Orientador : Antonio Herbert Lancha Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:29:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_HamiltonAugustoRoschelda_M.pdf: 4019709 bytes, checksum: fdf830cb2f5797ea3dee4dfdfb026423 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A suplementação de creatina tem sido amplamente utilizada entre atletas e praticantes de atividade física com o intuito de melhorar o rendimento em atividades físicas de alta intensidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da suplementação de creatina sobre a concentração sanguínea de lactato, o conteúdo de glicogênio muscular (sóleo e fígado) e hepático de glicogênio além das atividades máximas das enzimas citrato sintase e fosfofrutoquinase (sóleo e gastrocnêmio) em ratos submetidos a atividade intermitente acima do limiar metabólico anaeróbico. Os animais foram divididos em 2 grupos, controle (CTL) e suplemento (SPL), e após 5 dias de suplementação (0,3glkg de peso), os mesmos foram submetidos à 6 repetições de 30 segundos de natação acima do limiar metabólico anaeróbico. As concentrações de lactato sanguíneo mostraram-se significativamente menores (p<0,05) para o grupo SPL nas repetições 3,4,5 e 6. Não foram encontradas diferenças entre os grupos para o conteúdo de glicogênio e atividade máxima das enzimas em nenhum dos tecidos analizados. Sugerimos que a ressíntese aumentada de creatina fosfato em períodos de repouso bem como a maior disponibilidade do conteúdo total de creatina poderiam, em última análise, tamponar o acúmulo de ADP e H+, gerando menor dependência da glicólise anaeróbica e em consequência, a . menor concentração de lactato observada / Abstract: Influence of Creatine Supplementation on Blood Lactate Concentration in Rats Submitted to Intermittent Swimming Exercise Above the Metabolic Anaerobic Threshold. Creatine supplementation has been spread out among athletes and physical active people with the purpose of improving performance during high intensity exercises. The aim of this study was to evaluate the influence of creatine supplementation on blood lactate concentration and glycogen content (Iiver, soleus, and gastrocnemius) and maximal enzyme activity - phosphofructokinase and cytrate synthase (soleus, gastrocnemius) in rats submitted to intermittent swimming exercise above the metabolic anaerobic threshold. Animais were divided in two groups, control (CTL) and supplement (SPL), and after 5 days of creatine supplementation (0,3g/kg BW), ali animais performed 6 bouts of 30s swimming exercise above the metabolic anaerobic threshold. Blood lactate concentrations were significantly lower (p<0,05) for the SPL group on bouts 3,4,5, and 6. No differences were observed for any other parameter analyzed between groups. The possible mechanisms responsible for the lower blood lactate concentration are greater availability of total creatine content and increased . creatine phosphate resynthesis during rest periods, thus buffering H+ ions and ADP accumulation, which could reflect in lesser reliance on anaerobic glycolysis with lower lactate production / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Carlos Eduardo Negreiros de Paiva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T08:25:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conrado_ReginaCeliaSpadari_M.pdf: 4583655 bytes, checksum: 6b7003c1a60d09c06d1753d485f2681b (MD5) Previous issue date: 1978 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadora : Marcia Salomão Dias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T23:43:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sainati_AnaRita_M.pdf: 5543231 bytes, checksum: f64cf17576455f7068f8904860f9009c (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: Foi verificado que o esteviosideo, principio ativo da planta Stevia rebaudiana, exibe efeitos depressores da freqüência cardíacas e pressão arterial em ratos (Humboldt e Boeckh, 1978). O objetivo no presente estudo foi verificar o efeito de diferentes concentrações de esteviosídeo (4, 8, 12 e 16 mg/kg) sobre alguns parâmetros da função renal e na pressão arterial média de ratos. Foi verificado também o efeito de um inibidor da síntese de prostaglandinas, a indometacina, sobre a ação vasodilatadora do esteviosideo. A infusão de doses crescentes de esteviosideo produziu, de maneira diretamente proporcional à dose usada, acentuada queda da pressão arterial média e elevação do fluxo plasmático renal, sem modificar o ritmo de filtração glomerular. O esteviosídeo tembém elevou a excreção fracional dos íons sódio e potássio, bem como o fluxo urinário. Durante a inibição da síntese de prostaglandinas, por outro lado a redução da pressão arterial média, bem como a elevação do fluxo plasmático renal, induzidas pelo esteviosídeo, foram inibidas pela indometacina, embora o ritmo de filtração glomerular não tenha sido afetado. Os efeitos diurticos natriuréticos e kaliurético do esteviosídeo também foram abolidos pela indometacina. Deste modo, pudemos concluir que o esteviosídeo se comporta como uma típica substancia vasodilatadora, causando alterações na pressão arterial média e nos parâmetro da função renal, sendo estes efeitos provavelmente dependentes da atividades das prostaglandinas / Abstract: It was verified that stevioside the active principle of Stevia rabaudiana, exhibits depressor effects on heart rate and arterial pressure in rats (Humboldt e Soeckh, 1978). The purpose of this study was to invertigate the effect of different concentrations of stevioside (4, 9, 12 and 16 mg/kg), on some parameters of renal function and mean arterial pressure in rats. It was also verified the effect of an inhibitor of prostaglandin systhesis, the indomethacin, on vasodilator action of stevioside. The infusion of increasing doses of steviodide resulted in a dose-related decrease in mean arterial pressure and an increase in renal flow, with no change in glomerular filtration rate. Stevioside has also increased the fractional excretion of sodium and potassium, as well as urine flow. During the inhibition of prostaglandin systhesis, on the other hand, the mean arterial pressure decrease and renal plasma flow increase, both stevioside induced, were inhibited by indomethacin, but the glomerular filtration rate were not affected. The diurect, natriuretic and kaliuretic effects of stevioside were also abolished b indomethacin. Consequently, we could conclude that stevioside behaves like a typical vasodilator substance, causisng changes in mean arterial pressure and in the parameters of renal funcition, being these effect probably dependent of prostaglandin activity / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Tese (livre docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-17T13:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose_JoaoLeonel_LD.pdf: 1176384 bytes, checksum: d3913be0354bcfdecb71aac736bfdd43 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: 0 presente trabalho foi realizado com a finalidade de estudar os eventuais efeitos das diferentes frações e suas associações do princípio ativo Parotin, sobre a hiperglicemia de ratos diabéticos experimentais. Foram utilizados 40 ratas fêmeas (Rattus norve gicus, albinus, Wistar), com 2 a 3 meses de idade, pesando, aproximadamente, entre 180 e 250 gramas. Os animais foram separados e distribuídos em 5 grupos seguintes: I - Controle (normais) II - Controle Diabéticos Experimentais III- Diabéticos Experimentais. + Frações do Parotin redistribuídos em 4 subgrupos de 5 ratos. Em cada subgrupo foi administrado, via IP, frações 1, 2, 3 e 4 de Parotin, respectivamente, numa concentração de 0,40 mg/100g de peso corporal de cada fração. IV - Diabéticos Experimentais + Associações das Frações 1 + 3 do Parotin, composto de 5 animais que receberam pela mesma via as Frações 1 + 3 do Parotin na mesma concentração do grupo anterior. V - Diabéticos Experimentais + Associações das Frações 1 + 1 + 3 + 4, constituído de 5 ratos que receberam todas as Frações do Parotin. Os animais de todos os grupos foram submetidos a primeira dosagem da glicemia que foi considerada tempo zero. Nos animais dos Grupos III, IV e V em seguida eram administrados as respectivas Frações ou associações do Parotin. A seguir eram feitas dosagens glicêmicas nos intervalos de 3, 6 e 12 horas a partir do tempo zero. Nas condições experimentais utilizados e com a metodologia empregada, concluiu-se que as Frações, bem como as associações delas, apresentam ação era diminuir a hiperglicemia de animais diabéticos por aloxana. Dentre as Frações utilizadas, as Frações I e III é que mostraram melhor atividade, sem entretanto, superar o efeito da associação das 4 frações na diminuição da glicemia de animais diabéticos / Abstract: Not informed / Tese (livre docencia) - Univer / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Livre docente em Odontologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-17Bitstream added on 2014-06-13T19:49:29Z : No. of bitstreams: 1 silva_jf_me_botib.pdf: 326535 bytes, checksum: fe0aa6d59a3acd2eb778f89a8d92390b (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O consumo de mate em altas temperaturas tem sido considerado um fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma epidermóide de esôfago (CE) na América do Sul. Desta forma, os efeitos da ingestão de mate sobre danos de DNA e a carcinogênese de esôfago, induzidos pela dietilnitrosamina (DEN) e injúria térmica, foram avaliados em ratos Wistar machos. Na fase de iniciação, os animais foram iniciados com injeções i.p. da DEN (8 x 80 mg/Kg p.c.) e submetidos a injúria térmica (água a 65°C, lmIlrato, instilado no interior do esôfago) e receberam, concomitantemente, mate (2.0% p/v, grupo teste) ou chá-verde (2.0% p/v, grupo controle positivo) como única fonte de líquidos por oito semanas. Nenhum tratamento adicional foi introduzido durante a fase de pós-iniciação (nona a vigésima semana do experimento). Amostras de sangue periférico foram coletadas quatro horas após a última administração da DEN para o teste do cometa na oitava semana e amostras de esôfago e fígado foram coletadas na oitava e vigésima semanas do experimento. Na oitava semana, a ingestão de mate e chá-verde por si não foi genotóxica e reduziu de forma significativa os níveis de danos no DNA de leucócitos de sangue periférico nos animais tratados com a DEN. Além disso, uma redução significativa nos níveis de proliferação celular no epitélio do esôfago e no parênquima hepático e no número de lesões hepáticas pré-neoplásicas foram também observadas nos grupos iniciados e que receberam mate ou chá-verde. Na vigésima semana, uma menor incidência de neoplasias de esôfago e fígado foi observada nos grupos que receberam previamente mate e chá-verde quando comparado ao grupo iniciado pela DEN e submetido à injúria térmica. Os resultados do presente estudo indicam que a ingestão de mate se mostrou benéfica contra danos no DNA e a carcinogênese de esôfago e fígado induzidos pela DEN. / Drinking hot mate has been associated with risk for esophageal squamous cell carcinoma m South America. Thus, the modifying effects of mate tea intake on DNA damage and esophageal carcinogenesis induced by diethylnitrosamine (DEN) plus thermal injury were evaluated in male Wistar rats. In the initiation phase, rats were treated with DEN injections (8 x 80 mg/Kg b.w.) plus thermal injury (water 65°C, lml/rat, instilled into the esophagus) and concomitantly received mate tea (2.0% w/v, test group) or green tea (2.0% w/v, positive control group) as the sole source of drinking fluid for 8 weeks. Any additional treatment was introduced at post-initiation until week 20. Peripheral blood was collected 4 hr after the last DEN application for comet assay at week 8 and samples from esophagus and liver were collected at weeks 8 and 20. At week 8, mate or green tea intake itselfwere non-genotoxic and significantly decreased DNA damage levels in peripheral blood leucocytes from DEN-treated animaIs. Also, a significant reduction of cell proliferation rates in both esophageal epithelium and liver parenchyma and on the number of putative preneoplastic liver lesions were observed in initiated and mate or green tea-treated animaIs at week 8. A significant lower incidence of esophageal and liver neoplasms and tumor multiplicity was observed in the groups previously treated with mate or green tea when compared to the DEN initiated/thermal injury group at week 20. These data indicate that mate tea presented protective effects against DNA damage and esophageal and liver carcinogenesis induced by DEN.

Orientador: Luís Fernando Barbisan / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Lígia Souza Lima Silveira da Mota / Resumo: O consumo de mate em altas temperaturas tem sido considerado um fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma epidermóide de esôfago (CE) na América do Sul. Desta forma, os efeitos da ingestão de mate sobre danos de DNA e a carcinogênese de esôfago, induzidos pela dietilnitrosamina (DEN) e injúria térmica, foram avaliados em ratos Wistar machos. Na fase de iniciação, os animais foram iniciados com injeções i.p. da DEN (8 x 80 mg/Kg p.c.) e submetidos a injúria térmica (água a 65°C, lmIlrato, instilado no interior do esôfago) e receberam, concomitantemente, mate (2.0% p/v, grupo teste) ou chá-verde (2.0% p/v, grupo controle positivo) como única fonte de líquidos por oito semanas. Nenhum tratamento adicional foi introduzido durante a fase de pós-iniciação (nona a vigésima semana do experimento). Amostras de sangue periférico foram coletadas quatro horas após a última administração da DEN para o teste do cometa na oitava semana e amostras de esôfago e fígado foram coletadas na oitava e vigésima semanas do experimento. Na oitava semana, a ingestão de mate e chá-verde por si não foi genotóxica e reduziu de forma significativa os níveis de danos no DNA de leucócitos de sangue periférico nos animais tratados com a DEN. Além disso, uma redução significativa nos níveis de proliferação celular no epitélio do esôfago e no parênquima hepático e no número de lesões hepáticas pré-neoplásicas foram também observadas nos grupos iniciados e que receberam mate ou chá-verde. Na vigésima semana, uma menor incidência de neoplasias de esôfago e fígado foi observada nos grupos que receberam previamente mate e chá-verde quando comparado ao grupo iniciado pela DEN e submetido à injúria térmica. Os resultados do presente estudo indicam que a ingestão de mate se mostrou benéfica contra danos no DNA e a carcinogênese de esôfago e fígado induzidos pela DEN. / Abstract: Drinking hot mate has been associated with risk for esophageal squamous cell carcinoma m South America. Thus, the modifying effects of mate tea intake on DNA damage and esophageal carcinogenesis induced by diethylnitrosamine (DEN) plus thermal injury were evaluated in male Wistar rats. In the initiation phase, rats were treated with DEN injections (8 x 80 mg/Kg b.w.) plus thermal injury (water 65°C, lml/rat, instilled into the esophagus) and concomitantly received mate tea (2.0% w/v, test group) or green tea (2.0% w/v, positive control group) as the sole source of drinking fluid for 8 weeks. Any additional treatment was introduced at post-initiation until week 20. Peripheral blood was collected 4 hr after the last DEN application for comet assay at week 8 and samples from esophagus and liver were collected at weeks 8 and 20. At week 8, mate or green tea intake itselfwere non-genotoxic and significantly decreased DNA damage levels in peripheral blood leucocytes from DEN-treated animaIs. Also, a significant reduction of cell proliferation rates in both esophageal epithelium and liver parenchyma and on the number of putative preneoplastic liver lesions were observed in initiated and mate or green tea-treated animaIs at week 8. A significant lower incidence of esophageal and liver neoplasms and tumor multiplicity was observed in the groups previously treated with mate or green tea when compared to the DEN initiated/thermal injury group at week 20. These data indicate that mate tea presented protective effects against DNA damage and esophageal and liver carcinogenesis induced by DEN. / Mestre

Orientador: Lourenço Gallo Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T05:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Golfetti_Roseli_D.pdf: 4644875 bytes, checksum: c9a3c4cc6ee6ea0a15525a2e7add39d4 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Os organismos vivos caracterizam-se por apresentarem grande capacidade de resposta aos estímulos internos e ou externos, no sentido de se adaptarem às condições vigentes. O sistema adrenérgico desempenha papel expressivo em muitos destes processos adaptativos. Alterações funcionais dos adrenoceptores quanto ao número, ou sensibilidade às catecolaminas apresentam repercussões fisiológicas e fisiopatológicas, restritas ou abrangentes em todos os sistemas orgânicos. O coração, por ter um expressivo número de diferentes tipos de receptores adrenérgicos, pode ser alvo de substanciais modificações das suas duas. propriedades básicas: inotrópica e cronotrópica. Neste cqntexto este trabalho teve como objetivo estudar as respostas inotrópicas à noradrenalina ( NA ) do átrio esquerdo ( AE ) isolado, de ratos adultos jovens e velhos, submetidos a estímulos provocativos ( modelo: natação de ratos ). Os grupos estudados foram: controles ( C) jovens ( n = 7 ) e, velhos ( n = 6 ); Stress Intermitente (SI) - sessões de 5, 15, 30 minutos de natação em três dias consecutivos - jovens ( n = 8) e velhos (n = 6 ); e Stress Agudo (SA) sessão única de 50 minutos de natação - jovens ( n = 6 ) e velhos ( n = 6 ). As variáveis registradas foram: Tensão, [T ( gf)]; primeira derivada temporal de T, [dT/dt ( gf / s )] e a segunda derivada temporal T, [ d2T/de ( gf / S2 )]. A resposta contrátil do átrio à NA foi avaliada por meio das curvas dose-resposta. A tensão máxima ( T max ) e a dose correspondente à concentração molar do agonista, que determina um efeito correspondente a 50% do efeito máximo ( EC50 ), foram empregadas como parâmetros para análise do ciclo contração relaxamento. Verificou-se, que os valores iniciais de T max ( antes das doses de NA ) não apresentaram diferença estatística nas três condições estudadas ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador: Marcos A. Tambascia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T13:01:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Volpini_WalkyriaMaraGoncalves_D.pdf: 5363845 bytes, checksum: 243c0673aa5598aa9f2ef16ee01cd643 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O camundongo NOD é um modelo espontâneo de diabetes auto-imune, cuja expressão clínica de síndrome hiperglicêmica é mais freqüente em fêmeas (em torno de 60%) do que em machos (< 10%), entre a 20ª e 25ª semanas de vida. Uma infiltração linfomononuclear progressiva das ilhotas de Langerhans (insulite), iniciada na 5ª semana de vida, em ambos os sexos, precede o desenvolvimento clínico do diabetes. A doença é mediada por células T CD4+ e CD8+ com auto-reatividade anticélula ß. A Ciclofosfamida (Cl), administrada a animais NOD de oito semanas de vida, induz o diabetes clínico em machos e o acelera em fêmeas, por provável depleção de células T supressoras dos mecanismos diabetogênicos. Este modelo (DMID-CI) é um instrumento experimental para aplicação de protocolos terapêuticos, descritos, sobretudo, em fase inicial do processo auto-imune. O objetivo deste estudo foi o de testar a eficiência de uma imuno-intervenção no DMID-CI do camundongo NOD, em fase avançada de insulite, com anticorpos monoclonais (AcMos) depletantes antiCD4 e antiCD8, estratégia pouco documentada na literatura. Foi caracterizado, inicialmente, o perfil de evolução da insulite, induzida em dois modelos de administração de ciclofosfamida (uma e duas doses de 200 mg/kg/dose, no intervalo de 14 dias) para definir-se a janela terapêutica adequada. A análise histológica da insulite, em NOD machos e fêmeas, semelhante em ambos modelos, demonstrou um momento preciso de progressão rápida de insulite em estádios avançados (invasivo/destrutiva), com paralela diminuição de ilhotas normais ou com periinsulite. Este momento consistiu de um intervalo, situado entre o T e o 14° dias após a primeira dose de Cl, considerado como o de estabelecimento do processo imunopatológico no pâncreas. A expressão do DMID clínico foi, porém, significativamente aumentada duas semanas após a segunda dose da droga (80% em ambos os sexos). A insulite, induzida por Cl, apresentou evolução fenotípica (análise imuno-histoquímica) similar à desenvolvida espontaneamente em camundongos NOD, com predomínio de células T CD4+ em estádios iniciais e aumento da proporção de CD8+ em fase avançada. A prevenção do DM1D-CI clínico foi alcançada, de forma similar, através de imunoterapia isolada com AcMos depletantes antiCD4 (YTS-191) e antiCD8 (YTS-169), iniciada em momento critico de progressão de insulite invasivo/destrutiva (10° dia após a primeira dose de CI). O sucesso terapêutico foi obtido com protocolo de curta duração (10 dias) e de baixas doses totais de AcMos (0,5 a 1,25 mg/camundongo). O tratamento com antiCD4 impediu a evolução da insulite para os estádios finais, os quais não foram, porém, bloqueados por antiCD8. A estratégia terapêutica utilizada demonstrou o potencial interesse clínico dos AcMos antiCD4+ e amiCD8+ no bloqueio de subpopulações T executoras da destruição auto-imune das células ß. / Abstract: The NOD (non obese diabetic) mouse is a model of spontaneous autoimmune diabetes, in which expression of the hyperglycemic syndrome occurs between 20 and 25 weeks of age and is more common in females (about 60%) than in males (< 10%). A progressive infiltration of the islets of Langerhans by lymphomononuclear cells (insulitis) preceeds the development of the clinical diabetes condition in both sexes. This diabetes is mediated by CD4+ and CD8+ T cells with autoreactivity against 6 cells. Cyclophosphamide (CY) administered to eight week-old NOD mice induces clinical diabetes in males and accelerates its development in females, probably by depleting the T suppressor cells of diabetogenic mechanisms. CY-induced insulin-dependent diabetes mellitus model (CY -IDDM) provides a useful experimental approach for investigating the application of therapeutic protocols in the initial phase of the autoimmune process. The aim of the present study was to examine the role of an intervention in advanced insulitis phase of CY-IDDM in NOD mice with depleting anti-CD4 and anti-CD8 monoclonal antibodies (MoAbs). The evolution of the insulitis induced by cyclophosphamide was initially characterized by administering two doses of 200 mg/kg separated by a 14-day interval in order to determine the appropriate therapeutic window. The histological analysis of insulitis in male and female NOD mice yelded similar results for both sexes and showed that the period of rapid progression of advanced invasive/destructive insulitis was paralleled by a reduction in the number of normal or peri-insulitis islets. This period of insulitis development ocurred between the 7th and the 14m day after the first CY injection and was considered to represent the establishing of the immunopathologic process in the pancreas. The clinical expression of IDDM was significantly increased within two weeks after the second CY dose (80% in both sexes). Based on immunohistochemical analysis the CY-induced insulitis showed a phenotypic evolution similar to that spontaneously developed in NOD mice with the predominance of CD4+ T cells in the initial phase and an increased proportion of CD8+ T cells in the advanced phase. CY-induced IDDM could be prevented by treating the mice with depleting anti- CD4 and anti-CD8 MoAbs. This treatment was initiated at a critical moment in the progress of the invasive/destructive insulitis (10 days after the first CY dose). Therapeutic success was achieved with in a short time (10 days) and at low total doses of MoAbs (0.5 to 1.25 mg/mouse). Anti-CD4 but not anti-CD8 MoAbs prevented the insulitis from evolving to its final stages. These results clearly indicate the potential clinical usefulness of anti-CD4 and anti-CD8 MoAbs in abolishing or neutralizing the activity of specific subpopulations involved in the autoimmune destruction of ß cells. / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T19:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_SilviaCristinaCrepaldi_D.pdf: 4970540 bytes, checksum: caabd222e7acbf570b4567612f3ce6fe (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo aprofundar os conhecimentos sobre os mecanismos celulares envolvidos na maturação do acoplamento estímulo-secreção de insulina na fase de vida perinatal; e da função do lactogênio PRL neste processo. Para tanto, ilhotas de ratos neonatais foram mantidas em cultura durante períodos de tempo diferentes, recebendo ou não tratamento hormonal diário. À seguir, analisamos a expressão dos transportadores de glicose, a permeabilidade ao cálcio e a secreção de insulina estimulada por substâncias diferentes. Os dados obtidos nos indicam que em ilhotas neonatais o tratamento crônico com PRL e a concentração de glicose no meio de cultura, modulam o aumento na expressão do GLUT2. A expressão do GLUTl não é alterada pela PRL ou pela glicose. A permeabilidade ao 45Ca²+ é modificada após o tratamento prolongado com PRL, aproximando-se ao padrão do adulto. A PRL induz aumento no conteúdo de insulina e maturação da resposta secretória estimulada por glicose e aminoácidos. A maturação da resposta secretória estimulada por glicose é potencializada pelo tempo de tratamento hormonal. O tratamento com PRL parece não atuar nos mecanismos envolvidos na modulação muscarínica embora induza maturação no sistema PKC. O tempo de cultura "per se" induz uma maturação parcial da resposta secretória de insulina. A cultura por período de tempo prolongado torna as células B mais sensíveis à estimulação por Leu ou Arg. Finalmente, a comparação dos dados obtidos após cultura durante 7 ou 19 dias, indica que o tratamento prolongado com PRL atua em etapas importantes do mecanismo de secreção de insulina, favorecendo o acoplamento entre o metabolismo do nutriente, a despolarização da membrana da célula B, a elevação na concentração citosólica de Ca²+ e a resposta secretória. Portanto, ilhotas neonatais cultivadas em presença de PRL durante 19 dias, adquirem uma resposta secretória de insulina mais próxima ao padrão do adulto. Estes dados reforçam a importância da PRL no processo de maturação da resposta secretória de insulina, das células B-pancreáticas, na fase perinatal e sugerem um efeito tempo-dependente na ação do hormônio / Abstract: Maturation of the glucose sensing mechanism in mammals occurs during the perinatal life period. In rats, the poor secretory response to glucose obselVed during fetal period is rapidly converted to an adult response in few days after birth. This poor secretory response is ascribed to an uncoupling between glucose stimulation and membrane depolarization resulting in the opening of an insufficient number of voltage-sensitive Ca2+ -channels, and an impaired increase in cytosolic Ca²+ concentration. The obselVed uncoupling in fetal and neonatal islets seems to be also consequence of a reduced A TP generation by B cells. Growth and differentiation of the endocrine pancreas are controlled by many factors including the somatolactogenic hormones, especially prolactin (pRL). The present work aimed at investigating the cellular mechanisms envolved in the maturation of stimulus-response coupling of insulin secretion in the perinatal life phase and the functions of PRL in this processo For this purpose, islets trom neonatal rats were kept in culture during differents periods of time receiving or not daily hormonal treatment. Glucose transporter expression (GLUTI and GLUT2), Ca²+ membrane permeability and insulin secretion were analysed in these cultured neonatal islets. The PRL treatment and the glucose concentration in the culture medium affect GLUT2 expression. GLUTI expression is not modified by PRL or glucose. After prolonged PRL treatment 45Ca permeability in the neonatal islets are cio ser to that obselVed in adult islets. PRL induces increase in the insulin total content and accelerates the maturation of secretory response stimulated by glucose and aminoacids in a time-dependent fashion. The maturation of secretory response stimulated by glucose is accelerated by time of PRL treatment. The PRL treatment does not affect mechanisms controled by muscarinic receptors in B-cells. The PRL treatment induces maturation in the PKC system. The culture time "per se" induces partial maturation of insulin secretion response. B cells submited to prolonged period of culture become more sensitive to Leu or Arg stimulation. Finally, data obtained after culture during 7 or 19 days, show that a prolonged PRL treatment influence important steps of the insulin secretion mechanisms, favouring the coupling among nutrient metabolism, membrane B cell despolarization, increase in the [Ca²+]i and increase secretory response. Therefore, neonatal islets cultured in the presence of PRL during 19 days acquire an insulin response to the nutrients elo ser to the adult pattem. These data reinforce the importance of PRL in the maturation process of insulin secretion response by pancreatic B cells during the perinatal life period and suggest an effect time-dependent in the hormonal action / Doutorado / Fisiologia e Biofisica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T22:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thirone_AnaClaudiaPelegrinelli_M.pdf: 3468685 bytes, checksum: 5b77284d1cf448cbe7c8ba863ce0f7ef (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A insulina estimula a atividade tirosina quinase de seu receptor, resultando na fosforilação de substratos citoplasmáticos, substratos I e 2 do receptor de insulina (IRS-I e IRS-2). Estes dois substratos, por sua vez, ativam a fosfatidilinositol 3-quinase (PI 3-quinase). Sabe-se que um excesso crônico de hormônio do crescimento (GH) produz resistência insulínica, mas o exato mecanismo permanece não esclarecido. No presente estudo, examinamos os níveis protéicos e graus de fosforilação do receptor de insulina, do IRS-I e do IRS-2, bem como a associação destes substratos com a PI 3-quinase, no fígado e músculo de ratos tratados cronicamente com GR. Os níveis de receptor de insulina no fígado e músculo foram semelhantes nos grupos tratados com GH e controle. A autofosforilação do receptor, estimulada pela insulina, não mudou no fígado, mas mostrou se reduzida para 56 ::!: 5% (p<O,OOI) no músculo dos ratos tratados com GR. Em contraste, o nível protéico de IRS-I diminuiu para 40 ::!: 6% (p<O,OOI) no fígado dos ratos tratados com GH, mas não no músqIlo. A fosforilação do IRS-I, estimulada pela insulina, mostrou se diminuída para 67 ::!: 11% (p<0,05) e 64 ::!: 9% (p<O,OI) no fígado e músculo, respectivamente. A quantidade de IRS-2 fícou semelhante nos animais tratados com GH, em relação aos controles, tanto em fígado quanto em músculo, enquanto a fosforilação deste substrato, após estímulo com insulina, reduziu para 43 ::!: 4% (p<O,OOI) no fígado e 72 ::!: 8% (p<0,05) no músculo dos ratos tratados com GR. A associação do IRS-I com a PI 3 quinase, estimulada pela insulina, mostrou-se diminuída para 45 ::!: 5% (p<O,OOI) no fígado e para 63 ::!: 10% (p<0,05) no músculo dos ratos tratados com GR. Também a associação do IRS-2 com a PI 3-quinase decresceu para 47 ::!: 10% (p<0,05) e 68 ::!: 10% (p<0,05) em fígado e músculo, respectivamente. Concomitantemente, houve redução para 75::!: 4% (p<O,OOI) no nível hepático da PI 3-quinase. Estes dados sugerem que estas alterações, nas etapas iniciais de transmissão do sinal insulínicq, possam desempenhar alguma função na resistência insulínica observada nos animais tratados cronicamente com GR / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor which results in the phosphorylation of the cytosolic substrates, insulin receptor substrate-l (IRS-l) and insulin receptor substrate-2 (IRS-2). These two substrates in tum associate with and activate phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase). An excess of growth hormone (GH) is known to produce insulin resistance, but the exact molecular mechanism remains unclear. In the present study, we have examined the levels and phosphorylation status of the insulin receptor and its substrate IRS-l, as well as the association between this substrate and PI 3-kinase, in the liver and muscle of rats chronically treated with GH. The levels of insulin, receptor in the liver or muscle were similar in both the GH-treated and non-treated rats. Insulin-stimulated receptor autophosphorylation, as determined by immunoblotting with an antiphosphotyrosine antibody, did not change in the liver, but was reduced by 56 :t 5% (p<O. 001) in the muscle of rats treated with GH. In contrast, IRS-l protein levels decreased to 40 :t 6% (p<O.OOI) in, the liver of GH-treated rats, but not in muscle. In samples previously immunoprecipitated with anti-IRS-l antibody and blotted with antiphosphotyrosine antibody, there was a decrease in insulin stimulated IRS-l phosphorylation levels to 67:t 11% (p<0.05) and 64 :t 9% (p<O.OI) in the liver and muscle of GH treated rats, respectively. The insulin-stimulated IRS-l association with PI 3-kinase decreased to 45:t 5% (p<O.OOI) in the liver and to 63 :t 10% (p<0.05) in.the muscle ofrats treated with GR. Concomitantly, there was a decrease to 75:t 4% (p<O.OOI) in t4e leveI of hepatic PI 3-kinase. While there was no change in the hepatic and musde IRS-2 concentrations, the tyrosine phosphorylation of this substrate after insulin stimulation was reduced to 43 :t 4% (p<O,OOI) and 73 :t 8% (p<0,05) in the liver and muscle of GH treated rats, respectively. The association of IRS-2 with PI 3-kinase decreased to 47 :t 10% (p<0,05) in the liver and to 68 :t 11 % (p<0,05) iR the muscle of GH treated rats. These data suggest that changes in the early steps of insulin signal transduction may have a role in the insulin resistance observed' in animaIs chronically treated with GH / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Medicina