Orientador: Rosicleire Veríssimo Silveira / Resumo: Frente ao cenário de mudanças climáticas estabelecidas e consequentemente às alterações da temperatura global, torna-se essencial estudar os seus efeitos na espermatogênese dos animais. Sendo assim, objetivou-se caracterizar morfológica e estereológicamente os tipos celulares encontrados na espermatogênese do lambari Astyanax altiparanae, além de determinar as fases testiculares e a verificar a duração da espermatogênese em diferentes temperaturas. Para tal, noventa e seis espécimes machos e adultos de A. altiparanae foram mantidos em sistema de circulação fechada sob temperatura da água estabilizada à 27ºC (temperatura de conforto) e 32ºC. Posteriormente, os espécimes receberam pulsos de BrdU (bromodeoxiuridina) na concentração de 100 mg/Kg/dia por 2 dias consecutivos, sendo as coletas realizadas diariamente por um período de 15 dias. Os testículos foram removidos, fixados, processados, incluídos em historesina e seccionados a 3µm, submetidos a colorações de Hematoxilina/Eosina e a técnicas de imunodetecção de BrdU. Os resultados obtidos a partir da temperatura de conforto da espécie permitiram classificar as espermatogônias de A. altiparanae em A-indiferenciadas*, A-indiferenciadas, A-diferenciadas e espermatogônias B. Assim como, caracterizar o ciclo reprodutivo da espécie em Regredido, Maturação Inicial, Maturação Intermediária, Maturação Final e em Regressão. A duração da espermatogênese foi determinada em aproximadamente seis dias para animais em 27°C e um dia para ani... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view of the scenario of the established climate changes and the consequent changes in the global temperature, it is essential to study its effects on animal spermatogenesis. Therefore, the objective of this work was to characterize, morphologically and stereologically, the cell types found in spermatogenesis of the yellow-tetra Astyanax altiparanae, to determin the testicular phases and to verify the spermatogenesis duration at different temperatures. For this purpose, ninety-six male and adult specimens of A. altiparanae were kept in a closed circulation system under water temperature stabilized at 27ºC (comfort temperature) and 32ºC. Subsequently, the specimens received pulses of BrdU (bromodeoxyuridine) at a concentration of 100 mg/kg/day for 2 consecutive days, and samples were collected daily during a period of 15 days. Their testes were removed, fixed, processed in historesin and sectioned in 3 µm, submitted to Hematoxylin/Eosin and to BrdU immunodetcion. Partial results of the comfort temperature allowed to classify the A. altiparanae spermatogonia in Aind*, Aind, Adif and B. Moreover, the reproductive cycle of the species was classified in Regressed, Initial Maturation, Mid Maturation, Final Maturation and Regression. It was possible to conclude that the spermatogenesis duration was determined in approximately six days for animals at 27°C and one day for animals at 32°C. In addition, the elevated temperature was also responsible for increased cell proliferation in ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 45.pdf: 1382627 bytes, checksum: 825bdcaf635b617488f01f38eaba1085 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes... / O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes. Além disso, o número absoluto das subpopulações de células CD4+, CD8+ e B B220+ foi maior para os grupos tratados com os sensibilizantes. Um aumento nas subpopulações CD4+CD25+ e CD4+CD69+ foi observado principalmente para substâncias sensibilizantes. Uma quantidade de TNF-α 4 vezes maior foi encontrada no soro dos animais tratados com os sensibilizantes, quando comparados aos grupos tratados com o controle. Nenhuma diferença foi vista nos estudos histopatológicos das orelhas dos animais. Com os resultados obtidos foi possível concluir que: a padronização do LLNA foi possível; o CD25 foi o mais promissor dentre os estudados na tentativa de avaliar uma alternativa ao desfecho de proliferação; a subpopulação de células CD8+ parece ter uma função prioritária na DCA; a citocina TNF-α poderia ser uma forte candidata para identificação de substâncias sensibilizantes e a histopatologia de animais não parecer uma boa alternativa.

Em busca de novas estratégias para o reparo de tecidos pulpares com células-tronco faz-se necessário compreender melhor o nicho em que elas se encontram. Uma forma é observar o mecanismo de ativação sobre estas células durante o reparo de tecidos pulpares após sofrer uma injúria. Assim, foi proposto estudar a localização e composição do nicho das célulastronco da polpa dental através da exposição pulpar induzida in vitro em dentes humanos e in vivo em dentes de ratos, através da incorporação de Bromodeoxiuridina (BrdU) e Iododeoxiuridina (IdU) e co-expressão com proteínas de células-tronco. Para o ensaio in vitro, 33 terceiros molares humanos com rizogênese incompleta foram divididos em 3 grupos: dentes com exposição pulpar induzida e mantidos em cultivo (GCE, grupo cultura exposição) (n=15); dentes sem injúria e mantidos em cultivo (GCC, grupo cultura controle) (n=15); dentes hígidos apenas (GH, grupo hígido) (n=3). Os grupos GCE e GCC, foram cultivados com BrdU (10 l/ml) por 24h e posteriormente analisados após 2, 5 e 14 dias. Para o ensaio in vivo, 12 ratos Wistar receberam IdU (1mg/ml) diluído na água por 30 dias. Após 45 dias foram divididos em 2 grupos: grupo in vivo com exposição pulpar (GIVE) (n=17 dentes) e grupo in vivo controle (GIVC) (n=16 dentes). No GIVE foi realizada a exposição pulpar no primeiro molar e em seguida restaurado com Coltosol. Após 2, 4 e 8 dias pós-operatórios as amostras foram coletadas e processadas para análise histológica e imuno-histoquímica. As proteínas CD90, CD146, PDGFr e BrdU foram analisadas em duas áreas: lesão e centro em molares humanos enquanto, as proteínas CD90, NG2 e IdU foram analisadas em uma área única, em molares de rato. As análises estatísticas foram efetuadas pelos testes de Mann- Whitney e Kruskal-Wallis, p 5%. Em dentes humanos, na área de lesão do grupo GCE, células BrdU positivas foram encontradas nos três períodos, sendo presentes em maior número células PDGFr positivas nos dias 2 e 5 e células CD90 positivas no 14º dia; no centro pulpar, no 2º dia pós injúria houve um número semelhante de células CD90, CD146 e PDGFr positivas, sendo encontradas em maior porcentagem no 5º dia células PDGFr e CD90 positivas e 14º dia células CD90 positivas. No grupo GCC na área equivalente à lesão, células CD90 (2 e 5 dias) e PDGFr (14 dias) positivas foram encontradas em maior percentual; no centro pulpar, o número de células positivas para CD90, CD146 e PDGFr foi semelhante em todos os períodos, sendo encontradas células BrdU positivas no 2º dia. Em molares de ratos, no GIVE houveram mais células NG2 positivas no 2º dia, IdU no 4º dia e CD90 no 8º dia. No GIVC, o CD90 foi altamente expresso em todos os períodos analisados, a proteína NG2 também foi expressa em odontoblastos e CD90 na camada subodontoblástica em molares de rato. Todas as proteínas mencionadas coexistem no tecido pulpar humano e animal formando populações celulares heterogêneas perivasculares e perineurais encontradas em maior concentração em regiões próximas à área de injúria, sugerindo que nichos perivasculares e perineurais participam em conjunto na homeostase pulpar em resposta à injúria. / In pursuit of new strategies for pulp tissue repair with stem cells, it is necessary to better understand the niche in which they are found. One way is to observe the mechanism of these cells activation during the repair of pulp tissues after suffering an injury. Thus, it was proposed to study the location and composition of the dental pulp stem cell niche through induced dental pulp exposure in vitro in human teeth and in vivo in rat teeth by incorporating Bromodeoxyuridine (BrdU) and Iododeoxyuridine (IdU) and co-expression with stem cell proteins. For the in vitro assay, 33 human third molars with incomplete rhizogenesis were divided into 3 groups: teeth with induced pulp exposure and maintained in culture (GCE, group cultured with pulp exposure) (n = 15); healthy teeth maintained in culture (GCC, control cultured group) (n = 15); healthy teeth only (GH, healthy group) (n = 3). GCE and GCC groups were cultured with BrdU (10 l / ml) for 24 h and subsequently analyzed after 2, 5 and 14 days. For the in vivo assay, 12 Wistar rats received IdU (1mg / ml) diluted in water for 30 days. After 45 days were divided into 2 groups: in vivo group with pulp exposure (GIVE) (n = 17 teeth) and in vivo control group (GIVC) (n = 16 teeth). In GIVE, the pulp exposure was performed on the first molar and then restored with Coltosol. After 2, 4 and 8 postoperative days the samples were collected and processed for histological and immunohistochemical analysis. CD90, CD146, PDGFr and BrdU proteins were analyzed in two areas: injury and center in human molars whereas, CD90, NG2 and IdU were analysed in a single area in rat molars. Statistical analyzes were performed by the Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests, p 5%. In human teeth, in the lesion area of the GCE group, BrdU positive cells were found in the three periods, while a greater number of PDGFr positive cells on days 2 and 5 and CD90 positive cells on the 14th day was found; in the pulp center, on the second day after injury there were a similar number of CD90, CD146 and PDGFr positive cells, and found in greater percentage in the 5th day PDGFr and CD90 positive cells and in 14th day CD90 positive cells. In the GCC group, in the area equivalent to injury site, CD90 (2 and 5 days) and PDGFr (14 days) positive cells were found in a higher percentage; in the pulp center, the number of cells positive for CD90, CD146 and PDGFr was similar in all periods, and BrdU positive cells were found on day 2. In rat molars, GIVE presented more positive cells for NG2 on day 2, for IdU on day 4 and CD90 on day 8. In the GIVC, CD90 was highly expressed in all periods analysed, the NG2 protein was also expressed in odontoblasts and CD90 in the subodontoblastic layer in rat molars. All mentioned proteins coexist in the human and animal pulp tissue forming heterogeneous perivascular and perineural cellular populations found in greater concentration in regions near the area of injury, suggesting that perivascular and perineural niches participate together in pulpal homeostasis in response to injury.