Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-05-16T16:43:50Z No. of bitstreams: 1 VERLÂNIA FABÍOLA DE SOUSA FARIAS - DISSERTAÇÃO PPGSA PROFISSIONAL 2013..pdf: 942647 bytes, checksum: 70fe8770e6f2f71d2c0f3c1b41b05e2b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T16:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VERLÂNIA FABÍOLA DE SOUSA FARIAS - DISSERTAÇÃO PPGSA PROFISSIONAL 2013..pdf: 942647 bytes, checksum: 70fe8770e6f2f71d2c0f3c1b41b05e2b (MD5) Previous issue date: 2013-11-12 / O broto de palma surge no semiárido nordestino como uma hortaliça alternativa e potencial para o consumo humano, possibilitando a obtenção de produtos e alimentos ricos em nutrientes e antioxidantes. Assim, objetivou-se avaliar o desenvolvimento, a qualidade e a capacidade antioxidante em brotos de palma para o consumo humano. Os brotos foram colhidos nas primeiras horas do dia na área experimental do Centro de Ciências e Tecnologia Agroalimentar da Universidade Federal de Campina Grande, em Pombal - PB e avaliados quanto às variáveis físicas e químicas, utilizando-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, no fatorial 2 x 4, sendo 2 cultivares (‘Gigante’ e ‘Redonda’) e 4 estádios de desenvolvimento (estádio 1 - brotos de 4,0 a 8,0 cm; estádio 2 - brotos de 8,01 a 12,0 cm; estádio 3 - brotos de 12,01 a 16,0 cm; estádio 4 - brotos de 16,01 a 20,0 cm), com seis repetições e 250 g por unidade experimental. Para as variáveis diâmetro longitudinal e transversal, massa fresca com espinhos, sem espinhos e dos espinhos e rendimento, houve um aumento significativo de seus valores com o estádio de desenvolvimento, com destaque para os brotos da cultivar ‘Redonda’. Os teores de proteínas, lipídeos e carboidratos reduziram significativamente com o avanço do desenvolvimento, para ambas as cultivares, assim como para a relação sólidos solúveis e acidez titulável e para o amido. Nos compostos bioativos clorofilas, carotenoides e flavonoides, os maiores teores foram encontrados no terceiro e quarto estádios da cultivar ‘Gigante’; já os polifenóis extraíveis foram maiores no primeiro e segundo estádios, dessa cultivar. Os teores de ácido ascórbico aumentaram com o estádio de desenvolvimento nas duas cultivares. A capacidade antioxidante foi superior na massa seca quando comparada à massa fresca, nos brotos de palma ‘Gigante’ e ‘Redonda’. Dessa forma, independente dos tratamentos avaliados, os brotos de palma exibiram características similares às de outras hortaliças, constituindo-se como fonte de compostos com propriedades antioxidantes, podendo ser usados como hortaliça em qualquer estádio de desenvolvimento, sendo que o terceiro e o quarto estádios foram os mais indicados, tanto para o consumo in natura como para o processamento agroindustrial. / The bud of palm comes in northeast semiarid as an alternative and potential vegetable for human consumption, making it possible to obtain products and foods rich in nutrients and antioxidants. Thus, the objective was to evaluate the development, quality and antioxidant capacity in palm buds for human consumption. The buds were harvested in the early hours in the experimental area of the Centre for Science and Agrifood Technology, Federal University of Campina Grande, in Pombal - PB and analyzed for physical and chemical variables, using a completely randomized design in a factorial 2 x 4, with 2 cultivars (‘Giant’ and ‘Round’) and 4 developmental stages (stage 1 - buds from 4,0 to 8,0 cm, stage 2 - buds from 8,01 to 12,0 cm, stage 3 - buds 12,01 to 16,0 cm, stage 4 - buds from 16,01 to 20,0 cm), with six replicates of 250 g per experimental unit. For longitudinal and transverse diameter variables, fresh pasta with thorns, without thorns and spines and income, there was a significant increase in their values with the stage of development, with emphasis on the buds of the cultivar ‘Round’. The levels of proteins, lipids and carbohydrates significantly decreased with advancing development, for cultivars, as well as the soluble solid and titratable acidity and starch. Bioactive compounds in chlorophylls, carotenoids and flavonoids, the highest levels were found in the third and fourth stages of cultivar ‘Giant’; have extractable polyphenols were higher in the first and second stages, this cultivar. The levels of ascorbic acid increased with the stage of development in both cultivars. The antioxidant capacity was higher in dry weight when compared to fresh weight in buds palm ‘Giant’ and ‘Round’. Thus, regardless of the treatments, the shoots palm exhibited similar to other vegetables, constituting a source of compounds with antioxidant characteristics, can be used as a vegetable in any stage of development, and the third and fourth in stars were the most suitable for both fresh consumption and for the agro-processing.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9175_Dissertação-Estevao_final.pdf: 1819031 bytes, checksum: e54705766d207f78175fa6a3218ca117 (MD5) Previous issue date: 2015-09-15 / Nas empresas florestais é comum a discussão que na colheita em regime de manejo de talhadia ocorre perdas na produtividade das máquinas, porém os trabalhos na literatura são muito escassos para comprovar tal afirmação. Objetivou-se no presente trabalho realizar uma análise comparativa da colheita florestal mecanizada em área de regime de manejo de alto fuste e talhadia, analisando os parâmetros técnicos do colhedor florestal (harvester), juntamente com a influência da brotação lateral para a colheita florestal e os ganhos de produtividade da máquina em diferentes volumes médios por árvore colhida. A pesquisa foi realizada em uma empresa florestal, no município de Aracruz, Espírito Santo. Foram avaliados quatro tratamentos, sendo eles: talhadia com menor produtividade com brotação lateral, talhadia de maior produtividade sem brotação lateral, talhadia de menor produtividade sem brotação lateral, e alto fuste com menor produtividade. Foram utilizadas quatro máquinas do mesmo modelo, com os mesmos operadores, durante quatro dias de trabalho em cada tratamento, sempre no primeiro turno, totalizando 16 repetições em cada tratamento. A comparação das médias foi feita utilizando o teste t, em nível de 5% de probabilidade, bem como análise de box plot para verificar a dispersão e assimetria dos dados. De acordo com os resultados, não houve influência da brotação lateral na produtividade das máquinas, porém, a diferença no número de quedas de corrente durante a colheita com brotações laterais é significativa (2,86 vezes maior). Não observou-se diferença entre a produtividade da máquina em regime de manejo de talhadia e alto fuste, contudo, o número de quedas de corrente para a colheita em talhadia é estatisticamente diferente (1,59 vezes maior). O aumento da produtividade do talhão causou aumento na produtividade da máquina, não havendo diferença estatística entre o número de queda de corrente por volume processado em áreas com diferentes produtividades do talhão. Palavras-chave: mecanização florestal; rebrota; broto ladrão; condução dos brotos; reforma.

As células derivadas de fígado embrionário tanto de animais quanto de humanos tem sido cada vez mais estudas devido ao seu potencial antiinflamatório, imunomodulador e regenerativo, demonstrado as mesmas bipotencial de diferenciação em hepatócitos e colangiocitos. Na presente pesquisa utilizou-se células derivadas de fígados embrionários de ratos com 14,5 dias de gestação. As células apresentaram marcadores de células progenitoras hepáticas, bem como marcadores de células hepáticas e biliares diferenciadas confirmando, seu bipotencial. A terapia celular utilizando as células supracitadas, reduziu significativamente a progressão da fibrose hepática, diminuindo a inflamação e ainda estimulando a regeneração hepática de ratos submetidos à cirrose por ligadura do ducto biliar. As análises realizadas mediante avaliação quantitativa pela técnica de morfometria, demonstraram redução da deposição de fibras de colágeno, bem como menor proliferação de ductos biliares nos animais tratados. Os resultados foram ainda complementados por analise semiquantitativa, a qual avaliou a intensidade da necroinflamação dos tecidos hepáticos analisados, apontando menor escore de inflamação dos animais tratados. As células poderão ter efeito benéfico para o tratamento de doenças hepáticas crônicas, que estimulam a formação de fibrose. A cirrose é o estágio final comum à doenças hepáticas crônicas por causadas por fatores de diversas etiologias. Esta ocupa a decima quarta causa mundial de mortalidade em humanos, sendo que o único tratamento definitivo atualmente é transplante do órgão. Entretanto o número de transplantes está longe de suprir a demanda atual, visto que há um déficit de doadores do órgão. Terapias que possam oferecer uma alternativa de tratamento confiável, segura e acessível são bastante oportunas. Nossos resultados sugerem que as células utilizadas neste trabalho podem modular a fibrogênese, e consequentemente retardar o estabelecimento da cirrose em doenças hepáticas crônicas. / Studies on human and animal embryonic liver stem cells have been growing due to its anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative potential. These cells show also a bipotential do differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. In the present study, it was used rodent embryonic liver with 14.5 of gestation. The cells presented hepatic progenitor, as well adult hepatic and biliary cells markers, confirming their bipotential. Previous studies with these cells in therapy decreased hepatic fibrosis progression in rat models submitted to cirrhosis by biliary duct ligation. Quantitative analysis was performed by morphometry showed decreased collagen fibers deposition and lower proliferation of biliary ducts in treated animals. Results were complemented with semiquantitative analysis with evaluation of necroinflammation of the analyzed hepatic tissues, in which a decreased inflammation score was observed. Cirrhosis is a common final stage for chronic hepatic diseases caused by different factors in several etiologies. It occupies the 14th world cause of mortality in human. However, the number of liver transplants is insufficient for current demand, caused by deficit in organs donors. Therapies that could offer an alternative for a reliable, safe and accessible treatment is opportune. Our results suggest that cells used in this study can modulate fibrogenesis and consequently delay the establishment of cirrhosis in chronic liver diseases.

Doenças envolvendo órgãos endodermicamente derivados afetam milhares de pessoas no mundo. O sucesso da terapia celular para o tratamento de doenças de órgãos oriundos da mesoderme e ectoderme gera ótimas perspectivas para o uso do mesmo em tratamento de doenças de órgãos de origem endodérmica (tireóide, pulmões, fígado, vesícula biliar e pâncreas). Particularmente, no fígado, ainda que sejam atribuídas propriedades regenerativas em muitas lesões o mecanismo de reparação é insuficiente, tornando o transplante hepático à única opção definitiva. Dentre as células-tronco embrionárias, as células de linhagens hepáticas fetais podem estabelecer-se como fonte importante para a terapia celular em indivíduos com doenças hepáticas, pois possuem um alto índice de diferenciação de hepatócitos e células do ducto biliar in vitro. Evidências apontam a progranulina como um fator de crescimento de grande habilidade para a indução de proliferação celular, uma vez que está envolvida no desenvolvimento embrionário e neonatal. Sendo assim, neste trabalho foram utilizados embriões de ratos Fischer 344 com idades gestacionais 12,5; 13,5; 14,5; 15,5; 16;5 para caracterizar o papel do novo fator de crescimento progranulina na hepatogênese. Foram realizadas análises histológicas, de microscopia eletrônica de transmissão e imuno-histoquímicas nos embriões. Houve expressão de progranulina e Oct-4 (marcador de célula tronco indiferenciada) principalmente nas idades gestacionais de 13,5 a 16,6 dias e 12,5 a 16,5 dias para PCNA (marcador de proliferação celular). Dessa forma acredita-se que, a progranulina atua nos processos de proliferação celular e diferenciação das células-tronco do broto hepático, podendo ser usada como um fator de diferenciação em culturas in vitro visando à diferenciação de células-tronco do broto hepático em hepatócitos funcionais para a terapia celular. / Diseases involving endodermal-derivated organs affect thousands of people all over the world. The cell therapy success for treating diseases of organs originated from mesoderm and ectoderm generates excellent perspectives for its use in treating diseases of organs of endodermal origin (thyroid, lungs, liver, gallbladder and pancreas). Particularly in the liver, although regenerative proprieties are attributed in many lesions, the repairing mechanism is insufficient, making the hepatic transplant the only definitive option. Among the embryo stem cells, the fetal hepatic lineage cells may establish themselves as important sources for cell therapy in individuals with hepatic diseases, since they have high ability in hepatocytes and billiar duct cells differentiation in vitro. However, for the use of hepatic lineage embryo stem cells as a bi-potential source of differentiation, it is necessary the establishment of efficient proliferation methods in this type of cells. Evidences point to progranuline as a growth factor with high capability for the induction of cell proliferation, since it is involved in the embryo and neo-natal development. Thus, this study used embryos of Fischer 344 rats with gestational ages 12.5, 13.5, 14.5, 15.5 and 16.5 to characterize the role of the new growth factor progranuline in hepatogenesis. We conducted histological, transmission electron microscopy and immunohistochemical in embryos. There was expression of progranuline and Oct-4 (undifferentiated stem cell marker), especially at gestational ages 13.5 to 16.5 days and 12.5 to 16.5 days for PCNA (proliferation marker). So it is believed that progranuline acts on cell proliferation and differentiation of stem cells from the liver bud, which can be used as a differentiating factor in order to cultures in vitro differentiation of stem cells from the liver bud into functional hepatocytes for cell therapy.

Doenças envolvendo órgãos endodermicamente derivados afetam milhares de pessoas no mundo. O sucesso da terapia celular para o tratamento de doenças de órgãos oriundos da mesoderme e ectoderme gera ótimas perspectivas para o uso do mesmo em tratamento de doenças de órgãos de origem endodérmica (tireóide, pulmões, fígado, vesícula biliar e pâncreas). Particularmente, no fígado, ainda que sejam atribuídas propriedades regenerativas em muitas lesões o mecanismo de reparação é insuficiente, tornando o transplante hepático à única opção definitiva. Dentre as células-tronco embrionárias, as células de linhagens hepáticas fetais podem estabelecer-se como fonte importante para a terapia celular em indivíduos com doenças hepáticas, pois possuem um alto índice de diferenciação de hepatócitos e células do ducto biliar in vitro. Evidências apontam a progranulina como um fator de crescimento de grande habilidade para a indução de proliferação celular, uma vez que está envolvida no desenvolvimento embrionário e neonatal. Sendo assim, neste trabalho foram utilizados embriões de ratos Fischer 344 com idades gestacionais 12,5; 13,5; 14,5; 15,5; 16;5 para caracterizar o papel do novo fator de crescimento progranulina na hepatogênese. Foram realizadas análises histológicas, de microscopia eletrônica de transmissão e imuno-histoquímicas nos embriões. Houve expressão de progranulina e Oct-4 (marcador de célula tronco indiferenciada) principalmente nas idades gestacionais de 13,5 a 16,6 dias e 12,5 a 16,5 dias para PCNA (marcador de proliferação celular). Dessa forma acredita-se que, a progranulina atua nos processos de proliferação celular e diferenciação das células-tronco do broto hepático, podendo ser usada como um fator de diferenciação em culturas in vitro visando à diferenciação de células-tronco do broto hepático em hepatócitos funcionais para a terapia celular. / Diseases involving endodermal-derivated organs affect thousands of people all over the world. The cell therapy success for treating diseases of organs originated from mesoderm and ectoderm generates excellent perspectives for its use in treating diseases of organs of endodermal origin (thyroid, lungs, liver, gallbladder and pancreas). Particularly in the liver, although regenerative proprieties are attributed in many lesions, the repairing mechanism is insufficient, making the hepatic transplant the only definitive option. Among the embryo stem cells, the fetal hepatic lineage cells may establish themselves as important sources for cell therapy in individuals with hepatic diseases, since they have high ability in hepatocytes and billiar duct cells differentiation in vitro. However, for the use of hepatic lineage embryo stem cells as a bi-potential source of differentiation, it is necessary the establishment of efficient proliferation methods in this type of cells. Evidences point to progranuline as a growth factor with high capability for the induction of cell proliferation, since it is involved in the embryo and neo-natal development. Thus, this study used embryos of Fischer 344 rats with gestational ages 12.5, 13.5, 14.5, 15.5 and 16.5 to characterize the role of the new growth factor progranuline in hepatogenesis. We conducted histological, transmission electron microscopy and immunohistochemical in embryos. There was expression of progranuline and Oct-4 (undifferentiated stem cell marker), especially at gestational ages 13.5 to 16.5 days and 12.5 to 16.5 days for PCNA (proliferation marker). So it is believed that progranuline acts on cell proliferation and differentiation of stem cells from the liver bud, which can be used as a differentiating factor in order to cultures in vitro differentiation of stem cells from the liver bud into functional hepatocytes for cell therapy.

As células derivadas de fígado embrionário tanto de animais quanto de humanos tem sido cada vez mais estudas devido ao seu potencial antiinflamatório, imunomodulador e regenerativo, demonstrado as mesmas bipotencial de diferenciação em hepatócitos e colangiocitos. Na presente pesquisa utilizou-se células derivadas de fígados embrionários de ratos com 14,5 dias de gestação. As células apresentaram marcadores de células progenitoras hepáticas, bem como marcadores de células hepáticas e biliares diferenciadas confirmando, seu bipotencial. A terapia celular utilizando as células supracitadas, reduziu significativamente a progressão da fibrose hepática, diminuindo a inflamação e ainda estimulando a regeneração hepática de ratos submetidos à cirrose por ligadura do ducto biliar. As análises realizadas mediante avaliação quantitativa pela técnica de morfometria, demonstraram redução da deposição de fibras de colágeno, bem como menor proliferação de ductos biliares nos animais tratados. Os resultados foram ainda complementados por analise semiquantitativa, a qual avaliou a intensidade da necroinflamação dos tecidos hepáticos analisados, apontando menor escore de inflamação dos animais tratados. As células poderão ter efeito benéfico para o tratamento de doenças hepáticas crônicas, que estimulam a formação de fibrose. A cirrose é o estágio final comum à doenças hepáticas crônicas por causadas por fatores de diversas etiologias. Esta ocupa a decima quarta causa mundial de mortalidade em humanos, sendo que o único tratamento definitivo atualmente é transplante do órgão. Entretanto o número de transplantes está longe de suprir a demanda atual, visto que há um déficit de doadores do órgão. Terapias que possam oferecer uma alternativa de tratamento confiável, segura e acessível são bastante oportunas. Nossos resultados sugerem que as células utilizadas neste trabalho podem modular a fibrogênese, e consequentemente retardar o estabelecimento da cirrose em doenças hepáticas crônicas. / Studies on human and animal embryonic liver stem cells have been growing due to its anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative potential. These cells show also a bipotential do differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. In the present study, it was used rodent embryonic liver with 14.5 of gestation. The cells presented hepatic progenitor, as well adult hepatic and biliary cells markers, confirming their bipotential. Previous studies with these cells in therapy decreased hepatic fibrosis progression in rat models submitted to cirrhosis by biliary duct ligation. Quantitative analysis was performed by morphometry showed decreased collagen fibers deposition and lower proliferation of biliary ducts in treated animals. Results were complemented with semiquantitative analysis with evaluation of necroinflammation of the analyzed hepatic tissues, in which a decreased inflammation score was observed. Cirrhosis is a common final stage for chronic hepatic diseases caused by different factors in several etiologies. It occupies the 14th world cause of mortality in human. However, the number of liver transplants is insufficient for current demand, caused by deficit in organs donors. Therapies that could offer an alternative for a reliable, safe and accessible treatment is opportune. Our results suggest that cells used in this study can modulate fibrogenesis and consequently delay the establishment of cirrhosis in chronic liver diseases.

A perda do parênquima hepático, induzida por tratamento agudo, cirúrgico ou químico, desencadeia um processo regenerativo até que a massa hepática seja completamente restaurada. A regeneração hepática, após a hepatectomia parcial de 70%, é um dos modelos mais adequados de regeneração de células, órgãos e tecidos mais estudados. No fígado, ainda que sejam atribuídas propriedades regenerativas, muitas das lesões são tão prejudiciais que este mecanismo de reparação é insuficiente, tornando o transplante a única opção. As células derivadas do broto hepático de ratos apresentam uma boa alternativa para tratamento de doenças hepáticas devido ao seu alto índice proliferativo e da expressão de marcadores de pluripotência, sendo sua aplicabilidade viável em modelos experimentais. O objetivo deste trabalho foi analisar as diferentes vias de administração das células derivadas do broto hepático de ratos com 12,5 dias de gestação visando a melhor regeneração do órgão. Foram realizados experimentos de hepatectomia parcial de 70% (N=50 animais), PET Scan MSFX PRO In-Vivo RX e fluorescência, índice hepatossomático, análise de marcadores solúveis (GH, AFP, CEA, IGF-1), análises hematológicas, microscopia de luz (coloração HE, Tricômio de Masson), análise de marcadores por citometria de fluxo (CD90, STRO-1, Nanog, Oct3/4, Ki-67, Caspase 3) e ciclo celular por citometria de fluxo. Nossos dados demonstraram que as células do broto hepático administradas na via endotraqueal apresentaram melhor equilíbrio entre proliferação e morte celular, com maior expressão dos marcadores de pluripotência, melhor organização celular e regeneração tecidual, em contraste com outras vias, incluindo endovenosa, intraperitoneal e oroenteral. Isto a torna mais segura e de maior viabilidade na regeneração celular em relação às demais vias, sendo mais eficiente nos modelos de hepatectomia parcial / The restoration of liver parenchyma after partial hepatectomy or chemical treatments represents appropriate models to study regeneration mechanisms. The most appropriate model for liver regeneration is partial hepatectomy of 70%, however, organ repair properties are insufficient, suggesting the transplantation the best alternative to treat liver diseases. Cells derived from liver buds of rats show a high proliferative index and the expression of pluripotency markers; thus their significance for regeneration purposes can be tested experimentally. We here investigated different routes to administer cells derived from rat live buds of 12.5 days of gestation to adult individuals (N=50 animals) suffering from partial hepatectomy (70%). Applied methods included PET Scan MSFX PRO In-Vivo RX, fluorescence hepatossomatic index, analysis of soluble markers (GH, AFP, CEA, IGF-1), hematological analysis, light microscopy (staining HE, and Masson trichrome) as well as flow cytometry for cell cycle analysis and CD90, STRO-1, Nanog, OCT3/4, Ki-67, Caspase 3 expression. Our data showed that administration via the tracheal route resulted as favorite in regard to the balance between proliferation and cell deaths, of pluripotency marker expression, cellular organization and tissue regeneration, in contrast to other routes including: intravenous, intraperitoneal and oroenteral. Consequently, the tracheal route showed safer and more efficient treatment to enhance cell regeneration after partial hepatectomy

As células-tronco são capazes de se diferenciarem em praticamente todos os tipos celulares, podendo ser utilizadas em terapias de substituição em várias doenças. Células de linhagens hepáticas embrionárias e fetais pode ser uma fonte importante para a terapia celular em indivíduos com doenças hepáticas, pois possuem um alto índice de diferenciação em hepatócitos e células do ducto biliar. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial e o controle da resposta proliferativa de células do broto hepático de ratos Fischer 344 em cultura. A obtenção das células do broto hepático foi realizada nos períodos 12,5; 14,5 e 16,5 dias de gestação e os fragmentos foram cultivados em meio DMEM-F12. A caracterização morfológica foi realizada em microscopia invertida de luz e eletrônica de varredura. A caracterização dos marcadores de células mesenquimais, do citoesqueleto, progressão e fases do ciclo celular, morte celular, e do potencial elétrico mitocondrial foram realizadas por citometria de fluxo. A função bioquímica foi realizada pela análise das transaminases hepáticas e pela produção de radicais livres lipoperoxidados. Os resultados encontrados no acasalamento dos ratos isogênicos da linhagem Fischer 344 seguiu o protocolo de 12 h de luz, alcançando o índice reprodutivo satisfatório e reprodutível. O isolamento e separação do broto hepático desta linhagem de ratos permitiu a obtenção, expansão e caracterização de uma cultura primária nos diferentes dias de gestação 12,5; 14,5 e 16,5. Os aspectos morfológicos encontrados foram de células fusiformes do tipo fibroblast-like para todos os períodos de gestação em cultura. As análises das transaminases hepáticas TGO e TGP, mostraram se em concentrações menores no período 12,5 dias de gestação. A expressão dos marcadores de células-tronco de origem mesenquimais (CD90, Nanog, Oct ¾ e STRO1), marcadores do citoesqueleto (CK8, CK18 e Desmina), marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (P53, P21, P27 e Ciclina D1) e marcadores envolvidos na morte celular (Anexina V/PI, Caspase 3, Bax, Bad e Bcl2) mostraram diferencialmente expressos, nos diferentes períodos gestacionais. A análise do potencial elétrico mitocondrial nos períodos de gestação de 14,5 e 16,5 dias, foi maior na proporção de células inativas com menor capacidade funcional ou metabólica, quando comparada ao período de 12,5 dias ou mesmo em relação ao hepatócito normal de um rato adulto. Análise das fases do ciclo celular observou-se uma concentração de célula na fase G0/G1, repercutindo na modulação da capacidade de proliferação e aumento na proporção de células com DNA fragmentado, nas CBH no período de 16,5 dias em comparação aos demais períodos e ao hepatócito normal. O aumento da fragmentação do DNA em média de 3,5 e 2,3 vezes, respectivamente nos períodos de 12,5 e 14,5 dias de gestação. A capacidade de síntese e de divisão celular das CBH foi mantida em todos os períodos de gestação. Os radicais livres lipoperoxidados mostraram quantidades insignificantes em CBH nos diferentes dias de gestação. / Stem cells are able to differentiate into virtually all cell types and can be used in replacement therapies in various diseases. Cells of embryonic and fetal liver lines can be an important source for cell therapy in patients with liver disease because they have a high rate of differentiation into hepatocytes and biliary duct cells. The aim of this study was to evaluate the potential and control of the proliferative response of liver bud cells during the maturation of hepatocytes in culture. The acquirement of liver bud cells was performed for 12.5, 14.5 and 16.5 days of gestation and the fragments were cultured in DMEM-F12. Morphological characterization was performed on inverted light microscopy and scanning electron microscopy. The characterization of mesenchymal cell markers, cytoskeleton, and progression stages of the cell cycle, cell death and mitochondrial electric potential were performed by flow cytometry. The biochemical function was performed by analysis of liver transaminases and the production of free radicals lipoperoxidados. The results found in rats\' mating isogenic Fischer 344 followed the protocol of 12 hours of light reaching the reproductive rate satisfactory. The isolation and separation of the liver bud of this strain of mice allowed the isolation, expansion and characterization of a primary culture at different days of gestation, 12.5, 14.5 and 16.5 days. The morphological features were found of spindle cell type to fibroblast-like cells of the liver bud in culture. Analyses of hepatic transaminases GOT and GPT showed lower concentrations in the period 12.5 days of gestation. The expression of stem cell markers of mesenchymal origin (CD90, Nanog, Oct STRO1 and ¾), cytoskeletal markers (CK8, CK18 and desmin) markers involved in checking and cell cycle progression (P53, P21, P27 and Cyclin D1) and markers involved in apoptosis (Annexin V / PI, caspase 3, Bax, Bad and Bcl2) showed differentially expressed in different gestational periods. In the analysis of mitochondrial electrical potential in the gestation periods of 14.5 and 16.5 days, it was observed the higher proportion of quiescent cells with lower metabolic of functional capacity when compared to the periodo of 12.5 days or even compared to a normal hepatocyte adult rat. In the analysis of cell cycle phases it was observed the concentration of cell in the G0/G1 phase, resulting in modulation of proliferation capacity and the increase in the proportion of cells with fragmented DNA, CBH in the period 16.5 days compared to other periods and the normal hepatocyte. The increase of DNA fragmentation on average 3.5 and 2.3 times respectively in the periods of 12.5 and 14.5 days of gestation. The synthesis and cellular division of CBH was maintained in all stages of pregnancy. The free radicals lipoperoxidados showed insignificant amounts of CBH in the days of gestation.

A perda do parênquima hepático, induzida por tratamento agudo, cirúrgico ou químico, desencadeia um processo regenerativo até que a massa hepática seja completamente restaurada. A regeneração hepática, após a hepatectomia parcial de 70%, é um dos modelos mais adequados de regeneração de células, órgãos e tecidos mais estudados. No fígado, ainda que sejam atribuídas propriedades regenerativas, muitas das lesões são tão prejudiciais que este mecanismo de reparação é insuficiente, tornando o transplante a única opção. As células derivadas do broto hepático de ratos apresentam uma boa alternativa para tratamento de doenças hepáticas devido ao seu alto índice proliferativo e da expressão de marcadores de pluripotência, sendo sua aplicabilidade viável em modelos experimentais. O objetivo deste trabalho foi analisar as diferentes vias de administração das células derivadas do broto hepático de ratos com 12,5 dias de gestação visando a melhor regeneração do órgão. Foram realizados experimentos de hepatectomia parcial de 70% (N=50 animais), PET Scan MSFX PRO In-Vivo RX e fluorescência, índice hepatossomático, análise de marcadores solúveis (GH, AFP, CEA, IGF-1), análises hematológicas, microscopia de luz (coloração HE, Tricômio de Masson), análise de marcadores por citometria de fluxo (CD90, STRO-1, Nanog, Oct3/4, Ki-67, Caspase 3) e ciclo celular por citometria de fluxo. Nossos dados demonstraram que as células do broto hepático administradas na via endotraqueal apresentaram melhor equilíbrio entre proliferação e morte celular, com maior expressão dos marcadores de pluripotência, melhor organização celular e regeneração tecidual, em contraste com outras vias, incluindo endovenosa, intraperitoneal e oroenteral. Isto a torna mais segura e de maior viabilidade na regeneração celular em relação às demais vias, sendo mais eficiente nos modelos de hepatectomia parcial / The restoration of liver parenchyma after partial hepatectomy or chemical treatments represents appropriate models to study regeneration mechanisms. The most appropriate model for liver regeneration is partial hepatectomy of 70%, however, organ repair properties are insufficient, suggesting the transplantation the best alternative to treat liver diseases. Cells derived from liver buds of rats show a high proliferative index and the expression of pluripotency markers; thus their significance for regeneration purposes can be tested experimentally. We here investigated different routes to administer cells derived from rat live buds of 12.5 days of gestation to adult individuals (N=50 animals) suffering from partial hepatectomy (70%). Applied methods included PET Scan MSFX PRO In-Vivo RX, fluorescence hepatossomatic index, analysis of soluble markers (GH, AFP, CEA, IGF-1), hematological analysis, light microscopy (staining HE, and Masson trichrome) as well as flow cytometry for cell cycle analysis and CD90, STRO-1, Nanog, OCT3/4, Ki-67, Caspase 3 expression. Our data showed that administration via the tracheal route resulted as favorite in regard to the balance between proliferation and cell deaths, of pluripotency marker expression, cellular organization and tissue regeneration, in contrast to other routes including: intravenous, intraperitoneal and oroenteral. Consequently, the tracheal route showed safer and more efficient treatment to enhance cell regeneration after partial hepatectomy

As células-tronco são capazes de se diferenciarem em praticamente todos os tipos celulares, podendo ser utilizadas em terapias de substituição em várias doenças. Células de linhagens hepáticas embrionárias e fetais pode ser uma fonte importante para a terapia celular em indivíduos com doenças hepáticas, pois possuem um alto índice de diferenciação em hepatócitos e células do ducto biliar. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial e o controle da resposta proliferativa de células do broto hepático de ratos Fischer 344 em cultura. A obtenção das células do broto hepático foi realizada nos períodos 12,5; 14,5 e 16,5 dias de gestação e os fragmentos foram cultivados em meio DMEM-F12. A caracterização morfológica foi realizada em microscopia invertida de luz e eletrônica de varredura. A caracterização dos marcadores de células mesenquimais, do citoesqueleto, progressão e fases do ciclo celular, morte celular, e do potencial elétrico mitocondrial foram realizadas por citometria de fluxo. A função bioquímica foi realizada pela análise das transaminases hepáticas e pela produção de radicais livres lipoperoxidados. Os resultados encontrados no acasalamento dos ratos isogênicos da linhagem Fischer 344 seguiu o protocolo de 12 h de luz, alcançando o índice reprodutivo satisfatório e reprodutível. O isolamento e separação do broto hepático desta linhagem de ratos permitiu a obtenção, expansão e caracterização de uma cultura primária nos diferentes dias de gestação 12,5; 14,5 e 16,5. Os aspectos morfológicos encontrados foram de células fusiformes do tipo fibroblast-like para todos os períodos de gestação em cultura. As análises das transaminases hepáticas TGO e TGP, mostraram se em concentrações menores no período 12,5 dias de gestação. A expressão dos marcadores de células-tronco de origem mesenquimais (CD90, Nanog, Oct ¾ e STRO1), marcadores do citoesqueleto (CK8, CK18 e Desmina), marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (P53, P21, P27 e Ciclina D1) e marcadores envolvidos na morte celular (Anexina V/PI, Caspase 3, Bax, Bad e Bcl2) mostraram diferencialmente expressos, nos diferentes períodos gestacionais. A análise do potencial elétrico mitocondrial nos períodos de gestação de 14,5 e 16,5 dias, foi maior na proporção de células inativas com menor capacidade funcional ou metabólica, quando comparada ao período de 12,5 dias ou mesmo em relação ao hepatócito normal de um rato adulto. Análise das fases do ciclo celular observou-se uma concentração de célula na fase G0/G1, repercutindo na modulação da capacidade de proliferação e aumento na proporção de células com DNA fragmentado, nas CBH no período de 16,5 dias em comparação aos demais períodos e ao hepatócito normal. O aumento da fragmentação do DNA em média de 3,5 e 2,3 vezes, respectivamente nos períodos de 12,5 e 14,5 dias de gestação. A capacidade de síntese e de divisão celular das CBH foi mantida em todos os períodos de gestação. Os radicais livres lipoperoxidados mostraram quantidades insignificantes em CBH nos diferentes dias de gestação. / Stem cells are able to differentiate into virtually all cell types and can be used in replacement therapies in various diseases. Cells of embryonic and fetal liver lines can be an important source for cell therapy in patients with liver disease because they have a high rate of differentiation into hepatocytes and biliary duct cells. The aim of this study was to evaluate the potential and control of the proliferative response of liver bud cells during the maturation of hepatocytes in culture. The acquirement of liver bud cells was performed for 12.5, 14.5 and 16.5 days of gestation and the fragments were cultured in DMEM-F12. Morphological characterization was performed on inverted light microscopy and scanning electron microscopy. The characterization of mesenchymal cell markers, cytoskeleton, and progression stages of the cell cycle, cell death and mitochondrial electric potential were performed by flow cytometry. The biochemical function was performed by analysis of liver transaminases and the production of free radicals lipoperoxidados. The results found in rats\' mating isogenic Fischer 344 followed the protocol of 12 hours of light reaching the reproductive rate satisfactory. The isolation and separation of the liver bud of this strain of mice allowed the isolation, expansion and characterization of a primary culture at different days of gestation, 12.5, 14.5 and 16.5 days. The morphological features were found of spindle cell type to fibroblast-like cells of the liver bud in culture. Analyses of hepatic transaminases GOT and GPT showed lower concentrations in the period 12.5 days of gestation. The expression of stem cell markers of mesenchymal origin (CD90, Nanog, Oct STRO1 and ¾), cytoskeletal markers (CK8, CK18 and desmin) markers involved in checking and cell cycle progression (P53, P21, P27 and Cyclin D1) and markers involved in apoptosis (Annexin V / PI, caspase 3, Bax, Bad and Bcl2) showed differentially expressed in different gestational periods. In the analysis of mitochondrial electrical potential in the gestation periods of 14.5 and 16.5 days, it was observed the higher proportion of quiescent cells with lower metabolic of functional capacity when compared to the periodo of 12.5 days or even compared to a normal hepatocyte adult rat. In the analysis of cell cycle phases it was observed the concentration of cell in the G0/G1 phase, resulting in modulation of proliferation capacity and the increase in the proportion of cells with fragmented DNA, CBH in the period 16.5 days compared to other periods and the normal hepatocyte. The increase of DNA fragmentation on average 3.5 and 2.3 times respectively in the periods of 12.5 and 14.5 days of gestation. The synthesis and cellular division of CBH was maintained in all stages of pregnancy. The free radicals lipoperoxidados showed insignificant amounts of CBH in the days of gestation.