Fatores hepatotróficos (FH) possuem a capacidade de promover aumento de massa hepática em ratos e diminuição da fibrose em animais cirróticos. Os FH podem ser importantes nos casos de ressecção e transplantes hepáticos no qual o fígado remanescente necessita de um volume considerável para exercer suas funções após a cirurgia. Objetivou-se neste trabalho avaliar a cinética de uma solução de FH em fígados de animais sadios. Utilizou-se 105 ratos Wistar fêmeas divididos em 7 grupos de 15 animais cada. 6 grupos receberam solução de FH na dose 40 ml/kg/dia, i.p. e 1 grupo controle (CT) recebeu apenas solução salina 0,9%. Os animais foram eutanasiados com 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias (grupos 2, 4, 6, 8, 10 e 12) após o início do tratamento. Avaliou-se os parâmetros biométricos, a proliferação dos hepatócitos pela análise imuno-histoquímica (PCNA), morfometria do colágeno, função hepática e a expressão gênica de colágeno αI, TGFβ1, MMP 2 e PLAU. O aumento de massa hepática foi maior nos grupos 8, 10 e 12. A marcação de hepatócitos PCNA+ obteve seu pico no grupo 2. A morfometria do colágeno (mensurado pelo picrossírius) revelou redução nos grupos 6, 10 e 12 (o Grupo 8 não foi avaliado). A imunofluorescência para colágeno tipo III evidenciou redução do colágeno no grupo 12. Os resultados das enzimas de função hepática permaneceram normais. A expressão gênica do colágeno I obteve alta expressão diminuindo com o decorrer do tratamento; a ação do gene TGFβ1 indicou inibição da proliferação celular no grupo 12. MMP 2 e PLAU não demonstraram participar de forma efetiva no mecanismo de ação dos FHs. Os resultados demonstraram que a solução de FH promove a hipertrofia hepatocitária, sem alteração da função hepática e diminuindo o colágeno volumétrico do fígado. Os FH representam uma opção relevante ao tratamento de hepatopatias ou quando é necessário aumento de massa hepática antes de hepatectomias e/ou ressecções. / Hepatotrophic factors (HF) have the ability to the liver mass in rats and decrease fibrosis in cirrhotic rats. HFs can be important in cases of resection and liver transplantation in which the remnant liver needs to restore a considerable mass volume before surgery. Thus, this study evaluates the kinetics of HF solution in the livers of healthy animals. Were used 105 female Wistar rats divided into 7 groups of 15 animals each. 6 groups received HF solution at a dose 40 ml/kg/day, i.p. and 1 control group (CT) only received 0.9% saline solution. The animals were euthanized at 2, 4, 6, 8, 10 and 12 days (groups 2, 4, 6, 8, 10 and 12) after starting treatment. The biometric parameters, proliferation of hepatocytes by immunohistochemical analysis (PCNA), collagen morphometry, liver biochemical function and gene expression of collagen αI, TGFβ1, MMP 2 and PLAU. The increase in liver mass was greater in groups 8, 10 and 12. The index of hepatocytes PCNA+ peak obtained in group 2. Morphometry of collagen (measured by picrosirius red) revealed reduction in groups 6, 10 and 12 (Group 8 was not evaluated). Immunofluorescence for collagen type III showed reduction of collagen in group 12. The results of the enzymes of liver function remained normal. Gene expression of collagen I expression was higher decreasing over the course of treatment; the action of TGFβ1 gene showed inhibition of cell proliferation in group 12. MMP 2 and PLAU not shown to effectively participate in the mechanism of action of HFs. The results showed that the solution of HF promotes hepatocyte hypertrophy with no change in liver function and decreasing the volume of liver collagen. Therefore, HFs represents an important option for treatment of chronic liver diseases or when it is necessary to increase liver mass before hepatectomy and/or resections.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:39:01Z : No. of bitstreams: 1 000741878.pdf: 589831 bytes, checksum: 77c3f4dbd87f15940c0008b346021feb (MD5) / Pacientes cirróticos com carcinoma hepatocelular (CHC) tem um elevado risco de complicações pós-operatórias . Para reduzir a morbidade e a possibilidade de insuficiência hepática , é essencial identificarmos os fatores de risco que estão associados com ressecções hepáticas. Alguns estudos têm mostrado que as plaquetas promovem regeneração do fígado após hepatectomia. O objetivo deste estudo foi o de esclarecer a importância da contagem de plaquetas como um preditor de insuficiência hepática pós- hepatectomia em pacientes cirróticos com CHC. Usando PUBMED , EMBASE e LILACS, uma pesquisa bibliográfica foi realizada para identificar os estudos que avaliaram a relação entre a baixa contagem de plaquetas (<100.000/mm³) e insuficiência hepática em pacientes cirróticos que foram submetidos à ressecção de CHC. Nosso desfecho primário de interesse foi insuficiência hepática pós- hepatectomia . Os desfechos secundários foram mortalidade, complicações e sobrevida global e livre de doença. Relacionadas à disfunção hepática , encontramos uma diferença significativa, mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ tiveram menor incidência de disfunção hepática em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,17 [IC 95% 0,11-0,27 ] , I2 = 0 %). Encontramos também uma diferença significativa , mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ apresentaram menor morbidade em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,42 [IC 95% 0,29-0,62 ] , I2 = 0 %). Além disso , verificou-se uma diferença significativa , mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ apresentaram menor mortalidade em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,12 [IC 95% 0,05-0,27 ] , I2 = 15%). A revisão atual corrobora com os achados que mostram que uma baixa contagem de plaquetas pré-operatória... / Patients with hepatocellular carcinoma and underlying liver diseases have a high risk of postoperative complications. To reduce morbidity and the possibility of liver failure, it is essential to identify the risk factors that are associated with hepatic resections. Some studies have shown that platelets promote liver regeneration after hepatic resection. The aim of this study was to clarify the importance of platelet count as a predictor of post-hepatectomy liver failure after liver resection for cirrhotic patients with HCC. Using PUBMED, EMBASE, and LILACS, a literature search were conducted to identify studies that evaluated the relationship between low platelet count (<100.000/mm³) and liver insufficiency in patients with underlying liver diseases who were undergoing resection of hepatocellular carcinoma. Our primary outcome of interest was post-hepatectomy liver failure. The secondary outcomes were mortality, major complications and disease-free and overall survivals. Related to liver dysfunction, we found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had lower incidence of liver dysfunction compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.17 [95% CI 0.11 to 0.27], I2=0%). We also found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had lower incidence of major complications compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.42 [95% CI 0.29 to 0.62 ], I2=0%). In addition, we found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had a lower occurrence of death compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.12 [95% CI 0.05 to 0.27], I2=15%). The current review corroborates the findings that a low preoperative platelet count is associated with liver dysfunction and with both postoperative major complications and mortality

O fígado é um órgão que apresenta grande capacidade regenerativa após injúria. Contudo, é possível desencadear os processos regenerativos sem injúria, pelo uso de fatores hepatotróficos exógenos (FHE) injetados intraperitonealmente. Ainda há controvérsias em relação a essa via de administração. Neste trabalho foram testados dois protocolos de administração de uma solução de FHE (Parra et al., 1992): em duas doses diárias (2x) e três doses diárias (3x), sendo observado o efeito no crescimento e matriz extracelular (ME) hepática e o efeito do tratamento em outros órgãos viscerais. Os FHE (40 mg/kg) foram administrados intraperitonealmente em ratas Wistar por dez dias. Um grupo controle (C) recebeu solução salina. Amostras dos fígados foram observadas por microscopia óptica (parafina) e o colágeno foi quantificado por análise morfométrica com a coloração Picrossírius. Os animais do grupo 2x e 3x apresentaram aumento da massa do fígado de 30,1% e 22,5% respectivamente em relação ao grupo C. Ocorreu mortalidade (26,7%) no grupo 3x. Em ambos os grupos (2x e 3x) houve redução do colágeno intersticial em relação ao grupo C. Não houve alteração no quadro histológico dos demais órgãos analisados. Os FHE estimularam o crescimento hepático e a redução da proporção de colágeno tecidual. A administração em três doses diárias pode causar mortalidade, possivelmente pelo excessivo estresse da manipulação, o que não ocorreu no grupo 2x, não sendo recomendada esta abordagem no tratamento com FHE / The liver is an organ that presents great regenerative capacity after injury. However, it is possible to trigger the regenerative processes without previous with, for the use of exogenous hepatotrophics factors (HF) injected intraperitoneally. There are still controversies in relation to that of administration. In this work two protocols of administration of a solution of HF were tested: in two daily doses rates (2x) and three daily doses (3x), being observed the effect in the growth and extracellular liver matrix (ECM) and the effect of this treatment in other visceral organs. EHF (40 mg/kg) were administered intraperitoneally in female rats Wistar for ten days. A control group (C) received saline solution. Samples of the livers were observed by optical microscopy (paraffin) and the collagen was quantified by morfometric analysis with Picrossirius staining. The animals of the group 2x and 3x showed increase of the mass of the liver of 30,1% and 22,5% respectively in relation to the group C. Mortality happened (26,7%) in 3x group. In both groups (2x and 3x) there was reduction of the interstitial collagen in relation to the group C. There was not alteration in the histological picture of the other analyzed organs. HF stimulated the hepatic growth reduced the proportion of tissue collagen. The administration in three daily doses can cause mortality, possibly for the excessive stress of the manipulation, what didn\'t happen in the 2x group, not being recommended this approach in the treatment with HF

O fígado é um órgão importante para se analisar como o animal reage a agressões químicas. Um dos métodos utlizado para estudar a regeneração hepática é a hepatectomia parcial (HP). Assim, nosso objetivo foi verificar a influência da hepatectomia de 30% e de 70% sobre a taxa de proliferação das células hepática medida pela incorporação de BrdU na região da incisão e no resto do fígado e a proliferação de ductos biliares e de células epiteliais pré-ductulares biliares (CEPDBs) com o uso de uma combinação de 2 anticorpos específicos para citoqueratinas humanas, AE1/AE3. O pico de proliferação nos animais que sofreram HP de 30% do parênquima hepático deu-se após 1 dia da cirurgia enquanto que os animais que sofreram a HP de 70% o pico ocorreu no terceiro dia após a cirurgia.O índice de proliferação foi semelhante para a região próxima ou distante do corte. Para ambas as HP não houve diferença na regeneração do tecido retirado próximo ou distante da área de incisão. Nas regiões distantes da HP havia maior número de ductos havendo o pico do número de ductos coincidindo com o pico de proliferação celular de ambas as HP. Depois da HP o número de CEPDBs cresce consideravelmente. Os pico de proliferação também ocorreram no primeiro e terceiro dia para a HP de 30% e de 70% respectivamente, sendo mais altos na região distante do corte. Assim, durante a regeneração do fígado de C. gariepinus ocorre hiperplasia compensatória por proliferação de hepatócitos, de ductos biliares e de CEPDBs. A hepatectomia de 30% gerou uma resposta regenerativa intensa e é menos traumática para o animal, a região distante do corte reage mais intensamente que a região próxima do corte no que se refere aos ductos biliares e as CEPDBs. / The liver is an important organ in studies aimed to the verification of animals reactions to chemical injuries. The partial hepatectomy (PH) is one of the methods that are usually employed in hepatic regeneration experiments. Our objectives in this work were to verify the influence of 30% and 70% PH on the hepatic cells proliferation index as it is measured by BrdU nuclear uptake in two regions: close to the hepatic surgery region and in a farther region. The biliary ducts and bile preductular epithelial cells (BPDECs) proliferation was quantified with a combination of two antibodies against the human cytokeratins AE1/AE3. The proliferation index peak in 30% hepatectomy animals occurred one day after the surgery, but in 70% hepatectomy animals the peak was only observed after three days from the surgery. Differences between the proliferation index of the close and the far region were not observed and likewise histological differences were absent. In the regions far from the PH site more biliary ducts were counted than in closer regions, but the peaks were coincident in both regions with the hepatocytes proliferation index. It was also observed that the quantity of BPDECs increased. The peaks occurred in the first and third days for the 30% and 70% PH respectively, and both peaks were higher in the region far from the PH site. We may conclude that C. gariepinus liver regeneration after 30% and 70% PH occurs by means of compensatory hyperplasia by hepatocytes, biliary ducts and BPDECs proliferation. The 30% HP stimulated a strong regenerative response and is less traumatic to the animals. The regions far from the PH site reacts more intensely that the close region concerning the stimulation of biliary ducts and BPDECs proliferation.

Fatores hepatotróficos (FH) possuem a capacidade de promover aumento de massa hepática em ratos e diminuição da fibrose em animais cirróticos. Os FH podem ser importantes nos casos de ressecção e transplantes hepáticos no qual o fígado remanescente necessita de um volume considerável para exercer suas funções após a cirurgia. Objetivou-se neste trabalho avaliar a cinética de uma solução de FH em fígados de animais sadios. Utilizou-se 105 ratos Wistar fêmeas divididos em 7 grupos de 15 animais cada. 6 grupos receberam solução de FH na dose 40 ml/kg/dia, i.p. e 1 grupo controle (CT) recebeu apenas solução salina 0,9%. Os animais foram eutanasiados com 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias (grupos 2, 4, 6, 8, 10 e 12) após o início do tratamento. Avaliou-se os parâmetros biométricos, a proliferação dos hepatócitos pela análise imuno-histoquímica (PCNA), morfometria do colágeno, função hepática e a expressão gênica de colágeno &alpha;I, TGF&beta;1, MMP 2 e PLAU. O aumento de massa hepática foi maior nos grupos 8, 10 e 12. A marcação de hepatócitos PCNA+ obteve seu pico no grupo 2. A morfometria do colágeno (mensurado pelo picrossírius) revelou redução nos grupos 6, 10 e 12 (o Grupo 8 não foi avaliado). A imunofluorescência para colágeno tipo III evidenciou redução do colágeno no grupo 12. Os resultados das enzimas de função hepática permaneceram normais. A expressão gênica do colágeno I obteve alta expressão diminuindo com o decorrer do tratamento; a ação do gene TGF&beta;1 indicou inibição da proliferação celular no grupo 12. MMP 2 e PLAU não demonstraram participar de forma efetiva no mecanismo de ação dos FHs. Os resultados demonstraram que a solução de FH promove a hipertrofia hepatocitária, sem alteração da função hepática e diminuindo o colágeno volumétrico do fígado. Os FH representam uma opção relevante ao tratamento de hepatopatias ou quando é necessário aumento de massa hepática antes de hepatectomias e/ou ressecções. / Hepatotrophic factors (HF) have the ability to the liver mass in rats and decrease fibrosis in cirrhotic rats. HFs can be important in cases of resection and liver transplantation in which the remnant liver needs to restore a considerable mass volume before surgery. Thus, this study evaluates the kinetics of HF solution in the livers of healthy animals. Were used 105 female Wistar rats divided into 7 groups of 15 animals each. 6 groups received HF solution at a dose 40 ml/kg/day, i.p. and 1 control group (CT) only received 0.9% saline solution. The animals were euthanized at 2, 4, 6, 8, 10 and 12 days (groups 2, 4, 6, 8, 10 and 12) after starting treatment. The biometric parameters, proliferation of hepatocytes by immunohistochemical analysis (PCNA), collagen morphometry, liver biochemical function and gene expression of collagen &alpha;I, TGF&beta;1, MMP 2 and PLAU. The increase in liver mass was greater in groups 8, 10 and 12. The index of hepatocytes PCNA+ peak obtained in group 2. Morphometry of collagen (measured by picrosirius red) revealed reduction in groups 6, 10 and 12 (Group 8 was not evaluated). Immunofluorescence for collagen type III showed reduction of collagen in group 12. The results of the enzymes of liver function remained normal. Gene expression of collagen I expression was higher decreasing over the course of treatment; the action of TGF&beta;1 gene showed inhibition of cell proliferation in group 12. MMP 2 and PLAU not shown to effectively participate in the mechanism of action of HFs. The results showed that the solution of HF promotes hepatocyte hypertrophy with no change in liver function and decreasing the volume of liver collagen. Therefore, HFs represents an important option for treatment of chronic liver diseases or when it is necessary to increase liver mass before hepatectomy and/or resections.

O fígado é um órgão importante para se analisar como o animal reage a agressões químicas. Um dos métodos utlizado para estudar a regeneração hepática é a hepatectomia parcial (HP). Assim, nosso objetivo foi verificar a influência da hepatectomia de 30% e de 70% sobre a taxa de proliferação das células hepática medida pela incorporação de BrdU na região da incisão e no resto do fígado e a proliferação de ductos biliares e de células epiteliais pré-ductulares biliares (CEPDBs) com o uso de uma combinação de 2 anticorpos específicos para citoqueratinas humanas, AE1/AE3. O pico de proliferação nos animais que sofreram HP de 30% do parênquima hepático deu-se após 1 dia da cirurgia enquanto que os animais que sofreram a HP de 70% o pico ocorreu no terceiro dia após a cirurgia.O índice de proliferação foi semelhante para a região próxima ou distante do corte. Para ambas as HP não houve diferença na regeneração do tecido retirado próximo ou distante da área de incisão. Nas regiões distantes da HP havia maior número de ductos havendo o pico do número de ductos coincidindo com o pico de proliferação celular de ambas as HP. Depois da HP o número de CEPDBs cresce consideravelmente. Os pico de proliferação também ocorreram no primeiro e terceiro dia para a HP de 30% e de 70% respectivamente, sendo mais altos na região distante do corte. Assim, durante a regeneração do fígado de C. gariepinus ocorre hiperplasia compensatória por proliferação de hepatócitos, de ductos biliares e de CEPDBs. A hepatectomia de 30% gerou uma resposta regenerativa intensa e é menos traumática para o animal, a região distante do corte reage mais intensamente que a região próxima do corte no que se refere aos ductos biliares e as CEPDBs. / The liver is an important organ in studies aimed to the verification of animals reactions to chemical injuries. The partial hepatectomy (PH) is one of the methods that are usually employed in hepatic regeneration experiments. Our objectives in this work were to verify the influence of 30% and 70% PH on the hepatic cells proliferation index as it is measured by BrdU nuclear uptake in two regions: close to the hepatic surgery region and in a farther region. The biliary ducts and bile preductular epithelial cells (BPDECs) proliferation was quantified with a combination of two antibodies against the human cytokeratins AE1/AE3. The proliferation index peak in 30% hepatectomy animals occurred one day after the surgery, but in 70% hepatectomy animals the peak was only observed after three days from the surgery. Differences between the proliferation index of the close and the far region were not observed and likewise histological differences were absent. In the regions far from the PH site more biliary ducts were counted than in closer regions, but the peaks were coincident in both regions with the hepatocytes proliferation index. It was also observed that the quantity of BPDECs increased. The peaks occurred in the first and third days for the 30% and 70% PH respectively, and both peaks were higher in the region far from the PH site. We may conclude that C. gariepinus liver regeneration after 30% and 70% PH occurs by means of compensatory hyperplasia by hepatocytes, biliary ducts and BPDECs proliferation. The 30% HP stimulated a strong regenerative response and is less traumatic to the animals. The regions far from the PH site reacts more intensely that the close region concerning the stimulation of biliary ducts and BPDECs proliferation.

A perda do parênquima hepático, induzida por tratamento agudo, cirúrgico ou químico, desencadeia um processo regenerativo até que a massa hepática seja completamente restaurada. A regeneração hepática, após a hepatectomia parcial de 70%, é um dos modelos mais adequados de regeneração de células, órgãos e tecidos mais estudados. No fígado, ainda que sejam atribuídas propriedades regenerativas, muitas das lesões são tão prejudiciais que este mecanismo de reparação é insuficiente, tornando o transplante a única opção. As células derivadas do broto hepático de ratos apresentam uma boa alternativa para tratamento de doenças hepáticas devido ao seu alto índice proliferativo e da expressão de marcadores de pluripotência, sendo sua aplicabilidade viável em modelos experimentais. O objetivo deste trabalho foi analisar as diferentes vias de administração das células derivadas do broto hepático de ratos com 12,5 dias de gestação visando a melhor regeneração do órgão. Foram realizados experimentos de hepatectomia parcial de 70% (N=50 animais), PET Scan MSFX PRO In-Vivo RX e fluorescência, índice hepatossomático, análise de marcadores solúveis (GH, AFP, CEA, IGF-1), análises hematológicas, microscopia de luz (coloração HE, Tricômio de Masson), análise de marcadores por citometria de fluxo (CD90, STRO-1, Nanog, Oct3/4, Ki-67, Caspase 3) e ciclo celular por citometria de fluxo. Nossos dados demonstraram que as células do broto hepático administradas na via endotraqueal apresentaram melhor equilíbrio entre proliferação e morte celular, com maior expressão dos marcadores de pluripotência, melhor organização celular e regeneração tecidual, em contraste com outras vias, incluindo endovenosa, intraperitoneal e oroenteral. Isto a torna mais segura e de maior viabilidade na regeneração celular em relação às demais vias, sendo mais eficiente nos modelos de hepatectomia parcial / The restoration of liver parenchyma after partial hepatectomy or chemical treatments represents appropriate models to study regeneration mechanisms. The most appropriate model for liver regeneration is partial hepatectomy of 70%, however, organ repair properties are insufficient, suggesting the transplantation the best alternative to treat liver diseases. Cells derived from liver buds of rats show a high proliferative index and the expression of pluripotency markers; thus their significance for regeneration purposes can be tested experimentally. We here investigated different routes to administer cells derived from rat live buds of 12.5 days of gestation to adult individuals (N=50 animals) suffering from partial hepatectomy (70%). Applied methods included PET Scan MSFX PRO In-Vivo RX, fluorescence hepatossomatic index, analysis of soluble markers (GH, AFP, CEA, IGF-1), hematological analysis, light microscopy (staining HE, and Masson trichrome) as well as flow cytometry for cell cycle analysis and CD90, STRO-1, Nanog, OCT3/4, Ki-67, Caspase 3 expression. Our data showed that administration via the tracheal route resulted as favorite in regard to the balance between proliferation and cell deaths, of pluripotency marker expression, cellular organization and tissue regeneration, in contrast to other routes including: intravenous, intraperitoneal and oroenteral. Consequently, the tracheal route showed safer and more efficient treatment to enhance cell regeneration after partial hepatectomy

INTRODUÇÃO: O transplante hepático é o único tratamento efetivo para uma variedade de doenças hepáticas irreversíveis. No entanto, o número limitado de doadores pediátricos leva ao uso de enxertos hepáticos de doadores adultos, com necessidade de anastomoses vasculares mais complexas. Essas anastomoses tornam-se complicadas pela diferença no calibre dos vasos entre o doador e o receptor, resultando em alterações do fluxo sanguíneo, estenose da anastomose venosa ou arterial e trombose. Os efeitos para regeneração hepática decorrentes da privação do fluxo sanguíneo pela veia porta ou pela artéria hepática não estão completamente elucidados. Experimentalmente, quando um lobo do fígado não recebe o fluxo venoso portal, é observada atrofia deste segmento e hipertrofia do restante do órgão perfundido. Embora existam vários modelos experimentais para estudo da regeneração hepática, poucos são focados em animais em crescimento. Além disso, os efeitos regenerativos de drogas como o tacrolimus e a insulina precisam ser pesquisados, com o objetivo de encontrar um tratamento ideal para a insuficiência hepática ou um método de estimular a regeneração do fígado após ressecções ou transplantes parciais. O objetivo do presente estudo é descrever modelos de regeneração hepática em ratos em crescimento com: 1) ausência de fluxo hepático arterial e 2) redução do fluxo portal. Adicionalmente, o estudo avalia o efeito pró-regenerativo do tacrolimus e da insulina nesses modelos descritos. MÉTODOS: cento e vinte ratos (entre 50 e 100g de peso) foram divididos em 6 grupos, de acordo com o tipo de intervenção cirúrgica: Grupo 1, incisão abdominal sem intervenção hepática; Grupo 2, hepatectomia a 70%; Grupo 3, hepatectomia a 70% + estenose de veia porta; Grupo 4, hepatectomia a 70% + ligadura da artéria hepática; Grupo 5, hepatectomia a 70% + estenose de veia porta + insulina; Grupo 6, hepatectomia a 70% + estenose de veia porta + tacrolimus. Os animais dos grupos 1 ao 4 foram subdivididos em 5 subgrupos de acordo com o momento da morte: 1, 2, 3, 5 e 10 dias após a intervenção cirúrgica. Os animais dos grupos 5 e 6 foram subdividos em 2 subgrupos de acordo com o momento da morte: 2 e 10 dias após a intervenção cirúrgica. Os lobos hepáticos remanescentes foram submetidos à análise histomorfométrica, imuno-histoquímica e molecular. RESULTADOS: Verificou-se que no grupo com hepatectomia a 70% houve recuperação do peso do fígado no terceiro dia com aumento da atividade mitótica, enquanto que no grupo com estenose portal não se observou esse fenômeno (p < 0,001). A insulina e o tacrolimus promoveram aumento do peso do fígado e do índice mitótico. A atividade mitótica foi considerada aumentada nos animais dos grupos hepatectomia, hepatectomia + ligadura da artéria, insulina e tacrolimus; e esse parâmetro estava reduzido no grupo submetido à hepatectomia + estenose portal (p < 0,001). A expressão de interleucina 6 estava presente em todos os animais, sendo significativamente maior nos grupos hepatectomia, hepatectomia + ligadura da artéria e significativamente menor no grupo hepatectomia + estenose portal. Entretanto, a administração de tacrolimus ou insulina recuperou os níveis teciduais de interleucina 6 no grupo com estenose portal. CONCLUSÕES: No presente estudo foi padronizado um modelo simples e facilmente reprodutível para estudar a regeneração hepática em ratos em crescimento com redução do fluxo arterial ou venoso para o fígado. Foi demonstrado que a administração de insulina ou tacrolimus é capaz de reverter os efeitos deletérios da estenose portal na regeneração hepática. A obstrução do fluxo arterial não afetou a capacidade regenerativa hepática / BACKGROUND/PURPOSE: Liver transplantation is an effective treatment for a variety of irreversible liver diseases. However, the limited number of pediatric donor livers leads to the use of adult livers, which usually require more complex vascular anastomoses. These anastomoses are complicated by differences in vessel caliber between donors and recipients, resulting in vascular flow anomalies, stenosis of the venous or arterial anastomosis and thrombosis . The effects of portal vein or hepatic arterial flow privation in hepatic regeneration have not been completely elucidated. Experimentally, when a liver lobe is deprived of portal vein flow, atrophy is observed with hypertrophy of the other perfused parts of the organ, and interleukin-6 (IL-6) is required for normal liver regeneration. Although several experimental models are currently used to study the liver regeneration mechanisms, few studies have focused on the growing animal. In addition, the regenerative effects of drugs (e.g., tacrolimus and insulin) have been experimentally studied, aiming to find an ideal treatment for hepatic failure or a method of stimulating liver regeneration after extensive resection or partial transplants. The aim of the present investigation was to describe the new models of liver regeneration in growing rats with: 1) absence of arterial blood hepatic inflow and 2) reduced portal flow. Additionally, it was studied whether tacrolimus or insulin could have any pro-regenerative effect under such conditions. METHODS/MATERIALS: one hundred and twenty rats (50-100 g body weight) were divided into 6 groups based on the intervention type: Group 1 (sham), abdominal incision without intervention; Group 2, 70% hepatectomy; Group 3, 70% hepatectomy + portal vein stenosis; Group 4, 70% hepatectomy + ligation of the hepatic artery; Group 5, 70% hepatectomy + portal vein stenosis + insulin; and Group 6, 70% hepatectomy + portal vein stenosis + tacrolimus. Animals in groups 1 to 4 were subdivided into 5 groups according to the moment of death: 1, 2, 3, 5 and 10 days after surgical intervention. The animals in groups 5 and 6 were subdivided into 2 other groups according to the moment of death: 2 and 10 days after surgical intervention. The remnant liver lobes were harvested for morphological, histological histomorphometric, immunohistochemical and molecular analyses. RESULTS: it was verified that the hepatectomy group regained liver weight on the third day and had increased mitotic activity, and the portal vein stenosis prevented these phenomena, as well as the increased mitotic index (P < 0.001). In addition, insulin and tacrolimus promoted a significant increase of liver weight. Mitotic activity was considerably increased in the hepatectomy, hepatectomy + arterial ligature, insulin and tacrolimus groups and this parameter was reduced by portal vein stenosis. The expression of the interleukin-6 (IL-6) gene was present in all the animal groups. Tissue levels of IL- 6 were significantly increased by hepatectomy and hepatectomy + hepatic artery ligature; portal vein stenosis prevented this change. However, the administration of tacrolimus or insulin could recuperate the tissue levels of IL-6. CONCLUSION: In the present study a simple and highly reproducible model was standardized to study liver regeneration with portal vein or hepatic artery blood inflow reduction in growing rats. It was demonstrated that insulin or tacrolimus administration may partially reverse the harmful effects of portal vein stenosis. The obstruction of the arterial flow did not affect liver regeneration

INTRODUÇÃO: O transplante hepático é o único tratamento efetivo para uma variedade de doenças hepáticas irreversíveis. No entanto, o número limitado de doadores pediátricos leva ao uso de enxertos hepáticos de doadores adultos, com necessidade de anastomoses vasculares mais complexas. Essas anastomoses tornam-se complicadas pela diferença no calibre dos vasos entre o doador e o receptor, resultando em alterações do fluxo sanguíneo, estenose da anastomose venosa ou arterial e trombose. Os efeitos para regeneração hepática decorrentes da privação do fluxo sanguíneo pela veia porta ou pela artéria hepática não estão completamente elucidados. Experimentalmente, quando um lobo do fígado não recebe o fluxo venoso portal, é observada atrofia deste segmento e hipertrofia do restante do órgão perfundido. Embora existam vários modelos experimentais para estudo da regeneração hepática, poucos são focados em animais em crescimento. Além disso, os efeitos regenerativos de drogas como o tacrolimus e a insulina precisam ser pesquisados, com o objetivo de encontrar um tratamento ideal para a insuficiência hepática ou um método de estimular a regeneração do fígado após ressecções ou transplantes parciais. O objetivo do presente estudo é descrever modelos de regeneração hepática em ratos em crescimento com: 1) ausência de fluxo hepático arterial e 2) redução do fluxo portal. Adicionalmente, o estudo avalia o efeito pró-regenerativo do tacrolimus e da insulina nesses modelos descritos. MÉTODOS: cento e vinte ratos (entre 50 e 100g de peso) foram divididos em 6 grupos, de acordo com o tipo de intervenção cirúrgica: Grupo 1, incisão abdominal sem intervenção hepática; Grupo 2, hepatectomia a 70%; Grupo 3, hepatectomia a 70% + estenose de veia porta; Grupo 4, hepatectomia a 70% + ligadura da artéria hepática; Grupo 5, hepatectomia a 70% + estenose de veia porta + insulina; Grupo 6, hepatectomia a 70% + estenose de veia porta + tacrolimus. Os animais dos grupos 1 ao 4 foram subdivididos em 5 subgrupos de acordo com o momento da morte: 1, 2, 3, 5 e 10 dias após a intervenção cirúrgica. Os animais dos grupos 5 e 6 foram subdividos em 2 subgrupos de acordo com o momento da morte: 2 e 10 dias após a intervenção cirúrgica. Os lobos hepáticos remanescentes foram submetidos à análise histomorfométrica, imuno-histoquímica e molecular. RESULTADOS: Verificou-se que no grupo com hepatectomia a 70% houve recuperação do peso do fígado no terceiro dia com aumento da atividade mitótica, enquanto que no grupo com estenose portal não se observou esse fenômeno (p < 0,001). A insulina e o tacrolimus promoveram aumento do peso do fígado e do índice mitótico. A atividade mitótica foi considerada aumentada nos animais dos grupos hepatectomia, hepatectomia + ligadura da artéria, insulina e tacrolimus; e esse parâmetro estava reduzido no grupo submetido à hepatectomia + estenose portal (p < 0,001). A expressão de interleucina 6 estava presente em todos os animais, sendo significativamente maior nos grupos hepatectomia, hepatectomia + ligadura da artéria e significativamente menor no grupo hepatectomia + estenose portal. Entretanto, a administração de tacrolimus ou insulina recuperou os níveis teciduais de interleucina 6 no grupo com estenose portal. CONCLUSÕES: No presente estudo foi padronizado um modelo simples e facilmente reprodutível para estudar a regeneração hepática em ratos em crescimento com redução do fluxo arterial ou venoso para o fígado. Foi demonstrado que a administração de insulina ou tacrolimus é capaz de reverter os efeitos deletérios da estenose portal na regeneração hepática. A obstrução do fluxo arterial não afetou a capacidade regenerativa hepática / BACKGROUND/PURPOSE: Liver transplantation is an effective treatment for a variety of irreversible liver diseases. However, the limited number of pediatric donor livers leads to the use of adult livers, which usually require more complex vascular anastomoses. These anastomoses are complicated by differences in vessel caliber between donors and recipients, resulting in vascular flow anomalies, stenosis of the venous or arterial anastomosis and thrombosis . The effects of portal vein or hepatic arterial flow privation in hepatic regeneration have not been completely elucidated. Experimentally, when a liver lobe is deprived of portal vein flow, atrophy is observed with hypertrophy of the other perfused parts of the organ, and interleukin-6 (IL-6) is required for normal liver regeneration. Although several experimental models are currently used to study the liver regeneration mechanisms, few studies have focused on the growing animal. In addition, the regenerative effects of drugs (e.g., tacrolimus and insulin) have been experimentally studied, aiming to find an ideal treatment for hepatic failure or a method of stimulating liver regeneration after extensive resection or partial transplants. The aim of the present investigation was to describe the new models of liver regeneration in growing rats with: 1) absence of arterial blood hepatic inflow and 2) reduced portal flow. Additionally, it was studied whether tacrolimus or insulin could have any pro-regenerative effect under such conditions. METHODS/MATERIALS: one hundred and twenty rats (50-100 g body weight) were divided into 6 groups based on the intervention type: Group 1 (sham), abdominal incision without intervention; Group 2, 70% hepatectomy; Group 3, 70% hepatectomy + portal vein stenosis; Group 4, 70% hepatectomy + ligation of the hepatic artery; Group 5, 70% hepatectomy + portal vein stenosis + insulin; and Group 6, 70% hepatectomy + portal vein stenosis + tacrolimus. Animals in groups 1 to 4 were subdivided into 5 groups according to the moment of death: 1, 2, 3, 5 and 10 days after surgical intervention. The animals in groups 5 and 6 were subdivided into 2 other groups according to the moment of death: 2 and 10 days after surgical intervention. The remnant liver lobes were harvested for morphological, histological histomorphometric, immunohistochemical and molecular analyses. RESULTS: it was verified that the hepatectomy group regained liver weight on the third day and had increased mitotic activity, and the portal vein stenosis prevented these phenomena, as well as the increased mitotic index (P < 0.001). In addition, insulin and tacrolimus promoted a significant increase of liver weight. Mitotic activity was considerably increased in the hepatectomy, hepatectomy + arterial ligature, insulin and tacrolimus groups and this parameter was reduced by portal vein stenosis. The expression of the interleukin-6 (IL-6) gene was present in all the animal groups. Tissue levels of IL- 6 were significantly increased by hepatectomy and hepatectomy + hepatic artery ligature; portal vein stenosis prevented this change. However, the administration of tacrolimus or insulin could recuperate the tissue levels of IL-6. CONCLUSION: In the present study a simple and highly reproducible model was standardized to study liver regeneration with portal vein or hepatic artery blood inflow reduction in growing rats. It was demonstrated that insulin or tacrolimus administration may partially reverse the harmful effects of portal vein stenosis. The obstruction of the arterial flow did not affect liver regeneration

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A fibrose hepática é o resultado de uma lesão crônica, com a ativação de células inflamatórias e fibrogênicas no fígado, as quais levam a um acúmulo excessivo de proteínas de matriz extracelular (MEC). Essas alterações resultam na morte de células do fígado, com desorganização e perda da função do parênquima hepático. A cirrose é o estágio avançado da fibrose, e culmina na falência hepática, uma condição potencialmente fatal cujo único tratamento efetivo é o transplante de fígado, o qual é limitado pela disponibilidade de órgãos. Na busca por terapias alternativas visando a regeneração hepática, o transplante de células mononucleares de medula óssea (CMMO) mostrou resultados benéficos e promissores em modelos animais e alguns protocolos clínicos. Entre essas células, estão as células-tronco hematopoiéticas e mesenquimais, que apresentam potencial regenerativo e modulador da resposta inflamatória. Este estudo pretendeu avançar na compreensão dos mecanismos pelos quais as CMMO podem ajudar na regeneração hepática. Ratos com fibrose hepática induzida por ligadura do ducto biliar (LDB) foram transplantados com CMMO e comparados com ratos com fibrose sem transplante e ratos normais. Parâmetros hepáticos como componentes da MEC (colágeno total, colágenos tipos I e IV, laminina, metaloproteinases de matriz MMPs), componentes celulares (células fibrogênicas, células de Kupffer e colangiócitos) e enzimas hepáticas foram analisados por microscopia de luz, microscopia confocal, western blotting e espectrofotometria. Os resultados mostraram que o transplante de CMMO contribui para a regeneração hepática de maneira global, (a) diminuindo o acúmulo de colágeno e laminina; (b) aumentando a produção de MMPs que favorecem o remodelamento da MEC, principalmente por células de Kupffer; (c) normalizando a quantidade de colangiócitos e diminuindo a quantidade de células fibrogênicas; e (d) normalizando os níveis sanguíneos das enzimas hepáticas. Portanto, nós sugerimos que as CMMO podem ajudar na regeneração hepática através de mecanismos parácrinos e se diferenciando em células de Kupffer, contribuindo para a secreção de fatores antiinflamatórios e anti-fibrogênicos no fígado com fibrose. / Liver fibrosis results from a chronic injury, with the activation of hepatic inflammatory and fibrogenic cells, which lead to an excessive extracellular matrix (MEC) protein accumulation. These alterations result in the death of liver cells, along with disorganization and loss of function of the hepatic parenchyma. Cirrhosis is the advanced stage of fibrosis, and culminates in hepatic failure, a potentially fatal condition whose only effective treatment is liver transplantation, which is limited by organ shortage. Amid the search for alternative therapies aiming hepatic regeneration, bone marrow mononuclear cell (CMMO) transplantation has shown promising and benefic results in animal models and some clinical protocols. Amongst these cells are hematopoietic and mesenchymal stem cells, which present regenerative potential and modulate inflammatory response. This study aimed to add knowledge on the mechanisms by which CMMO may prompt hepatic regeneration. Rats with liver fibrosis induced by bile duct ligation (LDB) were transplanted with CMMO and compared to fibrotic and normal rats without transplantation. Hepatic parameters such as MEC components (total collagen, collagens types I and IV, laminin and matrix metalloproteinases MMPs), cellular components (fibrogenic and Kupffer cells, cholangiocytes) and liver enzymes were analyzed through confocal, fluorescence and light microscopy, western blotting and spectrophotometry. Results showed that CMMO contribute to liver regeneration globally, (a) reducing collagen and laminin accumulation; (b) increasing MMP production, specially by Kupffer cells, that favor MEC remodeling; (c) normalizing cholangiocyte numbers and reducing fibrogenic cells; and (d) normalizing plasma levels of hepatic enzymes. Therefore, we suggest that CMMO may help hepatic regeneration through paracrine mechanisms and by differentiating in Kupffer cells, contributing to the secretion of anti-inflammatory and anti-fibrotic factors within the fibrotic liver.