Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Ingeniero en Biotecnología Molecular. / Los canales de la superfamilia TRP son canales catiónicos no selectivos que permean principalmente Ca2+ y Na+, y comparten una arquitectura molecular general. Las subunidades de un canal TRP ensamblan en homo o heterotrámeros entre miembros de una misma o una diferente subfamilia compartiendo mecanismos de regulación y tráfico, lo que resulta en una gran diversidad de conductancias cationicas, en términos de sus propiedades regulatorias y biofísicas, por lo que han sido descritos como sensores polimodales que responden a una gran variedad de estímulos intracelulares y externos, cumpliendo roles fisiológicos esenciales en las funciones sensoriales, homeostáticas e incluso diversas funciones motiles como la contracción muscular y la migración celular. TRPC3 es un miembro de la subfamilia TRPC que está involucrado en un amplio espectro de mecanismos de señalización de Ca2+, y presenta propiedades de activación y regulación únicas que le permiten el reconocimiento e integración de múltiples estímulos. Este canal se asocia con varias proteínas permitiendo la formación de canales catiónicos diferentes en diversos tipos de células, afectando su actividad y función, por lo que es considerado un sensor multifuncional y versátil de gran relevancia fisiológica y fisiopatológica. Se ha visto que TRPC3 interacciona físicamente con TRPM4 en sistemas de expresión heterólogos, un miembro de la subfamilia TRPM impermeable a calcio, pero activado por este catión, que está involucrado en diferentes procesos fisiológicos, y cuya ganancia de función está relacionada con gran variedad de eventos fisiopatológicos como cáncer, enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas. En nuestro laboratorio, se encontró que las proteínas End Binding (EBs) interaccionan con un motivo ‘SxIP’ ubicado en la región amino terminal de TRPM4, y que xiii esta interacción TRPM4-EB gobierna el tráfico anterógrado del canal y su actividad. De acuerdo a estos antecedentes, se propone validar la interacción física entre TRPC3 y TRPM4, y evaluar si es que comparten mecanismos de tráfico y exportación a la superficie celular. Para ello, se realizaron experimentos de inmunoprecipitación y se evaluó el co-trafico de estos canales utilizando diferentes aproximaciones en modelos de expresión heteróloga que coexpresaban ambos canales. Se encontró que efectivamente TRPM4 interacciona con TRPC3, y además que la deleción del ‘motivo SWIP’ de TRPM4 afecta la localización y exportación de TRPC3 a la superficie celular. Debido a la creciente relevancia fisiológica de los eventos de heteroasociación y co-trafico relacionados a los canales TRP, estos datos sugieren que la interacción física entre estos miembros de diferentes sufamilias TRP involucra mecanismos de tráfico asociado a la interacción TRPM4-EBs y podría tener relevancia en tejidos que coexpresen ambos canales, como en tejido cardiovascular o neuronal. / TRP proteins are non-selective cationic channels that permeate mainly Ca2+ and Na+, and share a general molecular architecture. TRP channels subunits assemble as homo or heterotetramers between members of the same or different subfamily, sharing regulation and trafficking mechanisms which results in a great diversity of cationic conductances, in terms of their regulatory and biophysical properties, so they have been described as polymodal sensors that respond to a wide variety of intracellular and external stimuli, fulfilling essential physiological roles in sensory, homeostatic and even diverse motile functions such as muscle contraction and cell migration. TRPC3 is a member of the TRPC subfamily involved in a broad spectrum of Ca2+ signaling mechanisms, and has unique activation and regulation properties that allow recognition and integration of multiple stimuli. These channels are associated with several proteins that allow it to form different cation channels in different types of cells, affecting the activity and function of the channel, so it is considered a multifunctional and versatile sensor of great physiological and physiopathological relevance. TRPC3 physically interacts with TRPM4, a member of the TRPM subfamily impermeable by calcium, but activated by this cation, which is involved in different physiological processes, and whose gain of function is related to a great variety of pathophysiological events, such as cancer, cardiovascular and neurodegenerative diseases. In our laboratory, we found that End Binding proteins (EBs) interact with a 'SxIP' motif located in the amino terminal region of TRPM4, and this TRPM4-EB interaction governs the anterograde trafficking of the channel and its activity. Accordingly, we achieved to validate the physical interaction between TRPC3 and TRPM4, and to evaluate whether these channels share trafficking and exporting mechanisms to the cell surface. To do that, we performed immunoprecipitation assays and the co-trafficking assays in heterologous systems that coexpressed both channels. We found that TRPM4 interacts with TRPC3. Moreover, we observed that the deletion of the 'SWIP motif' of TRPM4 affects the localization and exporting of TRPC3 to the cell surface. Due to the increasing physiological relevance of hetero-association and co-trafficking events related to TRP channels, these data suggest that the physical interaction between these members of different TRP subfamilies involve trafficking mechanisms associated with TRPM4-EBs interaction. These data could have relevance in tissues that coexpress both channels, as in cardiovascular or neuronal tissues. / Este Seminario de Título fue financiado por el proyecto FONDECYT 1160518 y Núcleo Milenio de Enfermedades Asociadas a Canales Iónicos (IR: Oscar Cerda A.),

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / El transporte de Cl- mediante vías conductivas está asociado a numerosas funciones epiteliales, tales como la mantención del potencial de membrana, transporte de solutos y regulación de volumen celular. Existe evidencia de que el transporte de Cl- transepitelial en el sinciciotrofoblasto placentario, un epitelio carente de vías paracelulares, también podría estar involucrado en tales funciones. Un candidato molecular para el transporte conductivo de Cl- en la membrana apical del sinciciotrofoblasto es un Maxi-canal de Cl- con características biofísicas particulares: múltiples sub estados, conductancia de 240 pS, probabilidad de apertura (Po) dependiente de voltaje en forma de campana, modulación por ácidos grasos y hormonas esteroidales, y permeabilidad a diversos aniones incluyendo aminoácidos. La preeclampsia (PE) es una patología presente solo en el embarazo. Su etiología es desconocida y su impacto en la morbimortalidad materno fetal es importante. La morbilidad fetal depende, entre otras cosas, de la restricción de crecimiento intrauterino (IUGR), la cual estaría mediada por una disminución del flujo sanguíneo a la placenta, aunque la contribución de otros factores es desconocida. Las propiedades biofísicas del Maxi-canal de Cl- sugieren que alteraciones en su función podrían estar involucradas en el IUGR asociado a la PE y en otras disfunciones de mecanismos celulares básicos que contribuyen a la generación de un sinciciotrofoblasto disfuncional. La placenta intacta es de difícil acceso para métodos electrofisiológicos convencionales. Una buena aproximación es la reconstitución de membranas purificadas en liposomas gigantes, accesibles al método de patch clamp. La membrana apical purificada de placentas obtenidas inmediatamente después del alumbramiento, se obtiene usando un protocolo que incluye centrifugaciones diferenciales, separación de membrana apical y basal con cloruro de magnesio (MgCl2) y gradiente de sacarosa discontinua. Se realizaron 32 experimentos independientes (n=6 placentas preeclámpticas), registrándose un canal de Cl-, con múltiples sub estados y una Po dependiente de voltaje. Sin embargo, este canal, presentó diferencias significativas en sus características biofísicas comparadas con las del canal de placentas normales. En el 50% de los sellos, la conductancia es menor (138 pS), y la dependencia de potencial de la Po muestra una curva aplanada (n=16), con un valor de la Po de 0.8 sobre  80 mV, comparado con 0.6 para los controles. En conclusión, el Maxi canal de Cl- está en la membrana apical del sinciciotrofoblasto de placentas preeclámpticas. Los resultados sugieren que a lo menos, una sub población, posee características biofísicas que difieren del canal de Cl- de membranas no patológicas

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El presente trabajo tuvo como objetivo analizar los efectos del tiempo de reposo pre-sacrificio: 1, 3, 5 y 6 hrs, tiempo pos-mortem: 45 minutos y 24 hrs; sexo (machos castrados y hembras) y peso de canal: livianas < 90 kg; normales: 90 a < 106 kg y pesadas:  106 kg, sobre pH muscular, conductividad eléctrica muscular y temperatura muscular. Se trabajó con una muestra de 365 cerdos provenientes de un plantel industrial que fueron procesados en una Planta Faenadora de Carnes de la Región Metropolitana. Los estimadores de calidad de la carne se midieron en el músculo Longissimus dorsi, entre las vértebras T15 y L1 de la hemicanal derecha. Los resultados fueron analizados mediante análisis de varianza. Se encontró que los tres estimadores de calidad presentaron diferencias significativas (p  0,0001) entre los tiempos pos-mortem estudiados (45 min y 24 hrs). Como consecuencia de los valores más bajos de pH muscular a las 24 hrs (p  0,0001) y valores más altos de conductividad eléctrica tanto a los 45 min y 24 hrs (p  0,05), en los tiempos de reposo extremos, el reposo en un rango de 3 a 5 hrs sería suficiente para mejorar la calidad de la carne. El mayor peso de canal condicionó una menor calidad de la carne de cerdo al originar menores valores de pH muscular a los 45 min (p  0,05) y temperaturas más altas 45 min y 24 hr pos-mortem (p  0,0001 y p  0,001, respectivamente). El pH muscular a las 24 hrs fue menor en las canales de machos castrados (p  0,0001) en circunstancias que se observó una menor temperatura muscular a las 24 hrs en las de hembras (p  0,01), lo que indicaría que el sexo afecta de manera marginal los estimadores de calidad de carne de cerdo estudiados

Merchandising en el canal tradicional

Presenta el proceso constructivo de las excavaciones de diferentes obras (canales, pozos, sótanos, etc).

Canales de distribución.

Canales de distribución. Variable Plaza - segunda plaza.

Los estuarios son estructuras altamente dinámicas, donde la corriente de marea es la principal fuerza que determina las características morfológicas de los mismos. En este ambiente, los canales de marea son los elementos más significativos, ya que ellos determinan la dispersión del flujo. Entender y predecir la evolución y la dinámica sedimentaría asociada a los mismos es fundamental para una completa comprensión de este tipo de ecosistemas. En este trabajo de tesis se investiga la morfodinámica (procesos erosivodepositacionales) y las característica hidrosedimentológicas de un sistema de canales de marea del estuario de Bahía Blanca (sur de la Pcia. de Bs. As.). Los canales considerados en esta investigación (El Alambre, La Lista y Principal) se encuentran hidrodinámicamente vinculados. Con el objetivo de estudiar la evolución geomorfológica, la circulación de sedimentos y los procesos erosivodepositacionales, se aplicaron diferentes métodos de trabajo. Se usaron técnicas acústicas (ecosonda, sonar lateral), sísmica de alta resolución (3,5 kHz), mediciones de corrientes y muestreo de sedimentos. Asimismo, se evaluaron las facies sismoestratigráficas del subfondo marino, asociadas a la morfodinámica del ambiente. Los canales estudiados son dominados por corrientes bidireccionales (régimen mesomareal), las cuales son el principal agente que gobierna los procesos actuantes en ellos. Los rasgos morfológicos (dunas, point bar, bancos elongados), junto con los datos de corrientes indican la dominancia del reflujo. En consecuencia, el modelo de circulación de sedimento, con máximos valores de transporte en El Alambre (0,08773 gr cm-1 seg-1), revela una exportación de material hacia el canal Principal. La tendencia evolutiva del área responde a un desplazamiento de los veriles, sin producirse una profundización significativa de los canales, debido a un control litológico del material subyacente. Se determina la tendencia de El Alambre y La Lista a acentuar su sinuosidad, donde las formas acrecionales (point bars) se hallan genéticamente relacionadas a la sedimentación producida por la corriente de reflujo. Morfológica y dinámicamente se establece que El Alambre actúa como vía principal del sistema y La Lista se comporta como un tributario del mismo. El banco La Lista constituye un relevante cuerpo sedimentario elongado desarrollado en la desembocadura del canal homónimo. Su evolución morfológica está vinculada con un modelo de transporte residual de sedimento, con trayectorias opuestas a ambos lados del mismo. Este proceso origina un paulatino aumento en altur a y el crecimiento longitudinal de la geoforma. / Estuaries are highly dynamic structures where ebb currents are key in determining their morphological characteristics. Tidal channels within this environment are of pivotal importance as they determine flow dispersion. Both learning and predicting the evolution and sedimentary dynamics of estuaries are therefore greatly important to better understand these types of ecosystems. This thesis focuses on the study of the morphodynamics, erosivedepositational processes, and hydrosedimentological characteristics of a tidal channel system in Bahía Blanca estuary which is located in the south of the province of Buenos Aires, Argentina. The channels analyzed in this thesis, namely El Alambre, La Lista and Principal, are hydrodynamically-related. Different methods and techniques were used to study the geomorphological evolution, sediment circulation, and erosive-depositational processes. In particular, acoustic techniques such as echo sounder, side scan sonar, high resolution seismics (3.5 kHz), current measurements and bottom sediment sampling were used. In addition, marine sub-bottom seismoestratigraphic facies associated to the morphodynamics of the environment were analyzed. The channels studied in this thesis are dominated by bidirectional currents (mesotidal regime) which behave as the principal agent ruling the processes occurring in them. The morphological features, dunes, point bar, elongated banks in the study area as well as the current data obtained are all indicative of ebb dominance. The sediment circulation model with highest transport values in El Alambre (0.08773 gr cm-1 sec-1) thus reveals export of material towards Principal channel. The tendency of evolution of the study area is due to a flank displacement which does not end in a significant deepening as a result of a lithological control of underlying material. In addition, it was observed that in El Alambre and La Lista there is a tendency to increase sinuosity in which depositationals are genetically-related to sedimentation resulting from the ebb current. In view of the morphological features and the dynamics of the study area, it can be concluded that El Alambre behaves as the principal pathway of this estuarine system and that La Lista behaves as its tributary. La Lista bank is a relevant elongated sedimentary body formed in the mouth of the homonymous channel. Its morphological evolution is related to a residual sediment transport model with trajectories opposit to its two flanks. This process leads to a gradual increase in the height and longitudinal growth of the bank.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Esta memoria tuvo por objeto evaluar el resultado del cruzamiento bovinos de la raza Belga Azul, de gran conformación y rendimiento carnicero, con la raza lechera Holstein. En este manejo genético, muy común en la Unión Europea, se utilizan vacas adultas con menores índices productivos, de las cuales no es conveniente obtener reemplazos para el rebaño lechero. En lecherías cercanas a Los Ángeles, VIII Región, Chile, se inseminaron vacas Holstein con semen de toros Belga Azul, importado desde Bélgica. Los terneros machos fueron criados, castrados y engordados en las mismas lecherías hasta que se enviaron a una planta faenadora (Carnes Ñuble, Chillán, Chile), junto a los novillos Holstein controles. A un grupo de novillos Holstein puros (controles) se les aplicó un implante hormonal, normalmente utilizado en la engorda de novillos lecheros. Se evaluó el rendimiento a la vara, al desposte y las características de la canal de los novillos híbridos Belga Azul x Holstein y de los novillos Holstein Friesian puros, engordados en las mismas lecherías, con y sin implante hormonal. Se produjo un aumento estadísticamente significativo (p ≤ 0,05) para los híbridos Belga Azul x Holstein sobre ambos grupos de novillos Holstein con y sin implante hormonal, en las siguientes características: Peso de la canal (20 Kg. y 63 Kg. respectivamente), rendimiento en vara (casi 13% en ambos), rendimiento al desposte (7,55% y 6,59% respectivamente), siendo de mayor magnitud en los cortes mas valorados comercialmente, que a su vez son los de mayor demanda para exportación. En cuanto a las características cualitativas de la canal, se observó un aumento significativo (p ≤ 0,05) a favor del híbrido para el área del ojo del lomo de 38%, buen indicador de carnosidad de la canal

El presente trabajo consiste en el diseño de un modelo teórico que explique el comportamiento de las señales de calcio en un microdominio (agrupación de canales iónicos y transportadores involucrados en la dinámica del calcio dentro de un cilio olfatorio), observadas experimentalmente. Los cilios olfatorios son de gran importancia en la biología ya que funcionan como estructuras receptoras de los odorantes en las neuronas olfatorias. El calcio es uno de los principales transductores de la señal eléctrica generada, por lo que entender su dinámica a cabalidad representa un gran aporte al tema en cuestión. Teniendo en cuenta que el factor más importante en el análisis de muy pocos canales es que la apertura de éstos es probabilística, y que las señales de calcio son muy puntuales en el cilio olfatorio con respecto al tiempo y al espacio, se realizó un modelo matemático estocástico resuelto numéricamente (utilizando el software MATLAB) en Ecuaciones Diferenciales Ordinarias. Se observó claramente que el principal modulador de las señales de calcio en el microdominio es el canal activado por nucleótidos cíclicos CNG, existiendo una dependencia directa entre la corriente a través del canal y la concentración intracelular de calcio. Modificando algunos parámetros de manera apropiada dentro de rangos con sentido desde el punto de vista biológico, fue posible llegar a valores cuantitativos que concuerdan con lo observado experimentalmente. De esta forma, se obtienen resultados numéricos de gran similitud con las mediciones experimentales, siendo la difusión en el cilio y la cinética del canal CNG los parámetros claves en la modulación de las señales de calcio. Finalmente, el modelo cumple con el objetivo de dar un respaldo teórico a la observación experimental de la existencia de microdominios en los cilios olfatorios de las neuronas del olfato.