Mucociliary epithelia are found in the human airways and act as the first line of defence against inhaled foreign agents. Mucus traps potentially damaging particles and the cilia transport the mucus away from the airways to remove the threat. Modelling mucociliary epithelia for research purposes is challenging. This is because the airways are enclosed and are thus difficult to study directly. Instead, tissue is extracted or in vitro techniques are employed. Whilst these systems are useful, there is a need for accessible in vivo models to complement them. In this thesis I assess a new model system for studying mucociliary epithelia. This system is the larval epidermis of the amphibian, Xenopus tropicalis. Its epidermis comprises multi-ciliated cells that beat in a polarised direction reminiscent of those found in the human airways. It is also proposed to have a number of other cell types including mucus-secreting cells, but very little is known about them. The epidermis is open and accessible to manipulation meaning that it has great potential to be used in the study of mucociliary epithelia in live, native conditions. Such a system would be a valuable addition to the current models employed. However, the epidermis has not been thoroughly characterized before so its utility as a model system remains speculative.To develop and evaluate this new model, I fully characterize the epidermis, showing that it has five distinguishable cell types. This includes a population of cells called ionocytes that are shown to be essential for the health and function of the epidermis. I also test for the presence of mucins, the structural component of mucus, secreted from the epidermis in order to evaluate the proposal that mucus-secreting cells are present in the epidermis. A mucin-like protein called otogelin is identified. After characterizing the epidermal cell types, I compare them to the human mucociliary epithelium and consider potential applications and future perspectives for this model.

A gestação inicial da égua é um período fascinante que abrange numerosas e intensas mudanças em seu desenvolvimento, muitas das quais são únicas para a espécie equina. Esse desenvolvimento depende da manutenção da função lútea, do estabelecimento de um ambiente uterino e de uma interação precisa e orquestrada entre o concepto e o ambiente uterino. O objetivo deste estudo foi verificar as alterações histológicas do endométrio e a produção histotrófica em éguas cíclicas e prenhes nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação. No primeiro ciclo, biópsias endometriais de 30 éguas foram coletadas no dia 7 (n = 10), 10 (n = 10) e 13 (n = 10) constituindo o grupo éguas cíclicas. No segundo ciclo, as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil, acompanhadas diariamente até detectar a ovulação, considerada o dia 0. Foram coletadas biópsias endometriais nos dias7 (n 10), 10 (n 10) e 13 (n 10). Imediatamente após a coleta, o útero foi lavado e as éguas em que foi obtido embrião, foram inseridas no grupo de éguas prenhes. Um maior calibre dos vasos sanguíneos foi observado em prenhez comparados às éguas cíclicas do dia 7 aos 13. No sétimo dia pós-ovulação, uma grande perda de células ciliadas foi evidente no grupo de éguas prenhes, comparadas ao grupo de éguas cíclicas, as células do epitélio endometrial estavam mais protusas e uma pequena quantidade de secreção histotrófica entre as dobras endometriais foi observada. No décimo dia de prenhez, secreção histotrófica glandular e do epitélio luminal estavam mais presentes comparadas às éguas do grupo cíclico. No dia 13 de prenhes, foi observado um grande conteúdo de histotrofo nas aberturas glandulares que estavam cercadas por células ciliares. Ocorreram alterações no ambiente uterino logo após a entrada do embrião no útero. No estroma e no lúmen, essas modificações parecem visar fornecer a nutrição necessária para o desenvolvimento inicial do embrião e estas mudanças nas estruturas celulares irão interagir na sinalização embrionária, futura fixação, implantação e placentação. / The early pregnancy of mare is a fascinating period that encompasses numerous and intense changes in its development, many of which are unique to the equine species. This development depends on the maintenance of the luteal function, the establishment of a favorable uterine environment and a precise and orchestrated interaction between the concept and the uterine environment. The aim of this study was to evaluate histological changes in the endometrium in days 7, 10 and 13 post-ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, endometrial biopsies from 30 cyclic mares (Cyclic group) were collected on days 7, 10 and 13 post-ovulation. In the second cycle, the same mares were bred by a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 post-ovulation intrauterine biopsies were collected. Immediately after sample collection, the mare‟s uteri were flushed, and those mares with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. A larger blood vessel caliber was observed in pregnant mares than in cyclic from day 7 to 13. On the 7th day a large loss of ciliated cells was evident in the group of pregnant mares in comparison with the Cyclic group and the superficial cells of the endometrium were more protruded, and a small amount of histotrophic material between the folds was observed. On the 10th day of pregnancy, the glandular histotrophic secretion and the secretion of luminal epithelium became more intense than the secretion of cyclic mares. On the 13th day of pregnancy, a very large amount of histotroph was observed within large glandular openings surrounded by ciliated cells. Changes occurred in the uterine environment thereupon the entry of the embryo into the uterus. In the stroma and in the lumen, these modifications seem aim to provide the necessary nutrition for the initial development of the embryo and to promote changes at cellular structures that will interact in the embryonic signaling and future fixation, implantation and placentation.

A gestação inicial da égua é um período fascinante que abrange numerosas e intensas mudanças em seu desenvolvimento, muitas das quais são únicas para a espécie equina. Esse desenvolvimento depende da manutenção da função lútea, do estabelecimento de um ambiente uterino e de uma interação precisa e orquestrada entre o concepto e o ambiente uterino. O objetivo deste estudo foi verificar as alterações histológicas do endométrio e a produção histotrófica em éguas cíclicas e prenhes nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação. No primeiro ciclo, biópsias endometriais de 30 éguas foram coletadas no dia 7 (n = 10), 10 (n = 10) e 13 (n = 10) constituindo o grupo éguas cíclicas. No segundo ciclo, as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil, acompanhadas diariamente até detectar a ovulação, considerada o dia 0. Foram coletadas biópsias endometriais nos dias7 (n 10), 10 (n 10) e 13 (n 10). Imediatamente após a coleta, o útero foi lavado e as éguas em que foi obtido embrião, foram inseridas no grupo de éguas prenhes. Um maior calibre dos vasos sanguíneos foi observado em prenhez comparados às éguas cíclicas do dia 7 aos 13. No sétimo dia pós-ovulação, uma grande perda de células ciliadas foi evidente no grupo de éguas prenhes, comparadas ao grupo de éguas cíclicas, as células do epitélio endometrial estavam mais protusas e uma pequena quantidade de secreção histotrófica entre as dobras endometriais foi observada. No décimo dia de prenhez, secreção histotrófica glandular e do epitélio luminal estavam mais presentes comparadas às éguas do grupo cíclico. No dia 13 de prenhes, foi observado um grande conteúdo de histotrofo nas aberturas glandulares que estavam cercadas por células ciliares. Ocorreram alterações no ambiente uterino logo após a entrada do embrião no útero. No estroma e no lúmen, essas modificações parecem visar fornecer a nutrição necessária para o desenvolvimento inicial do embrião e estas mudanças nas estruturas celulares irão interagir na sinalização embrionária, futura fixação, implantação e placentação. / The early pregnancy of mare is a fascinating period that encompasses numerous and intense changes in its development, many of which are unique to the equine species. This development depends on the maintenance of the luteal function, the establishment of a favorable uterine environment and a precise and orchestrated interaction between the concept and the uterine environment. The aim of this study was to evaluate histological changes in the endometrium in days 7, 10 and 13 post-ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, endometrial biopsies from 30 cyclic mares (Cyclic group) were collected on days 7, 10 and 13 post-ovulation. In the second cycle, the same mares were bred by a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 post-ovulation intrauterine biopsies were collected. Immediately after sample collection, the mare‟s uteri were flushed, and those mares with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. A larger blood vessel caliber was observed in pregnant mares than in cyclic from day 7 to 13. On the 7th day a large loss of ciliated cells was evident in the group of pregnant mares in comparison with the Cyclic group and the superficial cells of the endometrium were more protruded, and a small amount of histotrophic material between the folds was observed. On the 10th day of pregnancy, the glandular histotrophic secretion and the secretion of luminal epithelium became more intense than the secretion of cyclic mares. On the 13th day of pregnancy, a very large amount of histotroph was observed within large glandular openings surrounded by ciliated cells. Changes occurred in the uterine environment thereupon the entry of the embryo into the uterus. In the stroma and in the lumen, these modifications seem aim to provide the necessary nutrition for the initial development of the embryo and to promote changes at cellular structures that will interact in the embryonic signaling and future fixation, implantation and placentation.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第19592号 / 医博第4099号 / 新制||医||1014(附属図書館) / 32628 / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 斎藤 通紀, 教授 伊達 洋至, 教授 上杉 志成 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM