Celecoxib é um antiinflamatório não esteroidal (AINE), inibidor seletivo da ciclooxigenase-2 (COX-2) usado em pesquisas recentes como agente anticarcinogênico. Os seus efeitos anti-neoplásicos dependem por um lado da sua capacidade de inibir a COX-2, mas por outro lado também age por mecanismos que independem da COX-2, em resumo o seu mecanismo de ação ainda não é completamente conhecido. O objetivo desta tese foi estudar os efeitos do celecoxib sobre as taxas de apoptose e os índices de proliferação celular de quatro linhagens celulares, Hn-6, Hn-19, Hn-30, Hn-31, de CECP e uma linhagem de queratinócitos mutada (HaCat), além de verificar se há correlação entre a expressão das proteínas COX-2, pAkt, ß-catenina, CD1 e NFKB e a inibição da proliferação celular. As células foram divididas em dois grupos: a, grupo controle; b, células cultivadas tratadas com celecoxib. A análise da expressão das proteínas pAkt, NFKB, ß-catenina, COX-2 e CD1 foi feita através da técnica de Western-blot. A indução de apoptose foi estudada com o Kit de Anexina. A proliferação celular foi monitorada através de curva de crescimento, com contagem celular na câmara de Neubauer e com o teste de viabilidade celular (Kit Cell Titer96) e a localização intracelular das proteínas foi avaliada por imunofluorescência. Os resultados mostraram significante aumento no índice celular de apoptose e diminuição da proliferação celular. Após o tratamento com celecoxib, a imunofluorescência mostrou que a proteína CD1 teve diminuição da expressão nuclear, a ß-catenina exibiu discreto aumento citoplasmático, o pAkt também passou a ser expresso no citoplasma da Hn6, enquanto as outras proteínas estudadas mantiveram o mesmo padrão de localização na célula. O western blot complementou os resultados da imunofluorescência indicando uma diminuição nos níveis de CD1. / Celecoxib, a cyclooxygenase-2 (COX-2) selective nonsteroidal anti-inflammatory drug, is a new anticarcinogenic agent. Its antitumor effects depend on the one hand on its COX-2-inhibiting potency, but on the other hand on COX-2-independent mechanisms, which until now have not been fully understood. The aim of this research was to study the effects of celecoxib in growth inhibition and apoptosis induction in four Head and Neck Squamous Cell Carcinoma (HNSCC) cell lines, HN6, HN19, HN30, HN31 and HaCat an immortalized keratinocyte cell line, and verify if there is a correlation between the growth inhibition and the expression of COX-2, pAkt, ß-catenin, CD1 and NFKB. The Western Blot was used to analyze the COX-2, pAkt, ß-catenin, CD1 and NFKB protein expression level. Apoptosis induction was studied with the Annexin V kit. The cell lines proliferation will be measured through a growth curve with the Neubauer chamber and MTS method (KitCell Titer96), the proteins intracellular site was assed by immunofluorescence technic. The same cell lines without any treatment were used as controls. Results showed a significant increase in apoptotic cells index, and growth inhibition in cell lines treated with celecoxib. The proteins localization was determined through immunofluorescence. In control group the CD1 was located mostly in nucleus, after treatment CD1 nuclear localization was reduced, it could also be noticed an increase in cytoplasmic expression of ß-catenin in all cell lines while pAkt cytoplasmic increase was present exclusevely in Hn6, the other proteins maintained their cellular localization,. The Western Blot results showed considerable reduction in CD1 levels with exception of Hn19 cell line.

Celecoxib é um antiinflamatório não esteroidal (AINE), inibidor seletivo da ciclooxigenase-2 (COX-2) usado em pesquisas recentes como agente anticarcinogênico. Os seus efeitos anti-neoplásicos dependem por um lado da sua capacidade de inibir a COX-2, mas por outro lado também age por mecanismos que independem da COX-2, em resumo o seu mecanismo de ação ainda não é completamente conhecido. O objetivo desta tese foi estudar os efeitos do celecoxib sobre as taxas de apoptose e os índices de proliferação celular de quatro linhagens celulares, Hn-6, Hn-19, Hn-30, Hn-31, de CECP e uma linhagem de queratinócitos mutada (HaCat), além de verificar se há correlação entre a expressão das proteínas COX-2, pAkt, ß-catenina, CD1 e NFKB e a inibição da proliferação celular. As células foram divididas em dois grupos: a, grupo controle; b, células cultivadas tratadas com celecoxib. A análise da expressão das proteínas pAkt, NFKB, ß-catenina, COX-2 e CD1 foi feita através da técnica de Western-blot. A indução de apoptose foi estudada com o Kit de Anexina. A proliferação celular foi monitorada através de curva de crescimento, com contagem celular na câmara de Neubauer e com o teste de viabilidade celular (Kit Cell Titer96) e a localização intracelular das proteínas foi avaliada por imunofluorescência. Os resultados mostraram significante aumento no índice celular de apoptose e diminuição da proliferação celular. Após o tratamento com celecoxib, a imunofluorescência mostrou que a proteína CD1 teve diminuição da expressão nuclear, a ß-catenina exibiu discreto aumento citoplasmático, o pAkt também passou a ser expresso no citoplasma da Hn6, enquanto as outras proteínas estudadas mantiveram o mesmo padrão de localização na célula. O western blot complementou os resultados da imunofluorescência indicando uma diminuição nos níveis de CD1. / Celecoxib, a cyclooxygenase-2 (COX-2) selective nonsteroidal anti-inflammatory drug, is a new anticarcinogenic agent. Its antitumor effects depend on the one hand on its COX-2-inhibiting potency, but on the other hand on COX-2-independent mechanisms, which until now have not been fully understood. The aim of this research was to study the effects of celecoxib in growth inhibition and apoptosis induction in four Head and Neck Squamous Cell Carcinoma (HNSCC) cell lines, HN6, HN19, HN30, HN31 and HaCat an immortalized keratinocyte cell line, and verify if there is a correlation between the growth inhibition and the expression of COX-2, pAkt, ß-catenin, CD1 and NFKB. The Western Blot was used to analyze the COX-2, pAkt, ß-catenin, CD1 and NFKB protein expression level. Apoptosis induction was studied with the Annexin V kit. The cell lines proliferation will be measured through a growth curve with the Neubauer chamber and MTS method (KitCell Titer96), the proteins intracellular site was assed by immunofluorescence technic. The same cell lines without any treatment were used as controls. Results showed a significant increase in apoptotic cells index, and growth inhibition in cell lines treated with celecoxib. The proteins localization was determined through immunofluorescence. In control group the CD1 was located mostly in nucleus, after treatment CD1 nuclear localization was reduced, it could also be noticed an increase in cytoplasmic expression of ß-catenin in all cell lines while pAkt cytoplasmic increase was present exclusevely in Hn6, the other proteins maintained their cellular localization,. The Western Blot results showed considerable reduction in CD1 levels with exception of Hn19 cell line.