A hipoacusia neurossensorial (HNS) é a anomalia sensorial congénita mais comum, afetando aproximadamente 1 em cada 500-1000 recém-nascidos. É não sindrómica em 70% dos indivíduos, apresentando hereditariedade autossómica dominante em 15-20% dos casos, autossómica recessiva em 80%, ou ainda ligada ao cromossoma X ou mitocondrial numa minoria dos casos. As mutações no gene GJB2 são responsáveis por mais de 50% dos casos de HNS não-sindrómica autossómica recessiva, em todo o mundo. Várias variantes deste gene têm sido descritas, sendo que a classificação quanto à patogenicidade é ainda controversa para muitas delas. O estudo da frequência das variantes nas populações (não doentes) é uma ferramenta importante para a classificação das mesmas. Por sua vez, o esclarecimento da patogenicidade das variantes assume cada vez mais um papel relevante e útil no aconselhamento genético familiar. Até à data, foi estimada a frequência na população portuguesa (não doente) de apenas duas mutações: Gly12Valfs*2 (35delG) e Met34Thr. Nesta dissertação, reportam-se as prevalências, numa amostra da população portuguesa, das variantes menos comuns do gene GJB2. Embora as mutações no gene GJB2 sejam a principal causa de HNS não-sindrómica em todo o mundo, esta é uma doença geneticamente heterogénea, sendo que foram identificadas mutações em mais de 100 genes até à data. Neste contexto, estudos moleculares baseados na análise de um único gene podem ser ineficientes e mais caros. A sequenciação de nova geração permite a análise simultânea de múltiplos genes associados a uma determinada doença ou fenótipo. Esta tecnologia é já amplamente utilizada na investigação. Mais recentemente, surgiu a sua utilização como meio de diagnóstico. Como tal, torna-se necessário objetivar a sua utilidade diagnóstica quando aplicada a um contexto clínico. Nesta dissertação, avaliamos o valor da análise de um painel de genes por sequenciação de nova geração no diagnóstico das causas genéticas da hipoacusia numa amostra da população portuguesa. / Sensorineural hearing (SNHL) loss is one the most common congenital sensory impairments, affecting approximately 1 in 500-1000 newborns. About 60% of early-onset hearing loss cases are due to genetic causes, of which 70% are non-syndromic. Nonsyndromic SNHL is inherited in an autosomal recessive trait in 80%, but it can also be transmitted in an autosomal dominant (15-20%), X-linked (2-3%) or mitochondrial (1%) patterns. Sequence variations at the GJB2 locus account for up to 50% of cases of nonsyndromic SNHL in several populations. Although the pathogenic role has been clearly established for several GJB2 sequence variations, it remains controversial for some less common variants. An important tool for the classification of their pathogenicity is the assessment of their frequency in a healthy population. It must be remembered that the elucidation of the pathogenic role of each variant is of paramount importance in a familial genetic counselling. To our knowledge, only two GJB2 variants have their prevalence in a Portuguese community sample estimated: Gly12Valfs*2 (35delG) and Met34Thr. In this dissertation, we report the prevalence of the less common variants of the GJB2 gene in a Portuguese sample. Despite the fact that GJB2 mutations are the main cause of nonsyndromic SNHL, more than 100 hearing loss related genes have been identified to date. The extreme genetic heterogeneity of SNHL makes genetic diagnosis based on gene-by-gene Sanger sequencing very laborious, expensive and time-consuming. As a technology of high throughput, next-generation sequencing (NGS), allows for the routine sequencing of a large number of genes per patient in a single, fast and cost-effective experiment. NGS technologies are already broadly used in the investigation setting. More recently, emerged its utilization as a diagnostic tool. Therefore, objectifying NGS diagnostic utility when applied to a clinical context is necessary. In this dissertation, we evaluate the diagnostic yield of NGS targeting a panel of several genes related to hearing loss in a Portuguese sample.

No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

Introdução: A glândula suprarrenal é um órgão endócrino composto por duas partes, a medula e o córtex. As neoplasias da medula da suprarrenal incluem os feocromocitomas e as neoplasias do córtex incluem os adenomas e os carcinomas. Mutações em genes que codificam as subunidades da enzima succinato desidrogenase (SDHx) foram identificadas em feocromocitomas esporádicos e familiares e, recentemente, numa pequena série de carcinomas da suprarrenal. Objetivo: Descrever a série de tumores do córtex e da medula da suprarrenal do nosso hospital e caraterizar o envolvimento das subunidades da succinato desidrogenase usando imunohistoquímica, seguida de análise de mutações. Métodos: Revisão retrospetiva dos registos clinico-patológicos de 62 pacientes com feocromocitoma, 106 com adenoma do córtex e 17 com carcinoma do córtex, diagnosticados no Centro Hospitalar de S. João. A imunohistoquímica da SDHB foi realizada em todos os casos. A imunohistoquímica da SDHA e a análise de mutações do gene da SDHB foram realizadas nos casos com marcação negativa da SDHB e nos casos com marcação positiva com áreas negativas. Resultados: Todos os tumores foram mais prevalentes na quinta década de vida e em mulheres. Nos adenomas verificou-se maior prevalência de casos assintomáticos. Os carcinomas foram sempre sintomáticos, maiores que os adenomas e apresentaram mais frequentemente necrose e hemorragia. Os feocromocitomas apresentaram a percentagem mais elevada de associação com síndromes de suscetibilidade genética. A imunohistoquímica da SDHB foi positiva em todos os adenomas e carcinomas. Dois feocromocitomas (3.2%) foram classificados como negativos. Todos os tumores selecionados para imunohistoquímica da SDHA tiveram marcação positiva. As mutações do gene que codifica a SDHB foram detetadas em três feocromocitomas (4.8%): dois casos negativos (c.487 T>C, p.S163P; c.136C>T, p.Arg46*) e um caso positivo com áreas negativas (c.418G>T, p.V140F). Discussão: Este é o primeiro trabalho a estudar feocromocitomas e adenomas e carcinomas do córtex da suprarrenal individualmente, descrevendo a população e avaliando alterações das subunidades da succinato desidrogenase. A nossa série foi demograficamente semelhante a outras descritas recentemente. Alterações da imunohistoquímica da SDHB levaram a análise de mutações em feocromocitomas: a mutação c.487T>C, p.S163P é considerada um polimorfismo raro, não sendo patogénica; as mutações c.136C>T, p.Arg46* e c.418G>T, p.V140F são consideradas patogénicas. / Introduction: The adrenal gland is an endocrine organ comprised of two parts, the adrenal medulla and the adrenal cortex. The neoplasms of the adrenal medulla include pheochromocytoma and neoplasms of the adrenal cortex include adrenocortical adenomas and carcinomas. Mutations in genes encoding for succinate dehydrogenase subunits (SDHx) have been identified in familial and sporadic pheochromocytoma and recently in a small series of adrenocortical carcinomas. Aim: To describe our hospital series of adrenal cortex and medulla tumours and characterize SDHx involvement using immunohistochemistry, followed by mutational analysis. Methods: Retrospective review of the clinico-pathological records of 62 pheochromocytoma, 106 cortical adenoma and 17 cortical carcinoma patients diagnosed in Centro Hospitalar de S. João. SDHB immunohistochemistry was performed in all cases. SDHA immunohistochemistry and SDHB mutation analysis were performed in those with negative SDHB staining and in those with a positive staining with negative areas. Results: All tumours were more prevalent in the fifth decade and in women. Asymptomatic cases frequency was higher in adenomas. Carcinomas were always symptomatic, larger than adenomas, and displayed more frequently necrosis and haemorrhage. Pheochromocytomas presented the highest frequency of associated genetic susceptibility syndromes. SDHB immunohistochemistry was positive in all adenomas and carcinomas. Two pheochromocytomas (3.2%) were classified as negative. All the tumours selected for SDHA immunohistochemistry had a positive staining. SDHB mutations were detected in three pheochromocytomas (4.8%): two negative cases (c.487 T>C, p.S163P; c.136C>T, p.Arg46*) and one positive case with negative areas (c.418G>T, p.V140F). Discussion: This is the first work to study pheochromocytomas, adrenocortical adenomas and carcinomas as individual entities, describing its population and evaluating SDHx alterations. Our series was demographically similar to others recently described. Alterations in SDHB immunohistochemistry triggered the mutational analysis in pheochromocytomas: the mutation c.487T>C, p.S163P is considered a rare polymorphism, non-pathogenic; the mutations c.136C>T, p.Arg46* and c.418G>T, p.V140F are pathogenic. We did not find any SDHB immunohistochemistry alterations triggering the genetic analysis in cortex tumours.

No description available.