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Perfil de suscetibilidade e detec??o de marcadores gen?ticos de resist?ncia em Streptococcus Agalactiae isolados de amostras animais e humanas

Cunha, Cleia Maria Monteiro da 09 October 2008 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Cleia Maria Monteiro da Cunha.pdf: 485275 bytes, checksum: a4db2d06d84a6f336975955e4fb1bd45 (MD5) Previous issue date: 2008-10-09 / Streptococcus agalactiae, also referred as group B streptococci (GBS) are commensals microorganisms adapted to asymptomatic colonization of the mammalians gut and genitourinary tract. Initially, this specie was recognized as a major etiologic agent for bovine mastitis but has becoming a leading cause of invasive infections in human neonates. The reasons behind the prompt and persistent emergence of GBS neonatal disease have not been completely elucidated, once human and bovine GBS populations are assumed be distinct and unrelated by divergence on their own physiological characters. Aiming to contribute for the characterization of the two S. agalactiae sub-populations that are in a proximal coexistence in the Rio de Janeiro state, this study evaluated phenotypic and genotypic diversity aspects of regional groups of GBS. The first made up of 50 isolates obtained from human specimens whilst the other group was constituted of 36 isolates from milk of dairy cows presenting clinical or sub clinical mastitis. Phenotypic characterization was based on physiological and serological tests, antimicrobial susceptibility assays were carried out by the disk standard procedure and microdilution method. The genetic aspect was assessed by PCR for detection of genes associated with resistance to tetracycline. According to the results of physiologic tests, β-hemolysis was a faculty shared by about 28% of bovine isolates and 100% of human isolates. GBS bovine isolates also shows different profile of sensitivity to bacitracin, only 33% of them were susceptive to the antibiotic, regardless of the whole human isolates set had demonstrated a 100% susceptive pattern to this substance. A 100% sensitivity percentual to penicillin was shared by all isolates assayed in this study corroborating the general procedure for antibiotic therapy of GBS infection. Otherwise, and in an overall view, bovine isolates showed higher resistance rates to a set of antibiotics, including cephoxitin, erytromicin, clyndamicin, sulphamethoxazole, azithromycin and ciprofloxacin than in their human counterparts. In a similar sense, it was observed in this study that 13,9% of the animal GBS isolates expressed cMLSB and 2,8 % M phenotypes. The M phenotype was expressed in 6% of the human related isolates as the unique MLSB parameter. Genetical assays performed detected 13,8% (5/36) and 14% (7/50) for tet (M), and 30,5% (11/36) and 10% (5/50) for de tet (O), respectively, in bovine and human isolates. These genes are implicated in tetracycline resistance by ribosome protection mechanism through enzymatic structural modification. / Os Streptococcus agalactiae, tamb?m designados como estreptococos do grupo B (EGB), s?o microrganismos comensais adaptados para fazer a coloniza??o assintom?tica do tubo digestivo, e do trato geniturin?rio de mam?feros. Inicialmente, reconhecida como um dos mais importantes agentes etiol?gicos da mastite bovina, esta esp?cie foi tamb?m implicada como uma das principais causas de infec??es invasivas em rec?m-nascidos humanos. As raz?es para a r?pida e consistente evolu??o do EGB como importante agente causal de infec??es neonatais ainda n?o foram completamente elucidadas, uma vez que as subpopula??es de EGB nos isolados de humanos e bovinos s?o independentes e distintas com base no reconhecimento da diversidade de suas caracter?sticas fisiol?gicas. Com o objetivo de contribuir para a caracteriza??o das duas subpopula??es de S. agalactiae que coexistem no Estado do Rio de Janeiro, este estudo avaliou aspectos da diversidade gen?tica e fenot?pica de dois grupos de EGB regionais, sendo o primeiro composto por 50 isolados obtidos a partir de esp?cimes cl?nicos humanos, e o segundo constitu?do por 36 isolados a partir de leite de vacas leiteiras com ind?cios de mastite cl?nica ou subcl?nica. A caracteriza??o fenot?pica dos isolados foi baseada em testes sorol?gicos e fisiol?gicos, testes de suscetibilidade antimicrobiana realizados com t?cnica padronizada para utiliza??o de disco de difus?o e pelo m?todo de microdilui??o. O aspecto gen?tico foi avaliado pela aplica??o de PCR para detec??o de genes associados ? resist?ncia ? tetraciclina. Os testes fisiol?gicos demonstraram que a capacidade de promover β-hem?lise era uma caracter?stica partilhada por cerca de 28% dos isolados a partir do material de natureza bovina, mas que manifestava-se em todos os isolados de origem humana. Os isolados de EGB bovinos tamb?m mostraram um perfil diferente quanto ? sensibilidade ? bacitracina, uma vez que apenas 33% delas se revelaram suscet?veis a esse antibi?tico contra 100% de sensibilidade para os isolados de origem humana. O percentual de 100% de sensibilidade ? penicilina demonstrado por todos os isolados analisados neste estudo, tamb?m corrobora a import?ncia do uso desse antibi?tico como procedimento geral na terapia de infec??es por EGB. De uma forma geral, neste estudo foi observado que os isolados originados de material bovino demonstraram percentuais de resist?ncia ao conjunto de antibi?ticos analisados (cefoxitina, eritromicina, clindamicina, sulfametoxazol, azitromicina e ciprofloxacina) superiores aos observados em isolados de material humano. Foi tamb?m observado que 13,9% dos isolados de EGB animais examinados expressaram o fen?tipo cMLSB e 2,8% o fen?tipo M. O fen?tipo M foi o ?nico par?metro MLSB expresso entre os isolados de S. agalactiae humanos, com um percentual de 6%. Quanto ? presen?a de genes de resist?ncia a tetraciclina entre as subpopula??es de EGB, detectou-se percentuais de 13,8% (5/36) e 14% (7/50) para tet(M), e 30,5% (11/36) e 10% (5/50) para tet(O), respectivamente, nos isolados bovinos e humanos avaliados. Estes genes est?o implicados na resist?ncia ? tetraciclina por um mecanismo prote??o ribossomal, pela altera??o estrutural mediada por a??o enzim?tica. Palavras-chave: Streptococcus agalactiae, caracteriza??o fenot?pica, gene tet

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