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Rentabilidade da produÃÃo de acerola orgÃnica sob condiÃÃo determinÃstica e de risco

Elica de Aguiar Martins 05 March 2013 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Organic agriculture has largely been increasing in recent decades, and it became present in the producing agenda of various countries, presenting high growth rates over the last years. The organic acerola is grown in Coastal Irrigation District Board of Piauà â DITALPI where there are three cooperatives working in order to increase the production and generate employment and income. The name of the cooperative that we analyzed in this study is Cooperativa Biofruta, formed by 26 producers, which only 23 of them were analyzed. The quesion in analysis consists in determine if the production of organic acerola is economically feasible and low-risk. So, specifically, we seek to characterize the producers of the Cooperativa BIOFRUTA, calculate and analyze the economic feasibility of production of acerola producers of this cooperaative, under deterministic condition, and, estimate and analyse, under risk conditions, some economic indicators to the producers of the Cooperativa BIOFRUTA. To achieve these objectives, were used primary data, referred to the production growth in 2011, as well as the secondary data. The results showed that the majority of the producers were between 30 and 50 years old, with a level of education considered excellent, large experience in the area of organic products and irrigation, used the micro aspersion system and were satisfied with the cooperative. The deterministic assessment presented low values for gross margin, net marginandaverage net revenue, concluding that it happens becausethere areproducersinvery different situations, withsignificant dispersion ofproduction conditions. That is why it was decided to divide the producers in three scenarios, where in the first one were put all the producers, the second one only those who had negative net margin and the third scenario with the ones who had positive net margin. Deterministically analyzing the scenarios it was concluded that the producers of the 1st scenario had no injury, but did not have a good return, as the producers of the 2nd had injury, while the 3rd scenario, presented positive profits and a more comfortable situation compared to the other scenarios. In the risk assessment, it was found that the producers of the 1st scenario were subject to high risk in production, that the producers in the 2nd scenario have 100% risk to continue producing and, as the market price is given, these producers need to improve their productivity to get out of this situation, since they can not influence the price. The best results were given by the 3rd scenario producers, that proved be quite profitable and low risk. / A agricultura orgÃnica desenvolveu-se muito nas Ãltimas dÃcadas, e tornou-se presente na pauta de produÃÃo de vÃrios paÃses, exibindo ao longo dos Ãltimos anos, elevadas taxas de crescimento. A acerola orgÃnica à cultivada no Distrito de IrrigaÃÃo Tabuleiro LitorÃneo do PiauÃ- DITALPI, onde existem trÃs cooperativas com o intuito de aumentarem a produÃÃo e gerarem emprego e renda. A instituiÃÃo analisadaà a Cooperativa Biofruta, formada por 26 produtores, dos quais foram analisados somente 23. A questÃo em anÃlise consiste em determinarse a produÃÃo de acerola orgÃnica à economicamente viÃvel e de baixo risco.Assim, especificamente, procura-se caracterizar os produtores da Cooperativa BIOFRUTA; calcular e analisar a viabilidade econÃmica da produÃÃo de acerola dos produtores da Cooperativa, sob condiÃÃo determinÃstica; e estimar e analisar, sob condiÃÃes de risco, alguns indicadores econÃmicos para os produtores da organizaÃÃo sob exame. Para alcanÃar estes objetivos, foram utilizados dados primÃrios, referentes à produÃÃo desenvolvida em 2011, assim comoindicadores secundÃrios. Os resultados mostraram que a maioria dos produtores tem idade entre 30 e 50 anos, com um nÃvel de escolaridade considerado Ãtimo, grande experiÃncia na Ãrea de orgÃnicos e irrigaÃÃo, usavam o sistema de microaspersÃo e estavam satisfeitos com a Cooperativa. A avaliaÃÃo determinÃstica demonstrou valores baixos de MargemBruta, MargemLÃquida e receita LÃquida mÃdia, concluindo-se que se deve ao fato de existirem produtores em situaÃÃes muito diferentes, com grande dispersÃo de condiÃÃes de produÃÃo. Por isso, optou-se por dividir os produtores em trÃs cenÃrios, onde em um ficaram todos os produtores, no segundo, sà aqueles que possuÃam MargemLÃquida negativa e o terceiro com margensLÃquidas positivas. Analisando-se deterministicamente, concluiu-se que os produtores do 1 cenÃrio nÃo tiveram prejuÃzo, mas tambÃm nÃo possuÃam uma boa rentabilidade, jà os produtores do 2 cenÃrio tiveram prejuÃzo, enquanto os do 3 cenÃrio expressaram receita LÃquida positiva e uma situaÃÃo mais confortÃvel em relaÃÃo aos outros cenÃrios. Na avaliaÃÃo de risco, verificou-se que os produtores do 1 cenÃrio estavam sujeitosa elevados riscos na produÃÃo, que os produtores do 2 cenÃrio correm risco de 100% de continuar produzindo e, como o preÃo de mercado à dado, esses produtores precisam melhorar sua produtividade para saÃrem dessa situaÃÃo, jà que nÃo podem influenciar no preÃo. Os melhores resultados foram dos produtores do 3 cenÃrio, que se mostraram bastante rentÃveis e com baixo risco.
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Effect of flavonoids rutin and quercetin in peripheral neuropathy induced sensitive oxaliplatin / Efeito dos flavonÃides rutina e quercetina na neuropatia sensitiva perifÃrica induzida por oxaliplatina

Maria Isabel Carneiro de Azevedo 26 January 2012 (has links)
Oxaliplatin is a third-generation platinum compound and the first-line treatment for colorectal cancer. The main limiting factor in oxaliplatin treatment is painful neuropathy that is difficult to treat. This side effect has been studied for several years, but its full mechanism is still inconclusive, and effective treatment does not exist. Data suggest that oxaliplatinâs initial neurotoxic effect is peripheral and oxidative stress-dependent. A spinal target is also suggested in its mechanism of action. The flavonoids rutin and quercetin have been described as cell-protecting agents because of their antioxidant, antinociceptive, and anti-inflammatory actions. We proposed a preventive effect of these agents on oxaliplatin-induced painful peripheral neuropathy based on their antioxidant properties. Methods: Oxaliplatin (1 mg/kg, i.v.) was injected in male Swiss mice, twice per week for 4 weeks. The development of sensory alterations, such as thermal allodynia and mechanical hypernociception, was evaluated using the tail immersion test in cold water (10ÂC) and the von Frey test. Rutin and quercetin (25-100 mg/kg, i.p.) were injected 30 min before each oxaliplatin injection. The animalsâ spinal cords were removed for histopathological and immunohistochemical evaluation and malondialdehyde and non-protein sulfhydryl group assays. Results: Oxaliplatin significantly reduced thermal and mechanical nociceptive thresholds, effects prevented by quercetin and rutin at all doses. Fos immunostaining in the dorsal horn of the spinal cord confirmed these results. The oxidative stress assays mainly showed that oxaliplatin induced peroxidation in the spinal cord and that rutin and quercetin decreased this effect. The flavonoids also decreased inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosine immunostaining in the dorsal horn of the spinal cord. These results suggest that nitric oxide and peroxynitrite are also involved in the neurotoxic effect of oxaliplatin and that rutin and quercetin can inhibit their effect in the spinal cord. We also observed the preservation of dorsal horn structure using histopathological analyses. Conclusions: Oxaliplatin induced painful peripheral neuropathy in mice, an effect that was prevented by rutin and quercetin. The mechanism of action of oxaliplatin appears to be at least partially oxidative stress-induced damage in dorsal horn neurons, with the involvement of lipid peroxidation and protein nitrosylation. / Oxaliplatina (OXL) à um agente antineoplÃsico de terceira geraÃÃo, com potente atividade citotÃxica em vÃrios tipos de cÃncer, mas apresenta um efeito neurotÃxico importante que causa uma severa e dolorosa neuropatia perifÃrica. Dados da literatura tambÃm sugerem que o efeito neurotÃxico inicial da OXL seria dependente do estresse oxidativo, nos tecidos perifÃricos. Os flavonÃides Rutina (RT) e Quercetina (QC) foram descritos como agentes protetores celulares por sua aÃÃo antioxidante, assim como por seus efeitos antiinflamatÃrios e antinociceptivos. O objetivo deste estudo à investigar o efeito do tratamento com RT e QC na neuropatia sensitiva perifÃrica (NSP) induzida pela OXL em camundongos. O estudo foi aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa Animal da Universidade Federal do Cearà (n 36/2011). A neuropatia sensitiva foi induzida em camundongos Swiss machos (25-30 g), atravÃs de duas injeÃÃes por semana de OXL (1 mg/kg, e.v.) durante 4,5 semanas, no total de nove injeÃÃes, juntamente com a avaliaÃÃo de testes nociceptivos semanais. AlodÃnia tÃrmica foi avaliada pelo teste de imersÃo da cauda em Ãgua fria (10 ÂC), e hipernocicepÃÃo mecÃnica plantar pelo teste eletrÃnico de Von Frey. Os animais tratados com OXL foram divididos nos grupos: grupo controle (prÃ-tratado com salina), e trÃs grupos prÃ-tratados com RT ou QC (25, 50 e 100 mg/kg, i.p), 30 min antes de cada injeÃÃo de OXL. No final dos experimentos, as medulas espinhais foram removidas e processadas para avaliaÃÃo histopatolÃgica e imunohistoquÃmica. Em outros experimentos a medula espinha tambÃm foi retirada para testes bioquÃmicos (MDA e NP-SH). Nossos resultados mostraram que a OXL reduziu significativamente (p < 0,05) tanto o limiar nociceptivo tÃrmico como mecÃnico. O tratamento com QC, preveniu esses efeitos (p< 0,05) em todas as doses (efeito mÃximo na dose de 50 mg/kg), aumentando o limiar em 68,6 % para alodÃnia tÃrmica e em 47,6 % para hipernocicepÃÃo mecÃnica. O tratamento com RT tambÃm preveniu esses efeitos (p < 0,05) em todas as doses (efeito mÃximo na dose de 50 mg/kg) aumentando o limiar em 448 % para alodÃnia tÃrmica e em 25,5 % para hipernocicepÃÃo mecÃnica. A imunohistoquÃmica mostrou que a RT e QC diminuÃram a imunoexpressÃo para c-fos, NOSi (oxido nÃtrico sintase induzida) e nitrotirosina, no corno posterior da medula espinhal, quando comparada ao grupo controle. OXL aumentou significativamente os nÃveis de MDA, mas nÃo de NP-SH com inibiÃÃo pelo tratamento com RT e QC. Nossos resultados mostraram que RT e QC tem efeito antinociceptivo em ambos os testes, tÃrmico e mecÃnico, juntamente com a inibiÃÃo da imunoexpressÃo para c-fos pela QC na neuropatia sensitiva perifÃrica da OXL. AlÃm disso, a QC foi capaz de inibir a imunoexpressÃo para nitrotirosina e para NOSi no corno posterior da medula espinhal, indicando um possÃvel mecanismo envolvendo NO e estresse oxidativo. Os dados sugerem que RT e QC podem ter um efeito neuroprotetor, vindo a ser uma alternativa promissora na prevenÃÃo a neuropatia sensitiva perifÃrica causada pela OXL na quimioterapia do CÃncer.
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Effect of the quercetin induced pancreatitis cerulein in mice / Efeito da quercetina na pancreatite aguda induzida por ceruleÃna em camundongos

Karine Maria Martins Bezerra Carvalho 23 June 2010 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Quercetin is a plant-derived flavonoid widely known by its anti-oxidant and antiinflammatory properties. Acute pancreatitis (AP) is a disease with a high morbidity and mortality and a complex pathophysiology, with variable involvement of regional tissues or organ systems. Despite of extensive investigations into this disease entity, to date there exists no specific medical treatment for AP. In this study, quercetin was investigated for its effect on the severity of cerulein-induced acute pancreatitis in mice. Male Swiss mice were treated with quercetin (25, 50 and 100 mg/kg, p.o.), vehicle (2% DMSO in distilled water, 10 ml/kg) or thalidomide (200 mg/kg, p.o.), 1 h before administration of cerulein (5 x 50 &#956;g/kg, 1 h apart). A group treated with saline (0.9% NaCl) was also included. The effects of treatments on pancreatic edema, serum amylase and lipase enzymes and cytokines (TNF-, IL-6, IL-1 and IL-10), myeloperoxidase activity (pancreas and lung), pancreatic thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), non-protein-sulfidryl groups (NP-SH), histopathology of pancreas and lung and immunostaining for TNF- expression in pancreas were analysed. Cerulein significantly increased pancreatic edema and serum levels of amylase, lipase, TNF-, IL-6 and IL-1 and decreased IL-10 levels. Histopathologic evaluation revealed the presence of edema, neutrophil infiltration, hemorrhage, acinar vacuolization and necrosis of the pancreas and lung hemorrhage. Besides, we observed a marked increase in the expression of TNF- in immunohistochemical analysis. The pre-treatment with quercetin (25, 50 and 100 mg/kg, p.o.) or thalidomide (200 mg/kg, p.o.) significantly attenuated the severity of acute pancreatitis induced by cerulein, as evidenced by significant reductions in pancreatic serum enzymes lipase and amylase and the pancreatic inflammation, evidenced by suppression of neutrophil infiltration, TNF-a, IL-1b and IL-6 cytokine production and the TNF-a expression. Further, it enhanced the IL-10 cytokine production and demonstrated an antioxidant action through a decrease in the levels of TBARS and restoration of pancreatic NP-SH. Quercetin could also attenuate the systemic repercussion in the lung evidenced by suppression of neutrophil infiltration (MPO) and decrease of lung hemorrhage (histology). In conclusion, this study provides the first evidence to show that quercetin attenuates the development of cerulein-induced acute pancreatitis through the anti-inflammatory and antioxidant mechanisms. / A quercetina à um flavonÃide derivado de plantas amplamente conhecido por suas propriedades antiinflamatÃrias e antioxidantes. A pancreatite aguda (PA) à uma doenÃa com alta morbi/mortalidade e fisiopatologia complexa, com envolvimento variÃvel de tecidos locais ou ÃrgÃos sistÃmicos. Apesar das amplas investigaÃÃes, atà o momento, nÃo existe nenhum tratamento mÃdico especÃfico para PA. Neste estudo, foram investigados os efeitos da quercetina sobre a gravidade da pancreatite aguda induzida por ceruleÃna em camundongos. Camundongos Swiss machos foram tratados com quercetina (25, 50 e 100 mg/kg, v.o.) ou veÃculo (2% DMSO em Ãgua destilada, 10ml/kg) ou talidomida (200mg/kg, v.o.) 1 h antes da administraÃÃo de ceruleÃna (5 x 50 &#956;g/kg, com intervalo de 1 h entre as doses). Foi incluÃdo no estudo um grupo de animais tratados com salina (0.9%). NÃs analisamos o edema pancreÃtico, os nÃveis sÃricos de amilase, lipase e citocinas (TNF-, IL-6, IL-1 e IL-10), mieloperoxidase (MPO) pancreÃtica e pulmonar, substÃncias reativas ao Ãcido tiobarbitÃrico (TBARS), grupos sulfidrÃlicos nÃo-proteicos (NP-SH), avaliaÃÃo histolÃgica do pÃncreas e pulmÃo e imunohistoquÃmica pancreÃtica (TNF-). CeruleÃna aumentou significativamente o edema pancreÃtico e os nÃveis sÃricos de amilase, lipase, TNF-, IL-6, IL-1 e dimiuiu os nÃveis de IL-10. A avaliaÃÃo histolÃgica revelou edema, infiltraÃÃo de neutrÃfilos, hemorragia, vacuolizaÃÃo e necrose acinar no pÃncreas, alÃm de hemorragia pulmonar. NÃs tambÃm observamos um marcado aumento na expressÃo de TNF- na avaliaÃÃo imunohistoquÃmica. O prÃ-tratamento com quercetina (25, 50 e 100 mg/kg, v.o.) ou talidomida (200mg/kg, v.o.) atenuou significativamente a gravidade da pancreatite aguda induzida por ceruleÃna, o que foi evidenciado pela reduÃÃo dos nÃveis sÃricos das enzimas amilase e lipase, reduÃÃo da inflamaÃÃo pancreÃtica atravÃs da supressÃo da infiltraÃÃo de neutrÃfilos e dos nÃveis sÃricos das citocinas TNF-a, IL-1b e IL-6, expressÃo de TNF-a. AlÃm disso, aumentou a produÃÃo de nÃveis da citocina IL-10 e demonstrou uma aÃÃo atioxidante atravÃs da diminuiÃÃo nos nÃveis de TBARS e restauraÃÃo de NP-SH pancreÃticos. Quercetina tambÃm atenuou a repercussÃo sistÃmica nos pulmÃes evidenciada atravÃs da supressÃo da infiltraÃÃo de neutrÃfilos (MPO) e diminuiÃÃo da hemorragia pulmonar demonstrada na avaliaÃÃo histolÃgica. Em conclusÃo, o estudo fornece a primeira evidÃncia de que a quercetina atenua o desenvolvimento da pancreatite aguda induzida por ceruleÃna em camundongos, atravÃs de mecanismos antiinflamatÃrios e antioxidantes.
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Evaluation of the effect of damage on the intestinal thalidomide and liver in rats induced by indomethacin wistar / AvaliaÃÃo do efeito da talidomida sobre os danos intestinais e hepÃticos induzidos pela indometacina em ratos wistar

Marcos AntÃnio Martins da Silva 08 July 2011 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O uso clÃnico de indometacina, embora eficaz na supressÃo da dor, febre e inflamaÃÃo, à frequentemente associado a efeitos deletÃrios sobre o sistema gastrointestinal, hematolÃgico e renal, que limitam o seu uso terapÃutico. Este estudo analisou se a talidomida poderia reduzir a letalidade induzida pela indometacina e as alteraÃÃes hematolÃgicas e bioquÃmicas no sangue, os danos intestinais, alÃm do efeito da talidomida sobre o epitÃlio intestinal e o aumento nos nÃveis de fibrinogÃnio plasmÃtico induzido pela indometacina em ratos. Os ratos foram tratados com indometacina (5,0 mg/kg), talidomida 100,0 mg/kg e 200,0 mg/kg, e ampicilina (200,0 mg/kg), via oral, num perÃodo de cinco dias. Os animais foram submetidos à coleta de sangue no quinto dia de tratamento, mediante a punÃÃo do plexo-orbital do olho. Os parÃmetros estudados foram: eritrograma, contagem de leucÃcitos, tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), fibrinogÃnio, contagem de plaquetas, cultura do lavado peritoneal e dosagem de mieloperoxidase (MPO) nesse lavado, avaliaÃÃo hepÃtica (ALT, AST, FA, GGT) e glicose. Os resultados do TP, TTPA, antitrombina, contagem de plaquetas, mantiveram-se normais em relaÃÃo ao grupo controle. Nos animais tratados com indometacina, observamos um aumento (p <0,001) nos nÃveis de fibrinogÃnio (637,50Â13,19 mg/dL) sendo o mesmo revertido pelo tratamento com talidomida 100,0 mg/kg e 200,0 mg/kg, (381,80  50,79 mg/dL; 389,30 65,13 mg/dL) respectivamente. Os animais que receberam indometacina apresentaram positividade em 100% das culturas realizadas para enterobactÃrias, demonstrando assim a presenÃa de bactÃrias do trato gastrintestinal na cavidade peritoneal. A atividade da MPO no lÃquido peritoneal dos ratos que receberam indometacina (5,0 mg/kg, v.o, 5d) foi significativamente maior (1217  341,4 U/mL) quando comparada com o grupo-controle (3,33  3,33 U/mL). O tratamento com talidomida (100 e 200 mg / kg, v.o, 5d) reduziu significativamente (p <0,05) este aumento (375,8  149,1 U/ mL), sendo a inibiÃÃo de 69,2%. Os resultados demonstram que a lesÃo intestinal inflamatÃria induzida pela indometacina foi revertida parcialmente pelo tratamento com a talidomida. AlÃm disso, os dados obtidos evidenciam o efeito hepatoprotetor da talidomida contra a indometacina, provavelmente por sua atividade antiinflamatÃria diminuindo ou minimizando o aumento do fibrinogÃnio e recrutamento leucocitÃrio no ambiente hepÃtico. / The clinical use of indomethacin, although effective in suppressing pain, fever and inflammation is often associated with deleterious effects for the gastrointestinal system, and hematological and renal functions, which limit its therapeutic use. This study examined in rats whether thalidomide could reduced the lethality induced by indomethacin and hematological, biochemical, blood, and intestinal damage. This study analyzed the effect of thalidomide on the intestinal epithelium and increased levels of plasma fibrinogen induced by indomethacin in rats. The rats were treated with indomethacin (5.0 mg / kg), thalidomide 100.0 mg / kg or 200.0 mg / kg, and ampicillin (200.0 mg / kg) orally over a period of 5 days. The animals were submitted to blood collection on the fifth day of treatment by puncturing the orbital plexus of the eye, after being anesthetized with ether. The blood was placed in tubes containing anticoagulant, EDTA, sodium citrate and 3.8% in tubes without anticoagulant. The parameters studied were: erythrogram, leukocyte count, prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), fibrinogen, platelet count, and culture of peritoneal lavage, measurement of MPO and evaluation of liver function (ALT, AST, FA, GGT and glucose). The results of the PT, APTT, antithrombin, platelet counts remained normal in the control group. In animals treated with indomethacin, we observed a significant increase (p <0.001) in fibrinogen levels (637.50  13.19 mg / dL) and this increase reversed by treatment with thalidomide 100.0 mg / kg or 200.0 mg / kg, (381.80  50.79 mg / dL, 389.30  65.13 mg / dL, respectively). Animals that received indomethacin were positive in 100% of the cultures performed for enterobacteria, thus demonstrating the presence of bacteria in the gastrointestinal tract into the peritoneal cavity, probably due to a drug-induced intestinal perforation. The MPO activity in peritoneal fluid of rats given indomethacin (5.0 mg / kg, po, 5d) was significantly higher (1217  341.4 U / mL) compared with the control group (3.33  3, 33 U / mL). Treatment with thalidomide (100 or 200 mg / kg, vo, 5d) significantly reversed this effect (p <0.05), (375.8  149.1 U / mL). As inhibition of 69.2%. The results showed that inflammatory intestinal injury in rats induced by indomethacin was partially reversed by treatment with thalidomide. In addition, the data showed a hepatoprotective effect of thalidomide against indomethacin, by its anti-inflammatory activity that might prevent the increase of fibrinogen and leukocyte recruitment in the liver environment.
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Estudo das alteraÃÃes morfolÃgicas induzidas pela Toxina A, do Clostridium difficile em cÃlulas epiteliais intestinais e do efeito protetor da Glutamina e Alanil-glutamina / Study of morphological changes induced by a toxin, clostridium difficile of intestinal epithelial cells and protective effect of glutamine and alanyl-glutamine

Ana AngÃlica Queiroz AssunÃÃo Santos 29 November 2011 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Clostridium difficile à a maior causa de colite associada ao uso de antibiÃticos, com significante morbidade e mortalidade. Glutamina (Gln), um aminoÃcido nÃo-essencial, à a maior fonte combustÃvel para a dinÃmica das cÃlulas intestinais. Alanil-glutamina (Ala-Gln) à um dipeptÃdeo, altamente solÃvel e bem tolerado. O objetivo deste estudo foi analisar as alteraÃÃes induzidas pela toxina A (TcdA) do Clostridium difficile na morfologia e elementos do citoesqueleto das cÃlulas epiteliais intestinais e o efeito do tratamento com Gln e Ala-Gln, utilizando tÃcnicas avanÃadas de microscopia. Placas de cultura de cÃlulas com doze poÃos, previamente acrescidas de lamÃnulas de vidro, com diÃmetro de 13mm, IEC-6, 5x105 foram semeadas e cultivadas por 24 horas em meio DMEM. Depois, as cÃlulas foram incubadas por 24h de acordo com os seguintes grupos: Controle, TcdA (10 ng / mL), TcdA + Gln (10 mM) e TcdA + Ala-Gln (10 mM). As cÃlulas foram fixados em formol a 4% por 14h, depois foram examinados na microscopia de forÃa atÃmica (AFM), microscopia eletrÃnica de varredura (SEM), microscopia confocal e fluorescente. Para o SEM as amostras foram fixadas em porta amostras fita adesiva de carbono e cobertos com uma pelÃcula de ouro 15 mm para adquirir condutividade por pulverizaÃÃo catÃdica. Para microscopia de fluorescÃncia e o confocal, as cÃlulas foram permeabilizadas com PBS/Triton depois foram marcados com RhoA- FITC, Faloidina âRodamina e DAPI e as imagens capturadas atravÃs de um microscÃpio invertido de fluorescÃncia ou confocal. Um immunoblotting foi realizado com os mesmos grupos. A membrana PVDF foi incubada com o anticorpo RhoA overnight, em seguida ativado pelo kit Amershan. O controle protÃico foi feito por &#945;-tubulina. TambÃm realizarmos experimentos de proliferaÃÃo celular e estresse oxidativo. Observou-se que a TcdA causa intenso encolhimento celular restando mÃltiplas extensÃes filamentosas. Esta alteraÃÃo na forma foi associada ao colapso do citoesqueleto de F-actina demonstrada na microscopia de fluorescÃncia. Um aumento da produÃÃo RhoA foi detectada no grupo tratado com Gln e Ala-Gln. Demonstramos que a morfologia das cÃlulas intestinais e organizaÃÃo do citoesqueleto foram dramaticamente alteradas pela TcdA e que a suplementaÃÃo com Ala-Gln e Gln impediu o dano celular epitelial intestinal induzida pela TcdA provavelmente por aumentar a expressÃo RhoA. A TcdA induziu uma reduÃÃo de 8,4% na proliferaÃÃo celular, enquanto o Ala-Gln e Gln aumentou 13,2% e 12,7%, respectivamente. A TcdA induziu as cÃlulas ao dano oxidativo, que foi revertido com o uso de Gln e Ala-Gln. Nossos resultados fornecem justificativa para o uso potencial de Ala-Gln e Gln como terapia adjuvante na doenÃa causada pelo Clostridium difficile. InvestigaÃÃo de alteraÃÃes morfolÃgicas e citoesqueleto usando avanÃadas tÃcnicas de microscopia pode auxiliar na avaliaÃÃo da atividade de proteÃÃo ou terapÃutica de drogas contra os efeitos TcdA. / Clostridium difficile is the major cause of antibiotic-associated colitis, a disease with significant morbidity and mortality. Glutamine (Gln), a non-essential aminoacid, is a major fuel for the dynamic intestinal cell population. Alanyl-glutamine (Ala-Gln) is a dipeptide that is highly soluble and well tolerated. The aim of this study was to analyze the changes induced by Clostridium difficile toxin A (TcdA) in intestinal epithelial cell morphology and cytoskeletal element and the effect of Gln and Ala-Gln treatment, using advanced microscopic techniques. Twelve well cell culture plates, with 13 mm diameter glass coverlids, were seeded with 5x105 IEC-6 cells and grown for 24h in DMEM media. Afterwards, the wells were incubated for 24h as follow: control, TcdA (10 ng/mL), TcdA + Gln (10 mM) and TcdA + Ala-Gln (10 mM). The cells were than fixed in 4% formaldehyde for 14 h and afterwards they were examined by atomic force microscopy (AFM), scanning electronic microscopy (SEM) and Fluorescent microscopy. For the SEM the samples were fixed to samples holders with carbon adhesive tape and covered with a 15 mm gold film for conductivity by sputter. To fluorescent microscopy the cells were permeabilizided with PBS/Triton after that they were marked with stained with FITC-RhoA, Rodhamine-phallodin and DAPI performed using an inverted fluorescence microscope. An immunoblotting was realized with the same groups. The PVDF membrane was incubated with RhoA antibody overnight and afterwards activated by Amershan kit. The proteic control was made by &#945;- tubulin. Also performed experiments of cellular proliferation and oxidative stress. As observed by AFM, SEM and Fluorescent microscopy TcdA caused intense cell shrinkage with multiple extensions. This change in shape was associated with collapse of the F-actin cytoskeleton demonstrated by fluorescent microscopy. An increase of RhoA production was detected in the groups treated with Gln e Ala-Gln. We demonstrated that TcdA dramatically altered the intestinal cell morphology and cytoskeleton organization and that Ala-Gln and Gln supplementation consistently prevented the intestinal epithelial cell damage induced by TcdA probably by increasing RhoA expression. The TcdA induced a reduction of 8.4% in cell proliferation while the Ala-Gln and Gln increased by 13.2% and 12.7%, respectively. The TcdA induced cells to oxidative damage, which was reversed by the use of Gln and Ala-Gln.. Our findings provide rationale for the potential use of Ala-Gln and Gln as adjuvant therapy in Clostridium difficile disease. Investigation of morphological and cytoskeleton changes using advanced microscopic techniques may aid in the evaluation of the protective or therapeutic activity of drugs against TcdA effects.
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Study of changes of rhythm sleep-wake, the body temperature and melatonin secretion in patients with chronic pulmonary disease obstructive / Estudo das alteraÃÃes do ritmo vigÃlia-sono, da temperatura corporal e da secreÃÃo de melatonina em pacientes com doenÃa pulmonar obstrutiva crÃnica

Deuzilane Muniz Nunes 21 October 2012 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Previamente, alteraÃÃes circadianas na doenÃa pulmonar obstrutiva crÃnica (DPOC) foram insuficientemente investigadas. Neste trabalho, que consiste em trÃs estudos, foram avaliadas as alteraÃÃes no ritmo vigÃlia-sono; a variaÃÃo circadiana da temperatura oral; a secreÃÃo noturna de melatonina e a concentraÃÃo de cortisol matinal na DPOC estÃvel. Inicialmente, 26 pacientes com DPOC moderada a muito grave (idade mÃdiaÂDP=66,9Â8,5 anos) e 15 controles (idade=63,0Â10,7 anos) foram avaliados por actimetria durante 5-7 dias. Dispneia, funÃÃo pulmonar (espirometria), qualidade do sono (Ãndice de Qualidade do Sono de Pittsburgh, IQSP) e sonolÃncia diurna (Escala de SonolÃncia de Epworth, ESE) foram mensurados. IndivÃduos com DPOC apresentaram maior latÃncia para o sono (p=0.003), atividade noturna (p=0.003) e tempo acordado apÃs inÃcio do sono (p=0.003) e menor tempo total de sono (TTS; p=0.024) e eficiÃncia do sono (p=0.001). Nos pacientes, a dispneia correlacionou-se com atividade no sono (r=0,41; p=0.04) e TTS (r=-0,46; p=0.02). A qualidade do sono foi pior na DPOC (p=0.043). No segundo estudo, a temperatura oral foi medida a cada duas horas, das 4 Ãs 22 horas, em 31 pacientes com DPOC moderada a muito grave (idade=66,3Â6,5anos) e 19 controles (idade=63,6Â5,4anos). Dispneia, qualidade do sono (IQSP), sonolÃncia diurna (ESE), sintomas depressivos (InventÃrio DepressÃo de Beck, BDI-II), fadiga (Escala de Gravidade de Fadiga, EGF), cronotipo (QuestionÃrio de Matutinidade-Vespertinidade, MEQ) e risco de apneia obstrutiva do sono (QuestionÃrio de Berlim) foram avaliados. Pacientes com DPOC apresentaram pior escore do IQSP (p<0.001), do BDI-II (p=0.02) e do EGF (p<0.001). Os valores de temperatura Ãs 4 e 6 horas foram maiores nos pacientes do que nos controles (p=0.001 e p=0.02, respectivamente). Na DPOC, a temperatura Ãs 6 horas correlacionou-se com o IQSP global (p=0.015). No terceiro estudo, 11 pacientes com DPOC moderada a grave (idade=64,4Â8,8 anos) foram avaliados com polissonografia e determinaÃÃo do grau de dispneia, funÃÃo pulmonar, comorbidades (Indice de Comorbidades de Charlson, ICC) e dosagem de cortisol matinal (6 horas). Em sete casos, foi medida a concentraÃÃo de melatonina Ãs 18, 19, 20, 21, 22, 23, 00, 2, 4 e 6 horas. Observou-se prolongamento da latÃncia para o sono REM (118,1Â86,3 min), baixa eficiÃncia do sono (82,9Â11,6%) e elevado Ãndice de despertares (16,3Â8,5/hora). As curvas de secreÃÃo de melatonina mostraram grande variabilidade. Em mÃdia, o pico de melatonina (82,28Â49,4pg/mL) ocorreu Ãs 22 horas. A eficiÃncia do sono correlacionou-se com a concentraÃÃo de melatonina Ãs 20 (p=0.05) e 23 horas (p=0.04) e o TTS com a concentraÃÃo de melatonina Ãs 22 horas (p=0.05). A concentraÃÃo de cortisol Ãs 6 horas (22,08Â5,8 mg /dl) correlacionou-se inversamente com o Ãndice de despertares (p=0.04). Em conclusÃo, pacientes com DPOC estÃvel apresentam alteraÃÃes do sono avaliados por actimetria, associada ao grau de dispneia. O ritmo da temperatura oral na DPOC està alterado, com temperaturas mais elevadas no inÃcio da manhÃ, o que pode estar relacionado a alteraÃÃes do sono. O padrÃo de secreÃÃo de melatonina na DPOC à bastante variÃvel. Os nÃveis de cortisol matinal e a concentraÃÃo de melatonina Ãs 20, 22 e 23 horas associam-se a alteraÃÃes do sono nestes pacientes. / Previously, circadian alterations in chronic obstructive pulmonary disease (COPD) have been insufficiently investigated. In this work, consisting of three studies, we evaluated the impairments in sleep-wake rhythm, the circadian variation of oral temperature, the nocturnal melatonin secretion and morning cortisol concentration in patients with stable COPD. Initially, 26 patients with moderate to very severe COPD (mean age  SD = 66.9  8.5 years) and 15 controls (age = 63.0  10.7 years) were evaluated by actigraphy for 5-7 days. Dyspnea, lung function (spirometry), sleep quality (Pittsburgh Sleep Quality Index, PSQI) and daytime sleepiness (Epworth Sleepiness Scale, ESS) were measured. Individuals with COPD showed increased sleep latency (p = 0.003), mean nocturnal activity (p = 0.003), and wake after sleep onset (p = 0.003). Furthermore, they presented reduced total sleep time (TST, p = 0.024) and lower sleep efficiency (p = 0.001). In patients, severity of dyspnea was correlated with activity levels during sleep (r = 0.41, p = 0.04) and with TST (r = -0.46, p = 0.02). Subjective sleep quality was poorer in patients than controls (p = 0.043). In the second study, oral temperature was measured every two hours, from 4:00 a.m to 10:00 p.m, in 31 patients with moderate to very severe COPD (age = 66.3  6.5 years) as well as in 19 controls (age = 63.6  5.4 years). Dyspnea, sleep quality (PSQI), daytime sleepiness (ESS), depressive symptoms (Beck Depression Inventory, BDI-II), fatigue (Fatigue Severity Scale, FSS), chronotype (morningness-eveningness Questionnaire, MEQ) and risk of sleep apnea (Berlin Questionnaire) were evaluated. COPD patients showed worse PSQI global score (p<0.001), BDI-II (p = 0.02) and FSS (p <0.001). Mean temperature at 4:00 a.m and 6:00 a.m were higher in patients than in controls (p = 0.001 and p = 0.02, respectively). In the COPD group, the temperature at 6:00 a.m was correlated with the PSQI global score (p = 0.015). In the third study, 11 patients with moderate or severe COPD (age = 64.4  8.8 years) were evaluated with polysomnography, dyspnea, pulmonary function and comorbidities (Charlson Comorbidity Index, CCI) and they had the cortisol levels measured in the morning at 6:00 a.m. The concentration of melatonin was measured at 6:00, 7:00, 8:00, 9:00, 10:00, 11:00 p.m and, 0:00, 2:00, 4:00 and 6:00 a.m in seven cases. It was observed prolongation of REM sleep latency (118.1  86.3 min), lower sleep efficiency (82.9  11.6%) and elevated arousal index (16.3  8.5 / h). The curves of melatonin secretion showed great variability. On average, the peak of melatonin (82.28  49.4 pg / ml) occurred at 10:00 p.m. Sleep efficiency was correlated with the concentration of melatonin at 8:00 p.m (p = 0.05) and 11:00 p.m (p = 0.04) and the TST with melatonin concentration at 10:00 p.m (p = 0.05). The cortisol concentration at 6:00 a.m (22.08  5.8 mg /dl) were correlated inversely with the arousal index (p = 0.04). In conclusion, clinically stable COPD patients presented sleep alterations assessed by actigraphy, associated with the degree of dyspnea. The rhythm of oral temperature was altered in COPD, with higher temperatures in the early morning, and this may be related to sleep disturbances. The pattern of melatonin secretion in COPD is variable. Cortisol morning levels and melatonin concentration measured at 8:00, 10:00 and 11:00 p.m are associated with changes in the sleep pattern of these patients.
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Molecular identification of clinical and strains environmental Burkholderia pseudomallei, from the State of CearÃ: based on analysis regions 16S and 16S-23S ribosomal DNA nuclear / IdentificaÃÃo molecular de cepas clÃnicas e ambientais de Burkholderia pseudomallei, oriundas do Estado do CearÃ: anÃlise baseada nas regiÃes 16S e 16S-23S do DNA ribossÃmico nuclear

Manuela Soares Couto 14 September 2009 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Melioidosis is a potentially fatal disease caused by the bacterium Burkholderia pseudomallei, considered emerging in Brazil since the first cases were reported in 2003, on State of CearÃ. This study aimed to perform the molecular identification of 31 isolates of B. pseudomallei (26 clinical and 5 environmental) maintained in the culture collection of CEMM (Specialized Center for Medical Mycology), based on sequences 16S and 16S-23S rRNA. The DNA of these samples was extracted with the kit Wizard  Genomic DNA Purification (Promega), quantified by spectrophotometry and stored at 4ÂC. The amplification of a fragment of 302 bp of 16S-23S rRNA specific to B. pseudomallei was performed by PCR reaction with primers Bp1 and Bp4. The sequencing of 16S and 16S-23S rRNA was performed by using of the kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). The phylogenetic tree of 16S rRNA and the sequence identity matrix and sequence difference count matrix based on the 16S-23S rRNA were generated by the program MEGA4, version 4.1. The results confirmed the identification of 15 strains of B. pseudomallei (5 clinical and 10 environmental), which represents 48.4% of the isolates analyzed in this study. The phylogenetic tree based on 16S rRNA shows that the clinical and environmental isolates of B. pseudomallei of State of Cearà are evolutionarily clustered with the strains B. pseudomallei MSHR346 (Australia), B. pseudomallei 1106a (Thailand), B. pseudomallei K96243 (Thailand), B. pseudomallei 1710b (Thailand) and B. pseudomallei 668 (Australia). Using the same extraction kit was possible to extract DNA from B. pseudomallei directly from clinical specimen (bronchoalveolar lavage), confirming a new case of melioidosis in Ubajara/CE. In this study, the use of PCR for amplification of a fragment of 302 bp of 16S-23S rRNA identified correctly B. pseudomallei, and to confirm the discrimination between B. pseudomallei and B. mallei, the sequencing of the 16S and 16S-23S rRNA genes was performed. The technique of PCR coupled with sequencing of 16S and 16S-23S rRNA resulted in a high sensitivity and specificity of detection of B. pseudomallei in this study. / A melioidose à uma doenÃa potencialmente fatal causada pela bactÃria Burkholderia pseudomallei, sendo considerada emergente no Brasil desde que os primeiros casos foram reportados em 2003, no Estado do CearÃ. Este estudo pretendeu realizar a identificaÃÃo molecular de 31 isolados de B. pseudomallei (cinco clÃnicos e 26 ambientais) mantidos na coleÃÃo de culturas do CEMM (Centro Especializado em Micologia MÃdica), com base nas sequÃncias 16S e 16S-23S DNAr. O DNA destas amostras foi extraÃdo com o kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega), quantificado por espectrofotometria e armazenado a 4ÂC. A amplificaÃÃo de um fragmento de 302 pb da regiÃo espaÃadora 16S-23S DNAr especÃfico para B. pseudomallei foi realizada por meio de reaÃÃo de PCR com os primers Bp1 e Bp4. O sequenciamento das regiÃes 16S e 16S-23S DNAr foi realizado pelo mÃtodo da terminaÃÃo da cadeia pelo didesoxinucleotÃdeo, usando-se o kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). A Ãrvore filogenÃtica da regiÃo 16S DNAr e as matrizes sequÃncia identidade e contagem de diferenÃas baseadas na regiÃo 16S-23S DNAr foram geradas pelo programa MEGA4, versÃo 4.1. Os resultados confirmaram a identificaÃÃo de 15 cepas de B. pseudomallei (cinco clÃnicas e dez ambientais), o que corresponde a 48.4% dos isolados em estudo. A Ãrvore filogenÃtica baseada na regiÃo 16S DNAr demonstra que os isolados clÃnicos e ambientais de B. pseudomallei do Estado do Cearà sÃo evolutivamente agrupados com as cepas B. pseudomallei MSHR346 (AustrÃlia), B. pseudomallei 1106a (TailÃndia), B. pseudomallei K96243 (TailÃndia), B. pseudomallei 1710b (TailÃndia) e B. pseudomallei 668 (AustrÃlia). Com a utilizaÃÃo do mesmo kit de extraÃÃo tambÃm foi possÃvel extrair DNA de B. pseudomallei diretamente de espÃcime clÃnico (lavado brÃnquico), confirmando um novo caso de melioidose no MunicÃpio de Ubajara/CE. Em nosso estudo, o uso da PCR para a amplificaÃÃo de um fragmento de 302 pb da regiÃo 16S-23S DNAr identificou corretamente B. pseudomallei, sendo que para confirmar a discriminaÃÃo entre B. pseudomallei e B. mallei, o sequenciamento das regiÃes 16S e 16S-23S DNAr foi realizado. A tÃcnica de PCR aliada ao sequenciamento das regiÃes 16S e 16S-23S do DNA ribossÃmico nuclear resultaram em uma elevada sensibilidade e especificidade de detecÃÃo de B. pseudomallei neste estudo.
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SeparaÃÃo materna prolongada induz desnutriÃÃo e inflamaÃÃo sistÃmica com deficiÃncia de igf-1 e leptina e alteraÃÃes hipocampais em camundongos lactentes

Ãtalo Leite Figueiredo 22 June 2015 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A separaÃÃo materna prolongada (SMP) pode causar uma desnutriÃÃo energÃtico-proteica devido à restriÃÃo do leite materno, o que pode levar a alteraÃÃes no hipocampo, alÃm de afetar a barreira intestinal, induzindo translocaÃÃo bacteriana e inflamaÃÃo sistÃmica. Um estudo recente mostrou uma correlaÃÃo negativa entre marcadores inflamatÃrios sistÃmicos e nÃveis sÃricos do fator de crescimento insuliniforme 1 (IGF-1) em crianÃas desnutridas com baixa estatura. Contudo, ainda hà uma lacuna no conhecimento quanto ao impacto da inflamaÃÃo sistÃmica no desenvolvimento do hipocampo em animais desnutridos. Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da SMP no desenvolvimento fÃsico, na ontogenia de alguns reflexos neonatais e nas alteraÃÃes hipocampais em camundongos C57BL/6J, incluindo alteraÃÃes morfolÃgicas, neuroquÃmicas e expressÃo de marcadores de plasticidade cerebral, incluindo sinaptofisina (SYN) e proteÃna bÃsica de mielina (PBM). Um segundo objetivo desse estudo foi avaliar o efeito na SMP nos nÃveis sÃricos de corticosterona, IGF-1, leptina e adiponectina e de uma proteÃna de fase aguda, a proteÃna C reativa (PCR), essa Ãltima como um marcador de inflamaÃÃo sistÃmica. A SMP foi induzida isolando metade dos filhotes de sua mÃe em cada ninhada por perÃodos definidos (4h no dia 4, 8h no dia 5, e 12h nos demais dias) numa gaiola incubadora. MediÃÃes diÃrias de peso e comprimento de cauda foram realizadas, sendo a Ãltima como marcador de crescimento linear. Testes para avaliar reflexos neonatais incluindo recuo do abismo (cliff avoidance), correÃÃo da posiÃÃo (surface righting), comportamento de nado (swimming behavior) e imobilidade dorsal (dorsal immobility) foram realizados nos dias 6, 8, 10, 12 e 14. No dia 14, os filhotes foram sacrificados por decapitaÃÃo para obtenÃÃo do sangue para as anÃlises hormonais e PCR no soro atravÃs de ELISA; e coleta de hipocampo para dosagens de aminoÃcidos por HPLC; imuno-histoquÃmica para SYN; e expressÃo de SYN e PBM no tecido encefÃlico por western blot. Uma parte dos animais foi submetida à perfusÃo transcardÃaca com soluÃÃo fixadora para anÃlises estereolÃgicas. A SMP induziu uma desnutriÃÃo com reduÃÃo significativa do ganho de peso corporal (a partir do sexto dia) e do comprimento da cauda (a partir do dÃcimo primeiro dia) (p<0,05). A avaliaÃÃo do comportamento revelou diferenÃas entre os grupos nos testes de correÃÃo da posiÃÃo e imobilidade dorsal (p<0,05). Na estereologia, foram observadas diferenÃas no volume total e no volume da camada de cÃlulas piramidais de CA3 nos animais submetidos à SMP quando comparados com o grupo controle nÃo separado (CNS) (p<0,05). A dosagem de aminoÃcidos indicou menor concentraÃÃo de aspartato, glutamato, glicina e GABA nos animais do grupo SMP quando comparado ao CNS (p<0,05). Os animais do grupo CNS apresentaram maior marcaÃÃo para SYN quando comparado ao grupo SMP. A SMP reduziu os nÃveis leptina e IGF-1, bem como nos nÃveis sÃricos de PCR (P<0,05). Em conjunto, esses resultados sugerem que a SPM causa inflamaÃÃo sistÃmica, com reduÃÃo dos nÃveis sÃricos de leptina e IGF-1, dÃficits de crescimento e comportamentais e alteraÃÃes na estrutura e atividade neuroquÃmica do hipocampo.
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Atividade antimicrobiana de metabÃlitos secundÃrios obtidos de leveduras ambientais do bioma cearense frente a cepas de bactÃrias patogÃnicas, incluindo Staphylococcus aureus resistentes à meticilina: atividade antibacteriana e investigaÃÃo do mecanismo de aÃÃo / METABOLITES ANTIMICROBIAL ACTIVITY SECONDARY YEASTS OBTAINED THE ENVIRONMENTAL BIOME CEARENSE FRONT OF STRAINS PATHOGENIC BACTERIA INCLUDING Staphylococcus aureus resistant to methicillin: ANTIBACTERIAL ACTIVITY AND MODE OF ACTION OF INVESTIGATION

JoÃo Batista de Andrade Neto 03 July 2015 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O uso consequente e contÃnuo dos antimicrobianos levaram ao surgimento de patÃgenos potencialmente letais. O grupo de micro-organismos ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter sp.) se destaca perante os demais, onde as infecÃÃes por Staphylococcus aureus se sobressaem como a principal causa de infecÃÃes sistÃmicas, sendo o Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (SARM) um dos principais responsÃveis por estas infecÃÃes no Brasil. Dessa forma, a emergÃncia de cepas com sensibilidade reduzida acompanhada de uma terapia antimicrobiana limitada faz com que seja necessÃria uma busca por novas opÃÃes terapÃuticas. No presente trabalho, foram analisadas leveduras isoladas da regiÃo nordeste do Brasil, mais especificamente no estado do CearÃ, com o objetivo de buscar metabÃlitos antimicrobianos com atividade anti-SARM, bem como a descriÃÃo de um eventual mecanismo de aÃÃo. Foram isoladas 13 leveduras as quais foram acondicionadas em condiÃÃes de cultivo distintas, a fim de otimizar o crescimento dos isolados de leveduras. Em seguida os extratos acetoetÃlicos obtidos a partir das leveduras, foram exploradas afim de verificar se produziam metabÃlitos secundÃrios com propriedades antimicrobianas. 59% (11) dos extratos obtidos foram ativos contra bactÃrias Gram positivas e 32% (7) contra bactÃrias Gram positivas e Gram negativas. Os extratos mais ativos apresentaram atividade contra SARM e tiveram CIM que variaram de 34-192 Âg/mL. A anÃlise por citometria de fluxo revelou que esses extratos foram capazes de causar danos a membrana plasmÃtica e promover fragmentaÃÃo do DNA bacteriano, levando a cÃlula à morte celular por apoptose. Nos ensaios citotÃxicos, utilizando o teste do MTT com cÃlulas de leucÃcitos humanos, os extratos mostraram baixa citotoxicidade. As anÃlises quÃmicas revelaram estruturalmente diversos metabÃlitos secundÃrios, incluindo os compostos hexahidro-3-(fenilmetil)-pirrolo[1,2-a] pirazina-1,4-dione e o Ãcido lÃurico, jà descritos na literatura por suas propriedades contra Staphylococcus aureus sensÃveis à meticilina (MSSA) e SARM, bem como outros metabÃlitos conhecidos foram identificados nos extratos restantes, sugerindo que estas leveduras podem produzir molÃculas promissoras. Dentro deste contexto, a atividade antimicrobiana e o baixo potencial citotÃxico demonstrado por esses extratos revelaram uma classe de compostos quÃmicos promissores para desenvolvimento de novos antibioticos. No entanto, mais estudos farmacolÃgicos serÃo feitos para confirmar estes dados. / The consequent and continuous use of antimicrobials led to the emergence of potentially lethal pathogens. ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter sp.) microorganisms group stands towards others, in which Staphylococcus aureus infections stand out as the leading cause of systemic infections, with SARM being a major responsible for these infections in Brazil. Thus, the emergence of strains with reduced sensitivity accompanied by a limited antimicrobial therapy makes the search for new therapeutic options necessary. In this study, isolate yeasts from the northeaster region of Brazil, more specifically in Cearà state, were analysed in order to find antimicrobial metabolites with anti-SARM activity, as well as to find a description of a possible mechanism of action. In this paper, 13 yeasts were isolated and conditioned in different growing conditions, in order to optimize the growth of the isolates. In addition, it was explored whether extracts from yeast produced new secondary metabolites with antimicrobial properties. 59% (11) of the obtained extracts were active against Gram positive bacteria and 32% (7) were active against Gram positive and Gram negative bacteria. These more active extracts showed activity against SARM and had MIC ranging between 34-192 Âg/mL. Analysis by flow cytometer showed that these extracts were capable of causing damage to the plasma membrane and of promoting bacterial DNA fragmentation, leading the cell to cell death by apoptosis. In cytotoxic tests using the MTT test with human leukocyte cells, the secondary metabolites showed low cytotoxicity. Chemical analysis revealed structurally different secondary metabolites, including the compounds pyrrolo [1,2-a] pyrazine-1,4-dione, Hexahydro-3- (phenyl methyl) Laurie acid and, as described in the literature for their properties against MSSA and SARM as well as other known metabolites were identified in the remaining extracts, suggesting that these strains can produce new molecules. Within this context, the antimicrobial activity and the low cytotoxic potential demonstrated by these extracts reveal a class of promising chemical compounds to the development of new antibiotics. However, more pharmacological studies will be done to confirm these data.
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SeparaÃÃo materna prolongada induz desnutriÃÃo e inflamaÃÃo sistÃmica com deficiÃncia de IGF-1 e leptina e alteraÃÃes hipocampais em camundongos lactentes / Prolonged maternal separation induced malnutrition and systemic inflammation IGF-1 deficient and leptin and hippocampal changes in infant mice

Ãtalo Leite Figueiredo 22 June 2015 (has links)
CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Prolonged maternal separation (PMS) can cause protein-energy malnutrition due to restriction of breast milk, which may lead to changes in the hippocampus, affecting the intestinal barrier, inducing bacterial translocation and systemic inflammation. A recent study has documented a negative correlation between systemic inflammatory markers and insulin-like growth factor-1 (IGF-1) serum levels in malnourished stunted children. However, there is a gap of knowledge how systemic inflammation affects hippocampal development in malnourished animals. This study aimed to investigate the effect of PMS on physical development, ontogeny of some neonatal reflexes, and on hippocampal alterations in C57BL6J mice, including morphological, neurochemical, and brain plasticity markers, including synaptophysin (SYN) and myelin basic protein (MBP) expression. A second aim of this study was to evaluate serum levels of corticosterone, IGF-1, leptin, adiponectin and an acute phase protein, C-reactive protein (CRP), the latter as a systemic inflammatory marker. PMS was induced by isolating half of the littermates from the dam for defined periods (4 hours on day 4, 8 hours on day 5 and 12 hours thereafter) in an incubator box. Daily measurements of weight and tail length were recorded, the latter as an indication of linear growth. Tests to evaluate neonatal reflexes included cliff avoidance, surface righting, swimming behaviors and dorsal immobility, which were performed on days 6, 8, 10, 12 and 14. On day 14, pups were euthanized by decapitation to drawn blood for serum hormonal analyses and CRP by ELISA. Hippocampus were harvest for amino acid dosage by HPLC; immunohistochemistry for SYN; and total brain SYN and MBP by western blot. A subset of animals was subject to transcardiac perfusion with a fixative solution for stereological analyses. PMS induced malnutrition with significant reduction in body weight gain (from the sixth day) and tail length (from the eleventh day) (p<0.05). The assessment of neonatal reflexes revealed differences between groups on surface righting and dorsal immobility (p<0.05). The stereology data showed that malnutrition challenge reduced the total volume and area of the CA3 hippocampal field and CA3 pyramidal layer volume and reduced CA1 pyramidal layer area (p<0.05) when compared with the non-separated control group (NSC). The amino acid dosage indicated lower concentration of aspartate, glutamate, glycine and GABA in PMS when compared with CNS animals (p<0.05). The NSC mice showed more hippocampal SYN immunolabeling when compared with the PMS group. PMS mice had higher serum levels of IGF-1 and leptin, as well as increased serum CRP (p<0.05). Together, these results suggest that PMS causes systemic inflammation with reduced serum levels of leptin and IGF-1, growth and behavioral deficits, along with alterations in the hippocampal structure and neurochemical activity. / A separaÃÃo materna prolongada (SMP) pode causar uma desnutriÃÃo energÃtico-proteica devido à restriÃÃo do leite materno, o que pode levar a alteraÃÃes no hipocampo, alÃm de afetar a barreira intestinal, induzindo translocaÃÃo bacteriana e inflamaÃÃo sistÃmica. Um estudo recente mostrou uma correlaÃÃo negativa entre marcadores inflamatÃrios sistÃmicos e nÃveis sÃricos do fator de crescimento insuliniforme 1 (IGF-1) em crianÃas desnutridas com baixa estatura. Contudo, ainda hà uma lacuna no conhecimento quanto ao impacto da inflamaÃÃo sistÃmica no desenvolvimento do hipocampo em animais desnutridos. Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da SMP no desenvolvimento fÃsico, na ontogenia de alguns reflexos neonatais e nas alteraÃÃes hipocampais em camundongos C57BL/6J, incluindo alteraÃÃes morfolÃgicas, neuroquÃmicas e expressÃo de marcadores de plasticidade cerebral, incluindo sinaptofisina (SYN) e proteÃna bÃsica de mielina (PBM). Um segundo objetivo desse estudo foi avaliar o efeito na SMP nos nÃveis sÃricos de corticosterona, IGF-1, leptina e adiponectina e de uma proteÃna de fase aguda, a proteÃna C reativa (PCR), essa Ãltima como um marcador de inflamaÃÃo sistÃmica. A SMP foi induzida isolando metade dos filhotes de sua mÃe em cada ninhada por perÃodos definidos (4h no dia 4, 8h no dia 5, e 12h nos demais dias) numa gaiola incubadora. MediÃÃes diÃrias de peso e comprimento de cauda foram realizadas, sendo a Ãltima como marcador de crescimento linear. Testes para avaliar reflexos neonatais incluindo recuo do abismo (cliff avoidance), correÃÃo da posiÃÃo (surface righting), comportamento de nado (swimming behavior) e imobilidade dorsal (dorsal immobility) foram realizados nos dias 6, 8, 10, 12 e 14. No dia 14, os filhotes foram sacrificados por decapitaÃÃo para obtenÃÃo do sangue para as anÃlises hormonais e PCR no soro atravÃs de ELISA; e coleta de hipocampo para dosagens de aminoÃcidos por HPLC; imuno-histoquÃmica para SYN; e expressÃo de SYN e PBM no tecido encefÃlico por western blot. Uma parte dos animais foi submetida à perfusÃo transcardÃaca com soluÃÃo fixadora para anÃlises estereolÃgicas. A SMP induziu uma desnutriÃÃo com reduÃÃo significativa do ganho de peso corporal (a partir do sexto dia) e do comprimento da cauda (a partir do dÃcimo primeiro dia) (p<0,05). A avaliaÃÃo do comportamento revelou diferenÃas entre os grupos nos testes de correÃÃo da posiÃÃo e imobilidade dorsal (p<0,05). Na estereologia, foram observadas diferenÃas no volume total e no volume da camada de cÃlulas piramidais de CA3 nos animais submetidos à SMP quando comparados com o grupo controle nÃo separado (CNS) (p<0,05). A dosagem de aminoÃcidos indicou menor concentraÃÃo de aspartato, glutamato, glicina e GABA nos animais do grupo SMP quando comparado ao CNS (p<0,05). Os animais do grupo CNS apresentaram maior marcaÃÃo para SYN quando comparado ao grupo SMP. A SMP reduziu os nÃveis leptina e IGF-1, bem como nos nÃveis sÃricos de PCR (P<0,05). Em conjunto, esses resultados sugerem que a SPM causa inflamaÃÃo sistÃmica, com reduÃÃo dos nÃveis sÃricos de leptina e IGF-1, dÃficits de crescimento e comportamentais e alteraÃÃes na estrutura e atividade neuroquÃmica do hipocampo.

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