Orientador: José Luiz Rybarczyk Filho / Resumo: A toxicogenômica é uma área de estudo que se utiliza de dados provindos de tecnologias das ciências ômicas e de metodologias de análise de dados da bioinformática para caracte- rizar perfis biológicos de compostos a fim realizar um estudo sobre seu comportamento no sistema biológico. Um dos problemas na análise de dados de expressão gênica é que existem diversas metodologias disponı́veis, cada uma aborda os dados brutos de maneira diferente e consequentemente fornecem resultados diferentes. Porém estes resultados não estão necessa- riamente errados, por essa razão abordar dados toxicogenômicos de diversas maneiras pode ajudar pesquisadores a tecer hipóteses sobre os mecanismos das drogas. Isso pode implicar em redução de custos na fase pré-clı́nica do desenvolvimento de medicamentos e numa melhor qualidade de tratamento para os pacientes. A abordagem mais comum na análise de dados de expressão gênica é o enriquecimento funcional dos genes que se mostrem diferencialmente expressos. Entretanto é possı́vel que informações relevantes possam ser obtidas utilizando métodos com outras considerações. Para avaliar esta hipótese o presente trabalho tem por objetivo analisar dados de expressão gênica disponı́veis em bases de dados on-line referentes a 3 drogas antineoplásicas testadas em fı́gado de Rattus norvergicus (estudos in vivo e in vi- tro) e Homo sapiens (estudo in vivo apenas) para avaliação de ontologias alteradas em cada droga. Duas metodologias de bioinformática foram utiliz... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toxicogenomics is an area that uses data generated by omics technologies and bioinformatics to characterize biological profiles of chemical compounds in order to analyze the biological system’s behavior in response to said compounds. A commom problem in the analysis of gene expression data is the large amount of methodologies available, each one approaches the raw data differently and consequently provide different results. But these results are not necessarily wrong, for that reason approaching toxicogenomic data in several ways may help researchers to hypothesize about a drug’s mechanisms. This may imply cost reduction in the pre-clinical phase of drug development and in a better quality of treatment for patients. The most common approach in the analysis of gene expression data is the functional enrichment of differentially expressed genes (EFDEGs). However, it is possible that relevant information can be obtained using methods with other considerations. To evaluate this hypothesis this work aims to analyze gene expression data available in the OPEN TG-GATEs online database about 3 antineoplastic drugs tested in the liver of Rattus norvergicus (in vivo and in vitro) and Homo sapiens (in vivo only) for the evaluation of altered ontologies in each drug. Two bioinformatics methodologies were used to analyze these data. The traditional analysis of differentially expressed genes (EFDEGs) and the analysis of groups of functionally associated genes determined by shannon entropy (A... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-24T03:10:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336120.pdf: 10320634 bytes, checksum: 96c396c0a5a70a0e074f9253da69dda9 (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho apresenta o desenvolvimento de métodos simples e eficientes para a síntese de sais de isotiourônio, sais de isotiourônio N-substituidos e sais de isotiossemicarbazida com rendimentos globais de 84 a 98% a partir de (Z)-2-(bromometil)-2-alcenoatos derivados da reação de Morita-Baylis-Hillman. Estes sais de isotiourônio com diferentes funcionalidades incorporadas em suas estruturas foram avaliados quanto à sua atividade citotóxica e antimetastática contra células leucêmicas e de melanoma e apresentaram excelentes resultados, como os altos índices de seletividade para as células tumorais em concentrações na ordem de micromolar. Em especial, o estudo em linhagens celulares de melanoma vem mostrando resultados expressivos até o momento, onde a associação do fármaco Vemurafenib com o sal de isotiourônio substituído pelo grupo fenil resultou em um efeito sinérgico, sendo que isso pode reduzir as adversidades relacionadas à toxicidade deste fármaco. Devido à multifuncionalidade dos sais de isotiourônio N-substituidos, desenvolveu-se um método para a síntese de 4-(4-nitrobenzil)-2-iminotiazolidinas com rendimentos de 30 a 73%. Esta transformação do tipo linear envolve inicialmente a preparação de (Z)-2-(bromometil)-3-(4-nitrofenil)-2-propenoato de metila, seguido da reação com tioureias N-substituídas para obtenção de sais de isotiourônio N-substituidos, os quais sofrem reações de acilação e posterior adição do tipo anti-Michael intramolecular em meio básico para formação do núcleo tiazolidínico. Subsequentemente, desenvolveu-se a síntese de 4-(4-nitrobenzil)-, 4-(2-nitrobenzil)- e 4-(4-cianobenzil)-2-aroiliminotiazolidinas em uma única etapa reacional, reagindo os (Z)-2-(bromometil)-2-propenoatos substituídos por grupos retiradores de elétrons com tioureias N-acil-N'-substituídas sob catálise básica, com rendimentos de 11 a 97%. Esta versatilidade reacional propiciou a preparação de 2-iminotiazolidina bicíclica a partir da reação de uma dihidropirimidinona com (Z)-2-(bromometil)-3-(4-nitrofenil)-2-propenoato de metila em meio básico. Em seguida, as 4-(4-nitrobenzil)- e 4-(2-nitrobenzil)-2-iminotiazolidinas foram empregadas como precursores em reações de redução para a preparação de 4-(4-aminobenzil)-2-aroiliminotiazolidinas (63-79%), 4-(4-aminobenzil)-2-iminotiazolidinas (78-94%), 2-iminotiazolidina-spiro-4-dihidroquinolonas (71-73%) e 4-hidroximetil-2-iminotiazolidina (89%). Posteriormente, a 2-iminotiazolidina-4-carboxilato de metila foi submetida à reação de hidrólise alcalina do grupo éster levando à formação quimiosseletiva do ácido 2-iminotiazolidina-4-carboxílico em excelente rendimento (94%).<br> / Abstract : This work presents simple and efficient methods for the synthesis of isothiouronium salts, N-substituted isothiouronium salts and isothiosemicarbazide salts in good overall yields (84-98%) from (Z)-2-(bromomethyl)-2-alkenoates, which are derived from the Morita-Baylis-Hillman reaction. These isothiouronium salts decorated with a variety of functional groups were evaluated for their cytotoxic and antimetastatic activity against leukemia and melanoma cells and presented excellent results such as the high selectivity index for tumor cells under micromolar-level concentrations. In particular, the study of melanoma cell lines has shown promising results, wherein the association of Vemurafenib drug with the isothiouronium salt substituted with a phenyl group resulted in a synergistic effect, and this may reduce the adversities related to the toxicity of this drug. Due to the multifunctionality of the N-substituted isothiouronium salts a method was developed for the synthesis of 4-(4-nitrobenzyl)-2-iminothiazolidines in good yields (30-73%). This linear transformation initially involved the preparation of a (Z)-2-(bromomethyl)-3-(4-nitrophenyl)-2-alkenoate followed by reaction with N-substituted thioureas to give N-substituted isothiouronium salts, which were subsequently acylated and the resulting isothioureas were treated with base to furnish the thiazolinic nucleus through intramolecular anti-Michael addition. Moreover, the convergent synthesis of 4-(4-nitrobenzyl)-, 4-(2-nitrobenzyl)- and 4-(2-cianobenzyl)-2-iminothiazolidines from (Z)-2-(bromomethyl)-2-alkenoates and N-acyl-N?-substituted thiourea was developed through base-catalyzed reactions in one step and good-to-high yields in most cases (11-97%). As an extension of this versatile reaction, the preparation of a bicyclic 2-iminothiazolidine was achieved from methyl (Z)-2-(bromomethyl)-3-(4-nitrophenyl)-2-propenoate and a dihydropyrimidinone under basic medium. Selected 4-(4-nitrobenzyl)- and 4-(2-nitrobenzyl)-2-iminothiazolidines were employed as precursors for further functional group transformations. Reduction reactions gave 4-(4-aminobenzyl)-2-aroyliminothiazolidines (63-79%), 4-(4-aminobenzyl)-2-iminothiazolidines (78-94%), 2-iminothia-zolidine-spiro-dihydroquinolones (71-73%) and 4-hydroxymethyl-2-iminothiazolidine (89%). Also, the methyl 2-iminothiazolidine-4-carboxylate was subjected to chemoselective hydrolysis of the ester group, leading to the 2-iminothiazolidine-4-carboxylic acid in excellent yield (94%).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-22T07:18:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 247312.pdf: 410456 bytes, checksum: 4c647af533cde4585f126780481386c3 (MD5) / O potencial das nanopartículas poliméricas em aumentar as oportunidades de absorção corneal após a administração tópica na superfície ocular tem sido alvo de intensas pesquisas nos últimos anos. Nesse sentido, as vantagens do recobrimento destes sistemas com polímeros catiônicos mucoadesivos também têm sido investigadas. Neste estudo, com o objetivo de avaliar a interação com a córnea e a passagem transcorneal do agente antitumoral 5-fluorouracil (5-FU) nanoencapsulado, nanoesferas de poli- -caprolactona (PECL) e poli- -caprolactona recoberta com quitosana (PECL-CS) foram preparadas. As nanoesferas foram obtidas pela técnica da dupla emulsão (a/o/a)/evaporação do solvente, sob agitação ultrassônica. A caracterização físico-química do sistema foi efetuada, sendo avaliados o potencial zeta e o diâmetro médio das partículas. Ambas as formulações PECL e PECL/CS obtiveram tamanho nanométrico e potencial zeta - 19 e + 60 mV, respectivamente. A eficiência de encapsulação do 5-FU foi determinada por espectrofotometria de absorção no ultravioleta (UV) a 260 nm e os resultados obtidos foram da ordem de 59 e 66% para PECL e PECL/CS, respectivamente. O estudo de cinética de liberação do 5-FU in vitro demonstrou a influência do recobrimento das nanopartículas com a quitosana sobre o perfil de liberação, sendo 60 % do fármaco liberado ao longo das 12 horas de estudo, a partir da formulação revestida com quitosana. As nanopartículas não recobertas, por sua vez, apresentaram uma liberação de 95 % do 5-FU em 120 minutos. Na avaliação da interação das nanopartículas com os componentes do muco ocular, as características mucoadesivas da quitosana foram demonstradas a partir da modificação na viscosidade de uma dispersão de mucina após incubação com a formulação contendo o biopolímero. Na determinação da estabilidade destes sistemas frente a lisozima, uma agregação das nanopartículas sem quitosana foi demonstrada a partir de alterações ocorridas no diâmetro médio e índice de polidispersão das partículas, após incubação com a enzima. Na avaliação ex vivo da retenção do 5-FU livre e nanoencapsulado em córneas de porco, um método de extração do 5-FU foi desenvolvido, utilizando a cromatografia líquida de alta de eficiência para quantificar o fármaco retido no tecido corneal. Os resultados obtidos no estudo ex vivo, em células de difusão, foram superiores para os sistemas dispersos em relação à solução de fármaco livre. Porém, quando comparadas as duas formulações de nanopartículas, aquelas recobertas com quitosana demonstraram um aumento significativo na quantidade de fármaco retido na córnea (p< 0,05). No doseamento do 5-FU permeado através da córnea não foi detectada a presença de fármaco liberado a partir das formulações de nanoesferas. Esses resultados sugerem que as nanopartículas de PECL e PECL/CS apresentam um potencial para a liberação de fármacos na mucosa ocular e representam uma alternativa promissora no tratamento de patologias extra-oculares.

Orientador: Juliano Milanezi de Almeida / Banca: Edilson Ervolino / Banca: Estevam Augusto Bonfante / Resumo: Objetivo: avaliar a influência da nicotina e dos agentes antineoplásicos Cisplatina (CIS) e 5-fluorouracil (5-FU) sobre os tecidos peri-implantares, bem como os efeitos desses agentes antineoplásicos sobre os tecidos peri-implantares em animais previamente expostos à nicotina. Material e métodos: 180 ratos machos (Wistar) foram randomizados para dois grandes grupos (n=90), NIC e SS, em seguida, para três subgrupos (n=30) de acordo com os agentes antineoplásicos. Receberam 0,5ml de solução de cloreto de sódio 0,9% (SS) ou 3 mg/kg de hemissulfato de nicotina (NIC), de acordo com cada grupo, 30 dias antes e 30 dias após a cirurgia. No dia 0, todos os animais receberam os implantes de titânio (DSP Biomedical®, 4 mm x 2,2 mm) nas tíbias direita e esquerda. Aos 30 dias após a cirurgia, as aplicações de SS e NIC foram interrompidas por 5 dias e, aos 35 e 37 dias, foram administrados os agentes antineoplásicos CIS, 5-FU ou 0,5 ml de SS, via intraperitoneal, respeitando intervalo de 48 h entre as aplicações. Para CIS, 5 mg/kg e 2,5 mg/kg, e para 5-FU, 60 mg/kg e 40 mg/kg, respetivamente. SS-SS: receberam SS via subcutânea e intraperitoneal. SS-CIS: receberam SS via subcutânea e CIS via intraperitoneal. SS-5FU: receberam SS via subcutânea e 5-FU via intraperitoneal. NIC-SS: receberam NIC via subcutânea e SS via intraperitoneal. NIC-CIS: receberam NIC via subcutânea e CIS via intraperitoneal. NIC-5FU: receberam NIC via subcutânea e 5-FU via intraperitoneal. Dez animais por grupo/período... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: to evaluate the influence of nicotine and the antineoplastic agents Cisplatin (CIS) and 5-fluorouracil (5-FU) over the peri-implant tissues, as well as the effects of these agents over peri-implant tissues in animals previously exposed to nicotine. Material and Methods: 180 male rats (Wistar) were initially randomized to two groups (n=90), NIC and SS. Then, to three subgroups (n=30) according to the protocol of antineoplastic agents. Received 0.5 ml of sodium chloride 0.9% (SS) or 3 mg/kg of nicotine hemissulfate (NIC) according to each group, subcutaneously, 30 days before and after surgical procedure for implants placement. At day 0, all animals received the titanium implants (DSP Biomedical®, 4 mm x 2.2 mm) in both right and left tibiae. At 30 days after surgery SS and NIC was interrupted, and at 35 and 37 days were intraperitoneally administered the antineoplastic agents CIS, 5FU or 0.5 ml SS, with 48 h interval between applications. For CIS, 5 mg/kg and 2,5 mg/kg, and 5-FU, 60 mg/kg and 40 mg/kg, respectively. SS-SS: received SS subcutaneously and intraperitoneally. SS-CIS: received SS subcutaneously and CIS intraperitoneally. SS-5FU: received SS subcutaneously and 5-FU intraperitoneally. NIC-SS: received NIC subcutaneously and SS intraperitoneally. NIC-CIS: received NIC subcutaneously and CIS intraperitoneally. NIC-5FU: received NIC subcutaneously and 5-FU intraperitoneally. Ten animals per group and period were euthanized at 50, 65 and 95 days after implants placement. The collected specimens were fixed in buffered formaldehyde solution 4% for 48h and assigned to ground section processing for analysis of bone/implant contact (BIC), or conventional histologic processing with demineralization and paraffin embedding for histometric analysis of percentage of newly-formed bone (PNFB) (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Gestão do Cuidado em Enfermagem, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-24T03:10:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336213.pdf: 2290714 bytes, checksum: 15c4445e6304eb453bdaf2d45d389134 (MD5) Previous issue date: 2015 / Estudo descritivo, exploratório com abordagem quantitativa dos dados. O estudo foi desenvolvido na unidade de clínica médica de um hospital Universitário. Teve como objetivos: Identificar a ocorrência de potenciais interações medicamentosas associadas à antineoplásicos; Analisar o conhecimento dos enfermeiros sobre interações medicamentosas associadas à antineoplásicos; Elaborar um guia para consulta de medicamentos antineoplásicos com enfoque nas interações medicamentosas; e, Propor um sistema eletrônico de alertas para a prevenção de interações medicamentosas associadas à antineoplásicos. A coleta de dados foi realizada no período de setembro a dezembro de 2014, por meio de instrumentos estruturados. No primeiro objetivo a amostra foi constituída por 128 prescrições, em que se verificou a presença de 201 potenciais interações medicamentosas associadas à antineoplásicos. Destas, (201 potenciais interações medicamentosas)91% foram classificadas como de gravidade maior ou contraindicadas. A maioria das potenciais interações medicamentosas teve como efeito clínico o aumento/diminuição da concentração plasmática do medicamento antineoplásico. Com relação ao segundo objetivo, a população constou de 14 enfermeiras, 64,3% haviam concluído a graduação a menos de cinco anos, 78,6% trabalhavam a menos de cinco anos com pacientes oncológicos, 85,6% possuíam algum tipo de pós-graduação, 28,6% relataram ter participado de atualização em farmacologia, 71,4% consideram-se com conhecimento insatisfatório sobre interação medicamentosa e 100% referiram que já tiveram dúvidas sobre a mesma na prática. Quanto à identificação de interação medicamentosa, 25,5% foi o índice de respostas corretas, 20,2% de incorretas e 54,3% das respostas foram nulas. Em relação ao manejo, 19,2% foi o índice de respostas corretas, 25,5% incorretas e 54,3% foram anuladas. O estudo revelou que quanto maior a idade, maior o tempo de conclusão da graduação e maior o tempo de atuação com pacientes oncológicos; e quanto maior a participação nos cursos de atualização em farmacologia, maior foi o número de acertos das interações medicamentosas e do manejo clínico. Para alcançar o terceiro e o quarto objetivos se fez um levantamento dos medicamentos mais utilizados na unidade pelos pacientes portadores de hemopatias malignas, chegando-se a um quantitativo de 94 medicamentos, sendo 22 antineoplásicos e 72 medicamentos de outras classes terapêuticas. Em seguida foi realizado um levantamento de informações em bases de dados específicas. O guia foi elaborado com as informações: conceito e classificação das interações medicamentosas, caracterização dos antineoplásicos, quadro de informações identificando as interações medicamentosas entre os 94 medicamentos. Baseado nas informações do guia se organizou uma proposta de sistema eletrônico de alerta para a prevenção de interações medicamentosas de antineoplásicos. Concluiu-se que pacientes portadores de hemopatias malignas estão sujeitos a potenciais interações medicamentosas graves em decorrência do seu tratamento antineoplásico. Os resultados obtidos evidenciaram ainda que há uma lacuna no conhecimento sobre farmacologia e mais especificamente sobre interações medicamentosas por parte dos enfermeiros e chamaram a atenção para a necessidade de processos de educação referentes a este assunto. Considera-se que a elaboração de um guia e a proposta de um sistema de alerta eletrônico são ferramentas que contribuirão para o desenvolvimento de uma assistência de qualidade, minimizando e até mesmo eliminando o risco relativo a interações medicamentosas.<br> / Abstract : Descriptive and exploratory study, with quantitative data approach. The study was developed in the medical Unit of a University hospital. Its main goals were: Identifying the potential drug interactions associated to antineoplastic use; Analyzing the level of knowledge of the nurses about the drug interactions associated to antineoplastic use; Elaborating a guideline for antineoplastic medicine focusing on its drug interactions; and, proposing an electronic system of prevention warnings for the drug interactions associated to antineoplastic use. The data collecting was held in the months of September to December of 2014, through structured instruments. In the first goal, the sample was constituted of 128 prescriptions, where the presence of 201 potential drug interactions to antineoplastic could be observed. Among them, (201 potential drug interactions) 91% were classified with greatest severity or contraindicated. The majority of potential drug interactions had as a clinic effect, the increase/decrease of plasma concentration of the antineoplastic medicine. About the second goal, the population concluded that in 14 nurses, 64,3% had got their degree in the past five years, 78,6% had been working for less than five years with oncologic patients, 85,6% had some kind of post-graduation, 28,6% claimed to have participated of pharmacology updates, 71,4% consider their knowledge about drug interactions unsatisfactory and 100% stated already having doubts about the subject during practice. About the identification of the drug interaction, 25,5% was the rate of correct answers, 20,2% wrong answers and 54,3% of the answers were null. Regarding the handling, 19,2% was the rate of correct answers, 25,5% wrong and 54,3% were null. The study revealed that the older the person is, the longer they take to finish their graduation and the more time acting with oncologic patients; and the bigger their participation in pharmacology updating courses, the higher was the number of correct answers for drug interactions and clinic handling. To reach the third and the fourth goals, an inventory of the most used medications by the patients with malignant blood disorders was made, reaching an amount of 94 medications, being 22 antineoplastic and 72 medicine of other therapeutic classes. Next, there was a research for information in specific data basis. The guide was elaborated with the information, concept and classification of the drug interactions, characterization of the antineoplastic and an information board identifying the drug interactions among the 94 medications. Based on the guide information, a proposal of an electronic system was organized for the warning and prevention of the drug interactions of antineoplastic. We concluded that patients with malignant blood disorders are subjected to potential severe drug interactions due to their antineoplastic treatment. The results also showed that there is still a gap in the knowledge about pharmacology and more specifically among the nurses and call our attention for the need of education processes regarding this subject. The elaboration of a guide and the proposal of a warning electronic system are important tools, which will contribute to the development of a high quality assistance, minimizing and even eradicating the risks of drug interactions.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:39:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317579.pdf: 2266949 bytes, checksum: c109cde9b9c0ab36f488fbf71f7b4fbb (MD5) Previous issue date: 2013 / Introdução. Bidens pilosa L. é uma planta considerada medicinal que contém poliacetilenos presumivelmente responsáveis por ações antitumorais. As quinonas, como a juglona, também compreendem uma classe de substâncias de interesse por seu potencial antitumoral. Além disto, evidências indicam que a associação de ascorbato com algumas quinonas pode potencializar a atividade antitumoral. Objetivos. Avaliar o efeito antitumoral do extrato de B.pilosa obtido pela tecnologia supercrítica, a fim de obter um extrato rico em poliacetilenos (SFE) com atividade superior em comparação ao extrato obtido por maceração hidroetanólica (HCE). Testar a administração de juglona isoladamente ou em associação ao ascorbato em células T24 pela citotoxicidade; caracterizado o mecanismo de morte celular induzido, indução de estresse oxidativo, efeito antiproliferativo e preliminarmente, anti-invasivo in vitro. Por fim, avaliar a administração de juglona e ascorbato em associação a quimioterápicos convencionais, doxorrubicina e cisplatina. Metodologia. A composição fitoquimica dos extratos foi avaliada por cromatografia em camada delgada e espectrofotometria UV-Vis. A citotoxicidade para células MCF-7 e T24 foi avaliada pelo ensaio do MTT. O potencial lesivo sobre o DNA foi avaliado in vitro pela motilidade eletroforética de DNA plasmidial e imunoeletroforese para fosforilação da histona gama-H2Ax em células T24. Foram avaliados marcadores de danos oxidativos, geração celular de EROs e conteúdo de GSH, também a fosforilação do fator de iniciação eucariótico 2 eIF2a. Foi avaliada a morfologia das células em processo de morte, sendo também verificada a ativação de caspases por espectrofluorimetria e clivagem da poli (ADP-ribose) polimerase (PARP) por imunoeletroforese. A atividade antiproliferativa foi medida pelo ensaio de formação de colônias. A inibição da motilidade celular foi investigada pelo ensaio de migração. A atividade antitumoral in vivo foi medida em camundongos Balb-c portadores de tumor ascítico de Ehrlich. Resultados. Os espectros sobre os constituintes majoritários de SFE apresentaram bandas típicas de poliacetilenos com picos de absorção na faixa do UV registrados em 208, 269 e 334 nm. A citotoxicidade in vitro foi dependente da concentração dos extratos. Às 24h, a CI50 foi 811 e 437 µg/mL, respectivamente para HCE e SFE, reduzindo para 291 µg/mL às 48h, no caso de SFE. Às 24h, a CI50 foi 28,5 µM para juglona, reduzindo para 6,3 µM, quando associada ao ascorbato 1 mM. A citotoxicidade da cisplatina chegou a dobrar devida sua associação com juglona e ascorbato. HCE causou danos no DNA em 160 µg/mL, ao passo que 40 µg/mL de SFE causaram danos equivalentes. Juglona iniciou danos sobre o DNA em 20 µM, ao passo que 5 µM associados ao ascorbato 1 mM causaram danos equivalentes. A juglona induziu à geração celular de EROs e consumo de GSH; iniciando fosforilação do eIF2a que indica estresse de retículo endoplasmático. Estes efeitos foram potencializados em até 4 vezes pela associação ao ascorbato. A juglona sozinha ou associada ao ascorbato não causou ativação de caspases; corroborando a morfologia das células T24 em processo de morte, o processo induzido provavelmente está mais relacionado à necrose. Em tratamentos subletais, a juglona diminuiu a proliferação e a motilidade de células T24, ambos os processos potencializados pela associação ao ascorbato, que induziu à morte clonogênica. Finalmente, os ensaios in vivo indicaram que ambos os extratos de B. pilosa apresentaram atividade, mas SFE causou redução superior do volume de líquido ascítico e células compactadas (4 ± 1 e 1 ± 0,4 mL, respectivamente), ao mesmo tempo em que resultou em maior aumento no tempo de sobrevida (~31%) em comparação aos animais do controle negativo. A inibição do crescimento tumoral determinada para HCE foi de cerca de 40%, ao passo que esta determinação ultrapassou 60% no caso de SFE. Conclusão. A extração com fluido de CO2 supercrítico é uma alternativa para a obtenção de um extrato de B. pilosa rico em poliacetilenos citotóxicos com atividade antitumoral superior em comparação ao extrato obtido por maceração hidroetanólica. O ascorbato potencializa a citotoxicidade, o efeito antiproliferativo e inibidor da motilidade de células T24 in vitro da juglona. Os achados deste trabalho levam a sugerir que a dose do tratamento feito com juglona pode ser ajustada, em termos de redução da mesma, em até 4 vezes, se a juglona for administrada em associação ao ascorbato.<br> / Abstract: Introduction. Bidens pilosa L. is a plant considered medicinal containing polyacetylenes expected to be responsible for antitumor actions. Quinones, such as juglone, comprise a class of substances of interest also due to their antitumor potential. Furthermore, evidences indicate that the combination of ascorbate with some quinones can result in potentiated antitumor activity. Objectives. The supercritical technology was assessed to obtain an extract from B.pilosa rich in polyacetylenes (SFE) with superior antitumor activity compared to that of the extract obtained by hydroethanol maceration (HCE). Juglone was tested administered alone and/or combined with ascorbate on T24 cells for cytotoxicity, the mechanism of cell demise was characterized, oxidative stress induction; antiproliferative and, preliminarily, anti-invasive effects. Juglone and ascorbate were evaluated for the cytotoxicity in combination with the conventional chemotherapics doxorubicin and cisplatin. Methodology. The phytochemical composition of extracts was evaluated by thin layer chromatography with UV-Vis spectroscopy. Cytotoxicity on MCF-7 and T24 cells was checked by the MTT assay. The damaging potential on DNA was assessed in vitro by the electrophoretic motility of plasmid DNA and immunoelectrophoresis for phosphorylation of histone gamma-H2Ax in T24 cells. Markers of oxidative stress, ROS generation and GSH consumption, and the phosphorylation of the eukaryotic initiation factor eIF2á were analyzed as well. The induced cell death process was monitored by caspase activation through spectrofluorimetry and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) cleavage by immunoelectrophoresis. The antiproliferativo action was measured by the colony forming assay. Cell motility inhibition was investigated by a migration assay. In vivo antitumor activity was measured in Ehrlich carcinoma-bearing Balb-c mice. Results. Spectra about the major constituents in SFE presented typical bands of polyacetylenes recorded in UV at 208, 269 and 334 nm. Cytotoxicity in vitro was concentration-dependent. At 24 h, IC50 was 811 and 437 ìg/mL, respectively for HCE and SFE on MCF-7 cells, falling to 291 ìg/mL at 48 h, in the case of SFE. At 24h, IC50 was 28.5 ìM for juglone on T24 cells, falling to 6.3 ìM when it was combined with ascorbate 1 mM. At 24 h, the cisplatin#s cytoxicity on T24 cells increased up to 2-fold due to its combination with juglone and ascorbate. HCE caused DNA damage at 160 ìg/mL, whereas SFE at 40 ìg/mL caused equivalent damage. Juglone triggered DNA damage at 20 ìM, whereas 5 ìM in combination with ascorbate 1 mM caused equivalent damage. Juglone caused reduction in terms of ROS generation and increased GSH consumption, triggering eiF2á phosphorylation that indicates endoplasmic reticulum stress. These actions were potentiated up to 4-fold due to the combination of juglone with ascorbate. Juglone alone or combined with ascorbate did not cause caspase activation, corroborating T24 cell morphology under demise, the induced cell death process seems to be close related to necrosis. Under sublethal treatments, juglone reduced the proliferation and the motility of T24 cells, both actions were potentiated due to the combination with ascorbate, something that finally induced to clonogenic cell death. In vivo assays indicated that both extracts from B. pilosa had activity, but SFE caused superior reduction in terms of ascitic fluid volume and packed cells (4 ± 1 e 1 ± 0.4 mL, respectively). Furthermore, SFE increased more the animals life span (~31%) compared to animals from the negative control. The tumor growth inhibition by HCE was about 40%, whereas more than 60% was reached by SFE. Conclusion. Supercritical extraction with fluid CO2 is a choice to obtain an extract from B. pilosa rich in cytotoxic polyacetylenes with superior antitumor activity in comparison to that of the extract obtained by hydroethanol maceration. Ascorbate potentiated the cytotoxicity, the antiproliferative action and the inhibition of T24 cells motility in vitro by juglone. These findings lead to suggest that the dose of the treatment done with juglone can be adjusted, in terms of reduction, up to 4-fold, if juglone is administered in combination with ascorbate.

Orientador: Aldo Eloizo Job / Banca: Eduardo Rene Perez Gonzalez / Banca: Edgardo Alfonso Gomes Pineda / Banca: Antonio Hernandes Chaves Neto / Banca: Aneli de Melo Barbosa / Resumo: Biomateriais podem ser definidos como dispositivos que entram em contato com sistemas biológicos tanto na forma de sólidos quanto de líquidos e géis. Para um novo biomaterial, são necessários testes toxicológicos e de interação in vitro e in vivo. O látex é uma substância branca e leitosa que exsuda da casca da Hevea brasiliensis quando a mesma é perfurada e que tem sido apontado como um biomaterial promissor. O látex quando centrifugado em alta velocidade é separado em três frações: a fração com partículas de borracha, uma fração aquosa chamada fração C e uma fração de fundo chamada fração B. A fração C é a fração metabolicamente ativa do látex. Assim, o presente estudo investigou os potenciais efeitos antioxidantes, citotóxicos, genotóxicos e antitumorais da fração C do látex da Hevea brasiliensis. Para isso, foram utilizados os testes de sequestro de radicais livres e capacidade antioxidante total em meio in vitro sem células; o teste do MTT, o ensaio do cometa, avaliação de morte celular com coloração com Hoechst 33342 e Iodeto de Propídio (PI) e avaliação de parâmetros bioquímicos de estresse oxidativo em meio in vitro com duas linhagens celulares, a CHO-k1, linhagem de células normais de epitélio de ovário de hamster, e a B16F10, linhagem de células de melanoma murino; e a ação da fração C na indução de carcinoma de células escamosas (SCC) em camundongos SKH-1 por exposição crônica à radiação UVB. Nossos resultados mostraram que a fração C é antioxidante, com capacidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biomaterials can be defined as devices that come in contact with biological systems in the form of solids, liquids and gels. In vitro and in vivo toxicological tests are needed for a new biomaterial to come out. Latex is a while and milky solution that exsudes from Hevea Brasiliensis bark when perforated, and it has been appointed as a new promising biomaterial. When centrifuged in high speed, latex can be separated in three parts: rubber particle fraction, aqueous C-serum fraction and a bottom fraction called B-serum. C-serum is the part that is metabolically active. In this way, the aim of this work was to investigate potential antioxidant, cytotoxic, genotoxic and antitumor effect of latex C-serum from Hevea brasiliensis. For this purpose, we used in vitro free-radical scavenger and total antioxidant capacity tests; MIT test, comet assay, staining with Hoechst 33342 and Propidium Iodide (PI) to evaluate cell death, and evaluation of biochemical parameters of oxidative stress in Chinese hamster ovary epithelium normal cell line, CHO-K1, and murine melanoma cell line, B16F10; and C-serum effects in the inductino of squamous cell carcinoma (SCC) in KKH-1 mice by chronic UVB exposure. Our results show that latex C-serum is an antioxidant compound that was able to scavenge HO and NO radicals and H2O2. C-serum did not after the cell viability in CHO-k1 cells and it did not promote DNA damage in these cells, it did not after the levels of apoptotic and necrotic cells for this cell lineage and did not alter total thiol and MDA levels in these cells. However, for B16F10 cells, latex C-serum presented antitumor effect, reducing cell viability, inducing DNA damage and cell death, and altering total thiol and MDA levels in these cells. In the animals chronically exposed to UVA radiation, latex C-serum proteted the erythrocytes and skin cells from oxidative stress promote by the irradiation, and... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Adelino Vieira de Godoy Netto / Coorientador: Adriano Bof de Oliveira / Banca: Marian Rosaly Davolos / Banca: Fillipe Vieira Rocha / Resumo: Compostos ciclometalados de paládio(II) vêm sendo sistematicamente investigados não somente pelas suas propriedades catalíticas e mesogênicas mas, também, pela sua potencial aplicação como metalofármacos. Os complexos ciclopaladados contendo ligantes fosfínicos são uma classe bastante estudada por apresentarem mecanismos de ação diferentes daqueles conhecidos pelos agentes antitumorais tradicionais de platina. Nesse sentido, o objetivo central desse trabalho é sintetizar compostos organometálicos de Pd(II) contendo ligante benzaldeído-oxima e 1,1'-bis(difenilfosfina)ferroceno a fim de investigar seu potencial biológico. Esses novos complexos serão caracterizados no estado sólido e em solução pelas técnicas de análise elementar (CHN), espectroscopia de absorção vibracional na região do infravermelho, difração de raios X em monocristal, espectroscopia de RMN em solução. Com a determinação das propriedades químicas e físicas desses novos complexos, os mesmos serão aplicados em ensaios de citotoxicidade in vitro com células MCF-7, A549 e MRC-5 a fim de avaliar seu potencial antineoplásico, além de ensaios bactericidas frente a bactérias gram positivas e gram negativas. / Abstract: Cyclometalated complexes of palladium(II) have been systematically investigated not only for their catalytic and mesogenic properties but for the application as metallopharmaceuticals as well. Cyclopalladated containing phosphinic ligands are a notable class with an alternative biological mechanism different from that in platinum compounds regarding the anticancer activity. With this in mind, the purpose of this work is to synthesize organometallic compounds of Pd(II) derivated from benzaldehyde-oxime and 1,1'-bis(diphenilphosphino)ferrocene ligands to investigate their biological activity. The complexes were characterized in solid state and in solution techniques through CHN analysis, Infrared vibrational spectroscopy, Single crystal X ray diffraction and NMR spectroscopy in solution. Knowing the physical and chemical properties of these new compounds, in vitro cytotoxic assays with MCF-7, A549 and MRC-5 cells are performed to evaluate the antineoplastic potential, besides bactericidal activity against gram positive and gram negative bacteria. / Mestre

Orientador: Christiane Pienna Soares / Coorientador: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: Raquel Alves dos Santos / Resumo: carcinoma hepatocelular (CHC) é um tumor primário mais frequente do fígado, sendo a terceira causa de mortalidade por câncer. Dentre os tumores hepáticos primários o CHC é responsável por quase 90% dos casos. Frente a busca para o desenvolvimento da produção de novos fármacos derivados de produtos naturais, os fungos endofíticos apresentam-se como fontes promissoras. Estudos recentes mostraram que os extratos de fungos endofíticos tem várias atividades, como propriedades anti-tumorais. O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de citotóxica dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos isolados de Eugenia jambolana nas linhagens hepatocarcinoma murinho (Hepa 1c1c7), linhagem humana de hepatocarcinoma (Hep G2) e queratinócito normal de pele (HaCat) e verificar a indução de apoptose, atividade de caspase, genotoxicidade, mutagenicidade e identificar a distribuição no ciclo celular. Nossos resultados indicam que ambos os extratos apresentaram atividade inibidoras. O extrato bruto do fungo Pseudofusicoccum stromaticum (Ej-fm1) apresentou maior seletividade para Hepa1c1c7, apresentando CI50 de 58 μg/mL, com uma inibição celular de 63,4% e 38,4% para as concentrações de 100 μg/mL e 50 μg/mL. Enquanto HepG2 e HaCat não apresentaram morte celular significativa. O extrato de Neofusicoccum sp. (Ej-fv1) induziu alta citotoxicidade, apresentando inibição celular 67,83% apenas na concentração de 100 μg/mL com um valor de CI50 de 89 μg/mL. HepG2 e HaCaT demonstraram inibição celular significativa (38,4% e 43,5%, respectivamente), mas também apenas na maior concentração (100 μg/mL). Na avaliação de apoptose usando o método Hoechst/Iodeto de propídeo em Hepa1c1c7, o extrato (Ej-fm1) apresentou diferença estatística para a presença de apoptose tardia, bem como necrose. Mas para o extrato (Ej-fv1) houve morte celular significativa apenas na concentração de 100 μg/mL para a apoptose precoce e... / Abstract: Hepatocellular carcinoma (HCC) is more frequent primary liver cancer, and third most commum cause of cancer mortality. Among primary liver tumors HCC is responsible for nearly 90% of cases. Compared to search for the development of production of novel drugs from natural products, the endophytic fungi have been presented as promising sources. Recent studies showed that extracts of endophytic fungi have various activities, such as, properties antitumor. The aim of this study was to evaluate cytotoxicity capacity of the crude extract isolated endophytic fungus ripe fruit, Ej-fm1 and unripe fruit, Ej-FV1 Eugenia jambolana in Murine hepatoma cell (Hepa 1c1c7), Human hepatocarcinoma cell line (Hep G2) and spontaneously immortalized human keratinocytes (HaCaT) and check the induction of apoptosis, caspase activity, genotoxic activity, mutagenic and distribution of cell cycle. Our findings indicate that demonstrated that both extracts showed inhibitory activities. The crude extract from Pseudofusicoccum stromaticum (Ej-fm1) possessed more selectivity against Hepa1c1c7 showed IC50, value of 58 μg/mL, having a cellular inhibition 63.4% and 38.4% for the concentration 100μg / ml and 50μg/ml. While for HepG2 and HaCat, no significant cell death. The extract of Neofusicoccum sp.(Ej-fv1) induced high cytotoxicity, showed cellular inhibition 67.83% just at concentration 100μg/ml with IC50 value of 89 μg/mL. HepG2 and HaCaT cell also showed significant inhibition (38.4% and 43.5%, respectively) also only at the highest concentration. To evaluate apoptosis using Hoechst/ Propidium iodide method in Hepa1c1c7 cells, the extract (Ej-fm1) showed statistical difference for presence of late apoptosis, as well as necrosis. But the extract (Ej-fv1) there are significant cell death only in the concentration of 100μg / mL for early apoptosis and necrosis, noting a concentration-response for early apoptosis. About the analyses of cell death mechanisms, we ... / Mestre

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Daniele Cardoso Geraldo Maia / Banca: Clelia Akiko Hiruma Lima / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Edson Rodrgues Filho / Resumo: Nos últimos vinte anos, os quimioterápicos naturais foram introduzidos no tratamento do câncer e com estas novas perspectivas, vem aumentando o interesse das indústrias farmacêuticas em produtos de origem natural. Além disso, existe um grande interesse na identificação de novos agentes antineoplásicos, que possuam ação citotóxica seletiva associada à atividade imunomodulatória. Neste contexto, o presente estudo investiga possíveis efeitos farmacológicos de Qualea multiflora Mart (Vochysiaceae), utilizada na medicina popular do cerrado para o tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. A partir de resultados in vitro, propôs-se avaliar um tratamento in vivo em modelo tumoral mamário murino empregando-se uma fração terpênica (FT) derivada de Qualea multiflora (Q. multiflora) e as substâncias isoladas presentes nesta fração, lupeol (LP), lupenona (LP) e friedelina (FR), concomitantemente à avaliação dos efeitos imunológicos das substâncias testadas nos animais portadores de tumor. Os resultados parciais do presente estudo mostraram que as substâncias isoladas LP, LN e FR e a fração FT, na maioria das concentrações testadas, não apresentaram efeito tóxico in vitro sobre as células imunes, macrófagos e linfócitos . No entanto, LP, LN, FR e FT apresentaram excelente atividade citotóxica contra a linhagem tumoral LM3. AE não mostrou efeito tóxico in vitro contra a linhagem LM3. Por outro lado, a droga padrão Taxol (TX), apresentou pouco efeito tóxico contra a linhagem tumoral LM3, e acentuado efeito citotóxico contra macrófagos, indispensáveis à contenção tumoral. A partir destes resultados foram selecionadas as concentrações ideais para tratamento in vivo. Os resultados mostraram expressiva inibição do volume tumoral quando os animais foram tratados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the last twenty years, natural chemotherapeutic treatment were introduced into treatment of cancer and with these new perspectives, it has been increasing the interest of pharmaceutical products from natural origin. Moreover, there is great interest in identifying new anticancer agents that have selective cytotoxic activity associated with immunomodulatory activity. In this context, this study investigates possible pharmacological effects of Qualea multiflora (Q. multiflora) Vochysiaceae family, used in folk medicine of Brazilisn cerrado in the treatment of ulcers, gastritis, amebiasis, bloody diarrhea, intestinal pain and inflammation. From in vitro results, this study proposed to evaluate an alternative form of treatment for breast cancer employing a terpenic fraction (FT) derived from the chloroform extract of Q. multiflora and the isolated compounds present in this fraction, Ellagic Acid (EA), lupeol (LP), Lupenona (LP) and friedelin (FR) in an in vivo model of murine breast cancer concurrently to assess the immunological effects of the substances tested in animals with tumor. Partial results of this study showed that the isolated compounds AE, LP, LN and FR and FT fraction, most of the concentrations tested, showed no toxic effect in vitro on immune cells, macrophages and lymphocytes. However, LP, LN, FR and FT showed excellent cytotoxic activity against tumor line LM3. AE showed no toxic effect in vitro against strain LM3. Moreover, the standard drug Taxol (TX) showed little toxic effect against LM3 type of tumor, and marked effect against cytotoxic macrophages necessary for the containment of the tumor. From these results we selected the optimal concentrations for in vivo treatment. The results showed significant inhibition of tumor volume when the animals were treated... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor