Orientador: Cecilia Amelia Fazzio Escanhoela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campínas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Segatelli_Vanderlei_M.pdf: 1173808 bytes, checksum: efbd82ac6962165e42a166dfef483327 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) destaca-se como uma das formas mais comuns de câncer no mundo, correspondendo a aproximadamente 90% das neoplasias primárias do fígado, sendo a cirrose seu mais importante fator de risco. A sua progressão, no entanto, depende de inúmeros fatores e, entre estes, a angiogênese assume papel fundamental, principalmente por ser o CHC um tumor altamente vascularizado. É sabido que tumores sólidos, ao atingirem volume de 1 a 2mm3, passam a ter seu crescimento dependente de neovascularização e no fígado esta se faz através de capilarização sinusoidal, processo pelo qual ocorrem alterações morfológicas nos sinusóides hepáticos, com perda das fenestrações e deposição de membrana basal. Neste estudo retrospectivo avaliamos a angiogênese, através dos marcadores imuno-histoquímicos CD34 e CD105 (Endoglina), com determinação da densidade microvascular (DMV) em 44 produtos de hepatectomia total, compreendendo 44 nódulos neoplásicos (CHC), 44 nódulos regenerativos (NR) e 15 nódulos com características microscópicas de lesões pré-malignas (ou Nódulos Displásicos - ND), sendo 8 de baixo grau e 7 de alto grau. A avaliação compreendeu a determinação da DMV no centro e na periferia de todos os nódulos. Para análise estatística foi utilizada análise descritiva com apresentação de medidas de posição e dispersão para variáveis contínuas; para a comparação dos grupos foi utilizada a ANOVA, considerando-se p<0,05 estatisticamente significante. O CD34 demonstrou positividade difusa no CHC, com valores médios da DMV de 38,3±12,6 e 34,2±11,2 no centro e periferia, respectivamente. Já o CD105 apresentou expressão sinusoidal predominantemente periférica no CHC, com valores médios da DMV de 6,2±4,1 e 10,7±4,4, com diferenças significativas entre os grupos (p<0,0001). Também foram observadas diferenças na imunoexpressão entre os marcadores em NR (p<0,0001) e ND (p<0,0019). Concluímos que existem diferenças na imunoexpressão do CD34 e CD105 entre os nódulos benignos e malignos, com gradual aumento da neovascularização, bem caracterizado pelo CD34, devido ao processo de capilarização sinusoidal. O CD105, expresso em "subset" de microvasos neoformados, pode ser um indicador de diferenciação diagnóstica entre NR e CHC / Abstract: Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common forms of cancer worldwide, accounting for about 90% of primary tumors of the liver. Cirrhosis is the most important risk factor for HCC. However, the progression of hepatocellular carcinoma is dependent on a number of factors. Among these factors, angiogenesis plays a major role, mainly because HCC is a highly vascular tumor. It is known that when solid tumors reach a volume of 1 to 2mm3 their growth depends on neovascularization. In the liver, this occurs through sinusoidal capillarization, a process by which morphologic alterations occur in the hepatic sinusoids, with loss of fenestrations and basement membrane depositions. In this retrospective study, we evaluated angiogenesis by using immunohistochemical markers CD34 and CD105 (Endoglin), with determination of tumor microvessel density (MVD) in 44 products of total hepatectomy, including 44 malignant nodules (HCC), 44 regenerative nodules (RN) and 15 nodules with microscopic characteristics of preneoplastic lesions (or Dysplastic Nodules-DN), 8 being low-grade and 7 high-grade. The evaluation encompassed measurement of MVD in the center and periphery of all nodules. For statistical analysis, a descriptive analysis with measurements of position and dispersion for continuous variables was used. ANOVA was used for group comparison, considering p<0.05 as statistically significant. CD34 demonstrated a diffuse positivity in HCC, with median MVD values of 38.3±12.6 and 34.2±11.2 in the center and periphery, respectively. On the other hand, CD105 exhibited sinusoidal expression predominantly in the periphery of the HCC, with median MVD values of 6.2±4.1 and 10.7±4.4, with significant differences between groups (p<0.0001). Differences in the immunoexpression between markers in RN (p<0.0001) and DN (p<0.0019) were also observed. In conclusion, there are differences in the immunoexpression of CD34 and CD105 between benign and malignant nodules, with a gradual increase in neovessel formation, well-characterized by CD34, due to a process of sinusoidal capillarization. CD105, expressed in a "subset" of newly formed microvessels may be an indicator of the diagnostic differentiation between RN and HCC / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Christiane Pienna Soares / Coorientador: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: Raquel Alves dos Santos / Resumo: carcinoma hepatocelular (CHC) é um tumor primário mais frequente do fígado, sendo a terceira causa de mortalidade por câncer. Dentre os tumores hepáticos primários o CHC é responsável por quase 90% dos casos. Frente a busca para o desenvolvimento da produção de novos fármacos derivados de produtos naturais, os fungos endofíticos apresentam-se como fontes promissoras. Estudos recentes mostraram que os extratos de fungos endofíticos tem várias atividades, como propriedades anti-tumorais. O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de citotóxica dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos isolados de Eugenia jambolana nas linhagens hepatocarcinoma murinho (Hepa 1c1c7), linhagem humana de hepatocarcinoma (Hep G2) e queratinócito normal de pele (HaCat) e verificar a indução de apoptose, atividade de caspase, genotoxicidade, mutagenicidade e identificar a distribuição no ciclo celular. Nossos resultados indicam que ambos os extratos apresentaram atividade inibidoras. O extrato bruto do fungo Pseudofusicoccum stromaticum (Ej-fm1) apresentou maior seletividade para Hepa1c1c7, apresentando CI50 de 58 μg/mL, com uma inibição celular de 63,4% e 38,4% para as concentrações de 100 μg/mL e 50 μg/mL. Enquanto HepG2 e HaCat não apresentaram morte celular significativa. O extrato de Neofusicoccum sp. (Ej-fv1) induziu alta citotoxicidade, apresentando inibição celular 67,83% apenas na concentração de 100 μg/mL com um valor de CI50 de 89 μg/mL. HepG2 e HaCaT demonstraram inibição celular significativa (38,4% e 43,5%, respectivamente), mas também apenas na maior concentração (100 μg/mL). Na avaliação de apoptose usando o método Hoechst/Iodeto de propídeo em Hepa1c1c7, o extrato (Ej-fm1) apresentou diferença estatística para a presença de apoptose tardia, bem como necrose. Mas para o extrato (Ej-fv1) houve morte celular significativa apenas na concentração de 100 μg/mL para a apoptose precoce e... / Abstract: Hepatocellular carcinoma (HCC) is more frequent primary liver cancer, and third most commum cause of cancer mortality. Among primary liver tumors HCC is responsible for nearly 90% of cases. Compared to search for the development of production of novel drugs from natural products, the endophytic fungi have been presented as promising sources. Recent studies showed that extracts of endophytic fungi have various activities, such as, properties antitumor. The aim of this study was to evaluate cytotoxicity capacity of the crude extract isolated endophytic fungus ripe fruit, Ej-fm1 and unripe fruit, Ej-FV1 Eugenia jambolana in Murine hepatoma cell (Hepa 1c1c7), Human hepatocarcinoma cell line (Hep G2) and spontaneously immortalized human keratinocytes (HaCaT) and check the induction of apoptosis, caspase activity, genotoxic activity, mutagenic and distribution of cell cycle. Our findings indicate that demonstrated that both extracts showed inhibitory activities. The crude extract from Pseudofusicoccum stromaticum (Ej-fm1) possessed more selectivity against Hepa1c1c7 showed IC50, value of 58 μg/mL, having a cellular inhibition 63.4% and 38.4% for the concentration 100μg / ml and 50μg/ml. While for HepG2 and HaCat, no significant cell death. The extract of Neofusicoccum sp.(Ej-fv1) induced high cytotoxicity, showed cellular inhibition 67.83% just at concentration 100μg/ml with IC50 value of 89 μg/mL. HepG2 and HaCaT cell also showed significant inhibition (38.4% and 43.5%, respectively) also only at the highest concentration. To evaluate apoptosis using Hoechst/ Propidium iodide method in Hepa1c1c7 cells, the extract (Ej-fm1) showed statistical difference for presence of late apoptosis, as well as necrosis. But the extract (Ej-fv1) there are significant cell death only in the concentration of 100μg / mL for early apoptosis and necrosis, noting a concentration-response for early apoptosis. About the analyses of cell death mechanisms, we ... / Mestre

Orientador: Rogério Saad Hosne / Coorientador: Regina El Did / Banca: Juan Carlos Llanos / Banca: André Ibrahim David / Resumo: Pacientes cirróticos com carcinoma hepatocelular (CHC) tem um elevado risco de complicações pós-operatórias . Para reduzir a morbidade e a possibilidade de insuficiência hepática , é essencial identificarmos os fatores de risco que estão associados com ressecções hepáticas. Alguns estudos têm mostrado que as plaquetas promovem regeneração do fígado após hepatectomia. O objetivo deste estudo foi o de esclarecer a importância da contagem de plaquetas como um preditor de insuficiência hepática pós- hepatectomia em pacientes cirróticos com CHC. Usando PUBMED , EMBASE e LILACS, uma pesquisa bibliográfica foi realizada para identificar os estudos que avaliaram a relação entre a baixa contagem de plaquetas (<100.000/mm³) e insuficiência hepática em pacientes cirróticos que foram submetidos à ressecção de CHC. Nosso desfecho primário de interesse foi insuficiência hepática pós- hepatectomia . Os desfechos secundários foram mortalidade, complicações e sobrevida global e livre de doença. Relacionadas à disfunção hepática , encontramos uma diferença significativa, mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ tiveram menor incidência de disfunção hepática em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,17 [IC 95% 0,11-0,27 ] , I2 = 0 %). Encontramos também uma diferença significativa , mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ apresentaram menor morbidade em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,42 [IC 95% 0,29-0,62 ] , I2 = 0 %). Além disso , verificou-se uma diferença significativa , mostrando que os pacientes com contagem de plaquetas ≥100.000/mm³ apresentaram menor mortalidade em comparação com aqueles com contagem de plaquetas <100.000/mm³ (OR 0,12 [IC 95% 0,05-0,27 ] , I2 = 15%). A revisão atual corrobora com os achados que mostram que uma baixa contagem de plaquetas pré-operatória ... / Abstract: Patients with hepatocellular carcinoma and underlying liver diseases have a high risk of postoperative complications. To reduce morbidity and the possibility of liver failure, it is essential to identify the risk factors that are associated with hepatic resections. Some studies have shown that platelets promote liver regeneration after hepatic resection. The aim of this study was to clarify the importance of platelet count as a predictor of post-hepatectomy liver failure after liver resection for cirrhotic patients with HCC. Using PUBMED, EMBASE, and LILACS, a literature search were conducted to identify studies that evaluated the relationship between low platelet count (<100.000/mm³) and liver insufficiency in patients with underlying liver diseases who were undergoing resection of hepatocellular carcinoma. Our primary outcome of interest was post-hepatectomy liver failure. The secondary outcomes were mortality, major complications and disease-free and overall survivals. Related to liver dysfunction, we found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had lower incidence of liver dysfunction compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.17 [95% CI 0.11 to 0.27], I2=0%). We also found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had lower incidence of major complications compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.42 [95% CI 0.29 to 0.62 ], I2=0%). In addition, we found a significant difference showing that patients with platelet count ≥100.000/mm³ had a lower occurrence of death compared with those with platelet count <100.000/mm³ (OR 0.12 [95% CI 0.05 to 0.27], I2=15%). The current review corroborates the findings that a low preoperative platelet count is associated with liver dysfunction and with both postoperative major complications and mortality / Mestre

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:26:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:45:21Z : No. of bitstreams: 1 000846545_20160619.pdf: 570368 bytes, checksum: 359b7619b228700f4adb6cdcb47ce67e (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-20T12:14:09Z: 000846545_20160619.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-20T12:14:48Z : No. of bitstreams: 1 000846545.pdf: 1592978 bytes, checksum: c27d71a38bf3f6a65e31951c06bb5e3b (MD5) / carcinoma hepatocelular (CHC) é um tumor primário mais frequente do fígado, sendo a terceira causa de mortalidade por câncer. Dentre os tumores hepáticos primários o CHC é responsável por quase 90% dos casos. Frente a busca para o desenvolvimento da produção de novos fármacos derivados de produtos naturais, os fungos endofíticos apresentam-se como fontes promissoras. Estudos recentes mostraram que os extratos de fungos endofíticos tem várias atividades, como propriedades anti-tumorais. O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de citotóxica dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos isolados de Eugenia jambolana nas linhagens hepatocarcinoma murinho (Hepa 1c1c7), linhagem humana de hepatocarcinoma (Hep G2) e queratinócito normal de pele (HaCat) e verificar a indução de apoptose, atividade de caspase, genotoxicidade, mutagenicidade e identificar a distribuição no ciclo celular. Nossos resultados indicam que ambos os extratos apresentaram atividade inibidoras. O extrato bruto do fungo Pseudofusicoccum stromaticum (Ej-fm1) apresentou maior seletividade para Hepa1c1c7, apresentando CI50 de 58 μg/mL, com uma inibição celular de 63,4% e 38,4% para as concentrações de 100 μg/mL e 50 μg/mL. Enquanto HepG2 e HaCat não apresentaram morte celular significativa. O extrato de Neofusicoccum sp. (Ej-fv1) induziu alta citotoxicidade, apresentando inibição celular 67,83% apenas na concentração de 100 μg/mL com um valor de CI50 de 89 μg/mL. HepG2 e HaCaT demonstraram inibição celular significativa (38,4% e 43,5%, respectivamente), mas também apenas na maior concentração (100 μg/mL). Na avaliação de apoptose usando o método Hoechst/Iodeto de propídeo em Hepa1c1c7, o extrato (Ej-fm1) apresentou diferença estatística para a presença de apoptose tardia, bem como necrose. Mas para o extrato (Ej-fv1) houve morte celular significativa apenas na concentração de 100 μg/mL para a apoptose precoce e... / Hepatocellular carcinoma (HCC) is more frequent primary liver cancer, and third most commum cause of cancer mortality. Among primary liver tumors HCC is responsible for nearly 90% of cases. Compared to search for the development of production of novel drugs from natural products, the endophytic fungi have been presented as promising sources. Recent studies showed that extracts of endophytic fungi have various activities, such as, properties antitumor. The aim of this study was to evaluate cytotoxicity capacity of the crude extract isolated endophytic fungus ripe fruit, Ej-fm1 and unripe fruit, Ej-FV1 Eugenia jambolana in Murine hepatoma cell (Hepa 1c1c7), Human hepatocarcinoma cell line (Hep G2) and spontaneously immortalized human keratinocytes (HaCaT) and check the induction of apoptosis, caspase activity, genotoxic activity, mutagenic and distribution of cell cycle. Our findings indicate that demonstrated that both extracts showed inhibitory activities. The crude extract from Pseudofusicoccum stromaticum (Ej-fm1) possessed more selectivity against Hepa1c1c7 showed IC50, value of 58 μg/mL, having a cellular inhibition 63.4% and 38.4% for the concentration 100μg / ml and 50μg/ml. While for HepG2 and HaCat, no significant cell death. The extract of Neofusicoccum sp.(Ej-fv1) induced high cytotoxicity, showed cellular inhibition 67.83% just at concentration 100μg/ml with IC50 value of 89 μg/mL. HepG2 and HaCaT cell also showed significant inhibition (38.4% and 43.5%, respectively) also only at the highest concentration. To evaluate apoptosis using Hoechst/ Propidium iodide method in Hepa1c1c7 cells, the extract (Ej-fm1) showed statistical difference for presence of late apoptosis, as well as necrosis. But the extract (Ej-fv1) there are significant cell death only in the concentration of 100μg / mL for early apoptosis and necrosis, noting a concentration-response for early apoptosis. About the analyses of cell death mechanisms, we ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-30Bitstream added on 2014-12-02T11:21:11Z : No. of bitstreams: 1 000792799_20141231.pdf: 121704 bytes, checksum: 8ea6280bc854bb7701833438b6a4bcf7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:54Z: 000792799_20141231.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:50Z : No. of bitstreams: 1 000792799.pdf: 4115128 bytes, checksum: bf08d34c13536fc5692eaddb40e4fe2c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aproximadamente 170 milhões de pessoas no mundo estão cronicamente infectadas pelo vírus da Hepatite C (HCV). No Brasil, os números já chegam a 3 milhões. A persistência da infecção pelo HCV no fígado leva à cronificação da doença, cirrose e hepatocarcinoma. A proteína de envelope 2 (E2) do HCV é a responsável pelo seu acoplamento à célula hospedeira através da interação com receptores de superfície celular, como o R-LDL e o CD81, entre outros. Como as alterações na micro e macrovasculatura hepática, têm sido apontadas como elementos fundamentais na histogênese e prognóstico da doença, o objetivo deste estudo foi avaliar a interação da proteína E2 recombinante com os R-LDL presentes na superfície de células endoteliais (ECV304 e HUVEC) sob influência de LDL e da glicosilação protéica. Também avaliar a resposta inflamatória das células endoteliais à interação com estas proteínas. A proteína E2 foi expressa em dois sistemas heterólogos, E. coli e P. pastoris, para avaliação da glicosilação e da interação com LDL na ligação aos R-LDL das células através de citometria de fluxo. As proteínas também foram avaliadas em testes biológicos quanto à indução celular de produção de espécies reativas de oxigênio (EROs totais – QL e H2O2 - citometria de fluxo), NO (QL em fase gasosa e por método de Griess), arginase (espectrofotometria), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) e morte celular (MTT - espectrofotometria e por anexina V e PI - citometria de fluxo). Os resultados obtidos revelaram que as proteínas E2 recombinantes podem interagir com os R-LDL das células endoteliais após a ligação ao LDL e que esta ligação pode ser melhorada pela glicosilação (E2L) (p<0,01 em relação à E2B). O teste de NO indicou que as proteínas glicosiladas exibem maior potencial para o estímulo deste nas células HUVEC (p<0,01 em relação ao controle negativo). As concentrações de proteínas testadas não ... / Approximately 170 million people worldwide are chronically infected with hepatitis C virus (HCV). In Brazil, the numbers have already reached 3 million. The persistence of HCV infection leads to chronic infection in liver disease, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The envelope protein 2 (E2) of HCV is responsible for its coupling to the host cell through interaction with cell surface receptors such as the R-LDL and CD81, among others. Because changes in micro and macrovasculature liver, have been identified as key elements in the histogenesis and prognosis of the disease, the aim of this study was to evaluate the interaction of the protein E2 recombinant with the R-LDL present on the surface of endothelial cells (HUVEC and ECV304) under the influence of LDL and protein glycosylation. And also evaluate the inflammatory response of endothelial cells to interact with these proteins. The E2 protein was expressed in two heterologous systems, E. coli and P. pastoris for evaluation of glycosylation and interaction with LDL binding to the R-LDL cells by flow cytometry. The proteins were also evaluated in biological tests for induction of cellular production of reactive oxygen species (EROs - QL and H2O2 - flow cytometry), NO (QL in doing gas and Griess Reagent), arginase (spectrophotometry), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) and cell death (MTT – spectrophotometry and Annexin V and PI - flow cytometry). The results obtained showed that the recombinant E2 protein can interact with R-LDL endothelial cell after binding to LDL and that this binding can be enhanced by glycosylation (E2L) (p <0.01 in relation to E2B). The NO test indicated that glycosylated proteins exhibit greater potential for the stimulation of the HUVEC cells (p <0.01 compared with negative control). Protein concentrations tested were not sufficient to stimulate an increase or decrease in the activity of arginase remarkable compared to the negative control. The recombinant protein ...

Orientador: Patricia Pintor dos Reis / Resumo: Introdução: Os carcinomas hepato-pancreato-biliares (HPB) são carcinomas agressivos, com células progenitoras comuns, sugerindo que mecanismos moleculares de tumorigênese podem ser compartilhados entre estes tumores. Os microRNAs (miRNAs) são importantes reguladores da expressão gênica e têm sido investigados como potenciais biomarcadores diagnósticos, prognósticos e de resposta a tratamento de pacientes com câncer. O objetivo deste estudo foi identificar o perfil de expressão de miRNAs no plasma de pacientes com carcinomas HPB e potenciais processos biológicos envolvidos na tumorigênese destes carcinomas.Pacientes e Métodos: Foram analisadas 12 amostras de plasma, sendo 4 obtidas de pacientes com carcinoma hepatocelular, 4 com adenocarcinoma de pâncreas e 4 com colangiocarcinoma e 10 amostras de plasma de indivíduos saudáveis (grupo de referência). A expressão de miRNAs plasmáticos foi determinada por meio do ensaio TaqMan® Array Human MicroRNA Cards (card A, v3.0). Análises de predição de mRNAs-alvo potencialmente regulados pelos miRNAs identificados e redes de interação miRNAs-mRNAs-alvo foram geradas.Resultados: Dos 42 miRNAs com expressão desregulada no plasma de pacientes com carcinomas HPB comparados ao grupo de indivíduos saudáveis, 28 miRNAs (67%) são compartilhados entre os três subtipos tumorais, sendo: 19 com expressão diminuída e 9 com expressão aumentada. Os mRNAs-alvo preditos dos miRNAs com expressão alterada nos carcinomas HPB estão associados com importa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador : Paulo Inácio da Costa / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Marcelo Dias Baruffi / Banca: Amanda Martins Baviera / Resumo: Aproximadamente 170 milhões de pessoas no mundo estão cronicamente infectadas pelo vírus da Hepatite C (HCV). No Brasil, os números já chegam a 3 milhões. A persistência da infecção pelo HCV no fígado leva à cronificação da doença, cirrose e hepatocarcinoma. A proteína de envelope 2 (E2) do HCV é a responsável pelo seu acoplamento à célula hospedeira através da interação com receptores de superfície celular, como o R-LDL e o CD81, entre outros. Como as alterações na micro e macrovasculatura hepática, têm sido apontadas como elementos fundamentais na histogênese e prognóstico da doença, o objetivo deste estudo foi avaliar a interação da proteína E2 recombinante com os R-LDL presentes na superfície de células endoteliais (ECV304 e HUVEC) sob influência de LDL e da glicosilação protéica. Também avaliar a resposta inflamatória das células endoteliais à interação com estas proteínas. A proteína E2 foi expressa em dois sistemas heterólogos, E. coli e P. pastoris, para avaliação da glicosilação e da interação com LDL na ligação aos R-LDL das células através de citometria de fluxo. As proteínas também foram avaliadas em testes biológicos quanto à indução celular de produção de espécies reativas de oxigênio (EROs totais - QL e H2O2 - citometria de fluxo), NO (QL em fase gasosa e por método de Griess), arginase (espectrofotometria), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) e morte celular (MTT - espectrofotometria e por anexina V e PI - citometria de fluxo). Os resultados obtidos revelaram que as proteínas E2 recombinantes podem interagir com os R-LDL das células endoteliais após a ligação ao LDL e que esta ligação pode ser melhorada pela glicosilação (E2L) (p<0,01 em relação à E2B). O teste de NO indicou que as proteínas glicosiladas exibem maior potencial para o estímulo deste nas células HUVEC (p<0,01 em relação ao controle negativo). As concentrações de proteínas testadas não ... / Abstract: Approximately 170 million people worldwide are chronically infected with hepatitis C virus (HCV). In Brazil, the numbers have already reached 3 million. The persistence of HCV infection leads to chronic infection in liver disease, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The envelope protein 2 (E2) of HCV is responsible for its coupling to the host cell through interaction with cell surface receptors such as the R-LDL and CD81, among others. Because changes in micro and macrovasculature liver, have been identified as key elements in the histogenesis and prognosis of the disease, the aim of this study was to evaluate the interaction of the protein E2 recombinant with the R-LDL present on the surface of endothelial cells (HUVEC and ECV304) under the influence of LDL and protein glycosylation. And also evaluate the inflammatory response of endothelial cells to interact with these proteins. The E2 protein was expressed in two heterologous systems, E. coli and P. pastoris for evaluation of glycosylation and interaction with LDL binding to the R-LDL cells by flow cytometry. The proteins were also evaluated in biological tests for induction of cellular production of reactive oxygen species (EROs - QL and H2O2 - flow cytometry), NO (QL in doing gas and Griess Reagent), arginase (spectrophotometry), IL-8 (ELISA), VEGF (ELISA) and cell death (MTT - spectrophotometry and Annexin V and PI - flow cytometry). The results obtained showed that the recombinant E2 protein can interact with R-LDL endothelial cell after binding to LDL and that this binding can be enhanced by glycosylation (E2L) (p <0.01 in relation to E2B). The NO test indicated that glycosylated proteins exhibit greater potential for the stimulation of the HUVEC cells (p <0.01 compared with negative control). Protein concentrations tested were not sufficient to stimulate an increase or decrease in the activity of arginase remarkable compared to the negative control. The recombinant protein ... / Doutor

Orientador: Jorg Kobarg / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rui_Edmilson_D.pdf: 2734113 bytes, checksum: fe1cd8f79cba161393315108c9b5eef8 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A hepatite B constitui um grave problema de saúde pública. Dados epidemiológicos estimam que aproximadamente 350 milhões de pessoas são portadores do vírus da hepatite B (HBV). Admite-se que a infecção evolui para a cura em média 95% dos casos, entretanto nos portadores crônicos a infecção pode evoluir para cirrose e carcinoma hepatocelular (HCC). Há um crescente acúmulo de evidências que relaciona a proteína HBx do HBV ao desenvolvimento do HCC. A maioria dos estudos sobre a função da proteína HBx sugere que ela é uma proteína reguladora de funções pleiotrópicas com a capacidade de induzir o crescimento tumoral. Isso é possivelmente devido à sua capacidade de interagir com uma vasta gama de proteínas celulares. No presente estudo investigamos os aspectos moleculares da estrutura e função da proteína HBx e os resultados foram contextualizados no processo de transformação celular. Observamos pela primeira vez a capacidade da proteína HBx em se ligar ao RNA contendo seqüências ricas em adenina e uracila (AU), que são presentes em alguns proto-oncogenes como c-myc e c-fos. A geração de proteínas truncadas permitiu mapear a região de interação entre HBx e RNA. Realizamos ensaios de mutação sítio-dirigida em HBx e substituímos todas as cisteínas por serinas. Nossos resultados sugerem que as cisteínas na proteína HBx são de menor importância para a sua interação com o RNA e com as proteínas humanas p53 e RXR. Descobrimos ainda uma nova proteína humana que interage com HBx: E4F. Este fator de transcrição humano está relacionado com o controle do ciclo celular, com a segregação cromossômica e com a embriogênese. Ensaios em leveduras e in vitro mostraram que HBx selvagem, bem como as suas formas mutadas, foram capazes de interagir e regular a função de E4F, indicando um possível novo mecanismo para a transformação celular e a regulação da transcrição viral, uma vez que E4F exibiu uma capacidade de interagir com a região ¿enhancer II¿ do genoma do HBV / Abstract: Viral hepatitis is an important global public health problem. Epidemiological data show that worldwide 350 million people are chronically infected with the hepatitis B virus. About 95% of the infections cure spontaneously, but the chronically infected patients may develop liver cirrhosis or even hepatocellular carcinoma (HCC). A large body of evidence points to the viral onco-protein HBx as the principal cause for the cellular transformation. The majority of studies on HBx function suggest that it is a regulatory protein with pleiotropic functions and its capacity to induce tumor growth may be due to its ability to interact with a diverse array of cellular proteins. In the present study we investigated molecular and structural aspects of the function of the HBx protein in order to be able to shed light on the process of cellular transformation. We were able to demonstrate that HBx protein has the ability to bind to an AU-rich RNA sequences present in the mRNAs of certain proto-oncogenes such as c-myc and c-fos. The generation of truncated proteins allowed to map the region of interaction of HBx with the RNA. Furthermore, we performed site directed mutagenesis studies of HBx protein and substituted all of its cysteine residues with serines. Our data suggest that the cysteine residues in the HBx protein are of minor importance for its interaction with RNA, p53 and RXR proteins. Finally, we discovered in E4F a new human interacting protein partner for the HBx protein. The transcription factor E4F has been functionally implicated in the control of the cell cycle, the chromosomal segregation and embriogenesis. In studies using the yeast we further showed that wild-type HBx, as well as its mutated forms, can physically interact with the E4F protein and regulate its function. This indicates a possible new mechanism of cellular transformation and the regulation of the viral transcription, since the human protein E4F demonstrated the capacity to bind to the enhancer II region of the HBV genome / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Banca: Camila Andrea de Oliveira / Banca: Dânia Elisa Christofoletti Mazzeo Morales / Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) ocupa o 5º lugar entre os cânceres mais comum no mundo. No geral, cânceres apresentam alto risco de recorrência na forma de doença metastática. A identificação e caracterização funcional de genes associados à invasão e metástase é crucial para o desenvolvimento de novas terapias orientada contra esse processo. A proteína celular associada a migração e angiogênese (AAMP), está amplamente distribuída em muitos tipos de células com potencial migratório. Associado a isso, vários estudos apontam o papel crucial do metabolismo lipídico na iniciação das metástases. Estudos demonstram que os microRNAs (miRNAs) têm um papel central no controle das funções básicas das células. Um miRNA de grande interesse para este trabalho é o miRNA-149-3p. Em trabalhos realizados anteriormente pelo grupo de pesquisa, foi demonstrado que em células tumorais pulmonares (A549) esse miRNA foi apontado como um elemento de destaque no controle dos processos celulares de migração, pelo controle da proteína celular associada a migração e angiogênese (AAMP). Tendo em vista as doenças hepáticas, cabe avaliar os efeitos do miRNA-149-3p, considerando a existência de alvos putativos a esse miRNA, que se correlacionam diretamente com o metabolismo energético, buscando analisar pontos da via onde ocorre modulação ocasionada por este miRNA. Para as análises optou-se por trabalhar com as células SK-HEP-1 (linhagem metastática) e HEP-G2 (linhagem metabolizadora). Segundo as análises, de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatocellular carcinoma (CHC) ranks 5th among the most common cancers in the world. In general, cancers are at high risk of recurrence in the form of metastatic disease. The identification and functional characterization of genes associated with invasion and metastasis is crucial for the development of new therapies targeted against this process. Cellular protein associated with migration and angiogenesis (AAMP), is widely distributed in many cell types with migratory potential. Associated with this, several studies point to the crucial role of lipid metabolism in the initiation of metastases. Studies have shown that microRNAs (miRNAs) play a central role in the control of basic cell functions. A miRNA of great interest for this work is miRNA-149-3p. In previous studies by the research group, it was demonstrated that in lung tumor cells (A549) this miRNA was indicated as a prominent element in the control of cellular migration processes, by the cellular protein control associated with migration and angiogenesis (AAMP). Considering the hepatic diseases, the effects of miRNA-149-3p can be evaluated, considering the existence of putative targets for this miRNA, which correlate directly with the energetic metabolism, seeking to analyze points of the pathway where the miRNA modulation occurs. For the analyzes we opted to work with the SK-HEP-1 (metastatic line) and HEP-G2 (metabolizing line) cells. According to the analyzes, it has been shown that for both SK-HEP-1 and HEP-G2 the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-11-10T11:58:06Z : No. of bitstreams: 1 000783719.pdf: 1376907 bytes, checksum: 1c48628b623e5f890b5e37441185a7e5 (MD5) / O carcinoma hepatocelular (CHC) é o quinto mais frequente na população humana comum e o terceiro em mortalidade no mundo, evidenciando a necessidade de modelos biológicos para avaliação de fatores de risco, prevenção e tratamento desta malignidade. Existem vários modelos experimentais para o estudo da hepatocarcinogênese que utilizam substâncias químicas como a dietinitrosamina (DEN), agente iniciador da carcinogênese, e o tetracloreto de carbono (CCl4), agente promotor. Vários tipos celulares têm a capacidade de sintetizar/metabolizar e/ou serem estimuladas pela vitamina D (VD), incluindo as células hepáticas. Com isso, existe interesse em associar a deficiência de VD ao desenvolvimento de doenças hepáticas, incluindo o CHC. Desta forma, o presente estudo foi conduzido para avaliar o efeito da suplementação com VD3 (VD circulante) sobre o desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas (LPN) induzidas no modelo DEN/CCl4 em ratos Wistar. Os animais foram randomicamente alocados em seis grupos experimentais (n=15/grupo): G1: animais não tratados, G2: animais iniciados com dose única intraperitoneal (i.p.) de 200 mg/kg de DEN e aplicações intragástricas (i.g.) semanais de 1,0 ml/kg de CCl4 até o final da 18ª semana do experimento; G3 a G6: os animais foram submetidos ao protocolo DEN/CCl4 e receberam em dias alternados doses i.g. de 250, 500, 1000 e 1500 μg/kg de VD3, respectivamente, durante dezesseis semanas. No final da 18ª semana do experimento, os animais foram eutanaziados e o sangue (dosagens séricas de AST e 25OHD) e fígado (detecção de LPN glutationa S-transferase positivas (GST-P+), hepatócitos Ki-67 positivos e expressão protéica do receptor da VD (VDR)) foram analisados. Os grupos que receberam as doses de 1000 e 1500 μg/kg de VD3 apresentaram menor evolução de peso corpóreo e ingestão de ração (p< 0,001) e maiores valores de peso hepático relativo e de níveis séricos ... / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the fifth most frequent cancer worldwide, ranking third among all cancer-related mortalities in the world, indicating the importance to development of bioassays for evaluation of risk factors, prevention and treatment this malignancy. There are several animal models for the study of hepatocarcinogenesis using chemicals such as diethylnitrosamine (DEN), as an initiator for carcinogenesis, and carbon tetrachloride (CCl4) as a promoting agent. Various cell types have the capacity to synthesize/metabolize and/or it are stimulated by vitamin D (VD), including hepatocytes. Thus, there is a crescent evidence for relationship between VD deficiency and the development of liver disease, including HCC. Therefore, this study was conducted to evaluate the beneficial effect of VD3 supplementation on development of preneoplastic lesions (PNL) in the DEN/CCl4 model. Male Wistar rats were randomly divided into six groups (15 animals each). G1: untreated control group; G2-G6: groups received a single i.p. dose of diethylnitrosamine (DEN) and weekly intragastric administrations (i.g.) of carbon tetrachloride (CCl4); G3-G6: groups were submitted to DEN/CCl4 protocol and received VD3 supplementation at doses of 250, 500, 1000 and 1500 μg/kg, i.g., respectively, on alternate days for 16 weeks. At the end of week 18, the animals were euthanized and blood (AST and VD3 serum levels analysis) and liver (placental glutathione S-trasferase (GST-P)-positive PNL, KI-67 cell proliferation and vitamin D receptor (VDR) analysis) samples were collected. Groups receiving 1000 and 1500 μg/kg vitamin D3 presented significantly lower mean body weight evolution and food intake (p <0,001) but a increase (p <0,001, p < 0,001) in relative liver weight and VD3 serum levels in relation to groups G1 and G2. The total number of GST-P-positive LPN per area (mm2) did not differ between the DEN-initiated groups, but the ...