Yeasts form significant and important part of pedosphere microbiota. They keep nature balance, participate in cycles of elements and nutrients, are antagonists of various pathogens and as important decomposers, they produce the whole spectrum of different extracellular enzymes. The aim of this study was to determine the ability of yeasts, isolated from the soil adjacent to the fruit trees in Southwest Slovakia as well as from the contaminated soil (Pernek area, Slovakia), to produce extracellular enzymes. In total, 68 strains belonging to 45 different species were tested for the production of starch-like polysaccharide and for extracellular enzyme activities: polygalacturonases, lipases, proteases, cellulases, chitinases, -glucosidases and -amylases. This work was also focused on optimization of method for the yeast chitinase assay. Four methods were proved; two of them utilized liquid medium with chitin (colloidal and insoluble) as the sole carbon source and two others used solid plate methods with agar medium containing chitin. Based on results, cultivation in colloidal liquid chitin medium, terminated by the chitinase assay according to Ehrlich, was evaluated as the best method for detection of predominant exochitinase activity of yeasts. More than 75 % of tested yeasts exhibited some extracellular activity. Generally, the yeasts isolated from the soil under the fruit trees showed broader spectrum of enzyme activities than those originated from contaminated soils. Lipases, proteases and -glucosidases were found to be the most common activities. Only small proportion of yeasts was able to produce chitinases and/or cellulases. Aureobasidium pullulans, CCY 27-1-134, from the soil adjacent to the apple tree, showed the widest range of activities from all tested strains and it possessed all examined activities. On the other side, it did not produce starch-like polysaccharide. Tausonia (Trichosporon) pullulans and Cystofilobasidium macerans were the second most active producers of extracellular enzymes with variations in production of cellulases and -amylases. Representatives of the former polyphyletic genus Cryptococcus exhibited lipases, -glucosidases, -amylases and they were producers of the starch, but the interspecies differences were also noted. All strains of the genus Galactomyces were positive for polygalacturonases and the genera Candida and Cyberlindnera were positive for -glucosidases. All strains of Galactomyces candidum were tested for the production of polygalacturonases during 168 hours long cultivation on pectin media. Strain CCY 16-3-4 showed very stable growth on this medium and simultaneously exhibited significant amount of extracellular polygalactouronases. It has a potential to be very suitable producer of these enzymes but particular characterization of properties is necessary for its future use. Results of the screening showed that the production of extracellular enzymes is mostly strain-dependent and not species-dependent.

Nous avons réalisé la synthèse de précurseurs d'analogues sulfures de facteurs NOD, messagers chimiques intervenant lors du phénomène de nodulation rencontré dans l'association symbiotique entre certaines plantes légumineuses et des bactéries de la famille rhizobium. Cette association permet à la plante de fixer l'azote atmosphérique préalablement métabolisé par les bactéries. Ces analogues devraient permettre de mieux comprendre les différents processus intervenant au cours de la symbiose plante/ bactérie ainsi qu'étudier l'hydrolyse des facteurs NOD par des enzymes, les chitinases. Nous avons choisi de préparer des analogues fonctionnalisés pour lersquels seule la liaison O-glycosidique entre deux unités serait remplacée par une liaison thioglycosidique. Grâce à l'utilisation de donneurs de glycosyle sous la forme de trichloroacétimidate, nous avons réalisé la synthèse d'un thiotrisaccharide ainsi que celle d'un thiotétrasaccharide, précurseur d'analogues de facteurs NOD, dont les unités réductrices et non réductrices sont potentiellement différenciées en vue de leur fonctionnalisation. Par ailleurs, le transfert d'une unité de glucosamine sur un thiodisaccharide, à l'aide de la bétâ-1,4-galactosyltranférase, a conduit à la préparation d'un thiotrisaccharide. Cette dernière étape a permis d'envisager la synthèse d'un thiotétrasaccharide par voie chimio-enzymatique. Ces précurseurs devraient conduire à de nouveaux analogues sulfures de facteurs NOD sur lesquels des tests biologiques pourraient être réalisés afin d'évaluer l'activité de nodulation ainsi que la résistance aux chitinases

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Chez les insectes, les chitinases sont des enzymes principalement impliquées dans la dégradation de la chitine, lors des processus de croissance. Les chitinases représentent donc des cibles d'intérêt dans le développement de moyens de lutte alternatifs aux pesticides utilisés contre les ravageurs des cultures. Au cours de ces travaux de thèse, nous avons été amené à évaluer la pertinence de la dérégulation des activités chitinases chez les pucerons. L'impact des chitinases sur le développement du puceron M. persicae a été évalué par des tests de prise alimentaire réalisés in planta, sur des plantes de pommes de terre exprimant une chitinase d'insecte (Phaedon cochleariae, Coléoptère) et in vitro, en incorporant une chitinase bactérienne (Serratia marcescens) dans un milieu artificiel. Des effets probiotiques ont été mis en évidence dans les deux cas, remettant en cause l'utilisation des chitinases en tant que biopesticide pour lutter contre les pucerons. Compte tenu de ces effets inattendus, nous avons étudié les effets d'une stratégie antagoniste, basée sur l'utilisation d'inhibiteurs de chitinases. Quatre inhibiteurs de chitinases, d'origine et de nature variées, ont ainsi été testés via un milieu artificiel. Nos résultats rapportent pour la première fois une activité inhibitrice de ces molécules sur des pucerons. Nous avons donc orienté nos recherches dans cette voie, afin d'identifier de nouveaux inhibiteurs de chitinases. Deux approches ont été initiées avec d'une part la purification des chitinases du puceron M. persicae et d'autre part par l'évaluation des effets d'oligosaccharides mimétiques de la chitine et des inhibiteurs de chitinases. Les résultats obtenus nous laissent à penser que les inhibiteurs de chitinases constituent une voie prometteuse dans l'élaboration de nouveaux bioinsecticides.