A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

GUIMARÃES FILHO, Artur. Alterações metabólicas e enzimáticas na regeneração hepática em ratos alimentados com dietas suplementar de L-Glutamina e Alfa-Cetoglutarato. 2012. 181 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T16:48:08Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_aguimarãesfilho.pdf: 4581094 bytes, checksum: 84a3cc331dc0857a6d77bfa6ca795bb5 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T16:49:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_aguimarãesfilho.pdf: 4581094 bytes, checksum: 84a3cc331dc0857a6d77bfa6ca795bb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-14T16:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_aguimarãesfilho.pdf: 4581094 bytes, checksum: 84a3cc331dc0857a6d77bfa6ca795bb5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Studies have shown that partial hepatectomia (HP) with removal of two thirds of the organ, in rodents, is followed by growth of remnant liver. In eukaryotic cells the enzyme malate dehydrogenase, from Krebs cycle, can be found in the cytoplasm (cytoplasmic malate dehydrogenase (MDH1) and in the mitochondrial matrix mitochondrial malate dehydrogenase (MDH2). Ammonia, a chemical compound that is toxic to animals, is produced in the course of metabolism. The liver actively participates in the mechanism of detoxification of ammonia. Two enzymes are involved in the disposal of excess ammonia in the cytosol: the glutamate dehydrogenase and glutamine synthetase which reduce α-ketoglutarate (AKG) to glutamate and glutamate to glutamine (GLN), respectively. Considering the effects of AKG and GLN in the liver of rodents, this study aims at assessing the metabolic enzyme changes that take place in regenerating livers after HP in rats treated with these amino acids. Anesthetized rats (Ketamine 50mg/mL + Xilazine 2% -1:0,5 mL) were submitted to HP and treated with calcium caseinate (CCA), L-glutamine (GLN) or ornithine alpha ketoglutarate (OKG) solutions administered by gavage, according to weight of each animal (0, 5gKg). One hundred and eight rats were distributed in 6 groups (n=18) and named according to the treatment used: G-1= Laparotomy (LAP) + CCA; G-2-HP+CCA; G-3 = LAP + GLN; G-4 HP + GLN; G-5 = LAP +ACG; G-6 = HP + ACG. Each group was redistributed into 3 subgroups. Blood and liver samples were collected on the 3rd, 7th and 14th postoperative days for quantification of metabolites (glucose, ketone bodies, lactate, pyruvate and ATP) and enzymes (MDH1 and MDH2). There was an increase of glycemia in 3rd day both in rats subjected to LAP and treated with ACG (G-5) as well as those submitted to HP and treated with GLN (G-3). There was significant reduction in expression of MDH1 enzyme in the liver in the 3rd and 14th day in rats subjected to LAP and treated with ACG and GLN (G-5 and G-3) compared to the control G-1 as well as in the expression of the enzyme MDH2 in 3rd day in the liver of G-6 and G-2 rats. Moreover no changes occurred in the expression of MDH2 in Group G-4 in relation to G-2. It is concluded that the surgical trauma in animals subjected to LAP or HP and treated with ACG or GLN induces increased glycemia in post-operative stage. ACG or GLN promotes reduction in expression of MDH1 enzyme in the liver of rats subjected to surgical trauma in 3rd and 14 days post surgery. ACG promotes reduction in the expression of MDH2 in the liver of rats undergoing HP or LAP only on the 3rd and 14 days post surgery, respectively. GLN given to HP rats does not alter the expression of MDH2 in the liver during the first 14 days post surgery. / Estudos demonstraram que a hepatectomia parcial (HP) com remoção de dois terços do órgão, em roedores, é seguida por crescimento do fígado remanescente. Em células eucariontes a enzima malato desidrogenase, do ciclo de Krebs, pode ser encontrada no citoplasma (malato desidrogenase citoplásmica – (MDH1) e na matriz mitocondrial (malato desidrogenase mitocondrial - MDH2). A amônia, um composto químico tóxico para os animais, é produzida no curso do metabolismo. O fígado participa ativamente do mecanismo de detoxificação da amônia. Duas enzimas participam da eliminação do excesso de amônia do citosol: a glutamato desidrogenase e a glutamina sintetase que reduzem o alfa-cetoglutarato (ACG) em glutamato e glutamato em glutamina (GLN), respectivamente. Considerando os efeitos do ACG e da GLN no fígado de roedores, este estudo tem como objetivo avaliar as alterações metabólicas e enzimáticas observadas em fígados em regeneração após HP em ratos tratados com esses aminoácidos. Ratos anestesiados (Ketamina 50mg/mL + Xilazina 2% -1:0,5 mL) foram submetidos a HP e tratados com soluções de caseinato de cálcio (CCA), L-glutamina (GLN) ou ornitina alfa cetoglutarato (OKG), administradas por gavagem, de acordo com massa de cada animal (0,5g/Kg). Cento e oito ratos foram distribuídos em 6 grupos (n=18) e denominados conforme o tratamento usado: G-1= Laparotomia (LAP) + CCA; G-2= HP + CCA; G-3 = LAP + GLN; G-4 = HP + GLN; G-5= LAP + ACG; G-6 = HP + ACG. Cada grupo foi redistribuído em 3 subgrupos. Amostras (sangue e fígado) foram coletadas no 3º, 7º e 14º dias do pós-operatório, para quantificação de metabólitos (glicose, corpos cetônicos, piruvato, lactato e ATP) e enzimas (MDH1 e MDH2). Houve aumento da glicemia no 3º dia tanto nos ratos submetidos a LAP e tratados com ACG (G-5) bem como naqueles submetidos a HP e tratados com GLN (grupo G-3 ).Houve redução significante na expressão da enzima MDH1 no fígado no 3º e 14º dia nos ratos submetidos a LAP e tratados com ACG e GLN (G-5 e G-3) em relação ao controle G-1 bem como na expressão da enzima MDH2 no 3º dia no fígado dos ratos do G-6 em relação ao G-2. Também não foram observadas alterações na expressão da enzima MDH2 no grupo G-4 em relação ao grupo G-2. Conclui-se que o trauma cirúrgico em animais submetidos a LAP ou HP e tratados com ACG ou GLN induz aumento da glicemia na fase pós-operatoria. A oferta de ACG ou GLN promove redução na expressão da enzima MDH1 no fígado de ratos submetidos ao trauma cirúrgico no 3º e 14º dias pós cirurgia. A oferta de ACG promove redução na expressão da enzima MDH2 no fígado de ratos submetidos à HP ou somente LAP no 3º e 14º dias pós cirurgia, respectivamente. A oferta de GLN à ratos hepatectomizados não altera a expressão da enzima MDH2 no fígado desses animais nos primeiros 14 dias pós cirurgia.

A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

A hepatectomia de 90% em murinos é um modelo de insuficiência hepática aguda. Recentemente, tem sido demonstrado que as plaquetas possuem um efeito importante na regeneração hepática. As plaquetas promovem a regeneração de tecidos através da liberação de fatores de crescimento tais como o Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e a Serotonina. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do plasma rico em plaquetas (PRP) em modelo de hepatectomia de 90% em ratos. Para isso, PRP ou medula óssea total (WBM) foram imobilizados em microcápsulas de alginato de sódio implantadas no peritônio de ratos imediatamente após a hepatectomia. O grupo controle recebeu cápsulas vazias (EC). Os animais foram sacrificados às 6, 12, 24, 48, 72 horas pós-hepatectomia (n=5-8/grupo/tempo) para avaliar a taxa de regeneração hepática, o índice mitótico, o índice de marcação com 5-bromo-2’-deoxiuridina (BrdU), HGF sérico, e a expressão no fígado remanescente de 5Ht2b e Pdgf. A taxa de sobrevida em 10 dias foi avaliada em outro grupo de animais (n=20/grupo). Foi observado que o grupo PRP apresentou a maior taxa de sobrevida aos 10 dias apesar da menor taxa de regeneração hepática em todos os tempos. Já o grupo EC mostrou uma taxa de regeneração maior nas primeiras 72 horas. O índice mitótico foi maior para o grupo PRP às 48 horas, porém o índice de BrdU não foi diferente entre os grupos em nenhum tempo. A expressão de 5Ht2b e Pdgf foi elevada no grupo PRP às 72 horas, entretanto o HGF sérico não apresentou diferenças entre os grupos. Estes resultados sugerem que o efeito benéfico do PRP pode ser mediado pelo incremento gradual e uniforme da taxa de regeneração e por uma resposta a fatores mitogênicos como a serotonina e o PDGF. / Ninety percent hepatectomy in rodents is a model for acute liver failure. Recently, it has been reported that platelet has a strong effect enhancing liver regeneration, due to its several growth factors such as Platelet Derived Growth Factor (PDGF) and serotonin. The aim of this study was to investigate the role of Platelet-Rich Plasma on 90% hepatectomy in rats. Platelet rich-plasma (PRP) or Whole Bone Marrow (WBM) were microencapsulated in sodium alginate and implanted in the peritoneum of rats immediately after 90% hepatectomy. Control group received empty capsules (EC). Animals were sacrificed at 6, 12, 24, 48, and 72 hours post hepatectomy (n=5-8/group/time) to evaluate liver regeneration rate, mitotic index, 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) labeling index, serum HGF, and 5Ht2b and Pdgf expression in liver. Survival rate in 10 days was also evaluated in a different set of animals (n=20/group). PRP group showed the highest survival rate at 10 days despite the lowest liver regeneration rate at any time point. EC group showed the highest regeneration rate in the first 72 hours. Mitotic index was highest in PRP group at 48 hours although BrdU index did not show any difference among groups. Gene expression of 5Ht2b and Pdgf was both up-regulated at 72 hours in PRP group, whereas serum HGF did not show any differences among groups. These results suggest that the beneficial effect of PRP may be mediated by a gradual increase in the regeneration rate and a response to mitogenic factors such as serotonin and PDGF.

A capacidade extraordinária de crescimento do tecido hepático pode ser estimulada por dois processos, a hepatectomia parcial ou pelo fornecimento de substâncias hepatotróficas. Neste trabalho, foi adotada a segunda opção para tratar fígados de rata com fibrose, verificando-se o efeito dos fatores hepatotróficos sobre o quadro histopatológico, a proporção volumétrica do colágeno e a condição funcional do fígado de ratas Wistar com fibrose induzida por dimetilnitrosamina. Após 5 semanas de tratamento. Os animais foram submetidos à biópsia hepática e divididos em 2 grupos: o Grupo C recebeu 40 ml/kg de solução fisiológica por via intraperitoneal a cada 12h, durante 10 dias consecutivos e o Grupo F recebeu fatores hepatotróficos na mesma dosagem e freqüência que as do Grupo C. O sangue foi colhido momentos antes do sacrifício e em seguida amostras dos fígados foram levadas à rotina de fixação e inclusão para microscopia de luz. O exame histopatológico mostrou a presença de lesões características de fibrose hepática, tais como: nódulos regenerativos, proliferação de ductos biliares, infiltrado inflamatório com presença de células ovais e megalocitose de hepatócitos, sendo que os animais do Grupo F apresentaram redução do quadro acima descrito. O peso dos animais do grupo F aumentou 13%, o peso do fígado aumentou 12,2% e o peso do fígado em relação ao peso da carcaça aumentou 16%. A densidade volumétrica do colágeno no lóbulo hepático reduziu-se em 43% no grupo F, enquanto que no Grupo C houve aumento de 6%. O colágeno perivascular na veia centrolobular aumentou 42,7% no grupo C e reduziu-se 43,4% no grupo F. No espaço porta o colágeno perivascular aumentou 6,7% no grupo C e reduziu 67,3% no grupo F. A concentração sérica de albumina no Grupo C foi de 3,8g/l e no Grupo F de 4,7g/l. A proteína total foi 6,1g/l no Grupo C e no Grupo F de 7g/l. A aspartato aminotransferase AST foi 148,3 U/l no Grupo C e 94,9 U/lno Grupo F, a alanina aminotransferase ALT foi 86,9 U/l no Grupo C e 44,1 U/l no Grupo F. Concluiu-se assim, que os fatores hepatotróficos injetados intraperitonealmente, reduziram o quadro histopatológico e a densidade volumétrica do colágeno, promovendo melhor resposta da função hepática no Grupo F quando comparado com o Grupo C. / The extraordinary capacity of growth of hepatic tissue can be stimulated by two processes, by the partial hepatectomy or by hepatotrophic substance supply. In this work, it was adopted the second option to treat rats with induced-fibrosis, verifying the effect of the hepatotrophic factors on the histopathological evaluation, the ratio volumetric of the collagen and the functional condition of the liver of Wistar rats with induced-fibrosis by dimetilnitrosamine. After 5 weeks of treatment, the animals had been submitted to hepatic biopsies and divided in 2 groups: Group C received 40 ml/kg of physiological solution by intraperitoneal application each 12h, during 10 consecutive days and Group F received hepatotrophic factors in same dosage and frequency of Group C. Blood collection was proceeded moments before the sacrifice and samples of the liver had been submitted to the light microscopy routine of fixation and inclusion. The histopathologic evaluation showed the presence of characteristic injuries of hepatic fibrosis, such as: regenerative nodules, biliar ducts proliferation, inflammatory infiltrated with presence of oval cells and hepatocyte megalocytes, and the animals of Group F presented reduction of the above description. The weight of the animals of group F increased 13%, the weight of the liver increased 12.2% and the weight of the liver in relation to the weight of the carcass increased 16%. The volumetric collagen density in hepatic lobe decreased 43% in group F, while in Group C it icreased 6%. The central lobular vein perivascular collagen increased in 42.7% in group C and decreased 43.4% in group F. In the portal space, the perivascular collagen increased 6.7% in group C and reduced 67.3% in group F. The serum concentration of albumen in Group C was 3,8g/l and in Group F 4,7g/l. The total protein was 6,1g/l in Group C and in Group F 7g/l. The aspartate aminotransferase AST was 148,3 U/l in 94,9 Group C and U/l in Group F, alanine aminotransferase ALT was 86,9 U/l in 44.1 Group C and U/l in Group F. We concluded the intraperitoneal hepatotrophic factors injection had reduced the histopathological signs and the collagen volumetric density, promoted better recovery of the hepatic function in Group F when compared to Group C.

A cirurgia do fígado apresentou extraordinário avanço desde a primeira ressecção planejada realizada por Langenbuch em 1888, e o primeiro transplante de fígado realizado por Starzl em 1963, até atualmente quando extensas ressecções e transplantes de partes do fígado são possíveis. Isso se deve graças, entre outros fatores, ao reconhecimento da grande capacidade regenerativa do fígado. A regeneração hepática tem sido objeto de estudo por quase 100 anos, no entanto, o mecanismo pelo qual o hepatócito é estimulado à replicação não foi completamente elucidado. As citocinas têm papel fundamental no mecanismo de regeneração do fígado, destacando-se entre elas o TNF- e a IL-6. Elas favorecem a indução de outras citocinas e estimulam a regeneração. Elas, no entanto, contribuem também no mecanismo de lesão do hepátocito em situações como a da isquemia e reperfusão. Alguns dados da literatura são conflitantes e mostram respostas diferentes na regeneração hepática provocadas pela inibição do TNF-. A pentoxifilina é um derivado da metilxantina que tem uma potente ação inibidora da síntese de TNF-. O presente estudo visa a avaliar o efeito da administração de pentoxifilina na regeneração hepática em ratos submetidos a ressecção de 70% do parênquima hepático. Os animais foram divididos em 4 grupos: Controle, grupo I (laparotomia), Grupo II (hepatectomia + salina) e grupo III (hepatectomia + pentoxifilina). Foram realizadas dosagens de transaminases (AST e ALT) 2, 6 e 48 horas após o procedimento, de citocinas (TNF- e IL-6) no soro e no tecido hepático 2 e 6 horas após a operação, e realizado estudo histológico para avaliação do índice mitótico e do PCNA com o intuito de quantificar a regeneração hepática 48 horas após o procedimento. Os resultados mostraram que a pentoxifilina foi efetiva no bloqueio do TNF- e da IL-6 no soro, mas não no tecido hepático dos animais, e que esse bloqueio melhorou a regeneração hepática documentada pelo índice mitótico e pelo PCNA. Pudemos então concluir que a pentoxifilina, nas condições do presente estudo, melhorou a regeneração do fígado após ressecção de 70% do parênquima hepático por mecanismo relacionado a redução das citocinas séricas e manutenção das citocinas do tecido hepático / Liver surgery has grown extraordinarily from the first planned ressection performed by Langenbuch in 1888, and the first successful orthotopic liver transplantation by Starzl in 1963 to the extended liver resections and living donors liver transplantations currently performed in many centers. It occurred, among others factors, because of the recognition of the great liver regenerative capacity. Liver regeneration has been object of study for almost 100 years. However the mechanism by which hepatocytes replication is stimulated is not completely elucidated. Cytokines, mainly TNF- and IL-6, play a pivotal role in liver regeneration mechanism. However they also contribute to hepatocytes damage mechanisms, like in ischemia-reperfusion injury. Indeed some studies are conflicting, and show different effects of TNF- inhibition in liver regeneration. Pentoxifylline is a methylxanthine compound known to inhibits TNF- production by monocytic cells. The present study aims to evaluate the effect of pentoxifylline in liver regeneration in rats submitted to 70% hepatectomy. The animals were randomized into 4 groups: Control, group I (sham), Group II (hepatectomy + saline) and group III (hepatectomy + pentoxifylline). AST and ALT serum levels were determined at 2, 6 and 48 hours after the procedure, TNF- and IL-6 serum levels and liver tissue levels were determined at 2 and 6 hours after the operation. Mitotic index and PCNA were performed to quantify liver regeneration 48 hours after the procedure. We found that pentoxifylline reduces TNF- and IL-6 serum levels, without changes in the liver tissue levels. These results were associated with an improvement liver regeneration evaluated by the mitotic index and the PCNA. We concluded that pentoxifylline improved liver regeneration after 70% hepatectomy by a mechanism that comprises blood but not hepatic cytokines reduction

Orientador: Rogério Saad Hosne / Coorientador: Regina El Did / Banca: Juan Carlos Llanos / Banca: André Ibrahim David / Resumo: Pacientes cirróticos com carcinoma hepatocelular (CHC) tem um elevado risco de complicações pós-operatórias . Para reduzir a morbidade e a possibilidade de insuficiência hepática , é essencial identificarmos os fatores de risco que estão associados com ressecções hepáticas. Alguns estudos têm mostrado que as plaquetas promovem regeneração do fígado após hepatectomia. O objetivo deste estudo foi o de esclarecer a importância da contagem de plaquetas como um preditor de insuficiência hepática pós- hepatectomia em pacientes cirróticos com CHC. Usando PUBMED , EMBASE e LILACS, uma pesquisa bibliográfica foi realizada para identificar os estudos que avaliaram a relação entre a baixa contagem de plaquetas (<100.000/mm³) e insuficiência hepática em pacientes cirróticos que foram submetidos à ressecção de CHC. Nosso desfecho primário de interesse foi insuficiência hepática pós- hepatectomia . Os desfechos secundários foram mortalidade, complicações e sobrevida global e livre de doença. Relacionadas à disfunção hepática , encontramos uma diferença significativa, mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ tiveram menor incidência de disfunção hepática em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,17 [IC 95% 0,11-0,27 ] , I2 = 0 %). Encontramos também uma diferença significativa , mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ apresentaram menor morbidade em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,42 [IC 95% 0,29-0,62 ] , I2 = 0 %). Além disso , verificou-se uma diferença significativa , mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ apresentaram menor mortalidade em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,12 [IC 95% 0,05-0,27 ] , I2 = 15%). A revisão atual corrobora com os achados que mostram que uma baixa contagem de plaquetas pré-operatória ... / Abstract: Patients with hepatocellular carcinoma and underlying liver diseases have a high risk of postoperative complications. To reduce morbidity and the possibility of liver failure, it is essential to identify the risk factors that are associated with hepatic resections. Some studies have shown that platelets promote liver regeneration after hepatic resection. The aim of this study was to clarify the importance of platelet count as a predictor of post-hepatectomy liver failure after liver resection for cirrhotic patients with HCC. Using PUBMED, EMBASE, and LILACS, a literature search were conducted to identify studies that evaluated the relationship between low platelet count (<100.000/mm³) and liver insufficiency in patients with underlying liver diseases who were undergoing resection of hepatocellular carcinoma. Our primary outcome of interest was post-hepatectomy liver failure. The secondary outcomes were mortality, major complications and disease-free and overall survivals. Related to liver dysfunction, we found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had lower incidence of liver dysfunction compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.17 [95% CI 0.11 to 0.27], I2=0%). We also found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had lower incidence of major complications compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.42 [95% CI 0.29 to 0.62 ], I2=0%). In addition, we found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had a lower occurrence of death compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.12 [95% CI 0.05 to 0.27], I2=15%). The current review corroborates the findings that a low preoperative platelet count is associated with liver dysfunction and with both postoperative major complications and mortality / Mestre

A capacidade extraordinária de crescimento do tecido hepático pode ser estimulada por dois processos, a hepatectomia parcial ou pelo fornecimento de substâncias hepatotróficas. Neste trabalho, foi adotada a segunda opção para tratar fígados de rata com fibrose, verificando-se o efeito dos fatores hepatotróficos sobre o quadro histopatológico, a proporção volumétrica do colágeno e a condição funcional do fígado de ratas Wistar com fibrose induzida por dimetilnitrosamina. Após 5 semanas de tratamento. Os animais foram submetidos à biópsia hepática e divididos em 2 grupos: o Grupo C recebeu 40 ml/kg de solução fisiológica por via intraperitoneal a cada 12h, durante 10 dias consecutivos e o Grupo F recebeu fatores hepatotróficos na mesma dosagem e freqüência que as do Grupo C. O sangue foi colhido momentos antes do sacrifício e em seguida amostras dos fígados foram levadas à rotina de fixação e inclusão para microscopia de luz. O exame histopatológico mostrou a presença de lesões características de fibrose hepática, tais como: nódulos regenerativos, proliferação de ductos biliares, infiltrado inflamatório com presença de células ovais e megalocitose de hepatócitos, sendo que os animais do Grupo F apresentaram redução do quadro acima descrito. O peso dos animais do grupo F aumentou 13%, o peso do fígado aumentou 12,2% e o peso do fígado em relação ao peso da carcaça aumentou 16%. A densidade volumétrica do colágeno no lóbulo hepático reduziu-se em 43% no grupo F, enquanto que no Grupo C houve aumento de 6%. O colágeno perivascular na veia centrolobular aumentou 42,7% no grupo C e reduziu-se 43,4% no grupo F. No espaço porta o colágeno perivascular aumentou 6,7% no grupo C e reduziu 67,3% no grupo F. A concentração sérica de albumina no Grupo C foi de 3,8g/l e no Grupo F de 4,7g/l. A proteína total foi 6,1g/l no Grupo C e no Grupo F de 7g/l. A aspartato aminotransferase AST foi 148,3 U/l no Grupo C e 94,9 U/lno Grupo F, a alanina aminotransferase ALT foi 86,9 U/l no Grupo C e 44,1 U/l no Grupo F. Concluiu-se assim, que os fatores hepatotróficos injetados intraperitonealmente, reduziram o quadro histopatológico e a densidade volumétrica do colágeno, promovendo melhor resposta da função hepática no Grupo F quando comparado com o Grupo C. / The extraordinary capacity of growth of hepatic tissue can be stimulated by two processes, by the partial hepatectomy or by hepatotrophic substance supply. In this work, it was adopted the second option to treat rats with induced-fibrosis, verifying the effect of the hepatotrophic factors on the histopathological evaluation, the ratio volumetric of the collagen and the functional condition of the liver of Wistar rats with induced-fibrosis by dimetilnitrosamine. After 5 weeks of treatment, the animals had been submitted to hepatic biopsies and divided in 2 groups: Group C received 40 ml/kg of physiological solution by intraperitoneal application each 12h, during 10 consecutive days and Group F received hepatotrophic factors in same dosage and frequency of Group C. Blood collection was proceeded moments before the sacrifice and samples of the liver had been submitted to the light microscopy routine of fixation and inclusion. The histopathologic evaluation showed the presence of characteristic injuries of hepatic fibrosis, such as: regenerative nodules, biliar ducts proliferation, inflammatory infiltrated with presence of oval cells and hepatocyte megalocytes, and the animals of Group F presented reduction of the above description. The weight of the animals of group F increased 13%, the weight of the liver increased 12.2% and the weight of the liver in relation to the weight of the carcass increased 16%. The volumetric collagen density in hepatic lobe decreased 43% in group F, while in Group C it icreased 6%. The central lobular vein perivascular collagen increased in 42.7% in group C and decreased 43.4% in group F. In the portal space, the perivascular collagen increased 6.7% in group C and reduced 67.3% in group F. The serum concentration of albumen in Group C was 3,8g/l and in Group F 4,7g/l. The total protein was 6,1g/l in Group C and in Group F 7g/l. The aspartate aminotransferase AST was 148,3 U/l in 94,9 Group C and U/l in Group F, alanine aminotransferase ALT was 86,9 U/l in 44.1 Group C and U/l in Group F. We concluded the intraperitoneal hepatotrophic factors injection had reduced the histopathological signs and the collagen volumetric density, promoted better recovery of the hepatic function in Group F when compared to Group C.

A cirurgia do fígado apresentou extraordinário avanço desde a primeira ressecção planejada realizada por Langenbuch em 1888, e o primeiro transplante de fígado realizado por Starzl em 1963, até atualmente quando extensas ressecções e transplantes de partes do fígado são possíveis. Isso se deve graças, entre outros fatores, ao reconhecimento da grande capacidade regenerativa do fígado. A regeneração hepática tem sido objeto de estudo por quase 100 anos, no entanto, o mecanismo pelo qual o hepatócito é estimulado à replicação não foi completamente elucidado. As citocinas têm papel fundamental no mecanismo de regeneração do fígado, destacando-se entre elas o TNF- e a IL-6. Elas favorecem a indução de outras citocinas e estimulam a regeneração. Elas, no entanto, contribuem também no mecanismo de lesão do hepátocito em situações como a da isquemia e reperfusão. Alguns dados da literatura são conflitantes e mostram respostas diferentes na regeneração hepática provocadas pela inibição do TNF-. A pentoxifilina é um derivado da metilxantina que tem uma potente ação inibidora da síntese de TNF-. O presente estudo visa a avaliar o efeito da administração de pentoxifilina na regeneração hepática em ratos submetidos a ressecção de 70% do parênquima hepático. Os animais foram divididos em 4 grupos: Controle, grupo I (laparotomia), Grupo II (hepatectomia + salina) e grupo III (hepatectomia + pentoxifilina). Foram realizadas dosagens de transaminases (AST e ALT) 2, 6 e 48 horas após o procedimento, de citocinas (TNF- e IL-6) no soro e no tecido hepático 2 e 6 horas após a operação, e realizado estudo histológico para avaliação do índice mitótico e do PCNA com o intuito de quantificar a regeneração hepática 48 horas após o procedimento. Os resultados mostraram que a pentoxifilina foi efetiva no bloqueio do TNF- e da IL-6 no soro, mas não no tecido hepático dos animais, e que esse bloqueio melhorou a regeneração hepática documentada pelo índice mitótico e pelo PCNA. Pudemos então concluir que a pentoxifilina, nas condições do presente estudo, melhorou a regeneração do fígado após ressecção de 70% do parênquima hepático por mecanismo relacionado a redução das citocinas séricas e manutenção das citocinas do tecido hepático / Liver surgery has grown extraordinarily from the first planned ressection performed by Langenbuch in 1888, and the first successful orthotopic liver transplantation by Starzl in 1963 to the extended liver resections and living donors liver transplantations currently performed in many centers. It occurred, among others factors, because of the recognition of the great liver regenerative capacity. Liver regeneration has been object of study for almost 100 years. However the mechanism by which hepatocytes replication is stimulated is not completely elucidated. Cytokines, mainly TNF- and IL-6, play a pivotal role in liver regeneration mechanism. However they also contribute to hepatocytes damage mechanisms, like in ischemia-reperfusion injury. Indeed some studies are conflicting, and show different effects of TNF- inhibition in liver regeneration. Pentoxifylline is a methylxanthine compound known to inhibits TNF- production by monocytic cells. The present study aims to evaluate the effect of pentoxifylline in liver regeneration in rats submitted to 70% hepatectomy. The animals were randomized into 4 groups: Control, group I (sham), Group II (hepatectomy + saline) and group III (hepatectomy + pentoxifylline). AST and ALT serum levels were determined at 2, 6 and 48 hours after the procedure, TNF- and IL-6 serum levels and liver tissue levels were determined at 2 and 6 hours after the operation. Mitotic index and PCNA were performed to quantify liver regeneration 48 hours after the procedure. We found that pentoxifylline reduces TNF- and IL-6 serum levels, without changes in the liver tissue levels. These results were associated with an improvement liver regeneration evaluated by the mitotic index and the PCNA. We concluded that pentoxifylline improved liver regeneration after 70% hepatectomy by a mechanism that comprises blood but not hepatic cytokines reduction

O fígado é um órgão que apresenta grande capacidade regenerativa após injúria. Contudo, é possível desencadear os processos regenerativos sem injúria, pelo uso de fatores hepatotróficos exógenos (FHE) injetados intraperitonealmente. Ainda há controvérsias em relação a essa via de administração. Neste trabalho foram testados dois protocolos de administração de uma solução de FHE (Parra et al., 1992): em duas doses diárias (2x) e três doses diárias (3x), sendo observado o efeito no crescimento e matriz extracelular (ME) hepática e o efeito do tratamento em outros órgãos viscerais. Os FHE (40 mg/kg) foram administrados intraperitonealmente em ratas Wistar por dez dias. Um grupo controle (C) recebeu solução salina. Amostras dos fígados foram observadas por microscopia óptica (parafina) e o colágeno foi quantificado por análise morfométrica com a coloração Picrossírius. Os animais do grupo 2x e 3x apresentaram aumento da massa do fígado de 30,1% e 22,5% respectivamente em relação ao grupo C. Ocorreu mortalidade (26,7%) no grupo 3x. Em ambos os grupos (2x e 3x) houve redução do colágeno intersticial em relação ao grupo C. Não houve alteração no quadro histológico dos demais órgãos analisados. Os FHE estimularam o crescimento hepático e a redução da proporção de colágeno tecidual. A administração em três doses diárias pode causar mortalidade, possivelmente pelo excessivo estresse da manipulação, o que não ocorreu no grupo 2x, não sendo recomendada esta abordagem no tratamento com FHE / The liver is an organ that presents great regenerative capacity after injury. However, it is possible to trigger the regenerative processes without previous with, for the use of exogenous hepatotrophics factors (HF) injected intraperitoneally. There are still controversies in relation to that of administration. In this work two protocols of administration of a solution of HF were tested: in two daily doses rates (2x) and three daily doses (3x), being observed the effect in the growth and extracellular liver matrix (ECM) and the effect of this treatment in other visceral organs. EHF (40 mg/kg) were administered intraperitoneally in female rats Wistar for ten days. A control group (C) received saline solution. Samples of the livers were observed by optical microscopy (paraffin) and the collagen was quantified by morfometric analysis with Picrossirius staining. The animals of the group 2x and 3x showed increase of the mass of the liver of 30,1% and 22,5% respectively in relation to the group C. Mortality happened (26,7%) in 3x group. In both groups (2x and 3x) there was reduction of the interstitial collagen in relation to the group C. There was not alteration in the histological picture of the other analyzed organs. HF stimulated the hepatic growth reduced the proportion of tissue collagen. The administration in three daily doses can cause mortality, possibly for the excessive stress of the manipulation, what didn\'t happen in the 2x group, not being recommended this approach in the treatment with HF