Made available in DSpace on 2015-12-06T23:48:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Aneuploidia e instabilidade cromossômica são características da maioria dos tumores sólidos. Estas alterações podem resultar da segregação inapropriada dos cromossomos durante a divisões celulares, que pode ocorrer por diversos mecanismos incluindo defeitos teloméricos, amplificação centrossômica, centrômeros não funcionais e/ou defeitos no controle dos checkpoints do processo de divisão. Neste trabalho, foi utilizado um modelo in vitro de melanoma murino, cujo fator transformante foi o bloqueio de adesão celular ao substrato, para caracterizar alterações teloméricas e centroméricas que acompanham a transformação maligna dos melanócitos. Para estudar o tempo de ocorrência do encurtamento telomérico durante a transformação maligna, o perfil do comprimento telomérico foi analisado por Q-FISH e observamos que o tamanho dos telômeros diminui gradativamente ao longo da transformação maligna. Paralelamente, foi também encontrado um aumento no número de cromossomos sem telômeros e na complexidade do cariótipo, o que incluiu o aparecimento de fusões Robertsonianas em 100% das metáfases analisadas nas células metastáticas. Estes achados estão em concordância com estudos que mostram que anormalidades no comprimento dos telômeros parecem ser uma das alterações genéticas mais precocemente adquiridas no processo de transformação maligna e que anormalidades teloméricas resultam em agregação telomérica, ciclos de quebra, ponte e fusão e instabilidade cromossômica. Outra característica importante do modelo é a grande instabilidade centromérica manifestada pela presença abundante de fragmentos centroméricos e fusões de centrômeros. Juntos, estes resultados ilustram, para este modelo de melanoma, instabilidade cromossômica com uma assinatura estrutural de quebras centroméricas e perda telomérica. / Aneuploidy and chromosomal instability are hallmarks of most solid tumors. These alterations may result from inaccurate chromosomal segregation during mitosis, which can occur through several mechanisms including defective telomere metabolism, centrosome amplification, dysfunctional centromeres and/or defective spindle checkpoint control. In this work, we used an in vitro murine melanoma model that utilizes the cell adhesion blockade as a transforming factor to characterize telomeric and centromeric alterations that accompany melanocyte malignant transformation. To study the timing of the occurrence of telomere shortening during the transformation model, we analyzed the profile of telomere length by Q-FISH and found that telomere length significantly decreased as additional rounds of cell adhesion blockages were performed. Together with it, increase in telomere free ends and karyotype complexity were also found, which includes Robertsonian fusions in 100% of metaphases of the metastatic melanoma cells. These findings are in agreement with the idea that telomere length abnormalities appear to be one of the earliest genetic alterations acquired in the multistep process of malignant transformation and that telomere abnormalities result in telomere aggregation, breakagebridge-fusion cycles and chromosomal instability. Another remarkable feature of this model is the abundance of centromeric instability manifested as centromere fragments and centromeric fusions. Taken together, our results illustrate for this melanoma model chromosomal instability with a structural signature of centromere breakage and telomeric loss. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Many genetic diseases or abnormalities that may occur in human chromosomes can be detected by analyzing the shape and morphology of chromosomes. The elaboration of the karyotype (organization of the 24 chromosomes of a human cell according to its size through a drawing or a photograph obtained from a microscope) is usually used to achieve this goal. The first steps for chromosomal analysis is the definition and extraction of morphology and banding pattern (gray level variations along its length) features of chromosomes. Among the morphological characteristics, in addition to its size, there is the centromere location (a region that divides the chromosome in long arm and short arm) and the classification according to the same. The advances made in cell culture techniques, banding, collecting and analyzing of materials for the implementation of the karyotype allowed great progress in the diagnosis of chromosomal abnormalities. However, this process is still used manually, because despite the growing demand of this type of examination, it is still small the supply of automated systems that help the geneticists work in the katyotype generation. So, the automation of this process and the possibility of obtaining results in a short time speeding therapeutic conduct and reassuring that families are invaluable. Centromere detection is of great importance both in the manual process as the automatic process, for faster diagnosis. In the manual process, the possibility of performing a grouping of the chromosomes in relation to the size and centromere position would help the geneticist work at the identification and also in segmentation, because by defining the chromosome classification in relation to its centromere position, is possible to define their polarity (putting the chromosome "standing"). In the automatic process, it s an excellent filter in the search for a higher correctness rate for chromosomes identification systems, because each type of chromosome always belongs to a particular classification according to the centromere (metacentric, submetacentric or acrocentric). In this dissertation, therefore, sought to develop a series of methods for centromere detection, especially the definition of two algorithms that use the methods developed in this work. As a result it is emphasized that in applying this approach on the image base used from BioImLab (Biomedical Imaging Laboratory, University of Padova, Italy), it achieves about 94.37% of correctness, a higher rate than any work related literature. / Muitas doenças genéticas ou anomalias que podem ocorrer nos cromossomos humanos podem ser descobertas através da análise da forma e das características morfológicas dos cromossomos. A elaboração do cariótipo (organização dos 24 cromossomos de uma célula humana de acordo com o seu tamanho através de um desenho ou de uma fotografia obtida de um microscópio) é geralmente utilizada para alcançar este objetivo. Os primeiros passos para as análises cromossômicas são a definição e extração das características morfológicas e do padrão de bandas dos cromossomos (variações dos níveis de cinza ao longo de seu comprimento). Dentre as características morfológicas, além do seu tamanho, destaca-se a localização do centrômero (local que divide o cromossomo em braço longo e braço curto) e a classificação de acordo com o mesmo. Os avanços ocorridos nas técnicas de cultura celular, bandeamento, coleta e análise dos materiais para a execução do cariótipo possibilitaram grandes progressos no diagnóstico das alterações cromossômicas. Porém, este processo ainda é bastante utilizado de forma manual, pois, apesar da demanda crescente deste tipo de exame, ainda é pequena a oferta de sistemas automáticos que auxiliem o trabalho dos geneticistas na geração do cariótipo. Logo, a automatização deste processo e a possibilidade de se obter resultado em curto espaço de tempo, agilizando condutas terapêuticas ou tranqüilizando familiares tem um valor inestimável. A detecção do centrômero é de grande importância tanto no aspecto do processo manual como no processo automático, pois agilizaria o diagnóstico. No processo manual, a possibilidade de se realizar um agrupamento dos cromossomos em relação ao tamanho e a posição do centrômero auxiliaria o trabalho de um geneticista na parte de identificação e também na segmentação, pois ao se definir a classificação de um cromossomo em relação a sua posição do centrômero, é possível definir a sua polaridade (colocar o cromossomo em pé ). No processo automático, é um excelente filtro na busca por uma maior taxa de acertos nos sistemas de identificação dos cromossomos, pois cada tipo de cromossomo pertencerá sempre a uma determinada classificação de acordo com o centrômero (metacêntrico, submetacêntrico ou acrocêntrico). Nesta dissertação, portanto, buscou-se desenvolver uma série de métodos para detecção do centrômero, destacando-se a definição de dois algoritmos que utilizam os métodos desenvolvidos no decorrer deste trabalho. Como resultado obtido destaca-se que ao aplicar esta abordagem na base de imagens utilizada do BioImLab (Laboratório de Imagem Biomédica, Universidade de Padova, Itália), alcança-se cerca de 94.37% de acertos, uma taxa maior que qualquer trabalho relacionado na literatura.