármacos utilizados na quimioterapia do câncer não possui especificidade para as células tumorais, e em geral, são tóxicos aos tecidos de rápida proliferação. Esse é o motivo, pelo qual muitos pacientes submetidos à quimioterapia sofrem com alopecia, estomatite, necrose da mucosa do cólon, anorexia, náuseas e vômitos. Dessa forma, uma preocupação constante dos pesquisadores é encontrar um tratamento eficaz, com o mínimo de efeitos colaterais para curar o câncer. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo a avaliação da atividade anticâncer in vitro e in vivo da nitrofurantoína, um antibiótico, derivado do nitrofurano, comumente prescrito para prevenir e tratar infecções do trato urinário. Para isso, foram realizadas as atividades citotóxicas em células tumorais HT-29, MCF-7, HL-60 e NCI-H292 (através do método do brometo de 3-(4,5-dimetiltizol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio), viabilidade celular através do azul tripan e análise morfológica. A determinação da atividade antitumoral in vivo foi realizada em camundongos albinos suíços (Mus musculus) frente ao Carcinoma de Ehrlich. A nitrofurantoína apresentou efeitos citotóxicos nas linhagens testadas, com CI50 de 72 horas variando de 0,8 a 7,2 μg/mL frente às células HT-29, MCF-7 e NCIH292; e CI50 de 24 horas frente a células tumorais HL-60 no valor de 5,0 μg/mL. No ensaio de viabilidade por azul de tripan a nitrofurantoína reduziu significativamente o número de células viáveis nas concentrações testadas. A redução foi de 62,1% e 52,7% nas concentrações de 10 e 5 μg/mL, respectivamente. A análise morfológica das alterações celulares avaliada pelo método de coloração Hematoxilina/Eosina revelou características típicas de apoptose (membrana íntegra, condensação da cromatina e desintegração do material nuclear) e necrose (picnose e desintegração citoplasmática). A nitrofurantoína não foi capaz de causar hemólise em eritrócitos de camundongos. Em todas as doses testadas a nitrofurantoína inibiu o crescimento tumoral in vivo de forma significativa em relação ao controle. O tratamento com a nitrofurantoína não provocou alteração sobre a maioria a parâmetros hematológicos estudados em camundongos adultos. Os animais tratados com as diferentes doses não apresentaram alteração no índice do baço, mas houve redução significativa nos índices do fígado e do rim em relação ao grupo controle negativo, porém essa redução foi menor que a provocada pela doxorrubicina, fármaco utilizado na clínica para tratar o câncer. Com base nesses resultados foi possível concluir que a nitrofurantoína possuí potencial citotóxico frente às linhagens de células testadas e significante redução do crescimento do carcinoma de Ehrlich in vivo, podendo representar um protótipo para a síntese de análogos contra o câncer.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-05T18:59:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Izabela_Rangel_Lima.pdf: 1174915 bytes, checksum: c599a74335603a70bc195a00a2a7c731 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T18:59:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Izabela_Rangel_Lima.pdf: 1174915 bytes, checksum: c599a74335603a70bc195a00a2a7c731 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES, Universidade Federal de Pernambuco / Indigofera suffruticosa Mill (Fabaceae) ocorre em abundância no nordeste brasileiro e tem intenso uso popular no tratamento de infecções, inflamações e outros processos. Os estudos farmacológicos do extrato aquoso de folhas têm demonstrado atividades biológicas tais como: antiinflamatória, embriotóxica, antimicrobiana e antitumoral. Este trabalho foi desenvolvido para isolar a fração alcalóide de folhas de I. suffruticosa, investigar sua atividade antitumoral e estudar a histologia e a morfometria do tecido hepático de camundongos portadores de sarcoma 180. O material da pesquisa foi obtido a partir de um screening fitoquímico de folhas onde foram realizados os protocolos extrativos para identificar e isolar a fração alcalóide presente na espécie. Camundongos albinos suíços (Mus musculus), machos, adulto-jovens, 40 dias de idade, pesando em média 25 a 35g foram divididos em três grupos de 6 animais: G1 (portadores de sarcoma/salina), G2 (sem sarcoma/salina) e G3 (sarcoma/fração alcalóide). Nos grupos G1 e G3 foram injetados na área axilar direita uma suspensão de aproximadamente 0,3 ml de células do Sarcoma 180 (3x106 células/ml). Após 48 horas da implantação tumoral, a quimioterapia foi iniciada no grupo G3 com a fração alcalóide (25mg/kg.ip), G1 e G2 com salina (1.4ml/Kg). Após sete dias de tratamento os animais foram eutanaziados por deslocamento cervical, os tumores foram analisados e fragmentos de fígado foram utilizados para o estudo histológico e morfométrico. A fração alcalóide isolada, obtida do extrato aquoso de folhas de I. suffruticosa não reduziu significativamente o volume médio de Sarcoma 180 no grupo G3 comparado com G1. De acordo com o estudo histopatológico e morfométrico o tecido hepático de G2 e G3 apresentou arquitetura normal, quando comparado com G1 que mostrou congestão hepática. Esta pesquisa demonstrou que a fração alcalóide isolada de folhas de I. suffruticosa não inibiu o crescimento tumoral, por outro lado o estudo histológico, apresentou a arquitetura preservada do tecido hepático sugerindo um meio alternativo hepatoprotetor.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-09-21T20:49:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Evandro Valentim da Silva.pdf: 4870288 bytes, checksum: df2b2f27d9c6c0e2bbf13e414f63b156 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-24T22:27:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Evandro Valentim da Silva.pdf: 4870288 bytes, checksum: df2b2f27d9c6c0e2bbf13e414f63b156 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T22:27:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Evandro Valentim da Silva.pdf: 4870288 bytes, checksum: df2b2f27d9c6c0e2bbf13e414f63b156 (MD5) Previous issue date: 2016-09-13 / CNPq / Dentre muitos mecanismos, a estimulação da angiogênese leva ao aumento da secreção de fatores vaso-indutores e diminuição dos inibidores. O presente estudo avaliou as interferências dos extratos hidroalcóolico (EHA - 50 μg/mL) e metanólico (EM - 50 μg/mL) de Caulerpa taxifolia no metabolismo energético e na Angiogênese de embriões de Gallus gallus domésticos L. Ovos vermelhos da raça Rhode Island Red de quatro lotes, foram incubados a 37º C, com viragem automática, para o estudo do metabolismo energético e da angiogênese. Os grupos foram distribuídose divididos em grupos controle, tratados EHA (50 μg/mL) e ME (50 μg/mL), e controle enriquecidos com ω-3, com e sem tumor. No estágio de 288 horas, o desenvolvimento foi interrompido. Os vasos foram quantificados e caracterizados morfologicamente e os embriões fotografados, fixados e processados. Os resultados do metabolismo energético indicaram que não houve diferença significativa entre grupos controle e tratado normal, contudo os animais com tumores induzidos com EHA e ME e os enriquecidos com ω-3 apresentaram resposta significativa quando comparados ao controle (p≤ 0,05). Foi observado que as propriedades físicas e a integridade estrutural da casca dos animais controle tumorado apresentaram anomalias de formação: casca rugosa, áspera e mole. Os parâmetros morfométricos não apresentaram significância entre os grupos (p≤ 0,05). Em relação a vasculogênese e angiogênese houve uma redução significativa entre grupos normais e tumorados. Os vasos apresentaram uma discreta redução do calibre quando comparado ao grupo controle (p≤ 0,05). O aspecto microscópico da membrana amniótica dos organismos tratados com o EHA e ME, dos grupos normal e tumorado mantiveram a morfologia preservada ao longo do tratamento. O tecido cardiovascular de embriões controle com tumor apresentou pontos hemorrágicos e uma congestão no lúmen do vaso, talvez em função da presença da malignidade das células. A microscopia da medula encefálica se manteve preservada. Nos embriões controle tumorados ela se apresentou pouco conservada, com vasos congestos na região do manto, possivelmente por interferência da ação do tumor no tecido analisado. Estes biocompostos apresentaram ainda efeito antivasculogênico e antiangiogênico, sem comprometer a anatomia macroscópica e microscópica dos organismos tratados durante o desenvolvimento embrionário. Diante do presente exposto, conclui-se que os compostos presentes nos extratos de Caulerpa taxifolia pode ser considerada um potencial agente antitumoral de origem marinha, que talvez atue nos mecanismos intrínsecos relacionados com a matriz extracelular, estabilizando e remodelando a estrutura vascular e a capacidade de indução da neovasculogênese. / The neovascularization is an important mechanism in tumor development, is responsible for nutritional support to cancer cells proliferating and establishing favorable conditions for metastatic spread. Among many mechanisms, stimulation of angiogenesis leads to increased secretion of vaso-inducing factors and decreased inhibitors. This study evaluated the interference of hydroalcoholic extracts (EHA - 50 mg / mL) and methanol (MS - 50 ug / ml) of Caulerpa taxifolia in energy metabolism and angiogenesis of Gallus gallus domesticus embryos L. Red breed eggs Rhode Island Red four batches were incubated at 37 C with automatic turning, for study of energy metabolism and angiogenesis. The groups were divided in control groups treated EHA (50 g / mL) and ME (50 ug / ml) and control enriched with ω-3, with and without tumor. In stage age of 288 hours, the development was stopped. The vessels were quantified and characterized morphologically and photographed embryos, fixed and processed. The results of energy metabolism showed no significant difference between control group and the normal treaty, yet tumorados animals treated with EHA and ME and enriched with ω-3 showed significant response compared to control (p ≤ 0.05). It was observed that the physical properties and structural integrity of the shell tumorado control animals showed formation of defects: rough skin, rough and soft. The morphometric parameters showed no significant difference between the groups (p ≤ 0.05). For vasculogenesis and angiogenesis was significantly reduced between normal groups and tumorados. The vessel had a slight reduction in size compared with the control group (p ≤ 0.05). The microscopic aspect of amniotic membrane bodies treated with EHA and ME, the tumorado groups remained normal and preserved morphology throughout the treatment. The cardiovascular tissue with tumor control embryos showed bleeding points and congestion in the vessel lumen, perhaps due to the presence of malignant cells. The brain marrow microscopy remained preserved. However, in tumorados control embryos she had just saved with congested vessels in the mantle region, possibly by tumor action of interference in the analyzed tissue. These biocompounds still had antivasculogênico and antiangiogenic effect without compromising the macroscopic and microscopic anatomy of organisms treated during embryonic development. Given the above this, it is concluded that the compounds present solution in taxifolia Caulerpa extracts can be considered as a potential antitumor agent of marine origin, which may act on the intrinsic mechanisms related to the extracellular matrix, stabilizing and reshaping the vascular structure and inducibility of neovasculogenesis.

La Fracción D es un proteoglucano obtenido del hongo comestible Grifola frondosa (Maitake). Existe evidencia de que la Fracción D presenta efectos anticancerígenos en distintas etapas de la progresión tumoral. Sin embargo, estos efectos han sido poco explorados en el caso del cáncer de mama. En este contexto, nos proponemos investigar los posibles efectos terapéuticos de la Fracción D en este tipo de cáncer. Los efectos antineoplásicos de la Fracción D han sido atribuidos tradicionalmente a su capacidad inmunoestimuladora. Sin embargo, recientemente se comenzó a observar que dicha fracción podría actuar de manera independiente del sistema inmune sobre células derivadas de ciertos tipos tumorales. Por esta razón, también nos proponemos identificar los mecanismos celulares y moleculares por los cuales la Fracción D ejercería un efecto antitumoral independiente del sistema inmune en células de cáncer de mama. In cultivo, demostramos que la Fracción D es capaz de actuar sobre células tumorales mamarias, modulando su perfil de expresión génica y afectando diferentes procesos celulares cuya desregulación está implicada en el desarrollo y progresión del cáncer. Particularmente, demostramos que la Fracción D disminuye la viabilidad de células tumorales mamarias hormono independientes (LM3, murinas) y triple negativas (MDA-MB-231, humanas), sin afectar la progresión del ciclo celular e induciendo apoptosis en la línea LM3. Demostramos también que la Fracción D disminuye la capacidad migratoria e invasiva de ambas líneas. En relación a esto, observamos que el proteoglucano aumenta la adhesión de las células tumorales al plástico y la expresión de E-cadherina en ellas. La Fracción D disminuyó la actividad de MMP-2 y MMP-9 secretada por las células tumorales. En relación con la motilidad celular, el proteoglucano afectó la organización del citoesqueleto de actina, disminuyendo el número de lamellipodios/filopodios en las LM3, y la presencia de fibras de estrés en las MDA-MB-231. Por otro lado, la Fracción D presentó un efecto diferencial sobre la viabilidad de células mamarias no malignas (HC11, murinas) afectándolas en menor medida que a su contraparte tumoral. La migración de estas células resultó disminuida por el proteoglucano, mientras la capacidad invasiva no reportó cambios. In vivo, en un modelo murino de trasplante singenéico de células LM3 demostramos que el tratamiento con la Fracción D disminuye la carga tumoral y el número de metástasis pulmonares. La reducción del tamaño tumoral fue acompañada de un incremento de la expresión de Bax, sin registrar cambios el índice mitótico y la expresión de Ki-67. La Fracción D exhibió también un efecto protector en ratones BALB/c, retrasando y/o previniendo el desarrollo tumoral cuando fue aplicado en forma previa a la implantación de células LM3. En el caso de las células MDA-MB-231, los efectos antitumorales del proteoglucano observados in cultivo no pudieron ser fehacientemente corroborados in vivo. En conjunto, los resultados de esta tesis apoyan el potencial empleo de la Fracción D de Maitake como agente terapéutico en cáncer de mama y dan muestra de su efecto sobre procesos celulares independientemente del sistema inmunológico por medio de los cuales el proteoglucano también estaría ejerciendo su efecto antitumoral. / D-Fraction is a proteoglucan extracted from the edible mushroom Grifola frondosa (Maitake). There is evidence that D-Fraction has antitumoral effects over different stages of tumor progression. However, these effects have been poorly investigated in breast cancer. In this context, we propose to investigate the potential therapeutic effects of D-Fraction in this type of cancer. The antitumoral effect of D-Fraction has long been traditionally attributed to their immunostimulatory capacity. However, in recent years evidence emerged showing that this proteoglucan could act, independently of the immune system, on certain tumor cells types. For this reason, we propose to identify the cellular and molecular mechanisms by which D-Fraction could exert an immune system-independent antitumoral effect in breast cancer. In culture, we showed that D-Fraction is capable of acting on breast tumor cells by modulating their gene expression profile and by affecting different cellular processes whose dysregulation is implicated in the development and progression of cancer. In particular, we demonstrated that D-Fraction decreases the viability of murine hormone-independent LM3 and human triple-negative MDA-MB-231 breast cancer cells, without affecting cell cycle progression but rather by inducing apoptosis in LM3 cell line. We also demonstrated that D-Fraction decreases the migratory and invasive capability of both tumor lines. In relation whit this, we observed that the proteoglucan increases breast cancer cell plastic adhesion and also the expression of E-cadherin in them. D-Fraction decreases the activity of MMP-2 and MMP-9 secreted by tumor cells. In association with cell motility, the proteoglucan affected the actin cytoskeleton organization by decreasing the number of lamellipodia/filopodia in LM3 cells, and the presence of stress fibers in MDA-MB-231 cells. On the other hand, D-Fraction showed a differential effect on the viability of non-malignant breast cells HC11 (murine cells) affecting it to a lesser extent than their tumor counterparts. The HC11 cell migration was decreased by the proteoglucan’s treatment while their invasive capability was unchanged. In vivo, in a murine model of syngeneic transplantation with LM3 cells, we demonstrated that D-Fraction treatment reduces tumor burden and the number of lung metastases. The reduction of tumor size was accompanied by an increase in the expression of Bax and not significant changes in the mitotic index and expression of Ki-67 were observed. D-Fraction also showed a protective effect in BALB/c mice by delaying and/or preventing tumor growth when it was applied before the implantation of LM3 cells. The antitumoral effects of the proteoglucan on MDA-MB-231 cells observed in culture could not be conclusively corroborated in vivo. Together, the results obtained in this thesis support the potential use of Maitake D-Fraction as a therapeutic agent in breast cancer and they demonstrate the effect of D-Fraction on cellular processes, independently of the immune system action, by means of which the proteoglucan would also exert its antitumor effect.

Les analogues nucléosidiques ont prouvé leur efficacité thérapeutique et sont désormais couramment utilisés en chimiothérapies antivirale et anticancéreuse. Depuis, il a récemment été démontré que les analogues de configuration non naturelle L pouvaient présenter des activités biologiques remarquables au même titre que ceux de configuration naturelle D. La recherche de nouveaux analogues nucléosidiques de configuration L apparaît ainsi prometteuse. Dans notre travail, nous nous sommes plus particulièrement intéressés aux dérivés de la L-2'-désoxyuridine substitués en position 5 de la nucléobase. La synthèse de ces composés a été réalisée à partir de la L-5-iodo-2'-désoxyuridine, un intermédiaire clé que nous avons préalablement obtenu à partir du L-ribose. Nous avons ensuite fonctionnalisé ce composé en position 5 via l'utilisation de réactions organopalladées. Les composés obtenus ont été évalués sur divers virus à ADN et à ARN, ainsi que sur des lignées cellulaires tumorales exprimant une enzyme modifiée de la désoxycytidine kinase, enzyme impliquée dans la métabolisation de nombreux nucléosides. Nous avons ensuite réalisé la synthèse des dérivés fluorés en position 2'-arabino. Dans ce cas, les analogues nucléosidiques ont été obtenus dans les deux configurations D et L afin de comparer leurs effets biologiques et de confirmer l'intérêt biologique de la configuration L. / Nucleosidic analogues have proven their therapeutic efficiency and are commonly used in antiviral and cancer chemotherapies. Recently, it has been shown that nucleosidic analogues with a L non-natural configuration could present notable biological activities as well as their D counterparts. Therefore, discovery of new nucleosidic analogues with L configuration appears promising. In our study, we were interested in L-2'-deoxyuridine derivatives including modification on the position 5 of the nucleobase. The synthesis of these compounds was performed from the L-5-iodo-2'-deoxyuridine, a key intermediate which was synthesized from L-ribose. Then, we functionalized the 5 position of this intermediate using palladium-catalyzed cross-couplings. The desired compounds were tested on various DNA and RNA viruses, and on tumor cell lines expressing a modified deoxycytidine kinase, an enzyme responsible for the metabolism of a number of nucleosides. Finally, we synthesized nucleoside derivatives containing a fluorine atom on the 2'-arabino position. In this case, both compounds with D and L configuration were obtained, in order to compare their biological effects and to confirm the biological interest of L configuration.

O filo Cyanobacteria constitui um grupo filogeneticamente coerente, embora, apresente grande diversidade morfológica, sendo sua sistemática constantemente revisada. Esses micro-organismos são, ainda, alvos de estudos biotecnológicos em razão da produção de toxinas e na busca por substâncias de interesse farmacológico. Dentre as linhagens analisadas neste estudo, sete sequências do gene rRNA 16S foram geradas e avaliadas com sequências previamente obtidas. Ao menos dois grupos podem representar novos gêneros de cianobactérias, sendo que um grupo demonstra ser endêmico de manguezais brasileiros. Os genes de inibidores de proteases, aeuruginosina, cianopeptolina e microviridina, foram detectados e a produção de aeruginosina foi confirmada por LC-MS nos gêneros Cyanobium e Nostoc. Sequências de aminoácidos do precursor de microviridina indicaram a produção de três novas variantes em quinze linhagens de cianobactérias dos gêneros Cyanobium, Synechococcus, Cyanobacterium, Nodosilinea e Nostoc. O potencial genético para produção de cilindrospermopsina (cyrJ) foi confirmado em vinte e seis linhagens. Em cinco linhagens dos gêneros Cyanobium e Nostoc foram encontrados os genes mcyD, mcyE e mcyG, envolvidos na biossíntese de microcistina. A sequência McyG da linhagem Nostoc sp. CENA175 agrupou-se filogeneticamente com outras de linhagens produtoras de microcistina. Os genes sxtA e sxtI, envolvidos na biossíntese de saxitoxina, foram encontrados em nove linhagens dos gêneros Cyanobium, Oxynema, Leptolyngbya, Nodosilinea e Nostoc. A sequência de SxtI da linhagen Leptolyngbya sp. CENA134 apresentou similaridade >= 70 % com proteínas hipotéticas enquanto as de Nostoc sp. CENA159 e Nostoc sp. CENA160 apresentaram similaridade >= 82 % com O-carbamoiltransferase. Na análise filogenética, a sequência de SxtI da linhagem Nostoc sp. 160 agrupou-se com sequências de linhagens produtoras de saxitoxina. Nas análises químicas, a fração 3 do extrato da linhagem Oxynema sp. CENA135 revelou uma substância com características de ácidos graxos poli-insaturados e a fração 2 do extrato da linhagem Nostoc sp. CENA175 apresentou uma estrutura aromática ligada a uma cadeia alifática. Outros três extratos, obtidos das linhagens Cyanobium sp. CENA157, Nodosilinea sp. CENA183 e Nostoc sp. CENA184 mostraram-se promissores quanto à presença de substâncias nitrogenadas. Os ensaios de bioatividade revelaram que 48 % dos extratos metanólicos inibiram o crescimento de ao menos um isolado de bactéria e/ou levedura. Os extratos das linhagens Cyanobium sp. CENA142 e Cyanobacterium sp. CENA169 foram eficientes contra o crescimento de seis bactérias patogênicas. Nos ensaios de inibição de células tumorais, o extrato de DCM da linhagem Cyanobium sp. CENA154 (100 ?gomL-1) inibiu moderadamente culturas de células 3LL. Os extratos etanólicos de Oxynema sp. CENA135 (20 ?gomL-1) e Cyanobium sp. CENA154 (100 ?gomL-1) inibiram as células CT-26. Em ensaios conduzidos com linhagens de células de glioma (U251), câncer de mama (MCF-7) e câncer de pulmão (NCI-H460), o extrato de DCM da linhagem Cyanobium sp. CENA136 inibiu 50 % do crescimento das respectivas células tumorais nas concentrações 7,8; 27,1 e 14,0 ?gomL-1. Desta forma, além de filogeneticamente diversas, as cianobactérias isoladas de ambiente marinho do Estado de São Paulo constituem fonte promissora de inibidores de proteases, cianotoxinas e substância bioativas com ação antibacteriana, antifúngica e antitumoral. / The phylum Cyanobacteria is a phylogenetically coherent group, although presenting great diversity, and its systematic have been constantly reviewed. These microorganisms are also targets of biotechnological studies due to the production of toxins and the search for novel substances of pharmacological interest. Among the strains analyzed in this study, sequences of the 16S rRNA gene were generated for seven and, than, analyzed with sequences previously obtained. At least two groups may represent new cyanobacterial genera, while a group of Cyanobium proves to be endemic of Brazilian mangroves. Genes of the proteases inhibitors, aeuruginosin, cyanopeptolin and microviridin, were detected and the production of aeruginosin was confirmed by LC-MS for Nostoc and Cyanobium. The amino acid sequences of microviridin precursor indicated the production of three new variants in fifteen cyanobacterial strains of the genera Cyanobium, Synechococcus, Cyanobacterium, Nostoc and Nodosilinea. The genetic potential for production of cylindrospermopsin (cyrJ) was confirmed in twenty-six strains. In five strains of the genera Nostoc and Cyanobium the mcyD, mcyE and mcyG genes, which are involved in the microcystin biosynthesis, were found. The McyG sequence of Nostoc sp. CENA175 was phylogenetically grouped with sequences of microcystin-producing strains. The sxtA and sxtI genes, from saxitoxin biosynthesis, were found in nine strains of the genera Cyanobium, Oxynema, Leptolyngbya, Nodosilinea and Nostoc. The SxtI sequence of Leptolyngbya sp. CENA134 showed similarity >= 70 % with hypothetical proteins, while the sequences of Nostoc sp. CENA159 and Nostoc sp. CENA160 showed similarity >= 82% with O-carbamoyltransferase. In the phylogenetic analysis, the SxtI sequence of Nostoc sp. CENA160 grouped with sequences of strains that produce saxitoxin. In chemical analysis, the fraction 3 of the Oxynema sp. CENA135 extract revealed a substance with poly-unsaturated fatty acids characteristics and the fraction 2 of Nostoc sp. CENA175 extract indicated an aromatic structure, attached to an aliphatic chain. Other three extracts obtained from Cyanobium sp. CENA157, Nodosilinea sp. CENA183 and Nostoc sp. CENA184 were promising for the presence of nitrogenous substances. Bioactivity assays revealed that 48 % of the methanolic extracts inhibited the growth of at least one isolate of bacteria and/or yeast. The extracts of Cyanobium sp. CENA142 and Cyanobacterium sp. CENA169 were efficient against six pathogenic bacteria. In the inhibition assays of tumor cells, the DCM extract of Cyanobium sp. CENA154 (100 mgomL-1) moderately inhibited the growth of 3LL cells. Ethanol extracts of Oxynema sp. CENA135 (20 mgomL-1) and Cyanobium sp. CENA154 (100 mgomL-1) were able to inhibit cultures of CT- 26 cells. In tests conducted with glioma cell lines (U251), breast cancer (MCF-7) and lung cancer (NCI-H460), the DCM extract of Cyanobium sp. CENA136 caused 50 % of growth inhibition, respectively, when used at concentrations of 7.8, 27.1 and 14.0 mgomL-1. Thus, besides their phylogenetically diversity, the cyanobacteria strains from marine environment of the São Paulo state are a promising source of protease inhibitors, cyanotoxins and bioactive compounds with antibacterial, antifungal and antitumor activities.