Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2017-12-26T18:34:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE-PPGCF-BC-UFPE.pdf: 10588160 bytes, checksum: d80cceb99be1ce649a6d1c41562ac460 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-26T18:34:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE-PPGCF-BC-UFPE.pdf: 10588160 bytes, checksum: d80cceb99be1ce649a6d1c41562ac460 (MD5) Previous issue date: 2016-11-30 / FACEPE / A anfotericina B (AnB) é um antibiótico macrolídeo derivado de uma cepa de Streptomyces nodosus, de reconhecida atividade antifúngica e leishmanicida. No entanto, tem seu uso limitado em razão da elevada toxicidade. Para tentar reduzir essa toxicidade na forma convencional tem se estimulado o desenvolvimento de novos sistemas de liberação. A via tópica oferece algumas vantagens, todavia a eficácia tópica só é obtida quando o fármaco apresenta adequado grau de penetração na pele. As microemulsões (MEs) são uma proposta interessante para a veiculação por via tópica da AnB, pois atuam como promotores de permeação, devido ao reduzido tamanho das gotículas formadas, assim como pelo seu alto conteúdo de tensoativos, que desorganiza os lipídeos da pele. Além disso, as MEs podem proporcionar uma modificação na biodisponibilidade e na diminuição da toxicidade dos fármacos, visto que esses sistemas apresentam-se como reservatórios capazes de liberar e direcionar os fármacos para tecidos e células específicas do organismo. Portanto, o objetivo deste estudo foi desenvolver e comparar as características biofarmacêuticas e potencial irritante de MEs e sistemas convencionais (SCs) contendo óleo de Syagrus cearensis para administração tópica de AnB. Diagramas de fase pseudo-ternários foram construídos utilizando o método de titulação de água para desenvolver as MEs e os SCs foram preparados de acordo com a técnica clássica de inversão de fase. No estudo de permeação e retenção cutânea, pele de porco dermatomizada sem estrato córneo foi utilizada como um modelo de biomembrana lesionado. O potencial de irritação foi avaliado utilizando três métodos alternativos, os ensaios da membrana corioalantóide (HET-CAM e CAM-TBS) e o teste de opacidade e permeabilidade em córnea bovina (BCOP). A formulação otimizada (ME02) consistiu em Anfotericina B a 0,1% (p/p), óleo catolé 9,1% (p/p), Smix (1:1, Tween 20 e Kolliphor EL) 81%, tamanho de gotícula de 31,02 ± 0,9 nm, potencial zeta de -23,4 mV e viscosidade 0,63 ± 0,1 Pa.s. A ME02 exibiu maior retenção de AnB nas camadas de pele (84,79 ± 2,08 μg.cm-2) do que todas as outras formulações. Em geral, as MEs apresentaram maior liberação e retenção do fármaco do que os SCs e todas as formulações mostraram maior retentividade que permeabilidade. Apenas as MEs desenvolvidas usando Labrasol/Plurol (L/PO) como par de tensoativos exibiram um potencial de irritação moderado, todas as outras formulações foram classificadas como não-irritantes ou levemente irritantes. Os resultados indicam que as formulações contendo óleo de S. cearensis são alternativas promissoras para a administração tópica da AnB visando o tratamento da leishmaniose cutânea. / Amphotericin B is a macrolide antibiotic derived from a strain of Streptomyces nodosus, known for its antifungal and antileishmanial activity. However, it has limited use due to the high toxicity. In order to reduce the toxicity in the conventional way, the development of new delivery systems has been stimulated. Topical administration of active drugs is a route that offers certain advantages, however, topical efficacy is only obtained from drugs with a suitable degree of penetration into the skin. Microemulsions are an interesting proposal for topical administration of Amphotericin B, because they act as permeation enhancers, due to the small size of the droplets formed, as well as to its high content of surfactants, which disrupts the skin lipids. Moreover, the MEs can also provide a change in bioavailability and by decreasing the toxicity of drugs, since such systems are presented as reservoirs capable of releasing drugs and targeting tissues and specific cells of the organism. Therefore, the aim of this study was to compare the biopharmaceutical characteristics and irritation potentials of microemulsions (MEs) and conventional systems (CSs) containing oil from Syagrus cearensis for intradermal delivery of Amphotericin B (AmB). Pseudo-ternary phase diagrams were constructed using a water titration method to develop the MEs, and the CSs were prepared according to the classical technique of phase inversion. In the skin permeation and retention study, dermatomed pig skin without stratum corneum was used as an alternative disturbed skin model. The irritation potential was evaluated using three different methods, chorioallantoic membrane assays (HET-CAM and CAM-TBS), and bovine corneal opacity and permeability test (BCOP). The optimized formulation (ME02) consisting of 0.1% (w/w) Amphotericin B, 9.1% (w/w) catolé oil, 81% (w/w) Smix (1:1, Tween 20 and Kolliphor EL) possessed droplet size of 31.02 ± 0.9 nm, zeta potential of -23.4 mV and viscosity 0.63 ± 0.1 Pa.s. ME02 exhibited greater retention of AmB in to skin layers (84.79 ± 2.08 μg.cm-2) than all the others formulations. In general, MEs showed higher drug release and retention than CSs and all of the formulations showed greater retentivity than permeability. Only MEs developed using Labrasol/Plurol Oleique (L/PO) as the surfactant and co-surfactant exhibited a moderate irritation potential, all other MEs and CSs were classified as non-irritants or slight irritants. The results indicate that formulations containing oil from S. cearensis are promising alternatives for the delivery of AmB targeting the treatment of cutaneous leishmaniasis.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El factor de crecimiento diferencial 9 (GDF-9) y la proteína morfogénica ósea 15 (BMP-15) regulan en diferentes especies procesos esenciales para la maduración del ovocito, tales como la expansión del cúmulo. Este estudio evaluó en caninos la expresión génica de GDF-9 y BMP-15 en las células del cúmulo (CCs) obtenidas de complejos cúmulos ovocitos (COCs) a través del ciclo estral en relación a la maduración in vitro (IVM) de los ovocitos y la expansión de estas células. Las CCs se obtuvieron de COCs de folículos antrales de anestro, proestro, estro y diestro, previo y después de la IVM, expandidas y no expandidas. Para lograr mayor cantidad de CCs, antes y después de la IVM, estas se cultivaron in vitro por 48 h en medio Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) con suero fetal bovino. El desarrollo meiótico luego de la IVM se evaluó mediante microscopía de fluorescencia, clasificándolo en vesícula germinal (VG), reinicio meiótico (GVBD), primera metafase (MI) y segunda metafase (MII). La expresión relativa de GDF-9 y BMP-15 en las CCs se evaluó mediante q-PCR. Estos genes se encontraron en todas las etapas del ciclo antes y después de la IVM, con diferencias significativas entre estas en relación a la expansión y maduración de los ovocitos. De acuerdo a los estados del ciclo estral, en las CCs de COCs no madurados, los niveles de GDF-9 fueron mayores (P < 0,05) durante el estro, seguido por el diestro y los menores (P < 0,05) niveles en proestro y anestro. En BMP-15, los mayores (P < 0,05) niveles de mRNA se observaron en estro y diestro. En las CCs expandidas no hubo diferencias en GDF-9 entre las distintas etapas del ciclo, pero en BMP-15 los menores (P < 0,05) niveles de mRNA se observaron en estro. Luego de la maduración, hubo un incremento (P < 0,05) de los transcriptos de ambos genes en las CCs de anestro, proestro y diestro, excepto los niveles de mRNA de BMP-15 durante el diestro. En estro en cambio, hubo una disminución significativa de la expresión de los dos genes luego de la IVM. No se encontraron diferencias significativas en la capacidad de alcanzar el estado de MII al considerar la etapa del ciclo. Sin embargo, los COCs obtenidos de proestro y diestro que expandieron sus CCs pudieron reiniciar la meiosis en mayor (P < 0,05) porcentaje en comparación con las demás etapas del ciclo y los COCs de estro que expandieron sus CCs lograron mayores (P < 0,05) porcentajes de MII en relación a los que no expandieron el cúmulo. En conclusión, GDF-9 y BMP-15 se expresan en las CCs en todas las etapas del ciclo con un patrón diferente de acuerdo a cada una y estarían involucrados en la expansión del cúmulo de la perra, pudiendo estar relacionado con la maduración meiótica in vitro, al menos en aquellos ovocitos en etapa estral. / Differential growth factor 9 (GDF-9) and bone morphogenic protein 15 (BMP-15) regulate essential processes for oocyte maturation in different species, such as cumulus expansion. This study evaluated gene expression of GDF-9 and BMP-15 in canine cumulus cells (CCs) obtained from cumulus-oocyte complexes (COCs) through the estrous cycle in relation to oocyte in vitro maturation (IVM) and the expansion of CCs. The CCs were obtained from COCs of antral follicles from anestrus, proestrus, estrus, diestrus phases, before and after IVM, expanded and non-expanded. To achieve more CCs, before and after IVM, these were cultured in vitro for 48 h in Dulbecco's Medium Modified Eagle's Medium (DMEM) with fetal calf serum. The meiotic development after IVM was evaluated by fluorescence microscopy, classifying it in germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVBD), first metaphase (MI) and second metaphase (MII). The relative expression of GDF-9 and BMP-15 in the CCs was evaluated by q-PCR. These genes were found in all stages of the reproductive cycle, before and after IVM, with significant differences between them in relation to the expansion and oocytes maturation. According to the estrous cycle stages, CCs from non-matured COCs expressed higher (P < 0.05) levels of GDF-9 mRNA during estrus in comparison with the other phases and the lowest (P < 0.05) levels at proestrus and anestrus. The highest (P < 0.05) levels of BMP-15 transcripts were observed in estrus and diestrus. There were no differences in GDF-9 gene expression comparing expanded CCs among the different phases of the estrous cycle, regarding BMP- 15 transcripts, the lowest (P < 0.05) levels were registered in estrus. After IVM, the level of both genes increased (P < 0.05) in CCs of anestrus, proestrus and diestrus, except BMP-15 during diestrus. In contrast, in estrus GDF-9 transcripts significantly decreased after IVM. Non expanded CCs exhibited the lowest levels of both genes at anestrus and proestrus, whereas at diestrus the levels of GDF-9 in non-matured CCs were lower (P < 0.05) than that of the expanded cells, the levels of BMP-15 were similar. No differences were found in the oocyte ability to reach MII state when comparing the phases of the estrous cycle. However, COCs obtained from proestrus and diestrus that expanded their CCs showed higher (P < 0.05) percentage of meiosis resumption than to the other phases. At estrus expanded CCs achieved higher (P < 0.05) percentages of MII in comparison to those did not expand. In conclusion, GDF-9 and BMP-15 are expressed in the CCs over the estrous cycle with different patterns according each phase and these genes maybe involved in the cumulus expansion in canines, maybe related to the in vitro maturation, at least in oocytes at estrus phase / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1171670

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 renata_muno_ioc_dout_2015.pdf: 22524697 bytes, checksum: 16fdbd8ff7f73d5a41adaa269ff4a04a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Toxoplasma gondii, agente etiológico da toxoplasmose, é um parasito intracelular obrigatório que infecta qualquer célula nucleada. Os felídeos são os únicos hospedeiros definitivos no ciclo de vida deste parasito, e suas células epiteliais intestinais são o nicho exclusivo para o desenvolvimento do ciclo sexuado do protozoário. A liberação de oocistos nas fezes de felinos contaminam o meio ambiente e este é o principal fator que explica a distribuição mundial da toxoplasmose. A infecção dos hospedeiros intermediários por oocistos, como aves e mamíferos de sangue quente, incluindo o homem, leva à formação de cistos teciduais, ampliando a transmissão do parasito, por meio do consumo de carne crua ou mal cozida. Os mecanismos que regem a diferenciação do T. gondii em células epiteliais e o conhecimento limitado do ciclo sexuado do parasito são as principais justificativas para o desenvolvimento desta tese. O emprego de células de felinos para o estudo da interação do T. gondii é pioneiro, criando novos campos de investigação sobre os aspectos da interação do parasito no hospedeiro definitivo. Assim, linhagens celulares oriundas do epitélio renal de felinos (CRFK) e de macaco verde (Vero), epitélio intestinal de ratos (IEC-6) e cultura primária de enterócitos de felinos (CEIF) foram utilizadas como modelo experimental da infecção pelo T. gondii. O desenvolvimento intracelular do parasito variou com a origem da célula epitelial e também com a relação parasito:célula hospedeira utilizada nos ensaios in vitro. As células de felino, CRFK, foram mais susceptível à infecção por bradizoítos do que as linhagens epiteliais de outras origens A formação de cistos in vitro foi observada nas células CRFK e Vero ao se utilizar a relação de 1:10 (bradizoíto:célula hospedeira). Culturas de CEIF tiveram sua natureza epitelial revelada pela presença de citoqueratina, expressão de fosfatase alcalina intestinal, presença de microvilosidades e junções intercelulares. A infecção de CEIF com bradizoítos de T. gondii cepa ME49 demonstrou que a carga parasitária foi decisiva para o destino intracelular do parasito: a relação de 1:5 favoreceu a proliferação de taquizoítos e o ciclo lítico; 1:10 foi determinante para o estabelecimento da cistogênese; e estruturas semelhantes a esquizontes foram identificadas quando a carga de 1:20 foi utilizada. A análise morfológica da infecção por períodos de 1 a 9 dias apontou diferentes estágios do parasito em células intestinais de felinos, semelhantes aos observados em estudos in vivo. Explorar esta nova linha de pesquisa, num campo ainda limitado aos ensaios de infecção experimental de gatos e preencher as lacunas no conhecimento da biologia do T. gondii em enterócitos de felinos é inovador e desafiador. Novas perspectivas se abrem, nos estudos dos aspectos moleculares que possam governar esta interação, contribuindo para o desenvolvimento de novas estratégias de intervenção de uma das principais rotas de disseminação da toxoplasmose / Toxoplasma gondii, the etiologic agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular parasite that infects any nucleated cell. The felines are the only definitive hosts in the life cycle of this parasite, being the intestinal epithelial cells, the unique niche for the development of protozoan sexual cycle. The release of oocysts in the feces of cats contaminates the environment and is the main factor explaining the worldwide distribution of toxoplasmosis. The infection by oocysts of intermediate hosts, such as warm-blooded birds and mammals, including man, leads to the formation of tissue cysts, promoting the increase in the parasite transmission through the consumption of raw or undercooked meat. The mechanisms involved in T. gondii differentiation in epithelial cells and the knowledge of the parasite sexual cycle are still unclear, justifying the development of this thesis. The use of feline cells for study the T. gondii interaction is pioneer, evaluating novel fields of research on aspects of the parasite relationship in definitive host. Therefore, cell lines derived from feline epithelial kidney (CRFK) and Green Monkey epithelial kidney (Vero), rat intestinal epithelial (IEC-6) and primary cultures of feline intestinal epithelial cells (FIEC) were used as an experimental model for T. gondii infection. The intracellular parasite development was dependent on the epithelial cell source and on parasite: host cell used in in vitro assays. The feline cells, CRFK, were more susceptible to bradyzoites infection than epithelium from other sources. In vitro cyst formation was observed in CRFK and Vero cells by using the ratio 1:10 (bradyzoite: host cell). CEIF cultures had their epithelial nature revealed by presence of cytokeratin, intestinal alkaline phosphatase expression, presence of intercellular junctions and microvilli. The interaction FIEC-T. gondii bradyzoites ME49 strain demonstrated that the parasite load is crucial to definy the Apicomplexan intracellular destiny: a ratio of 1:5 favored the tachyzoites proliferation and the lytic cycle; 1:10 was crucial to the establishment of cystogenesis; and schizont-like structures were identified when the load 1:20 was used. Morphological analysis of the infection for periods of 1-9a days pointed to the different parasite stages in the cats gut, as previous observed in in vivo studies. To explore this novel research line, a still limited field for experimental infection to cats and to fill gaps in the knowledge of T. gondii biology in cat’s enterocytes is exciting and poorly described. New perspectives are open to study molecular aspects involved in this interaction, contributing to the development of alternative intervention strategies of this crucial route of toxoplasmosis spread. / 2017-07-26

TESSAROLO, L. D. Estudo in vitro da atividade tripanocida de nanopartículas de benzonidazol em carbonato de cálcio sobre cepa y de Trypanosoma cruzi. 2016. 83 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-05-24T12:51:25Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_lstessarolo.pdf: 3165613 bytes, checksum: 6ddc54bf2a20e523a76900a0fe202bd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-05-24T12:51:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_lstessarolo.pdf: 3165613 bytes, checksum: 6ddc54bf2a20e523a76900a0fe202bd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-24T12:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_lstessarolo.pdf: 3165613 bytes, checksum: 6ddc54bf2a20e523a76900a0fe202bd4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / The Chagas disease is a major public health problem, affecting about 6 million people worldwide and causes high morbidity and mortality in affected populations. The benznidazole (BZ), the drug used in the treatment has limited effectiveness and cause serious adverse effects. The drug transport by nanoparticles has demonstrated efficacy as the controlled and targeted release of pharmacological molecules, in addition to its desirable properties such as good biocompatibility and biodegradability. The objective of this study was to evaluate the cytotoxicity of benznidazole nanoparticles of calcium carbonate (CaCO3 @ BZ) on host cells LLC-MK2; determining the trypanocidal effect on epimastigotes, trypomastigote and amastigotes of T. cruzi Y strain and comparing the effect of BZ as well as to characterize the mechanism of death. The cytotoxicity tests using the MTT method conducted with LLC-MK2 cells grown in DMEM with 10% FBS showed IC50 of 55 ug / ml for BZ @ CaCO3 and 160 g / mL for BZ. epimastigotes were cultured in LIT 10% FBS at 28 ° C in the presence of CaCO3 @ BZ for 24, 48 and 72 hours. BZ @ CaCO3 showed trypanocidal activity against epimastigotes the three treatment times (24h IC50 = 8.72 mg / ml, 48 h IC50 = 8 ug / ml, 72 h IC50 = 4.8 ug / ml) this being more significant effect the BZ (IC50 = 24h 56.7 g / ml IC50 = 48h 15.9 g / ml, 72 h IC50 = 4.3 ug / ml). trypomastigotes were obtained from LLC-MK2 cells infected supernatants, resuspended in DMEM with 2% FCS and treated for 24 h. The trypomastigotes were more likely BZ @ CaCO3 (IC50 = 1.8 ug / ml) than the BZ (IC50 = 67 ug / ml). These assays were also performed with calcium carbonate nanoparticles free drug (@ CaCO3) used as negative control. In the tests with the amastigote forms obtained by infecting LLC-MK2 cells BZ @ CaCO3 was able to reduce the% of infected cells, the number of amastigotes per infected cells and the survival rate at 24 hours of incubation. Flow cytometric assays using fluorescence markers 7-amino actinomycin D, annexin V-PE and rhodamine 123 demonstrated that the trypanocidal effect of both BZ @ CaCO3 as BZ associated death by necrosis with altered mitochondrial potential. Thus, it is concluded that the CaCO3 has BZ @ trypanocidal effect in vitro on the three forms of Trypanosoma cruzi, this being potentially greater effect than that observed for BZ. / A doença de chagas é um grande problema de saúde pública, afeta cerca de 6 milhões de pessoas em todo o mundo e causa altos índices de morbidade e mortalidade nas populações afetadas. O benzonidazol (BZ), fármaco utilizado no tratamento apresenta eficácia limitada e provoca sérios efeitos adversos. O transporte de fármacos por meio de nanopartículas tem demonstrado eficiência quanto à liberação controlada e direcionada de moléculas farmacológicas, além de apresentar propriedades desejáveis, como boa biocompatibilidade e biodegradabilidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a citoxicidade de nanopartículas de benzonidazol em carbonato de cálcio (BZ@CaCO3) sobre células de hospedeiras LLC-MK2; determinar o efeito tripanocida sobre as formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas da cepa Y de T. cruzi e comparar ao efeito do BZ, bem como, caracterizar o mecanismo de morte. Os testes de citotoxicidade utilizando o método do MTT realizados com células LLC-MK2 cultivadas com meio DMEM a 10% de SBF demonstraram IC50 de 55 µg/mL para BZ@CaCO3 e 160 µg/mL para BZ. Formas epimastigotas foram cultivadas em meio LIT a 10% de SBF a 28ºC na presença de BZ@CaCO3 por 24, 48 e 72 horas. BZ@CaCO3 mostrou atividade tripanocida sobre formas epimastigotas nos três tempos de tratamento (CI50 24h = 8,72 µg/mL; CI50 48h = 8 µg/mL; CI50 72 h = 4,8 µg/ml) sendo esse efeito mais significativo que o do BZ (CI50 24h = 56,7 µg/mL CI50 48h = 15,9 µg/mL; CI50 72h = 4,3 µg/ml). Formas tripomastigotas foram obtidas a partir dos sobrenadantes de células LLC-MK2 infectadas, ressuspensas em meio DMEM com 2% de SBF e tratadas durante 24 h. As formas tripomastigotas foram mais susceptíveis a BZ@CaCO3 (IC50 = 1,8 µg/mL) do que ao BZ (CI50= 67 µg/mL). Esses ensaios também foram realizados com nanopartículas de carbonato de cálcio livres de fármacos (@CaCO3) utilizadas como controle negativo. Nos ensaios com as formas amastigotas obtidas por infecção de células LLC-MK2 BZ@CaCO3 foi capaz de reduzir o % de células infectadas, o número de amastigotas por células infectadas e o índice de sobrevivência em 24h de incubação. Ensaios de citometria de fluxo utilizando os marcadores de fluorescência 7- amino actinomicina D, anexina V- PE e rodamina 123 mostraram que o efeito tripanocida tanto da BZ@CaCO3 quanto do BZ está relacionado a morte por necrose com alteração do potencial mitocondrial. Assim, conclui-se que a BZ@CaCO3 apresenta efeito tripanocida in vitro sobre as três formas de Trypanossoma cruzi, sendo esse efeito potencialmente maior do que o observado para BZ.

Tesis de pregrado / Debido a la popularidad del uso de los agentes de blanqueamiento, hoy en día existe una gran preocupación a nivel profesional sobre los efectos que se puedan dar luego de su aplicación sobre los tejidos dentarios y materiales dentales de restauración, evaluar el efecto in vitro del peróxido de hidrógeno al 35% sobre el sellado marginal de restauraciones con resina compuesta de nanopartículas, se utilizó 146 premorales humanos los cuales fueron extraídos debido a un tratamiento ortodóntico. En estos se realizó una cavidad clase V en la cara vestibular y posteriormente fueron restauradas con resina compuesta de nanopartículas. Se asignó aleatoriamente 73 unidades de estudio a cada grupo. El primer grupo fue el grupo control al que no se le aplicó el peróxido de hidrogeno al 35 %. El segundo grupo fue el grupo experimental al cual se le realizó 4 aplicaciones, de 8 minutos cada una, de peróxido de hidrógeno al 35%, en la cara vestibular de todos los premolares restaurados. Luego todas las piezas dentarias fueron sometidas en una solución acuosa de azul de metileno al 1% como indicador de microfiltración tras lo cual se procedió al corte transversal y análisis bajo microscopio electrónico, con un aumento de 10x para posteriormente asignar valores de microfiltración según el grado de penetración de la tinción en la interfase diente-restauración. Los datos obtenidos serán tabulados en una ficha de recolección de datos, con la prueba Z para diferencia de proporciones, leída al 95% de confiabilidad, el análisis de los resultados obtenidos en este estudio, mediante la prueba Z, indica que existen diferencias estadísticamente significativas en los valores de microfiltración entre el grupo con tratamiento blanqueador y el grupo sin tratamiento blanqueador y se concluyó que el peróxido de hidrógeno al 35% afecta negativamente el sellado de las restauraciones de resina compuesta.

Orientador: Adelino Vieira de Godoy Netto / Coorientador: Adriano Bof de Oliveira / Banca: Marian Rosaly Davolos / Banca: Fillipe Vieira Rocha / Resumo: Compostos ciclometalados de paládio(II) vêm sendo sistematicamente investigados não somente pelas suas propriedades catalíticas e mesogênicas mas, também, pela sua potencial aplicação como metalofármacos. Os complexos ciclopaladados contendo ligantes fosfínicos são uma classe bastante estudada por apresentarem mecanismos de ação diferentes daqueles conhecidos pelos agentes antitumorais tradicionais de platina. Nesse sentido, o objetivo central desse trabalho é sintetizar compostos organometálicos de Pd(II) contendo ligante benzaldeído-oxima e 1,1'-bis(difenilfosfina)ferroceno a fim de investigar seu potencial biológico. Esses novos complexos serão caracterizados no estado sólido e em solução pelas técnicas de análise elementar (CHN), espectroscopia de absorção vibracional na região do infravermelho, difração de raios X em monocristal, espectroscopia de RMN em solução. Com a determinação das propriedades químicas e físicas desses novos complexos, os mesmos serão aplicados em ensaios de citotoxicidade in vitro com células MCF-7, A549 e MRC-5 a fim de avaliar seu potencial antineoplásico, além de ensaios bactericidas frente a bactérias gram positivas e gram negativas. / Abstract: Cyclometalated complexes of palladium(II) have been systematically investigated not only for their catalytic and mesogenic properties but for the application as metallopharmaceuticals as well. Cyclopalladated containing phosphinic ligands are a notable class with an alternative biological mechanism different from that in platinum compounds regarding the anticancer activity. With this in mind, the purpose of this work is to synthesize organometallic compounds of Pd(II) derivated from benzaldehyde-oxime and 1,1'-bis(diphenilphosphino)ferrocene ligands to investigate their biological activity. The complexes were characterized in solid state and in solution techniques through CHN analysis, Infrared vibrational spectroscopy, Single crystal X ray diffraction and NMR spectroscopy in solution. Knowing the physical and chemical properties of these new compounds, in vitro cytotoxic assays with MCF-7, A549 and MRC-5 cells are performed to evaluate the antineoplastic potential, besides bactericidal activity against gram positive and gram negative bacteria. / Mestre

El estudio tuvo como objetivo comparar el grado de conversión (DC) de un cemento resinoso dual All Cem, FGM y una resina precalentada Palfique LX5, Tokuyama, fotoactivados a través de un disco de cerómero de 2mm y 4mm, inmediatamente después la fotopolimerización y 24 horas después. Se desarrolló en el Laboratorio de materiales dentales de la Universidad Federal Río Grande Do Sul- Brasil, conformando dos grupos: GA (grupo del cemento resinoso) dividido en GA2: especímenes resultantes de la fotopolimerización a través de disco de cerómero de 2mm y GA4: especímenes resultantes de la fotopolimerización a través de disco de cerómero de 4mm; y GP (Grupo resina precalentada), dividido en GP2: especímenes resultantes de la fotopolimerización a través de disco de cerómero de 2mm y GP4: especímenes resultantes de la fotopolimerización a través de disco de cerómero de 4mm. El tiempo de calentamiento de la resina fue de 5 minutos, con el dispositivo Ar Heat, (DEASIN). Para la medición del DC se usó el FTIR Vertex, Bruker Optic, Germany. Todas las muestras después de la primera medición fueron almacenadas a 37°C durante 24 horas. Transcurrido este tiempo, se midió una vez más el DC. Para el procesamiento de datos se utilizó el programa SPSS, con las pruebas estadísticas de ANOVA de una vía, comparaciones múltiples de Tucker y T de Student pareado (p<0.05). El estudio concluyó que el DC del GA2 presentó mejores valores que el GP2 inmediatamente después de la fotopolimerización; sin embargo, a las 24 horas no se evidenciaron diferencias significativas. Mientras que el DC del GA4 no presentó diferencias significativas con respecto al grupo GP4 inmediatamente después de la fotopolimerización, ni a las 24 horas, finalmente todos los grupos presentaron variación del DC en ambos tiempos, siendo mayores los valores a las 24 horas, sin presentar diferencias significativas. / Tesis

Ante el fracaso de un tratamiento y retratamiento endodóntico el protocolo adecuado que figura antes de llegar a una exodoncia es la cirugía apical. En la actualidad con una buena preparación científica, clínica y con la ayuda de la tecnología con los diversos equipos y puntas ultrasónicas en la especialidad de endodoncia; se pretende alcanzar una cirugía apical exitosa con una confección de una caja para obturación retrógrada óptima y con una mínima formación de micro fisuras destinarias a nivel del tercio apical de la raíz; para ello se utilizaron las puntas ultrasónicas diamantadas de retro preparación apical Woodpecker y Helse en el equipo ultrasónico Woodpecker UDSE; para determinar la formación de micro fisuras (MF); posterior a la retro preparación apical en premolares. El objetivo planteado de esta investigación fue evaluar la aparición de micro fisuras en la superficie apical posterior a la retro preparación; utilizando las puntas ultrasónicas diamantadas Woodpecker y Helse. La metodología que se empleó fue evaluativa – experimental in vitro; con una muestra no probabilística de treinta premolares, durante los meses de setiembre a octubre del 2017. La superficie radicular de las cavidades de la obturación retrógrada se analizaron visualmente con microscopía electrónica de barrido (SEM) y así poder detectar las micro fisuras dentinarias que se pudieron encontrar. Los resultados evidenciaron que hubo una mayor cantidad de micro fisuras por grupo después de la retro preparación apical y posterior al proceso de metalizado cuando se utilizó puntas diamantadas Helse y una menor cantidad de micro fisuras después de la retro preparación apical y posterior al proceso de metalizado cuando se utilizó puntas diamantadas Woodpecker. / Tesis

Objetivo: Evaluar in vitro el efecto antibacteriano de cuatro extractos metanólicos de Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens y Chondracanthus chamissoi sobre Streptococcus mutans (ATCC®35668™). Metodología: El presente estudio fue de tipo experimental in vitro, en el cual se prepararon cuatro extractos metanólicos de Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens y Chondracanthus chamissoi. Para cada extracto se realizaron 6 pruebas independientes y como control positivo se utilizó la solución de Clorhexidina al 0.12%. Para evaluar el efecto antibacteriano de los extractos se utilizó el método de difusión en pozo de Kirby-Bauer. La concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) fueron evaluadas mediante el método de microdilución y el efecto citotóxico fue determinado por el método de MTT. Resultados: Se observó mayor efecto antibacteriano de los extractos metanólicos de Lessonia trabeculata y Macrocystis pyrifera sobre cepas de Streptococcus mutans, mostrando halos de inhibición de 18.1 mm + 0.75 mm y 12.25 mm + 0.69 mm respectivamente. Mientras que los extractos metanólicos de Lessonia nigrescens y Chondracanthus chamissoi mostraron menor efecto antibacteriano sobre cepas de Streptococcus mutans, observándose halos de 10.08 mm + 0.46 mm y 9.32 mm + 0.49 mm respectivamente. En todos los casos, los extractos metanólicos muestran una baja citoxicidad sobre células MDCK, observando una viabilidad celular de 66% para el caso de Lessonia trabeculata, 85% para el caso de Chondracanthus chamissoi, 65% para el caso de Lessonia nigrescens y 79% para el caso de Macrocystis pyrifera. Conclusiones: Se determinó que los cuatro extractos metanólicos de Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens y Chondracantus chamissoi presentan efecto antibacteriano sobre cepas de Streptococcus mutans, mostrando diferencias significativas entre ellos. Además, los cuatro extractos metanólicos presentan bajo efecto citotóxico sobre MDCK a altas concentraciones. / Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial of the methanolic extracts of Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens and Chondracanthus chamissoi againts Streptococcus mutans (ATCC ®35668™). Material and methods: The present study was of experimental type in vitro, in which four methanolic extracts of Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens and Chondracanthus chamissoi were prepared. For each extract 6 independent tests were performed and as a positive control, the 0.12% Chlorhexidine solution was used. He went with the method of diffusion in the well of Kirby-Bauer, then proceeded to the reading of the halos with an external cover Vernier. Likewise, the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (CMB) of the extracts were found and the cytotoxic effect of each methanolic extract was determined with the MTT method. Results: A higher antibacterial effect was found in the methanolic extracts of Lessonia trabeculata and Macrocystis pyrifera with halos of 18.1 mm + 0.75 mm and 12.25 mm + 0.69 mm respectively on Streptococcus mutans respectively; however, it has the minor antibacterial effect of the methanolic extracts of Lessonia nigrescens and Chondracanthus chamissoi with halos of 10.08 mm + 0.46 mm and 9.32 mm + 0.49 mm. In cell viability, Lessonia trabeculata showed an effect at 66% of concentration similar to or less than 10000 mg / ml of the extract, while the extract of Chondracanthus chamissoi showed an effect superior to 84%, the extract of Lessonia nigrescens to 65% and the extract derived from Macrocystis pyrifera at 79%. Conclusions: It was determined that the four algae have an antibacterial effect against Streptococcus mutans, however there is a statistically significant difference between the extracts of Macrocystis pyrifera and Lessonia trabeculata with the extracts of Lessonia nigrescens and Chondracantus chamissoi. Likewise, the four algae have low cytotoxic effect at high concentrations. / Tesis

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O melanoma é decorrente de um crescimento celular descontrolado, com perda de inibição por contato e alterações no núcleo, afetando a manutenção dos telômeros. A telomerase, responsável pela síntese do telômero, protege o final da molécula de DNA. Sua atividade está ausente na maioria das células somáticas humanas e presente em quase todas linhagens de células tronco, germinativas e em mais de 90% dos tumores humanos. Estudos sugerem que a progressão de doenças malignas depende da reativação da telomerase, e que um agente inibidor dessa enzima poderia ser uma droga antitumoral efetiva, entre elas, o azidotimidinatrifosfato (AZT), sendo provado que o uso dessa droga em algumas neoplasias inibe in vitro sua ação. Objetivo: Avaliação da atividade da telomerase e da proliferação de células imortalizadas de melanoma Hs839T catalogo CRL-7572 submetidas à ação do AZT. Métodos: Foram utilizadas, linhagens de células de melanoma Hs839T catalogo CRL-7572, adquiridas via American Type Culture Collection, derivada da pele de um indivíduo caucasiano do sexo feminino de 42 anos. As células foram cultivadas em meio de cultura, suplementadas com diferentes concentrações de AZT em triplicata com 50, 100 e 200µM por 24h e 48h e comparados seus efeitos ao grupo controle. A avaliação da proliferação celular foi realizada pela técnica de MTT. A detecção da atividade da telomerase por KIT TRAPEZE® RT s7710 e PCR ELISA. Resultados: No tempo de 24 horas, quando comparado ao grupo controle, não houve inibição da proliferação celular e da atividade da telomerase da linhagem de melanoma Hs839T catalogo CRL-7572, embora sugira tendência à diminuição, quando comparados os grupos controle e 200µM. No tempo de 48 horas, houve uma diminuição momentânea, seguida de rápida recuperação, sugerindo que as células de linhagem utilizadas neste estudo são sensíveis ao AZT, mas que recuperam a atividade enzimática e proliferativa. Conclusão: A ação do AZT em células de melanoma HS839.T catalogo CRL-7572 estudadas nas concentrações e tempos propostos, não inibiu a atividade da telomerase e não afetou a proliferação celular. / Introduction: Melanoma is caused by an uncontrolled cell growth, with lossof inhibition contact and changes in the nucleus, affecting the maintenance of telomeres. Telomerase, responsible for telomere synthesis, protects the end of the DNA molecule. Its activity is absent in most human somatic cells and present in almost all lines of stem cells, germinatives, and in more than 90% of human tumors. Studies suggest that the malignancy progression depends on the telomerase reactivation, and that an inhibitor of this enzyme could be an effective antitumor drug, including the Azidothymidine-triphosphate (AZT) and proved that the use of this drug in some neoplasms inhibits their action “in vitro”. Objective: Evaluation of telomerase activity and proliferation of melanoma cells immortalized Hs839T catalog CRL-7572 subjected to the AZT action. Methods: We used melanoma cell lines of Hs839T catalog CRL-7572, acquired through American Type Culture Collection, derived from the skin of a 42-year-old Caucasian female person. The cells were grown in culture environment supplemented with different AZT concentrations in triplicate 50, 100 and 200µM) withim 24 and 48 hours and its effects compared to the control group. The cell proliferation evaluation was performed by MTT. Detection of telomerase activity by KIT S7710 TRAPEZE ® RT and PCR ELISA. Results: In 24 hours time, when compared to the control group, there was no inhibition of proliferation cell and telomerase activity, although there was tendency to decrease when compared to the control group and 200µM. In 48 hours time, there was a momentary decrease, followed by rapid recovery, suggesting that the cell lines used in this study are sensitive to AZT, but they recover the enzyme activity and proliferation. Conclusion: The action of AZT in melanoma cells HS839.T studied in the proposed concentrations and times did not inhibit telomerase activity and did not affect cell proliferation. / FAPESP: 07/59225-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações