MATOS, Jesamar Correia. Análise comparativa em histograma da intensidade de fluorescência de CD10 e CD19 em blastos leucêmicos e hematogônias. 2005. 99 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T13:48:54Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_jcmatos.pdf: 1013012 bytes, checksum: a3d1918d6a7f051c01d35ea52491ce11 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T15:57:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_jcmatos.pdf: 1013012 bytes, checksum: a3d1918d6a7f051c01d35ea52491ce11 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T15:57:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_jcmatos.pdf: 1013012 bytes, checksum: a3d1918d6a7f051c01d35ea52491ce11 (MD5) Previous issue date: 2005 / Hematogones are normal immature cells from bone marrow that are responsible for the production of the immune system’s B cell lineage. The acute lymphoblastic leukemia (ALL) of precursors B cells represents one type of neoplastic transformation of hematogones. Due to their high similarity there are risks of erroneous interpretation consequently making it necessary use to complementary diagnostic techniques. The CD10 and CD19 antigens are expressed on both types of cells so, it is necessary use other monoclonal antibodies to identify malign or benign nature. In attempt to avoid the use of different antibodies we investigate possible differences in the expression of CD10 and CD19 in both cell types. We collected 36 samples of bone marrow from non-neoplastic patients as a control group. The age raged from 0 to 15 years with an average of 5 years. It was also collected 39 samples from patients with ALL of B cells. The age ranged from 0 to 14 years with an average of 6.6 years. We analyzed the differences between the fluorescence intensity concerning average, standard deviation, variation, inclination and kurtosis coefficients for the two markers. The individual values of each sample were compared with the intervals generated by the values of the control group: ME±2SD; ME±2.5SD and ME±3SD. It was possible to distinguish the groups with 89.7% and 75%; 79.5% and 100% and 71.8% e 100% of sensibility and specificity, respectively for the intervals. In conclusion, the expression of CD10 and CD19 antigens on blasts and hematogones is significantly different and may be useful in the differentiation of both cell types / Hematogônias são células jovens normais da medula óssea responsáveis pela produção das células de linhagem B do sistema imunológico. A leucemia linfoblástica aguda de células precursoras B representa um dos tipos de transformação neoplásica das hematogônias. Devido a alta similaridade do ponto de vista citológico dos dois tipos celulares, é possível haver erros de interpretação na análise citológica, fazendo-se necessário em algumas circunstâncias o uso de técnicas complementares diagnósticas para diferenciar as células benignas das malignas. O uso de marcadores imunológicos através de anticorpos monoclonais marcados com fluorescência tem grande aplicabilidade nos laboratórios especializados como rotina no estudo das leucemias. Os antígenos CD10 e CD19 estão expressos em ambos os tipos celulares de forma que se faz necessária uma extensão no uso de outros marcadores para caracterização da natureza benigna ou maligna das células. Testou-se possíveis diferenças nas curvas de expressão de CD10 e CD19 dos dois tipos celulares. Foram colhidas 36 amostras de medula óssea de pacientes pediátricos não neoplásicos como grupo controle. A idade variou de 24 dias de vida a 15 anos com uma média de 5 anos. Foram colhidas também 39 amostras de pacientes portadores de LLA de linhagem B por ocasião do diagnóstico. A idade variou de 4 meses a 14 anos com uma média de 6,6 anos. Analisou-se as diferenças nas distribuições quanto a intensidade de fluorescência pelas médias, desvios-padrão, coeficientes de variação, coeficientes de inclinação e coeficiente de curtose para os dois marcadores CD10 e CD19 nos dois grupos. Os valores individuais de cada amostra foram comparados com os intervalos gerados pelos valores do grupo controle com os seguintes respectivos resultados de sensibilidade e especificidade: 89,7% e 75% para um cut-off de média+2DP; 79,5% e 100% para média+2,5DP; e 71,8% e 100% para média+3DP. Conclusão: A expressão de CD10 e CD19 em blastos e hematogônias é diferente podendo ser de utilidade prática na distinção entre os dois tipos celulares

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-05T17:41:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 388353 bytes, checksum: 897cb0cd725d5dc562e4412ef8f785fc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T17:41:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 388353 bytes, checksum: 897cb0cd725d5dc562e4412ef8f785fc (MD5) Previous issue date: 2005-12-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O gênero Eucalyptus, da família Myrtaceae, apresenta cerca de 800 espécies e vários híbridos naturais. Além da importância biológica, é de múltiplo interesse comercial, destacando-se na indústria farmacêutica e na produção de biomassa lenhosa. A quantificação do conteúdo de DNA nuclear é útil em estudos de relações filogenéticas. Também é uma informação importante no mapeamento de genomas. Para a determinação do conteúdo de DNA nuclear em plantas, a citometria de fluxo é considerada a metodologia mais utilizada. No entanto, os estudos com Eucalyptus apresentam diferenças entre os valores encontrados. Outra técnica cujos resultados permitem a determinação da quantidade de DNA nuclear é a citometria de imagem. O objetivo deste trabalho é reavaliar as divergências nas quantificações de DNA nuclear em Eucalyptus, pela aplicação das citometrias de fluxo e de imagem. As quantificações foram realizadas com o uso do citômetro de fluxo, associado à coloração com iodeto de propídeo, dos núcleos isolados. Os padrões de referência foram folhas de Raphanus sativus Saxa (1,11 pg), Lycopersicon esculentum Stupicke (1,96 pg) e hemácias de Gallus gallus Leghorn fêmea (2,33 pg). Histogramas da intensidade de fluorescência relativa foram obtidos após a análise dos núcleos isolados dos padrões internos combinados com E. globulus, E. grandis e E. urophylla. Os valores em pg de DNA nuclear encontrados para E. globulus e E. grandis foram de 1,39 e 1,41 (padrão R. sativus), 1,20 e 1,22 (padrão L. esculentum), e 1,05 e 1,09 (padrão G. gallus). A quantificação para E. urophylla foi de 1,01 pg (padrão G. gallus). As espécies de Eucalyptus analisadas não apresentaram diferenças entre si maiores que 5,4% no conteúdo de DNA do genoma em pg. Todavia, variações em uma única planta, resultantes dos diferentes padrões, apresentaram divergências de até 32%. A citometria de imagem, dos núcleos corados pela reação de Feulgen, foi realizada para analisar o conteúdo de DNA de E. globulus, cujos valores foram de 1,16 (padrão R. sativus) e 1,02 pg (padrão L. esculentum). O uso de fluorocromos (intercalantes ou base específicos) e a interferência de compostos secundários na coloração foram considerados pontos críticos na análise pela citometria de fluxo; além dos padrões de referência e dos coeficientes de variação para ambas as citometrias. Em todas as análises os maiores coeficientes de variação foram 3,80 (citometria de fluxo) e 4,83% (citometria de imagem). Pela comparação entre as metodologias aplicadas, demonstrou-se o valor mais elevado da estimativa do conteúdo de DNA nuclear em E. globulus via citometria de fluxo, cerca de 16% maior do que na citometria de imagem. As proporções entre os padrões vegetais continuaram as mesmas em ambas as citometrias. Embora a quantificação mais precisa de DNA nuclear em picogramas para E. globulus seja proveniente da citometria de fluxo das folhas, pelo valor do CV, a mais acurada foi considerada a média dos dados obtidos via citometria de imagem dos meristemas, cujo valor foi 1,09 pg DNA/2C. / The Eucalyptus genus of Myrtaceae family has about 800 species and some natural hybrids. Beyond the biological importance, it is of multiple commercial interests, being distinguished in the pharmaceutical industry and the production of pulp biomass. The quantification of the nuclear DNA content is useful in studies of phylogenetics. Also it is important information for genome mapping. For nuclear DNA content determination, flow cytometry is considered the most appropriate methodology. However, Eucalyptus studies present differences between values. Another technique whose results allow the determination of the nuclear DNA amount is the image cytometry. The objective of this work was to reevaluate the divergences in the measures of nuclear DNA in Eucalyptus, for the application of flow and image cytometries. The measures had been carried through with the use of flow cytometer and stain with propidium iodide, of the isolated nuclei. The reference standards were leaves of Raphanus sativus cv. Saxa (1.11 pg), Lycopersicon esculentum cv. Stupicke (1.96 pg) and Gallus gallus female Leghorn erythrocytes (2.33 pg). Histograms of relative fluorescence intensity have generated after analysis of the isolated nuclei of combined internal standards with E. globulus, E. grandis and E. urophylla. The values in pg of nuclear DNA found for E. globulus and E. grandis xhad been of 1.39 and 1.41 (standard R. sativus), 1.20 and 1.22 (standard L. esculentum), and 1,05 and 1,09 (standard G. gallus). The quantification for E. urophylla pg was of 1.01 (standard G. gallus). The Eucalyptus species analyzed did not present differences among themselves greater than 5.4% in genomic DNA content in pg. However, intraspecific variations in only one plant, resultant of the different standards, presented divergences of up to 32%. The image cytometry analyses, with Feulgen reaction stain nuclei, were carried out to analyze the E. globulus DNA content, whose values were of 1.16 (standard R. sativus) and 1.02 pg (standard L. esculentum). The fluorochrome use (DNA- intercalating or base specific) and the secondary compounds interference in the staining were considered critical points in the analysis for the flow cytometry; besides the standards of reference and the coefficients of variation for both the cytometries. In all the analyses the bigger variation coefficients were 3.80 (flow cytometry) and 4.83 (image cytometry). For the comparison between the applied methodologies, the increase of the estimate of the nuclear DNA content was confirmed in E. globulus by flow cytometry, about 16% greater as compared to image cytometry. The ratios between plant standards remained the same ones in both techniques. Although the most precise nuclear DNA quantification in picogramas for E. globulus was proceeding from flow cytometry of leaves, by CV value, the most accurate was considered the average of meristem image cytometry data, whose value was 1.09 pg DNA/2C.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-24Bitstream added on 2014-06-13T19:40:41Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_ac_dr_araiq.pdf: 1427909 bytes, checksum: 13ce547164df900d11546eb7b87b39b8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Devido a grande importância econômica da citricultura no Brasil e mundo e aos problemas sanitários enfrentados sendo alguns limitantes para o cultivo, como é o caso das doenças causadas por vírus como: a tristeza cítrica, causada pelo vírus da tristeza dos citros (CTV), pertencente ao gênero Closterovirus, família Closteroviridae, uma das maiores ameaças da citricultura mundial, mesmo com a pré imunização através de estirpes fracas do vírus e substituição de porta enxertos, estirpes fortes de CTV ainda causam prejuízos consideráveis. E com o aparecimento da doença morte súbita dos citros (MSC) de etiologia não determinada. Pelo fato de não haver ainda métodos eficientes de separação de ambos os vírus presentes em uma única amostra, levantando se as hipóteses que a causa da MSC esteja relacionada a uma estirpe do vírus CTV, a um vírus do gênero Marafivirus denominado Citrus Sudden Death-associated Virus (CSDaV), pertencente ao gênero Marafivirus, família Tymoviridae, ou a uma associação entre eles. Este trabalho vem propor um método eficaz de separação por citometria de fluxo (FC) de CTV e CSDaV em amostras semi purificadas, diluídas em tampão TE, pH7,5, utilizando marcação de ácidos nucléicos com Iodeto de Propídeo (PI) e conjugação de anticorpos policlonais anti CTV com Isotiocianato de Fluoresceína (FITC), cuja eficácia do método foi comprovada pela reação da polimerase em cadeia (PCR) / Because of high economic importance of citrus in Brazil and the world and health problems being faced some limiting factors for growing as is the case of diseases caused by viruses such as sadness citrus caused by citrus tristeza virus (CTV) belonging to Closterovirus gender, family Closteroviridae, one of the biggest threats to the citrus industry worldwide, even with the pre immunization using mild virus strains and replacement of the rootstocks, strong strains of CTV still cause considerable damage. And with the onset of the disease citrus sudden death (MSC) of undetermined etiology. Because there is not yet efficient methods of separation of the two viruses present in a single sample, raising the hypotheses that the cause of SCD is related to a strain of CTV, a virus Marafivirus group called Citrus Sudden Death-associated Virus (CSDaV) belonging to the genus Marafivirus, Tymoviridae family, or an association between them, this paper proposes an effective method of separation by flow cytometry (FC) and CTV in samples CSDaV semi purified, diluted in TE buffer, pH7, 5, using marking of nucleic acids with propidium iodide (PI) and a combination of polyclonal anti CTV with Fluorescein isothiocyanate (FITC), the effectiveness of the method was confirmed by polymerase reaction chain reaction (PCR)

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Márcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Maysa Furlan / Resumo: Cryptococcus neoformans é o patógeno fúngico mais comumente encontrado em infecções do sistema nervoso central, que desperta interesse devido a sua associação com os pacientes imunocomprometidos, em especial aqueles com AIDS. Embora haja ainda pouco relatados, isolados resistentes têm emergido nos últimos anos, e a disponibilidade de um método de sensibilidade rápido e reprodutível pode contribuir para a escolha do tratamento adequado. Os antifúngicos sintéticos possuem elevada toxicidade e sua disponibilidade na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente, o que reforça a demanda por novas alternativas terapêuticas. A busca por novos agentes antifúngicos a partir de plantas pode viabilizar o tratamento das principais micoses, diminuindo as reações adversas. Neste âmbito, pretendeuse padronizar a citometria de fluxo para a determinação da sensibilidade de anfotericina B e de substâncias de fontes naturais, comparando-as com o micrométodo. A citometria de fluxo foi utilizada no presente estudo para testar a sensibilidade de C. neoformans baseada na ligação de iodeto de propídeo na célula fúngica. Para tanto, isolados clínicos foram selecionados para análise da sensibilidade em citometria de fluxo depois de realizada a tipagem molecular de 151 isolados de Cryptococcus spp. das regiões de São José do Rio Preto e Rio de Janeiro por RFLP do gene URA5, em que a prevalência segue igual ao quadro mundial, em que o tipo molecular VNI é o mais prevalente, bem como verificou-se que a infecção por uma nova cepa e/ou diferentes espécies pode ocorrer com relativa freqüência. Foram ainda testados 57 extratos brutos, 52 frações e 53 substâncias puras isoladas de plantas do Cerrado e Mata Atlântica contra a cepa ATCC 90012 de C. neoformans... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryptococcus neoformans is a fungal pathogen most commonly found in infections of the central nervous system that arouses interest because of its association with immunocompromised patients, especially those with AIDS. Although have not been much reported, resistant isolates have emerged in recent years, and the availability of a method for rapid and reproducible susceptibility may contribute to the choice of treatment. The synthetic antifungal agents have high toxicity and its availability in medical practice is relatively small, sometimes inefficient, which reinforces the demand for new therapies. The search for new antifungal agents from natural products may facilitate the treatment of major fungal infections, reducing adverse reactions. In this context, we intended to standardize the flow cytometry to determine the susceptibility of amphotericin B and natural sources substances against C. neoformans, based on binding of propidium iodide (PI) in the fungal cell. For this, clinical isolates were selected for susceptibility analysis in flow cytometry after molecular typing of 151 Cryptococcus spp isolates from São José do Rio Preto and Rio de Janeiro by RFLP of the URA5 gene. The molecular type VNI is the most prevalent, as well as verified that infection by a new strain and / or different species can occur with relative frequency. We also tested 57 crude extracts, 52 fractions and 53 pure compounds isolated from plants of the Cerrado and the Atlantic forest against the C. neoformans ATCC 90012 strain. The pure substances sorbifolin, nitensoside B and isoquercitrin, from the plant Pterogyne nitens, presented MIC of 7.8μg/ml against C. neoformans, These data were confirmed by flow cytometry, after standardizing the method for amphotericin B, whose endpoint was 50% of the PI intensity, corresponding to the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

SILVA, C. R. Avaliação in vitro da atividade antifúngica da β-lapachona frente a cepas de Candida spp. resistentes a derivados azólicos na forma planctônica e em isolados formadores de biofilme. 2016. 106 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:18:45Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_crsilva.pdf: 2139615 bytes, checksum: c01276373b5208634c9333640fffcd4c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:18:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_crsilva.pdf: 2139615 bytes, checksum: c01276373b5208634c9333640fffcd4c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T14:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_crsilva.pdf: 2139615 bytes, checksum: c01276373b5208634c9333640fffcd4c (MD5) Previous issue date: 2016-07-12 / At the present time, a significant increase of opportunistic fungal infections is observed, mainly in immunocompromised patients. Candidiasis has been the most documented and are often associated with the formation of biofilms. Commercially available antifungal agents are restricted to a small number of drugs when compared to antibacterial agents. These facts, associated with the increase in the resistance frequency of Candida species, demonstrate the need to search for new therapeutic strategies, where natural products stand out. Several works have already demonstrated different biological activities of β-lapachone (naphthoquinone), including antifungal. Thus, the aim of the present study was to evaluate the antifungal potential of β-lapachone on the growth of Candida spp. Resistant to azole derivatives, in planktonic forms and biofilm, as well as to elucidate their possible mechanisms of action. For this, the evaluation of the anti-fungal effect of β-lapachone was performed on 22 strains of Candida spp. Using microdilution in broth. Subsequently, parameters such as cell viability, generation of reactive oxygen species (EROS), mitochondrial damage and phosphatidylserine externalization were evaluated by means of flow cytometric analysis and DNA damage by comet test, contributing to elucidation of the probable mechanism of Β-lapachone action. In addition, a protein expression profile was obtained by proteomic analysis in a representative C. albicans strain after treatment with the compound. And, finally, the cell viability of the biofilms was determined by the tetrazolium salt reduction (MTT) assay. According to the results, β-lapachone presented antifungal activity against strains of Candida spp. Azole resistant, with minimal inhibitory concentration (MIC) ranging from 4 - 16 μg / mL. Β-lapachone altered the permeability of the mitochondrial membrane, increased the intracellular levels of EROS, decreased cell viability in a dose-dependent manner, caused DNA damage and, consequently, led to cell death by apoptosis. Among the proteins identified, some are related to the translation process, energy metabolism, genetic processing and defense against reactive oxygen species. In relation to the biofilm assays, β-lapachone presented an effect on biofilm formed (24 hours), with the C. albicans isolate presenting a 50% reduction in concentrations of 2x MIC, 10x MIC and 50x MIC, while C. tropicalis and C In the concentrations of 10x MIC and 50x MIC (p <0.05). The use of subinhibitory concentrations was able to significantly reduce (p <0.05) the biofilm formation of Candida spp. Therefore, we conclude that β-lapachone is able to inhibit the in vitro growth of Candida spp. Resistant in both planktonic and biofilm forms suggesting that this compound molecule has the potential to act as an antifungal agent with apoptotic activity. / Nos dias atuais, observa-se um aumento significativo das infecções fúngicas oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. A candidíase tem sido a mais documentada e muitas vezes estão associadas à formação de biofilmes. Os agentes antifúngicos disponíveis no mercado são restritos a um pequeno número de fármacos quando comparados aos agentes antibacterianos. Esses fatos associados ao aumento da frequência de resistência de espécies de Candida, demonstram a necessidade de buscar por novas estratégias terapêuticas, onde os produtos naturais se destacam. Diversos trabalhos já demonstram diferentes atividades biológicas de β-lapachona (naftoquinona), incluindo antifúngica. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antifúngico da β-lapachona sobre o crescimento de Candida spp. resistentes a derivados azólicos, nas formas planctônicas e biofilme, bem como elucidar os seus possíveis mecanismos de ação. Para isso, a avaliação do efeito antifúngico da β-lapachona foi realizada em 22 cepas de Candida spp. utilizando microdiluição em caldo. Posteriormente, parâmetros como viabilidade celular, geração de espécies reativas de oxigênio (EROS), danos na mitocôndria e externalização de fosfatidilserina foram avaliados por meio de análises de citometria de fluxo e os danos ao DNA pelo teste do cometa contribuindo para elucidação do provável mecanismo de ação da β-lapachona. Além disso, por meio da análise proteômica foi obtido um perfil de expressão de proteínas em uma cepa representativa de C. albicans após tratamento com o composto. E, por fim, a viabilidade celular dos biofilmes foi determinada por meio do ensaio de redução do sal de tetrazólio (MTT). De acordo com os resultados obtidos, β-lapachona apresentou atividade antifúngica frente a cepas de Candida spp. resistentes a azólicos, com concentração inibitória mínima (CIM) variando entre 4 - 16 μg/mL. β-lapachona alterou a permeabilidade da membrana mitocondrial, aumentou os níveis intracelulares de EROS, diminuiu a viabilidade celular de forma dose-dependente, causou danos ao DNA e, consequentemente, conduziu morte celular por apoptose. Dentre as proteínas identificadas, algumas estão relacionadas com o processo de tradução, metabolismo energético, processamento genético e de defesa contra espécies reativas de oxigênio. Em relação aos ensaios de biofilmes, β-lapachona apresentou efeito sobre biofilme formado (24 horas), com o isolado de C. albicans apresentando redução de 50% nas concentrações de 2x CIM, 10x CIM e 50x CIM, enquanto C. tropicalis e C. parapsilosis nas concentrações de 10x CIM e 50x CIM (p < 0,05). O uso de concentrações subinibitórias foi capaz de reduzir significativamente (p < 0,05) a formação dos biofilmes de Candida spp. Portanto, conclui-se que β-lapachona é capaz de inibir o crescimento in vitro de Candida spp. resistentes a azólicos tanto na forma planctônica como em biofilme sugerindo que esta molécula composto tem potencial para agir como agente antifúngico com atividade apoptótica.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T19:35:16Z : No. of bitstreams: 1 benaducci_t_me_arafcf.pdf: 492292 bytes, checksum: 320fc25ea91902b305de821a5ecc8dfc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cryptococcus neoformans é o patógeno fúngico mais comumente encontrado em infecções do sistema nervoso central, que desperta interesse devido a sua associação com os pacientes imunocomprometidos, em especial aqueles com AIDS. Embora haja ainda pouco relatados, isolados resistentes têm emergido nos últimos anos, e a disponibilidade de um método de sensibilidade rápido e reprodutível pode contribuir para a escolha do tratamento adequado. Os antifúngicos sintéticos possuem elevada toxicidade e sua disponibilidade na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente, o que reforça a demanda por novas alternativas terapêuticas. A busca por novos agentes antifúngicos a partir de plantas pode viabilizar o tratamento das principais micoses, diminuindo as reações adversas. Neste âmbito, pretendeuse padronizar a citometria de fluxo para a determinação da sensibilidade de anfotericina B e de substâncias de fontes naturais, comparando-as com o micrométodo. A citometria de fluxo foi utilizada no presente estudo para testar a sensibilidade de C. neoformans baseada na ligação de iodeto de propídeo na célula fúngica. Para tanto, isolados clínicos foram selecionados para análise da sensibilidade em citometria de fluxo depois de realizada a tipagem molecular de 151 isolados de Cryptococcus spp. das regiões de São José do Rio Preto e Rio de Janeiro por RFLP do gene URA5, em que a prevalência segue igual ao quadro mundial, em que o tipo molecular VNI é o mais prevalente, bem como verificou-se que a infecção por uma nova cepa e/ou diferentes espécies pode ocorrer com relativa freqüência. Foram ainda testados 57 extratos brutos, 52 frações e 53 substâncias puras isoladas de plantas do Cerrado e Mata Atlântica contra a cepa ATCC 90012 de C. neoformans... / Cryptococcus neoformans is a fungal pathogen most commonly found in infections of the central nervous system that arouses interest because of its association with immunocompromised patients, especially those with AIDS. Although have not been much reported, resistant isolates have emerged in recent years, and the availability of a method for rapid and reproducible susceptibility may contribute to the choice of treatment. The synthetic antifungal agents have high toxicity and its availability in medical practice is relatively small, sometimes inefficient, which reinforces the demand for new therapies. The search for new antifungal agents from natural products may facilitate the treatment of major fungal infections, reducing adverse reactions. In this context, we intended to standardize the flow cytometry to determine the susceptibility of amphotericin B and natural sources substances against C. neoformans, based on binding of propidium iodide (PI) in the fungal cell. For this, clinical isolates were selected for susceptibility analysis in flow cytometry after molecular typing of 151 Cryptococcus spp isolates from São José do Rio Preto and Rio de Janeiro by RFLP of the URA5 gene. The molecular type VNI is the most prevalent, as well as verified that infection by a new strain and / or different species can occur with relative frequency. We also tested 57 crude extracts, 52 fractions and 53 pure compounds isolated from plants of the Cerrado and the Atlantic forest against the C. neoformans ATCC 90012 strain. The pure substances sorbifolin, nitensoside B and isoquercitrin, from the plant Pterogyne nitens, presented MIC of 7.8μg/ml against C. neoformans, These data were confirmed by flow cytometry, after standardizing the method for amphotericin B, whose endpoint was 50% of the PI intensity, corresponding to the... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Paulo Inácio da Costa / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Nelson Wulff / Banca: José Belasque Junior / Banca: Marcel Bellato Spósito / Resumo: Devido a grande importância econômica da citricultura no Brasil e mundo e aos problemas sanitários enfrentados sendo alguns limitantes para o cultivo, como é o caso das doenças causadas por vírus como: a tristeza cítrica, causada pelo vírus da tristeza dos citros (CTV), pertencente ao gênero Closterovirus, família Closteroviridae, uma das maiores ameaças da citricultura mundial, mesmo com a pré imunização através de estirpes fracas do vírus e substituição de porta enxertos, estirpes fortes de CTV ainda causam prejuízos consideráveis. E com o aparecimento da doença morte súbita dos citros (MSC) de etiologia não determinada. Pelo fato de não haver ainda métodos eficientes de separação de ambos os vírus presentes em uma única amostra, levantando se as hipóteses que a causa da MSC esteja relacionada a uma estirpe do vírus CTV, a um vírus do gênero Marafivirus denominado Citrus Sudden Death-associated Virus (CSDaV), pertencente ao gênero Marafivirus, família Tymoviridae, ou a uma associação entre eles. Este trabalho vem propor um método eficaz de separação por citometria de fluxo (FC) de CTV e CSDaV em amostras semi purificadas, diluídas em tampão TE, pH7,5, utilizando marcação de ácidos nucléicos com Iodeto de Propídeo (PI) e conjugação de anticorpos policlonais anti CTV com Isotiocianato de Fluoresceína (FITC), cuja eficácia do método foi comprovada pela reação da polimerase em cadeia (PCR) / Abstract: Because of high economic importance of citrus in Brazil and the world and health problems being faced some limiting factors for growing as is the case of diseases caused by viruses such as sadness citrus caused by citrus tristeza virus (CTV) belonging to Closterovirus gender, family Closteroviridae, one of the biggest threats to the citrus industry worldwide, even with the pre immunization using mild virus strains and replacement of the rootstocks, strong strains of CTV still cause considerable damage. And with the onset of the disease citrus sudden death (MSC) of undetermined etiology. Because there is not yet efficient methods of separation of the two viruses present in a single sample, raising the hypotheses that the cause of SCD is related to a strain of CTV, a virus Marafivirus group called Citrus Sudden Death-associated Virus (CSDaV) belonging to the genus Marafivirus, Tymoviridae family, or an association between them, this paper proposes an effective method of separation by flow cytometry (FC) and CTV in samples CSDaV semi purified, diluted in TE buffer, pH7, 5, using marking of nucleic acids with propidium iodide (PI) and a combination of polyclonal anti CTV with Fluorescein isothiocyanate (FITC), the effectiveness of the method was confirmed by polymerase reaction chain reaction (PCR) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo79_1.pdf: 1037483 bytes, checksum: 2a3e04b13ef6daeac80ee5ef7f9b473f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Anticorpos são largamente utilizados para caracterizar células leucêmicas dentre seus estágios de diferenciação. O uso de lectinas, (glico)proteínas que reconhecem especificamente carboidratos, como sonda de análise da superfície celular fornece informações sobre carboidratos na membrana celular. A diferenciação das células e sua transformação maligna são caracterizadas por mudanças nos resíduos de carboidratos de glicoconjugados de membrana celular as quais podem ser detectadas por lectinas. Neste estudo, células de medula óssea de pacientes com leucemia mielóide aguda (LMA) e linfóide aguda (LLA), recém diagnosticados no Centro de Oncohematologia Pediátrica do Hospital Universitário Oswaldo Cruz/UPE e Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco (HEMOPE), foram avaliadas usando um painel com cinco lectinas conjugadas ao isotiocianato de fluoresceina, FITC (fluorescein isothiocyanate), Wheat germ agglutinin (WGA), Lotus tetragonolobus agglutinin (LTA), Concanavalina A (Con A), Ulex europaeus (UEA I) e Arachis hypogaea (PNA), de acordo com o protocolo de marcação utilizado para o diagnóstico de rotina com anticorpos monoclonais. A WGA, específica para N-acetilglicosamina, marcou intensamente as células leucêmicas de pacientes com LLA e LMA, mas não foi capaz de diferenciá-las. Entretanto, a UEA-I (L-fucose) mostrou maior especificidade para as células de linhagem mielóide (LMA) do que para LLA, sendo capaz de diferenciá-las. A LTA marcou tanto as células de LMA quanto de LLA, embora apresente também especificidade para o carboidrato L-fucose. Não foi observada marcação seletiva para as lectinas PNA (D-galactose específica) e Con A (D-glicose/D-manose) para as células de LLA e LMA. Estes achados demonstram que lectinas são potenciais sondas para detectar mudanças no perfil sacarídico de glicoconjugados de membrana de células hematopoiéticas imaturas, sendo mais uma ferramenta para o diagnóstico dos diferentes tipos de leucemia

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-12T18:41:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Geraldo Sampaio.pdf: 579470 bytes, checksum: 5ea9d0a4310f23ecab87dc463848dc1e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-12T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Geraldo Sampaio.pdf: 579470 bytes, checksum: 5ea9d0a4310f23ecab87dc463848dc1e (MD5) / Introdução: Com o avanço no entendimento de bioprocessos, houve um significativo aumento de novas técnicas que geram diversas informações sobre as interações celulares. Dentre estas técnicas, a citometria de fluxo têm se consolidado como uma importante ferramenta com amplas aplicações, como por exemplo contar, examinar e classificar partículas microscópicas suspensas em meio líquido em fluxo, com a análise de vários parâmetros simultaneamente. Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa principalmente em caprinos e ovinos, doença que deprecia o valor do couro e carne no mercado agro-industrial. Objetivo: padronizar técnicas, através da citometria de fluxo, para avaliar a contagem absoluta deste microrganismo, bem como aspectos fisiológicos e da interação entre C.pseudotuberculosis e células fagocitárias murinas. Metodologia: Cultivo de C.pseudotuberculosis em meio BHI - T80 0,5%, seguido da marcação deste microrganismo com corantes fluorescentes, em diferentes períodos que definem diferentes estados fisiológicos ao longo do seu crescimento. Ensaio de fagocitose utilizando células do peritônio de murinos de duas linhagens após peritonite induzida por Tioglicolato de Sódio, cultivadas e lavadas para aderência celular. Após a adesão celular, foi feito o desafio com bactérias coradas com regente fluorescente, com 1h 30 min de infecção as células aderentes foram tripsinizadas, posteriormente lavadas e centrifugadas para o ensaio por citometria de fluxo. Resultados: Observou-se um período de crescimento similar a uma curva padrão de crescimento microbiano (fases lag, log, estacionária e de declínio), contudo a técnica utilizada permitiu a distinção entres diferentes estados fisiológicos. Os dados obtidos na citometria evidenciam populações de células fagocíticas contendo bactérias no citoplasma, sendo observadas duas populações envolvidas neste processo. Uma população de baixa complexidade interna, similar à apresentada por linfócitos, e uma população com complexidade interna moderada similar a apresentada por células de origem monocítica. As células dos camundongos CBA participando da fagocitose de microrganismos da linhagem T1 apresentam uma maior granulação interna que aquelas encontradas no peritônio dos camundongos da linhagem suíça nas mesmas condições, sugerindo uma maior ativação celular. O mesmo fenômeno pode ser observado quando as células participam da fagocitose da linhagem C57. Células peritoneais de camundongos CBA apresentaram maior capacidade de fagocitose e nesta linhagem se observou um maior envolvimento de células mononucleares fagocíticas nesta atividade. Para a linhagem suíça, observou-se uma maior participação de células compatíveis com linfócitos na fagocitose deste microrganismo. Conclusões: A técnica de citometria de fluxo com a marcação por florescência foi eficaz para a avaliação do crescimento e viabilidade de Corynebacterium pseudotuberculosis, bem como da interação das células bacterianas com as células fagocitárias peritoneais murinas. A CF constitui-se, portanto, numa técnica eficiente para a avaliação da curva de crescimento desta bactéria, permitindo a distinção dos diferentes estados fisiológicos, inclusive podendo indicar um mecanismo de escape à fagocitose. / Salvador

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-17T03:12:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335833.pdf: 2075808 bytes, checksum: 1ebab313b99f115d6ebbbc21b39fdc4d (MD5) Previous issue date: 2015 / As membranas serosas pleurais, peritoneais e pericárdicas são aquelas que envolvem, respectivamente, as superfícies do pulmão, da cavidade abdominal e do coração. Em condições patológicas, uma quantidade maior de líquido se acumula nessas cavidades formando um processo denominado efusão cavitária. Efusões cavitárias malignas são definidas como a presença de células malignas nas cavidades serosas. Recentes estudos mostram que a análise multiparamétrica por citometria de fluxo é uma metodologia sensível e rápida que permite avaliar um grande número de células com diferentes marcadores. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o fenótipo das células presentes nos líquidos cavitários e analisar a sua importância como marcadores fenotípicos para o diagnóstico diferencial entre as efusões malignas e as benignas. A primeira etapa deste trabalho consistiu em padronizar a marcação e a análise das amostras de efusões serosas por citometria de fluxo. Após a padronização, a celularidade de 65 amostras de líquidos cavitários foi avaliada por citometria de fluxo e comparada com a avaliação da morfologia por microscopia de luz, a qual é metodologia considerada padrão ouro para análise desses líquidos. A etapa seguinte consistiu em avaliar a eficiência dos marcadores Ber-EP4, TTF-1, Vimentina, GCFPD-15, CK7 e CK20 utilizados na imunocitoquímica para diferenciar as células reacionais das neoplásicas por citometria de fluxo em líquidos pleurais. Apesar do pequeno número de amostras analisadas (n=18), foi possível concluir que o painel de anticorpos padronizado neste estudo é útil para distinguir as células neoplásicas das normais e, com isso, fazer o diagnóstico diferencial entre as efusões malignas e as benignas. No entanto, mais estudos com um número maior de amostras serão necessários para o estabelecimento da metodologia na rotina laboratorial de investigação de células neoplásicas.<br> / Abstract : The pleural, pericardial and peritoneal membranes are respectively engaging the lung, abdominal cavity and the heart surfaces. Under pathological conditions, a greate quantity of fluid accumulates in these cavities forming a process known as cavity effusions. Malignant effusions are defined as the that the multi-parameter flow cytometric analysis is a sensitive method, which allows quick evaluation of a large number of cells with different markers. Thus, the aim of this study was to assess the phenotype of these cells in the cavity fluids, besides analyzing their importance as phenotypic markers for the differential diagnosis of malignant and benign effusions. The first stage of this work was to standardize the measurement and the analysis of samples of serous effusions by flow cytometry. After standardization, the cellularity from 65 samples of serous fluid was evaluated by flow cytometry and compared with the assessment of morphology by light microscopy, which is considered the gold standard methodology for analysis of liquids. The next step was to evaluate the efficiency of the Ber-EP4, TTF-1, Vimentina, GCFPD-15, CK7 and CK20 markers used in immunocytochemistry to differentiate reactions from neoplastic cells by flow cytometry in pleural fluids. Despite the small number of samples (n = 18), the results showed that the standard antibody panel in this study is useful to distinguish cancer from normal cells and, as a result, it is possible to make the differential diagnosis of malignant and benign effusions. However, further studies with a larger number of samples are needed to establish the methodology in laboratory investigation of cancer cells routine.