München, Techn. Univ., Diss., 2002. / Computerdatei im Fernzugriff.

München, Techn. Univ., Diss., 2002. / Computerdatei im Fernzugriff.

München, Techn. Universiẗat, Diss., 2002.

Braunschweig, Techn. University, Diss., 2003.

No description available.

Plaques formed by DC1 on B. cepacia LMG 18821 and B. cenocepacia PC184 are surrounded by large and expanding halos when production of the exopolysaccharide (EPS) cepacian is induced. This plaque morphology indicates that DC1 putatively carries an EPS depolymerase enzyme. Plaque halos were absent when DC1 infected a PC184 cepacian knockout mutant and a non-mucoid LMG 18821 mutant, constructed using plasposon mutagenesis. The virulence of these mutants compared to wildtype PC184 and LMG 18821 was determined using the Galleria mellonella infection model. No major changes to virulence were observed for the LMG 18821 mutant. But, the PC184 cepacian knockout mutant was attenuated for virulence suggesting that this carbohydrate pathway may play a role in pathogenesis. The gene(s) involved in halo formation remain unknown although attempts were made to determine the gene(s) involved by cloning and expressing DC1 fragments in E. coli and assaying for EPS degradation. / Microbiology and Biotechnology

Univ., Diss.--Stuttgart, 1998.

The pyrimidine biosynthetic pathway is essential and similar in all bacteria. The pathway from Pseudomonas is regulated by nucleotides which bind to the upstream region of the pyrBC’ gene complex. Work in our lab mapped the genes and showed that the pyrB and pyrC’ were part of an overlap complex. The Pseudomonas aeruginosa has one circular chromosome. A former Pseudomonas now called Burkholderia cepacia is similar to P. aeruginosa except that it contains three circular chromosomes (CI, CII, CIII) and one large plasmid. The primary chromosome named CI contains the pyrBC’. To our knowledge there has been no report of the activity of ATCase in Pseudomonas and contrasted with that of Burkholderia. Here, we compare the activity of ATCase in P. aeruginosa and B .cepacia. Cells of both organisms were grown in Pseudomonas minimal medium and in Enriched medium. The ATCase was extracted and partially purified from each sample. It is hypothesized that the B. cepacia has greater activity for ATCase than do the Pseudomonas.

La fibrose kystique (FK) est une maladie génétique causée par la mutation du gène codant pour la protéine CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator). Celle-ci présente un défaut sur le canal à ions chlorures affectant ainsi entre autres la viscosité des muqueuses au niveau du système respiratoire. Cet environnement est alors propice aux colonisations bactériennes opportunistes sous la forme de biofilm. Burkholderia cepacia, bacille Gram-négatif mobile, multi-résistant aux antibiotiques et hautement transmissible, s'avère d'une extrême virulence pour les patients atteints de FK. Cette bactérie pathogène désigne en fait un ensemble de neuf souches rassemblées sous le nom de « complexe B. cepacia » (CBC). Au moins huit de ces neuf souches produisent un exopolysaccharide nommé Cepacian. Celui-ci est constitué d'un motif de répétition heptasaccharidique composé notamment de l'enchaînement α-D-Rhap-( 1→4 )-α-D-GlcpA. Le D-rhamnose (ou 6-deoxy-D-mannose) est un composant de glycoconjugués des parois de bactéries pathogènes mais ce sucre rare est absent chez l'homme. Ce dernier présente donc un fort potentiel antigénique dans le cadre de la préparation d'un vaccin entièrement synthétique et spécifique contre B. cepacia. L'élaboration de celui-ci consiste en un activateur universel immunogénique peptidique (Tc-épitope), PADRE ou P2TT préalablement synthétisés, fonctionnalisé par une unité antigénique spécifique. Dans ce but, deux tri-O·saccharides constituants du LPS de B. cepacia et composés majoritairement de D-rhamnose, ainsi que des fragments du motif de répétition de l'exopolysaccharide (EPS) du CBC ont été synthétisés. Des méthodes de synthèses orthogonales ont été optimisées avec de très hauts rendements sur les cinq différents sucres constituant l'EPS ou les LPS du CBC, et plus spécifiquement sur le D-rhamnose. Une série de glycosylation suivie d'une conjugaison finale via une addition radicalaire ou une métathèse croisée a conduit à deux méthodes de conjugaison pour la synthèse de vaccins potentiels, ceci constituant le but final du projet. La synthèse linéaire en 21 étapes a conduit au trisaccharide, α-D-Rhap-(1→3)-α-D-Rhap-(1→2)-α-D-Rhap, avec 36% de rendement global (ou 19% en 18 étapes optimisables). Un rendement de 28% a été obtenu pour une synthèse séquentielle en 17 étapes pour le trisaccharide majeur du LPS, α-D-Rhap-(1→3)-α-D-Rhap-(1→4)-α-D-Galp. La conjugaison de ce dernier sur T-cell épitope constituera l'ultime étape afin d'obtenir un vaccin potentiel entièrement synthétique. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Vaccin synthétique, T-cell épitope, Burkholderia cepacia, Fibrose kystique, Oligosaccharide, D-rhamnose, Complexe B. cepacia.

No / Burkholderia cepacia is known to invade and survive within respiratory epithelial cells. Previous studies have employed transformed cell lines and it is not known whether the bacterium is capable of manifesting the same phenomena in primary cell culture. Two strains of B. cepacia of environmental (NCTC 10661) and clinical origin (C1359) were examined for their ability to invade and survive (over a 24 h period) within type II pneumocytes in primary culture using a gentamicin¿ceftazidime antibiotic protection assay. Both strains of B. cepacia were capable of invasion of type II pneumocytes in primary culture. Strain C1359 was capable of multiplying intracellularly as indicated by a seven-fold increase in the numbers of bacteria from 4¿24 h, whereas strain 10661, although unable to replicate intracellularly, was found to survive in the pneumocytes for at least 24 h. Future studies on the invasiveness of B. cepacia can employ A549 cells as a valid surrogate for primary cell culture assays which are time-consuming, labour-intensive and expensive to perform.