Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T21:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felisbino_MarinaBarreto_M.pdf: 5744960 bytes, checksum: 792f3ed20bbe7d53c917089733be679f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O ácido valproico (VPA) é um potente anti-convulsante conhecido como inibidor de deacetilases de histonas (HDACi) de classe I em diversos tipos celulares. Buscando conhecer se a estrutura cromatínica se alteraria quando da ação de HDACi, investigamos a supraorganização cromatínica de células tumorais HeLa e de células NIH 3T3, estas últimas caracterizadas por apresentarem áreas de heterocromatina conspícuas, sob tratamento com VPA. Essas informações foram associadas a da atividade enzimática de HDACs assim como do nível de acetilação das histonas H3 nesses modelos celulares tratados por VPA. As frequências de anomalias cromossômicas, morte celular e índices mitóticos também foram investigados. As células tratadas com VPA nas concentrações 0,05, 0,5 e 1,0 mM por 1-24 h foram submetidas à reação de Feulgen e analisadas através de microespectrofotometria de varredura automática e microscopia óptica. Western blots, análises enzimáticas e ensaio TUNEL também foram utilizados neste estudo. Células tratadas com tricostatina A (TSA), uma HDACi de atividade mais ampla do que o VPA, foram utilizadas como controles positivos. Em todas as condições de tratamento com VPA e TSA foi demonstrada descompactação cromatínica acompanhada de diminuição na atividade de HDACs e aumento na acetilação de histona H3. Essa alteração textural cromatínica também atingiu áreas heterocromáticas de células NIH 3T3. Nenhuma alteração nas frequências de anomalias cromossômicas, índices mitóticos e morte celular foi observada nesses modelos celulares nas condições relatadas, embora tenha ocorrido um aumento de fragmentação de DNA em células HeLa tratadas com VPA por 24 h e por TSA a partir de 4 h. Diminuição na proliferação celular nas células HeLa ocorreu apenas sob tratamento com VPA 5,0 mM por 48 h. Os resultados indicam que o VPA e a TSA promovem remodelação cromatínica em células tumorais HeLa e em células fibroblásticas NIH 3T3, que pode ser atribuída à sua ação de HDACi. Não se pôde descartar, porém, que o VPA atue sobre outras proteínas nucleares, cuja expressão poderia se apresentar diminuída sob sua ação / Abstract: Valproic acid (VPA) is a potent anticonvulsant that inhibits class I histone deacetylases (HDACi) in several cell types. Seeking to know whether the chromatin structure would change when the action of HDACi, we investigated whether VPA would affect chromatin supraorganization of tumoral HeLa cells and NIH 3T3 cells, this latter characterized by presenting areas of conspicuos heterochromatin. This information was associated with enzymatic activity of HDACs as well as the level of H3 histone acetylation in these cell models treated with VPA. The frequency of chromosome abnormalities and cell death and mitotic indices were also investigated. VPA-treated cells at concentration 0.05, 0.5 and 1.0 mM for 1-24 h were subjected to the Feulgen reaction and analysed by automatic scanning microspectrophotometry and optical microscopy. Western blots, enzymatic analysis and TUNEL assay were also performed in this study. Trichostatin A (TSA)-treated cells, an HDACi whose activity is broader than VPA, were used as positive control. Chromatin decondensation was demonstrated under all TSA and VPA treatments and was associated with decrease in HDAC activity and with increase in the level of H3 histone acetylation. This chromatin textural change also affected heterochromatic areas of NIH 3T3 cells. No changes in chromosome abnormalities, mitotic indices or morphologically identified cell death were found in both cellular models with the VPA treatment conditions mentioned above, although there was an increase of DNA fragmentation after a 24 h-VPA treatment and a 4 h-TSA treatment in HeLa cells. Decrease in cell proliferation in HeLa cells ocurred only under a 5.0 mM 48 h-VPA treatment. The results indicate that VPA and TSA promote chromatin remodeling in tumoral HeLa cells and fibroblastic NIH 3T3 cells, which may be attrituted to their HDACi action. It may not be discarded, however, that VPA acts on other nuclear proteins whose expression could be reducted under its action / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Os hormônios tireoidianos atuam sobre o metabolismo dos diversos tecidos do organismo e participam da regulação do consumo de glicose pelas células. Estudos já evidenciaram que o T3 atua, dependendo do tipo celular, aumentando a expressão de algumas isoformas dos transportadores de glicose (GLUTs) e a translocação do GLUT4 para a membrana plasmática, melhorando, também, a captação de glicose (CGlic) em poucos minutos. Os mecanismos envolvidos nessas ações do T3, contudo, ainda não estão bem esclarecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar as possíveis vias de sinalização envolvidas na ação aguda do T3 sobre a CGlic em células adiposas 3T3-L1. Nossos dados demonstraram que o T3 promove aumento na CGlic, com pico aos 10 min, retornando ao nível do controle após 30 min de incubação das células com o hormônio. Sugerimos que essa ação depende, ao menos, de duas vias de sinalização. Uma delas envolve a ativação das proteínas Src, PI3K e Akt. A outra, aparentemente, é iniciada a partir da membrana plasmática via integrina aVb3 / Thyroid hormones act on the metabolism of many tissues and participate in the regulation of glucose consumption by cells. Studies from this and other laboratories have demonstrated in muscle and adipose cells that T3 increases, in a short period (minutes), the expression of some glucose transporter (GLUTs) isoforms and GLUT4 translocation to the plasma membrane leading to an improvement of glucose uptake. However, the mechanisms involved in these T3 actions are still not clear. The aim of this study was to investigate the possible signaling pathways involved in the acute T3 action on glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes. Our results have shown that T3 increases glucose uptake with a peak at 10 min returning to the control level after 30 min of the cell incubation with the hormone. We suggest that this action depends on at least two parallel signaling pathways. One involves the activation of Src, PI3K and Akt proteins, while the other involves another mechanism triggered by T3, apparently, from the plasma membrane at aVb3 integrin.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-07-03T18:22:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Daniele Kosmo.pdf: 1666129 bytes, checksum: 21d35993408cf04cf3327fefb3c5a4a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-03T18:22:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Daniele Kosmo.pdf: 1666129 bytes, checksum: 21d35993408cf04cf3327fefb3c5a4a2 (MD5) Previous issue date: 2017-07-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer de pulmão está entre os tipos mais comuns dentre todos os tumores malignos. Sendo a quimioterapia o principal tratamento preconizado, todavia além dos seus diferentes efeitos colaterais, verifica-se a resistência a múltiplos fármacos, referida como a perda da sensibilidade tumoral aos agentes quimioterápicos. Óleos essenciais (OE) podem contornar esta refratariedade dos tumores aos fármacos e se apresentam também como alternativa antitumoral, em especial pela possibilidade de serem administrados por via inalatória. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a citotoxicidade da fase vapor do OE de Jasminum officinale em células Calu-3 (adenocarcinoma de câncer de pulmão humano) e células 3T3 (linhagem padrão de fibroblasto murino) bem como investigar as alterações morfológicas e mecanismo de ação deste OE em Calu-3. Foram realizados ensaios de avaliação metabólica com redução de MTT e ensaio de marcação de proteína com SRB, onde verificou-se a redução da viabilidade celular de maneira dose-dependente. A IC50 estimada para células Calu-3 foi de 1495,57 μg/mL e para as células 3T3 foi de 3795,05 μg/mL. Para investigação das alterações morfológicas associados à citotoxicidade, foram avaliados (1) a morfologia celular com o emprego dos corantes alaranjado de acridina, brometo de etídio; (2) distribuição de células entre as fases do ciclo celular com emprego de iodeto de propídio (PI) por citometria de fluxo; e foi avaliado o potencial inibitório da fase vapor do OE de Jasminum officinale na atividade da glicoproteína P empregando o ensaio de acúmulo de Rodamina 123. Os resultados obtidos indicaram que a morte das células foi causada pelo processo de apoptose tardia, inicial e necrose, com pequena redução da porcentagem de células nas fases sub-G0 e G2/M do ciclo celular. A fase vapor do OE de Jasminum officinale apresenta efeito inibitório sobre a atividade da glicoproteína P em sinergia com a curcumina.Tais resultados sugerem a possibilidade da utilização do OE de Jasminum officinale, em sua fase vapor no tratamento do câncer de pulmão por via inalatória, porém ainda são necessários mais estudos para aprofundar o conhecimento sobre óleos essenciais, frente a células normais e tumorais de pulmão, incluindo os mecanismos envolvidos. / Lung cancer is among the most common types among all malignancies, with an increase of 2% per year in its incidence. Chemotherapy is the main treatment recommended, but in addition cause collateral effects and also resistance to multiple drugs can occur, that is, the loss of tumor sensitivity to chemotherapeutic agents. Essential oils (OE) may be an option for this refractoriness of tumors to drugs and also present as an antitumor alternative, especially for the possibility of being administered by inhalation. The objective of this work was to evaluate the cytotoxicity of the vapor phase of jasmine OE in Calu-3 cells (human lung cancer adenocarcinoma) and 3T3 cells (murine fibroblast control line model). The vapor phase of jasmine OE reduces cell viability in a dose-dependent manner, as demonstrated by the MTT and SRB reduction assays. The estimated IC 50 for Calu-3 cells was 1495.57 μg / mL and for 3T3 cells was 3795.05 μg / mL. The possible effects associated with cytotoxicity, (1) cellular morphology, (2) cell cycle phase distribution and (3) P-glycoprotein activity were evaluated. Results indicated that cell death was caused by the late apoptosis and necrosis, reduction in the percentage of cells in the sub-G0 and G2/M cell cycle phases. The vapor phase of the jasmine oil presented an inhibitory effect on the activity of the glycoprotein P in synergy with curcumin. These results suggest the possibility of the use of the OE of jasmine, in its vapor phase in the treatment lung cancer, by inhalation. Further studies are needed to knowledge about essential oils, especially the so-called alternative, against normal and tumor cells of the lung, included the mechanism involved.