Objetivo: Evaluar in vitro el efecto antibacteriano del extracto metanólico de Uncaria Tomentosa (Uña de Gato) sobre cepas de Staphylococcus aureus (ATCC®25923™) y Fusobacterium nucleatun (ATCC®25586™) Materiales y métodos: El estudio fue de tipo experimental in vitro. Para la actividad antibacteriana se utilizó el método de Difusión en Agar y para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) se trabajó con el método de dilución en caldo en medio Brain Heart infusión Broth (BHI). Mientras que, la evaluación del efecto citotoxico del extracto se evaluó mediante el ensayo colorímetro del 3-(4.5-dimeltiltiazol-2-yl) -2.5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) utilizando la línea celular Madin Darby Canine Kidney (MDCK). Resultados : El extracto metanólico de Uncaria Tomentosa tiene efecto antibacteriano frente a la cepa de Staphylococcus aureus, observándose halos de inhibición de 31.3 ± 2.66 mm. Se utilizó la Clorhexidina al 0.12% como control positivo, con resultados superiores de 59.1 mm ± 3.6 mm. En el caso de Fusobacterium nucleatun, no se evidenció efecto antibacteriano con el extracto metanólico de Uncaria Tomentosa. La CMI del extracto fue de 0.0016 mg/ml frente al Staphylococcus. La viabilidad celular del extracto se mantiene con valores altos (16 000 mg/ml), no se encontró efecto citotóxico. Conclusiones: Con la actividad antimicrobiana del extracto de Uncaria tomentosa, se sugiere seguir con más investigaciones que aporten al conocimiento científico y a partir de ello, se puedan desarrollar nuevos medicamentos antibacterianos en distintas presentaciones y así afrontar los diferentes problemas en la salud oral. / Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of the methanolic extracts of Uncaria tomentosa (Cat´s Claw) againts Staphylococcus aureus (ATCC® 25923™) y Fusobacterium nucleatun (ATCC® 25586™). Material and Methods: The study was of experimental type in vitro. For the antibacterial activity the diffusion method was used in agar and to determine the minimum inhibitory concentration (MIC), the broth dilution method was used in Brain Heart Broth infusion medium (BHI). While the evaluation of the cytotoxic effect of the extract was evaluated by the colorimeter assay of 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) using the Madin Darby Canine Kidney cell line (MDCK). Results: There is an antibacterial effect of the methanolic extract of Uncaria Tomentosa against Staphylococcus aureus, where inhibition halo of 31.3 ± 2.66 mm were observed. Clorhexidine 0.12% was used as a positive control with superior results of 59.1 mm ± 3.6 mm. On the other hand, there was not antibacterial effect against the Fusobacterium nucleatum strains. Then, the MIC of the extract was 0.0016 mg/ml against Staphylococcus aureus. The cell viability of the extract is maintained at high values (16,000 mg/ml), no cytotoxic effect was found. Conclusion: With the antimicrobial activity of the extract of Uncaria tomentosa, it´s suggested to continue with more research that contributes to scientific knowledge and from this, new antibacterial drugs can be developed in different presentations and thus face the different problems in oral health. / Tesis

CARVALHO, F. S. R. Caracterização físico-química e avaliação in vitro de diferentes formulações da solução de Carnoy sobre substratos ósseo e dentário humanos. 2017. 129 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-06T13:42:50Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_fsrcarvalho.pdf: 4191897 bytes, checksum: a26d8a9264f70c6da4c53e87287d42f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-06T13:42:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_fsrcarvalho.pdf: 4191897 bytes, checksum: a26d8a9264f70c6da4c53e87287d42f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T13:42:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_fsrcarvalho.pdf: 4191897 bytes, checksum: a26d8a9264f70c6da4c53e87287d42f8 (MD5) Previous issue date: 2017-02-06 / The maxillofacial region may be affected by a variety of benign lesions (odontogenic and non-odontogenic), but locally invasive. The use of a conservative treatment can generate high rates of recurrence, whereas a radical approach can lead to aesthetic-functional disorders. The use of Carnoy's solution, as a complementary therapy to surgical treatment, has been described in the literature with the purpose of reducing the recurrence rates of these lesions, in addition to minimizing damages resulting from an aggressive surgical treatment. Thus, the present dissertation is constituted by two chapters that aim, respectively: 1) to characterize the physico-chemical and pharmacological properties of Carnoy's solution with and without chloroform; 2) to evaluate in vitro the effect of different formulations of Carnoy's solution on calcified human substrates. As methodological approaches, laboratory studies were performed. In Chapter 1, the physico-chemical / pharmacological properties and behavior of different formulations of the Carnoy solution used in oral and maxillofacial surgery were evaluated through Raman microspectroscopy, UV / Visible spectrophotometry, among others. The results of this study showed that the Carnoy solution presents acidic pH and, when chloroform is present, it becomes slightly more acidic, as well as giving the solution a higher viscosity. When the solutions were not filtered after preparation, precipitation of iron salts occurred after the seventh day when the chloroform was used in its composition. A study was carried out with 36 lower third molars and 18 mandibular bone fragments, both donated and collected from humans, which were divided into three groups: two groups (Group I = Carnoy solution with chloroform, Group II = Carnoy solution without chloroform) and a control group (saline solution). The samples were evaluated through Raman microspectroscopy, Knoop microhardness test and scanning electron microscopy (SEM) with X-ray dispersive energy spectrum (EDX). There was demineralization / degradation of dental structures in both the mineral matrix / organic matrix and carbonate / phosphate (GI and GII, p <0.05) and in the relationship between the collagen subtypes (GII, p <0.05). In the bone tissue degradation was observed by the reduction in the ratio between the collagen subtypes (GI and GII, p <0.05). The presence of chloroform resulted in a statistically significant reduction in the surface microhardness of dental tissue samples (p = 0.036). In the experimental groups, the MEV / EDX showed significant structural changes in all samples analyzed. As conclusions of both studies, we have: (1) Carnoy's solution is a stable solution when stored at room temperature which, in the presence of chloroform, is prone to precipitation of iron salts, increases its viscosity, And its pH becomes slightly more acidic; (2) both formulations of the Carnoy solution (with or without chloroform) exhibit demineralization ability when applied to calcified human tissues, promoting alteration in both the mineral matrix and the organic matrix; (3) the presence of chloroform in Carnoy's solution provides a greater potential for tissue demineralization and penetrability. / A região maxilofacial pode ser afetada por uma variedade de lesões benignas (odontogênicas e não-odontogênicas), mas localmente invasivas. O emprego de um tratamento conservador pode gerar altas taxas de recorrência, enquanto que uma abordagem radical pode acarretar desordens estético-funcionais. O uso da solução de Carnoy, enquanto terapia complementar ao tratamento cirúrgico, tem sido descrito na literatura com o propósito de reduzir as taxas de recorrências dessas lesões, além de minimizar danos decorrentes de um tratamento cirúrgico agressivo. Dessa forma, a presente dissertação é constituída por dois capítulos que têm como objetivo, respectivamente: 1) caracterizar as propriedades físico-químicas e farmacológicas da solução de Carnoy com e sem clorofórmio; 2) avaliar in vitro o efeito de diferentes formulações da solução de Carnoy sobre substratos humanos calcificados. Como abordagens metodológicas, foram realizados estudos laboratoriais. No Capítulo 1, procedeu-se com a avaliação das propriedades físico-químicas/farmacológicas e comportamento de diferentes formulações da solução de Carnoy utilizada em cirurgia oral e maxilo-facial através de microespectroscopia Raman, espectrofotometria UV/Visível, entre outras. Os resultados, desse estudo, evidenciaram que a solução de Carnoy apresenta pH ácido e, quando da presença do clorofórmio, esta torna-se levemente mais ácida, bem como confere à solução maior viscosidade. Quando as soluções não foram filtradas após sua preparação ocorreu precipitação de sais de ferro após o sétimo dia quando da utilização do clorofórmio em sua composição. No Capítulo 2, foi realizado um estudo com 36 terceiros molares inferiores e 18 fragmentos ósseos mandibulares, ambos doados e coletados de humanos, os quais foram divididos em três grupos: dois grupos experimentais (Grupo I = solução de Carnoy com clorofórmio; Grupo II = solução de Carnoy sem clorofórmio) e um grupo controle (solução salina). As amostras foram avaliadas através de microespectroscopia Raman, teste de microdureza Knoop e microscopia eletrônica de varredura (MEV) com análise do espectro de energia dispersiva de raios X (EDX). Houve desmineralização/degradação das estruturas dentárias tanto nas relações matriz mineral/matriz orgânica e carbonato/fosfato (GI e GII; p<0,05), quanto na relação entre os subtipos de colágeno (GII; p<0,05). No tecido ósseo foi observada degradação pela redução na relação entre os subtipos de colágeno (GI e GII; p<0,05). A presença do clorofórmio resultou em uma redução estatisticamente significante na microdureza superficial das amostras de tecidos dentários (p=0,036). Nos grupos experimentais, o MEV/EDX evidenciou significativas alterações estruturais em todas as amostras analisadas. Como conclusões de ambos os estudos, tem-se que: (1) a solução de Carnoy é uma solução estável quando armazenada em temperatura ambiente que, na presença de clorofórmio, é passível de precipitação de sais de ferro, sofre aumento de sua viscosidade, e seu pH torna-se levemente mais ácido; (2) ambas as formulações da solução de Carnoy (com ou sem clorofórmio) apresentam capacidade de desmineralização quando aplicada sobre tecidos humanos calcificados, promovendo alteração tanto na matriz mineral quanto na matriz orgânica; (3) a presença do clorofórmio na solução de Carnoy propicia um maior potencial de desmineralização e penetrabilidade teciduais.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Diversos estudos epidemiologicos sugerem relacao inversa entre o consumo regular de cafe e a ocorrencia de algumas desordens neurodegenerativas como a doenca de Parkinson e a doenca de Alzheimer. Dados experimentais da literatura principalmente relacionados as acoes farmacologicas da cafeina corroboram esta hipotese. Assim, foram avaliados extratos de cafe com diferentes conteudos de cafeina em testes in vitro e in vivo. A diferenca encontrada nas concentracoes de cafeina nao interferiu na capacidade antioxidante dos extratos avaliada pelo teste de sequestro de radicais DPPH e pelo teste de inibicao da lipoperoxidacao. Na avaliacao da inibicao da enzima anticolinesterase, no entanto, os cafes cafeinados inibiram a enzima em concentracoes muito menores quando comparados ao cafe descafeinado. Da mesma forma, foi observada atividade pro-dopaminergica para os cafes cafeinados mas nao para o descafeinado no teste da catatonia induzida por haloperidol apos com tratamento agudo com cafe (50, 150 e 500 mg/kg, v.o.) e cafeina (98,6 mg/kg, v.o.). A cafeina e as doses de 150 e 500 mg/kg dos cafes forte e extra-forte foram capazes de bloquear significativamente o estado catatonico induzido pelo haloperidol. Apos tratamento continuado por 45 dias com as doses acima descritas, foi observada reducao no numero de rotacoes de animais com lesao unilateral do feixe prosencefalico medial por 6-OHDA tratados com a dose de 500 mg/kg de cafe forte apenas, apos a administracao de metanfetamina. Esse resultado e correlacionavel com um efeito neuroprotetor no modelo utilizado. O conjunto destes resultados sugere que o cafe pode agir como neuroprotetor contra a doenca de Parkinson, com importante contribuicao da cafeina / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-10-23T12:45:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rychelle_medeiros_ioc_mest_2014.pdf: 1978487 bytes, checksum: f4ad898bc71b1f2bac123e0403daac80 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Mycobacterium leprae, patógeno intracelular causador da hanseníase, infecta com sucesso células da glia do sistema nervoso periférico, denominadas células de Schwann (CS). Estas células são responsáveis pela mielinização e envio de metabólitos, como o lactato e o piruvato, para os axônios, mantendo assim os processos energéticos associados à transdução de sinal nos nervos periféricos. A interação entre o bacilo e sua célula hospedeira vem sendo alvo de muitos estudos de modulação imunológica, desmielinização e de metabolismo lipídico, porém as possíveis modulações sobre o metabolismo energético destas células impostas pelo patógeno permanecem negligenciadas e desconhecidas. Para determinar estas modulações, estudamos o metabolismo energético de uma linhagem de células de Schwann humanas (ST8814) infectadas in vitro por M. leprae purificado a partir de extratos de coxim plantar de camundongos atímicos nu/nu. Analisamos processos de entrada e quebra de glicose, a fermentação, potencial elétrico mitocondrial e biossíntese de lipídios. A internalização de glicose foi avaliada através do seu análogo fluorescente 2-NBDG e o potencial elétrico mitocondrial monitorado através da sonda lipofílica catiônica TMRM Para analisar a fermentação da glicose quantificamos lactato através do kit lactato liquiform (Labtest) e analisamos a atividade da enzima lactato desidogenase (LDH) em suas duas isoformas. Para análises de quebra de glicose e biossíntese de lipídios foram avaliadas atividades de enzimas chaves como fosfofrutoquinase-1 (PFK-1), glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) e ATP citrato liase (ACL) através do monitoramento da redução/oxidação de NADH ou redução de NADP+ em 340 nm. Células infectadas apresentaram aproximadamente o dobro da captação de 2-NBDG e liberaram no sobrenadante a metade do lactato observado nas culturas controle. Este efeito foi acompanhado da diminuição de atividade de LDH- M, isoforma capaz de converter piruvato em lactato. A fluorescência de TMRM indicou redução do potencial elétrico mitocondrial nas células infectadas. Em contrapartida estas células demonstraram aumento significativo de atividade das enzimas G6PD e ACL. Concluímos que o M. leprae é capaz de modular a captação de glicose, fermentação, potencial elétrico mitocondrial e enzimas chaves do metabolismo energético de células de schwann humanas da linhagem ST8814 / Mycobacterium leprae , an intracellular pathogen which causes lep rosy, is able to infect Schwann cells (SC) in peripheral nervous system. These cells are responsible for myelination and release of metabolites such as lactate and pyruvate to axons and signal transduction in peripheral nerves. The host - pathogen interactio n in leprosy has been target of several studies of immune modulation, demyelination and lipid metabolism. However, modulations on the energy metabolism of these cells during infection by mycobacteria remain unknown. Here, we performed an in vitro study of the energy metabolism in the human SC cell line ST8814 infected with M. leprae purified from footpads of athymic mice and evaluate the glucose uptake and cleavage, fermentation, mitochondrial electrical potential and lipid biosynthesis. The glucose uptake was evaluated using a fluorescent analog, 2 - NBDG, and mitochondrial electrical potential monitored using a lipophilic cationic probe, TMRM. Also, fermentation was evaluated by lactate quantification using Liquiform kit (Labtest) and by activity of lactate desidogenase (LDH) enzyme into its two isoforms. Then, we analyzed the activity of key enzymes in the glucose cleavage and lipid biosynthesis: 1 - phosphofructokinase (PFK - 1), glucose - 6 - phosphate dehydrogenase (G6PD) and ATP citrate lyase (ACL) by monitoring the reduction / oxidation NADH or NADP + reduction at 340 nm. We demonstrated infected cells increased 2 - fold the uptake of 2 - NBDG and reduced the lactate production when comparing with uninfected cultures. This effect was followed by a decreased activity of LDH - M isoform, which is converts pyruvate to lactate. The fluorescence of TMRM indicated a reduction of mitochondrial electrical potential in M. leprae - infected SC. Interestingly, these cells showed a significant increase of activity of G6PD and ACL en zymes. Thus, we conclude that M. leprae can modulate glucose uptake, fermentation, mitochondrial electrical potential and key enzymes of energy metabolism of human Schwann cells of lineage ST8814

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 laura_coelho_ioc_mest_2015.pdf: 3578991 bytes, checksum: 9179d8e8f9cbb8e060f9f7033b71f08c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / A fibrose cardíaca é uma importante manifestação da cardiomiopatia chagásica. O papel dos fibroblastos cardíacos (FCs) nesse processo é pouco estudado. Nesse trabalho investigamos o efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi (cepa Y) e do fator de necrose tumoral (TNF) sobre a ativação de FCs in vitro, visando compreender o papel de FCs ativados no processo de gênese da fibrose cardíaca na infecção chagásica. Os FCs foram obtidos a partir de culturas primárias de células cardíacas de fetos de camundongos Swiss Webster, e sua ativação avaliada através da análise da proliferação, diferenciação destas células em miofibroblastos e a expressão de proteínas de matriz extracelular (ECM) através de imunofluorescência (IF) e Western blotting (WB). A caracterização das culturas foi feita através de análise morfológica e funcional e pela análise da expressão dos marcadores tropomiosina sarcomérica (TS) e receptor de domínio de discoidina 2 (DDR2). No nosso sistema de cultivo, 40% dos FCs foram infectados pelo T. cruzi quando utilizamos uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10 e 24h de interação As análises da expressão de alfa actina de músculo liso (\03B1-SMA) por WB, revelaram aumento desta proteína nas culturas infectadas sugerindo diferenciação para miofibroblasto nos tempos de 6h e 24h pós-infecção. As análises de proteínas de ECM revelaram aumento na expressão de fibronectina (FN) após 6h, 24h e 48h de infecção e de laminina (LN) após 6h e 24h, quando comparadas as culturas não infectadas. O tratamento com TNF não estimulou a produção de TNF e NO pelos FCs. TNF também não induziu a diferenciação e a síntese de ECM, porém influenciou o processo de proliferação destas células, revelado pelo aumento de células ki-67+ por IF. Ainda, a citocina reduziu as taxa de infecção dos FCs pelo parasita. Assim, nossos resultados demonstram um efeito da infecção pelo T. cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos, seja através da indução de diferenciação celular e expressão de proteínas de ECM, ou ainda pela indução de proliferação dos FCs, processos estes que podem contribuir para a gênese da fibrose cardíaca observada na doença de Chagas / Cardiac fibrosis is an important manifestation of Chagas cardiomyopathy . The involvement of cardiac fibroblasts (CFs) in this process is understudied. Here we investigated the effect of Trypanosoma cruzi infection (Y strain) and tumor necrosis factor (TNF) on CFs in vitro , aiming to understand the role of activated CFs in the process of genesis of cardiac fibrosis in chagasic infection. The CFs were obtained from primary cardiac cell cultures from Swiss Webster mice fetuses, and CFs activation analyzed by proliferation, myofibroblast differentiation and extracellular matrix (E CM) proteins expression, through immunofluorescence (IF) and Western blotting (WB). The characterization of cultures was made through morphological and functional analysis and through analysis of expression of the markers sarcomeric tropomyosin (TS) and di scoidin domain receptor 2 (DDR2). In our culture system, 40% of CFs were infected by T. cruzi using a multiplicity of infection (MOI) of 10 e 24h of interaction. WB analysis of alpha sm ooth muscle actin (α - SMA) expression revealed increased expression of this protein in T. cruzi - infected CFs suggesting cell differentiation into myofibroblasts at 6h and 24h post infection. ECM proteins analyses revealed increased expression of fibronectin (FN) at 6h, 24h e 48h pos infection and laminin (LN) at 6h and 24h in T. cruzi - infected cultures compared with non - infected ones. TNF treatment did not stimulate TNF and NO production by CFs. TNF also did not induce differentiation and ECM production by C Fs, but influenced the proliferation process of these cells, revealed by increase of ki - 67+ cells, through IF. Furthermore, the cytokine decrease the infection rate of CFs by T. cruzi . Therefore, our results demonstrate an effect of T. cruzi infection and TNF on cardiac fibroblasts activation, either through induction of cell differentiation and expression of ECM proteins, or by induction of CFs proliferation, processes which may contribute to the genesis of cardiac fibrosis in Chagas disease.

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cintia_marinho_ioc_dout_2015.pdf: 2296721 bytes, checksum: 160c0c4d020b49fe043c76c8f20136ad (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Sistema Complemento (SC) desempenha papel importante no controle de infecções atuando na eliminação do patógeno e na regulação da resposta imune. Contudo, uma ativação desregulada do SC gera efeitos deletérios ao hospedeiro, contribuindo para a patogênese de diversas doenças, como na Dengue. Entretanto, o envolvimento do SC na infecção pelo vírus Dengue (DENV) ainda tem vários aspectos a serem investigados. Assim, avaliamos a contribuição do SC na infecção in vitro de monócitos pelo DENV; o perfil de expressão dos Receptores de Complemento (CR) CR1, CR2, CR3, CR4, CD46, CD55 e CD59, e de moléculas de ativação nos monócitos e linfócitos T circulantes de pacientes infectados pelos DENV-1,-2 ou -4 por citometria de fluxo. Dosamos os níveis de SC5b-9 e citocinas em pacientes por ELISA. Avaliamos ainda, a contribuição da ativação do SC na permeabilidade e viabilidade endotelial, utilizando modelo in vitro de células endoteliais (CEs) pela medida da resistência elétrica transendotelial (TEER) e liberação de LDH sobrenadante de culturas. Por fim investigamos a interação DENV-2 com componentes purificados do SC por eletroforese das proteínas. Como achados principais, observamos diminuição na frequência de monócitos CD14+ expressando CR3, CR4 e CD59 em pacientes comparado aos controles saudáveis. De forma interessante, o bloqueio do CR3 levou à diminuição em cerca de 30% da infecção in vitro pelo DENV-2 em monócitos, sem alterar o fenótipo de ativação ou a ativação da caspase-1 destas células. No entanto, com o bloqueio de CR3, detectamos diminuição na produção de TNF-alfa e IFN-alfa. Não observamos diferença significativa na frequência de linfócitos T expressando CR3, CD46, CD55 e CD59 de em pacientes-Dengue-4 Apesar disso, os linfócitos T CR+ apresentaram um perfil ativado coexpressando CD29, CCR5 e CD107a. Na infecção pelo DENV, independente do sorotipo viral, detectamos elevados níveis circulantes de SC5b-9. Na infecção pelo DENV-1/-2 os níveis mais elevados de SC5b-9 foram observados em pacientes que apresentaram sangramentos e extravasamento plasmático, enquanto nos pacientes-DENV-4, os níveis de SC5b-9 foram correlacionados diretamente com a manutenção da integridade vascular. Entretanto, o SC5b-9 parece estar associado com a liberação de LDH intracelular. Finalmente, vimos que DENV-2 promove a clivagem de C3 na ausência de fator D. Nossos dados sugerem que uma frequência diminuída de monócitos expressando CR3 em pacientes poderia ser uma tentativa de controle da infecção, uma vez que detectamos diminuição da infecção, com o bloqueio de CR3 in vitro e ainda, vimos que o DENV-2 modula a clivagem de C3. O aumento da frequência de linfócitos T CR+ coexpressando moléculas de ativação sugere que células de perfil ativado, capazes de controlar a infecção, estariam protegidas da lise via SC. Confirmamos que o SC está ativado na Dengue, pelos altos níveis de SC5b-9. Entretanto, os níveis de SC5b-9 foram associados com a gravidade nos pacientes-DENV-1/-2 enquanto, nos pacientes-DENV-4 foram correlacionados com a manutenção da integridade vascular. Esses dados sugerem que a ativação do SC estaria relacionada diferencialmente com a patogênese de acordo com o sorotipo da infecção / The complement system (CS) develops an important role in the infection control, by direct elimination of pathogens and regulation o f the immune response. However, a deregulated CS activation is responsible to induce deleterious effects to the host, contributing to the pathogenesis of several diseases, including Dengue. Besides this, the involvement of the CS on Dengue virus (DENV) inf ection still has many aspects to be investigated. So, we evaluated the CS contribution during in vitro infection of monocytes by DENV; the profile of complement receptors (CR) CR1, CR2, CR3, CR4, CD46,CD55 and CD59 expression on circulating monocytes and T cells from DENV - 1, - 2 or - 4 infected patients by flow cytometry. We assessed the levels of SC5b - 9 and cytokines in patients by ELISA. We evaluated the contribution of the CS activation on endothelial permeability and viability by using an in vitro model wi th endothelial cells by accessing the transendothelial electric resistence (TEER) and LDH release on culture supernatants. Finally, the interaction of DENV - 2 and purified components was evaluated by electrophoresis of proteins. As principal findings, we ob served decreased frequencies of CD14 monocytes expressing CR3, CR4 and CD59 in patients compared to healthy controls. Interestingly, the blockage of CR3 resulted in around 30% reduction of the DENV - 2 infection in monocytes in vitro , without alteration on activation phenotype neither on caspase - 1 activation, of these cells. However, with CR3 - blocking we detected decreased production of TNF - alpha and IFN - alpha. Unaltered frequencies of T cells expressing CR3, CD46, CD55 and CD59 were found in DENV - 4. Beside s, T cells CR+ presented an activated profile, by the coexpression of CD29, CCR5 e CD107a. In DENV infection, regardless the viral serotype, we detected increased levels of circulating SC5b - 9. However among the two groups of patients we saw controversial r esults. In the DENV - 1/ - 2 infection higher levels of SC5b - 9 were detected in patients with bleeding and vascular leakage, while in DENV - 4 patients, the levels of SC5b - 9 were directly correlated with the maintenance of the vascular integrity. Although, the SC5b - 9 levels is associated to release of intracellular LDH. Finally, we saw that DENV - 2 promotes C3 cleavage in the absence of factor D. Our data suggest that a decreased frequency of CR3 - expressing monocytes in DENV - patients would aim to control the infe ction, since in vitro , we detected decreased infection when CR3 was blocked e also, DENV - 2 seems to modulate the cleavage of C3. The increased frequency of T cells CR+ coexpressing activation molecules suggest that cells with activated profile, able to con trol the infection, would be protected of CS mediated lysis. We confirmed that CS is activated during Dengue, by the high levels of SC5b - 9. However, the levels of SC5b - 9 were associated with to severity in DENV - 1/ - 2 patients, while in DENV - 4 it was directl y correlated with the maintenance of the vascular integrity. These data suggest that CS activation would be differentially related to the disease pathogenesis in accordance to the serotype of the infection

Made available in DSpace on 2016-04-27T12:29:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cintia_mello_ioc_mest_2015.pdf: 2747649 bytes, checksum: 92f3eedd9bed909aa684e19d506eabf4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A incidência de dengue em todo o mundo tem aumentado nas últimas décadas. As respostas imunológicas exacerbadas desempenham um papel crucial para a sua fisiopatologia, tais como a indução do extravasamento plasmático, originado principalmente pela produção de uma cascata de citocinas inflamatórias e que podem induzir distúrbios de coagulação e alteração da permeabilidade vascular levando, eventualmente, a hemorragias graves e ao choque. Os produtos naturais, que têm propriedades imunomoduladoras descritas na etnofarmacologia, podem promover o controle da replicação viral e uma redução de citocinas que induzem a permeabilidade endotelial, o que poderia resultar em manifestações clínicas mais leves. O objetivo deste estudo foi investigar se compostos provenientes de uma planta medicinal poderiam modular a resposta imune inata associada com características imunopatológicas na infecção pelo vírus Dengue (DENV), usando um modelo de infecção in vitro com linhagens contínuas de hepatócitos humanos (Huh-7). Métodos e Resultados: Após infecção das células-alvo Huh-7 pelo DENV-2, as culturas foram tratadas com lotes únicos de extratos hidroalcoólicos de Uncaria sp. (UGC ou UGF), em diferentes concentrações. A taxa de células contendo antígenos virais foi determinada após períodos de incubação por imunofluorescência vírus específica e citometria de fluxo A proteína viral não estrutural (NS1), indicativa de replicação viral, foi detectada nos sobrenadantes de cultura de células assim como as citocinas/quimiocinas MIF, IL-8 e IL-6, todas determinadas por ensaios de ELISA. Nos mesmos sobrenadantes, a produção do fator inflamatório óxido nítrico foi determinada indiretamente pela detecção de nitrito (Reação de Griess). Além disso, foram observados por citometria de fluxo alterações de viabilidade celular, apoptose e necrose, utilizando marcações pelo kit LIVE/DEAD e por Anexina V e Iodeto de propídio (PI). Foram observados efeitos antivirais de UGC e UGF, estatisticamente significantes, em comparação com células não tratadas, em concentrações que reduziram a frequência de células positivas para o antígeno viral e a quantidade de NS1 secretada. Efeitos imunomoduladores significantes foram mostrados pela redução da secreção de MIF, IL-8 e IL-6. Houve um aumento na produção de nitrito em culturas infectadas e tratadas com os dois extratos em diferentes concentrações, além de redução das taxas de apoptose e necrose, significantes. Conclusão: Existem compostos ativos na espécie vegetal que possuem capacidades antiviral e imunomoduladora. Sendo assim, mostraram-se potenciais candidatos para o desenvolvimento de um produto para tratamento da dengue. Apoiado por FIOCRUZ / RPT11D; IOC / PROEP; CNPq; FAPERJ; CAPES / The incidence of dengue worldwide has increased in recent decades. The exacerbated immune responses play a crucial role in the infection pathophysiology, such as the induction of plasma extravasation. It is caused mainly by the production of a cascade of inflammatory cytokines that can induce coagulation disorders and alterations in vascular permeability leading, eventually, to severe hemorrhages and shock. Natural products, which have immunomodulatory properties described in ethnopharmacology, can promote the control of viral replication and a reduction of cytokines that induce endothelial permeability, which could result in milder clinical manifestations. The aim of this study was to investigate whether compounds from a medicinal plant could modulate the innate immune response associated with immunopathological characteristics in infection Dengue virus (DENV), using an in vitro model of infection with continuous lines of human hepatocytes (Huh-7). Methods and Results: After infection of Huh-7 target cells by DENV-2, cultures were treated with single lots hydroalcoholic extracts of Uncaria sp. (UGC or UGF), at different concentrations. The rate of cells containing viral antigens was determined after incubation periods by virus-specific immunofluorescence and flow cytometry. Viral non-structural protein (NS1), indicative of viral replication, was detected in cell culture supernatants and cytokines/chemokines, MIF, IL-8 and IL-6, all determined by ELISA assays In the same supernatants, the production of inflammatory factor nitric oxide was determined indirectly by nitrite (Griess reaction). Moreover, cells were analyzed by flow cytometry for cell viability changes, apoptosis and necrosis, by using LIVE/DEAD and Annexin V and Propidium iodide (PI) kits. Antiviral effects were observed by UGC and UGF, statistically significant, compared to untreated cells at concentrations that reduced the rate of viral antigen positive cells, and the amount of the secreted NS1. Significant immunomodulatory effects were shown by the reduction in secretion of MIF, IL-8 and IL-6. An increase in nitrite production in infected and treated cells was observed with the two extracts in different concentrations. In addition, reduced rates of apoptotic and necroptic cells were significant. Conclusion: There are active compounds in plant species that have antiviral and immunomodulatory capabilities. Therefore, were potential candidates for the development of a product for treatment of dengue. Supported by FIOCRUZ/RPT11D; IOC/PROEP; CNPq; FAPERJ; CAPES / 2017-01-27

Orientador: Flávia Karina Delella / Resumo: O câncer de próstata (CaP) continua a ser uma das principais causas de morte entre os homens. Mesmo com suas altas taxas de mortalidade e incidência, pouco ainda se sabe sobre os aspectos moleculares desta doença. Entre os diversos fatores envolvidos na carcinogênese prostática, elementos da matriz extracelular (MEC) desempenham papel fundamental. Na próstata, a fibronectina (FN), proteína multimodular que tem sido relacionada ao desenvolvimento de múltiplos tipos de câncer, a migração e invasão celular, tem sua expressão restrita ao compartimento estromal. Contudo, no desenvolvimento tumoral, o padrão de expressão da FN é alterado, com secreção desregulada e falta de organização da matriz. Desta forma, para investigar o impacto da FN no CaP, as células neoplásicas LNCaP foram expostas somente à FN solúvel (25μg/mL) e em combinação com uma membrana basal. Nossos resultados demonstraram que quando a FN é o elemento predominante, as células tumorais desenvolvem um comportamento invasivo e resistência à apoptose. No entanto, na presença de uma membrana basal, a FN diminuiu o potencial maligno e metastático destas células, que neste novo ambiente exibiam perfil de expressão gênica mais semelhante às células RWPE-1, linhagem celular que ilustra as características do epitélio prostático normal. Consequentemente, sabendo que a relação entre as células tumorais e a MEC é regulada em múltiplos níveis, os microRNAs emergiram como importantes moléculas reguladoras. Portanto, também inve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prostate cancer (PCa) continues to be a leading cause of death among men. Even with its high mortality and incidence rates, little is known about the molecular aspects of this disease. Among the various factors involved in the carcinogenesis of the prostate, components of the extracellular matrix (ECM) play key roles. In the prostate, fibronectin (FN), a multimodular protein that has been linked to the development of multiple cancers and involved with cell migration and invasion, has its expression restricted to the stromal compartment. However, in tumor development, the pattern of expression of FN becomes altered, with deregulated secretion and a lack of matrix organization. Thus, in order to investigate the impact of FN on PCa, the neoplastic cells LNCaP were exposed only to soluble FN (25μg/mL) or in combination with a basement membrane. Our results demonstrated that when FN is the predominant element, tumor cells develop an invasive behavior and become resistant to apoptosis. However, in the presence of a basement membrane, FN decreases the malignant and metastatic potential of these cells, which in this new environment displayed a gene expression profile more similar to the RWPE- 1 cells, a cell line that illustrates the characteristics of the normal prostate epithelium. Consequently, knowing that the relationship between tumor cells and the ECM is regulated at multiple levels, microRNAs have emerged as important regulatory molecules. Therefore, we also investigated the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by LEONARDO DE FREITAS SILVA null (leonardofreitas86@gmail.com) on 2016-10-20T13:26:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado- reapresentação 1.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-10-26T17:52:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_lf_me_arafo.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-26T17:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_lf_me_arafo.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) Previous issue date: 2016-10-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A estabilidade primária de implantes dentários corresponde a um fenômeno mecânico relativo à qualidade ou quantidade óssea, ao tipo de implante e a técnica de instalação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o tempo de fresagem, aquecimento dos sítios fresados e a estabilidade dos implantes instalados em cavidades realizadas com ultrassom cirúrgico e instrumentos rotatórios. Foram realizadas 64 cavidades em 04 blocos de poliuretano simulando as densidades de ossos tipo I, II, III e IV. A temperatura da superfície do bloco nos leitos foi medida durante a fresagem. A estabilidade dos implantes foi mensurada por meio do torque de inserção, de remoção e frequência de ressonância. O implante cilíndrico TitaOss 3,75 x 11 mm foi instalado em todas as cavidades. Os resultados mostraram maior tempo e temperatura para o grupo em que foi usado o ultrassom. Quanto à estabilidade primária não houve diferença significante entre os grupos estudados. Pôde-se concluir que a estabilidade primária dos implantes não foi influenciada pelos métodos de fresagem utilizados e que o ultrassom cirúrgico necessitou de mais tempo e gerou mais calor do que o instrumento rotatório para o preparo das cavidades. / The primary stability of dental implants corresponds to a mechanical phenomenon related to bone quality or quantity, type of implant and installation technique. The objective of this study was to evaluate the time of drilling, heating drilled sites and stability of implants placed in cavities made with piezosurgery and rotary instruments. Polyurethane blocks were used simulating the densities of bone type I, II, III and IV. The surface temperature of the block was measured in the cavity during drilling, and recorded the highest temperature variation. The stability of the implants was measured with a torque insertion, torque of removal and resonance frequency. The cylindrical implant TitaOss 3.75 x 11 mm was used in all cavities. The results showed greater time and temperature for the group that was used piezosurgery. The primary stability was no significant difference between groups. It could be concluded that implant primary stability was not influenced by the used methods and piezosurgery took more time and generated more heat than the conventional rotatory instruments to prepare the cavities.

Orientador: Mario Tanomaru Filho / Banca: Gisele Faria / Banca: Marco Antônio Húngaro Duarte / Resumo: Cimentos à base de silicato tricálcico são desenvolvidos como alternativa ao Mineral Trióxido Agregado (MTA). O objetivo do estudo foi avaliar a biocompatibilidade e bioatividade do cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio (ZrO2) (STC) e MTA Plus (MTAP). Capítulo1- Células humanas de osteoblastos (Saos-2) foram utilizadas para análise da viabilidade celular por meio dos ensaios de MTT e Vermelho Neutro (NR), da bioatividade pela atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP) e da presença de área mineralizada pela coloração de Vermelho de Alizarina (ARS). Os dados obtidos para MTT, NR e ALP foram analisados por ANOVA e Bonferroni, e ARS, por ANOVA e Tukey (p ≤ 0,05). Nos ensaios de viabilidade celular, os materiais não foram citotóxicos. Maior atividade de ALP ocorreu aos 7 dias para todos materiais avaliados. Área mineralizada foi observada em todos os grupos, sendo menor para o grupo STC. Concluiu-se que o cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio e MTA Plus apresentam citocompatibilidade e potencial bioativo. Capítulo 2- A reação inflamatória induzida pelo STC e MTAP foi investigada em subcutâneo de ratos. Tubos de polietileno foram preenchidos com STC (n= 20) e MTAP (n= 20) e implantados no subcutâneo dorsal de quarenta ratos. No grupo controle (GC; n= 20), tubos vazios foram implantados. Após 7, 15, 30 e 60 dias, os tubos de polietileno com o tecido conjuntivo circundante foram fixados e embebidos em parafina. O núme... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tricalcium silicate- based cements have been developed as an alternative to Mineral Trióxido Agregado (MTA). The aim of the study was to evaluate biocompatibility and bioactivity of the tricalcium silicate cement replaced with 20% zirconium oxide (STC) e MTA Plus (MTAP). Chaper 1- Human osteoblastic cells (Saos-2) were exposed to test materials and assessed for viability, MTT and Neutral Red (NR) assay, and bioactivity for ALP activity assay and alizarin red staining (ARS). Unexposed cells acted as the control group. Statistical analysis was performed using ANOVA and the Bonferroni post- test (P < 0.05) to MTT, NR and ALP, and ANOVA and Tukey post- test (P ≤ 0.05) to ARS. MTT and NR results, all tested cements were non-cytotoxic. The highest ALP activity occurred at the 7th days. Mineralized area was observed in all materials, STC group showed lower mineralized area. Experimental tricalcium silicate with 20% zirconium oxide and MTA Plus have present biocompatibility and bioactive potential. Chapter 2- The inflammatory reaction induced by tricalcium silicate cement replaced with 20% zirconium oxide (STC) e MTA Plus (MTAP) was evaluated in rat subcutaneous tissues. A polyethylene tube filled with STC (n= 20) and MTAP (n= 20) was placed into the dorsal subcutaneous of forty rats; in the control group (GC; n= 20), empty tubes were implanted. After 7, 15, 30 and 60 days, the polyethylene tubes surrounded by connective tissue were embedded in paraffin. The number of inflammatory ce... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre