Le cancer du sein est le cancer le plus fréquent chez la femme (Boyle and Ferlay, 2005; Ferlay et al., 2007). Même si les traitements sont de plus en plus efficaces, il est responsable denviron 130 000 décès en Europe. Environ 20-30% des cancers du sein surexprime le gène ERBB2. Cette surexpression confère à la cellule un profil tumoral très agressif, et résistant aux chimiothérapies conventionnelles. Létude des facteurs responsable de la surexpression du gène ERBB2 dans les cancers du sein est le thème principal de recherche du laboratoire doncologie moléculaire. Notre laboratoire, a étudié les mécanismes moléculaires responsables de la surexpression du gène ERBB2 dans les cancers du sein. Nous avons montré que la surexpression est la conséquence dune stimulation de la transcription et non de la stabilisation de lARN (Pasleau et al., 1993). Pour étudier la régulation de la transcription un fragment de 6 kb du promoteur du gène ERBB2 a été cloné et séquencé. Différentes régions régulatrices ont été identifiées (Grooteclaes et al., 1994). Plusieurs sites de liaison pour des facteurs AP-2 ont été identifiés (Delacroix et al., 2005; Grooteclaes et al., 1999; Vernimmen et al., 2003a). La fixation des facteurs au promoteur a été vérifiée par Chromatin Immuniprecipitation (ChIP assay) (Begon et al., 2005; Delacroix et al., 2005). Afin de mieux comprendre le fonctionnement des facteurs de transcription AP-2, nous avons cherché les protéines interagissant avec ce facteur et contribuant à la surexpression dERBB2 dans des lignées de cancer du sein. Précédemment, Dominique Begon a montré linteraction de la protéine YY1 avec le facteur de transcription AP-2α et leur implication sur le promoteur du gène ERBB2 (Begon et al., 2005). La première partie de mon travail a été de mettre en corrélation par immunohistochimie lexpression des protéines YY1 et AP-2α avec la surexpression dERBB2 dans des tumeurs primaires. Nous avons également voulu étudier leffet dune diminution des protéines YY1 et AP-2 sur lexpression dERBB2, à laide de siRNAs (Voir article 1 en annexe, (Allouche A and Nolens G. et al., 2008). La deuxième partie de ce travail a porté sur lidentification dautres protéines pouvant interagir avec les protéines AP-2. Après purification, les protéines Ku70 et Ku80 furent identifiées. Nous avons voulu étudier leffet de cette interaction sur lactivité des protéines AP-2 (α et γ) et sur lexpression dERBB2 (voir article 2 en annexe).

Initialement, la vision restreinte des MMPs en tant que de simples « destructeurs » de la matrice extracellulaire avait largement sous-estimé limportance et la diversité de leurs contributions aux différentes étapes de la progression tumorale et de la dissémination métastatique. Ces dernières années, les fonctions complexes des MMPs dans la progression tumorale ont été renforcées par la découverte de nombreux nouveaux substrats dégradés, clivés ou activés par les MMPs, incluant non seulement des composants de la matrice extracellulaire mais aussi des récepteurs, des molécules dadhésion et de nombreuses molécules potentiellement bioactives. La complexité et la diversité de laction des MMPs dans la progression tumorale fournissent certaines explications quant à « léchec thérapeutique » de linhibition des MMPs dans les études cliniques de cancers humains. Une compréhension complète et spécifique de la biologie de chaque MMP est néanmoins requise avant de les considérer à nouveau comme des cibles thérapeutiques contre le cancer ou dautres pathologies. Les travaux réalisés dans le cadre de ce doctorat ont contribué à la compréhension des mécanismes moléculaires impliquant la MT1-MMP dans la croissance et langiogenèse tumorale et ont identifié, pour la première fois, une implication de la MT4-MMP dans la croissance tumorale et la dissémination métastatique du cancer du sein. Malgré sa faible activité de dégradation de la matrice extracellulaire, cette protéase à lien glycosylphosphatidyl inositol pourrait promouvoir la progression tumorale en affectant la structure des vaisseaux sanguins intratumoraux.

Cette thèse a pour vocation de contribuer au développement de différents immunocapteurs ampérométriques associés aux électrodes sérigraphiées (SPE). Les immunocapteurs sont des dispositifs simples associant un anticorps ou un antigène qui assurent la sélectivité à un transducteur (ici une SPE) ;ce dernier transforme la liaison anticorps/antigène en un signal mesurable (ici ampérométrique).<p>Le travail est divisé en deux volets principaux.<p>Le premier est consacré à la mise en œuvre de différents modèles d’immunocapteurs ampérométriques pour le dosage d’anticorps anti-tetani. La vaccination contre le tétanos est généralisée, toutefois pour maintenir un taux d’anticorps suffisant, il est indispensable d’administrer un rappel tous les 10 ans. Ce schéma vaccinal n’est pas toujours respecté, ce qui a pour conséquence qu’une partie de la population n’est plus protégée. Afin de déterminer le statut immunitaire du patient, il est indispensable de pouvoir déterminer le taux d’anticorps. Les immunocapteurs ampérométriques répondent à cet objectif. Plusieurs stratégies d’immobilisation de l’anatoxine tétanique (antigène) sur une SPE ont été mises en œuvre et comparées. L’une d’elles repose sur l’utilisation de microparticules superparamagnétiques pour la réaction immunologique et d’une SPE rendue magnétique par un support aimanté pour la mesure. D’autres reposent sur l’immobilisation de l’antigène et les réactions immunologiques directement à la surface de la SPE. L’utilisation de plans d’expérience, pour l’optimisation des immunoessais sur SPE est également exploitée dans ce travail. Les immunocapteurs développés ont permis de doser les anticorps anti-tetani dans le sérum de cobaye en dessous des valeurs considérées comme protectrices.<p>Dans le second volet, un immunocapteur basé sur l’utilisation de nanobodies® (NB) a été mis au point. Nous avons qualifié ce type d’immunocapteur original de nanoimmunocapteur. Le récepteur de facteur de croissance épidermique humain (HER2) a été utilisé comme cible. La protéine HER2 est considérée comme un biomarqueur important car sa surexpression provoque un type agressif de cancer du sein. Les NB sont des fragments à domaine unique dérivés d'anticorps à chaînes lourdes de camélidés. La stratégie de dosage immunologique en sandwich développée a tiré profit de la petite taille des NB pour la détection du marqueur électroactif d’oxydoréduction. La stabilité élevée des NB immobilisés a permis une durée de stockage des SPE modifiées supérieure à 3 semaines. De très courtes durées d'incubation étaient suffisantes pour obtenir une réponse satisfaisante. Le nanoimmunoessai a permis de déterminer le taux d’HER2 dopé dans des lysats cellulaires.<p> / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished