Orientador : Reinaldo Wilson Vieira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T18:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MoreiraNeto_FranciscoFernandes_M.pdf: 1863125 bytes, checksum: 471488fa133951fb5ae5518da2b5c0f3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Complicações por sangramento podem impedir o sucesso de qualquer cirurgia. Complicações causadas pelas transfusões sangüíneas também são fatores que devem ser levados em consideração quando analisamos o resultado das mesmas. As reações transfusionais são eventos comuns, mas são, felizmente na maioria das vezes, extremamente leves, não resultando em conseqüências mais graves Para os pacientes. No entanto, reações fatais etransmissão de doenças graves podem ocorrer. Acirculação extracorpórea aparece como amaior responsável pelas disfunções hemostáticas que ocorrem durante acirurgia cardíaca. As maiores causas dessas disfunções hemostáticas são as disfunções plaquetárias, da coagulação propriamente dita, ou da fibrinólise. As desordens da hemostasia causadoras de sangramento devem ser combatidas. Para tanto,o desenvolvimento de estratégias de prevenção e tratamento das mesmas é de grande importância e significado clínico. A utilização de anti-fibrinolíticos vem sendo feita como parte dessa estratégia, tanto que já existem vários trabalhos na literatura demonstrando aeficácia, especialmente, da aprotinina e, secundariamente, do ácido tranexâmico. No entanto aprotinina é cara e pode induzir a graves complicações anafiláticas. Quanto ao ácido tranexâmico, na literatura ainda não há consenso quanto à dose, nem quanto ao melhor regime de administração a ser utilizado. No presente trabalho, prospectivo, randomizado e duplo cego, estudamos a utilização profilática do anti-fibrinolítico ácido tranexâmico (Transamin@) , em um grupo de 80 pacientes submetidos àcirurgia primária de revascularização do miocárdio com o auxílio da circulação extracorpórea, que foram dividiqos em 2 grupos. No grupo-estudo o ácido tranexâmico foi administrado endovenosamente na dose de 4g (aproximadamente 50mg/Kg num paciente de 80 Kg)divididas em 2 partes: 2 g no início da cirurgia e 2 g adicionados ao perfusato da CEC; no grupo-controle foi administrada somente solução salin~ à 0,9% (placebo). Os grupos eram comparáveis em todas as variáveis demográficas, pré e intra-operatórias, exceto pelo número de anastomoses que foi significativamente maior no grupo-estudo. Como resultado encontramos que o grupo-estudo apresentou uma quantidade de sangramento pós-operatório pelos drenos mediastinais cerca de 30% menor, o que foi estatisticamente significativo (p=O,Ol). Não conseguimos em nossa amostra, não obstante, demonstrar uma redução na quantidade ou no número de pacientes transfundidos. Na análise das complicações pudemos verificar que o uso do ácido tranexâmico é seguro na dose de 4g, pois não houve diferença significativa na ocorrência de infarto agudo do miocárdio, insuficiência renal ou acidente vascular encefálico quando comparados os grupos, estudo econtrole. Em conclusão podemos afirmar que o ácido tranexâmico na dose de 4g reduz o sangramento no pós-operatório de cirurgia çardíaca primária de revascularização do miocárdio com circulação extracorpórea, sem aumentar significativamente aocorrência de complicações / Abstract: Bleeding complications, as well as complications related to blood transfusions may impair the results of any kind of surgery, especially cardiac surgery. Cardiopulmonary bypass appears as responsible for major hemostatic dysfunctions that happen during cardiac surgery. These dysfunctions are related mostly to platelet function or fibrinolisis and strategies should be developed to prevent or treat these dysfunctions. In the literature there are some papers showing the efficacy of antifibrinolitic agents like aprotinin and tranexamic acid. For this purpose, Aprotinin is very efficient but expensive and can induce anaphylactic reactions. Tranexamic acid is cheaper out the best re-gimen of administration is still controversial. We have undertaken arandomized study to examine prophylactic administration of~tranexamic acid (Transamin) in eighty patients submi tted to primary coronary artery bypass graft operation with cardiopulmonary bypass. In one group, 39 patients recei ved 4g of tranexamic acid di vided in 2 hal ves: the first half given before sternotomy and the other half in the priming of the cardiopulmonary bypass circuito The other group of 41 patients was used as contraIs and received only saline solution (placebo). Both groups were comparable in alI demographic variables. The tranexamic acid group had asignificantly higher number of distal anastomoses. Our results, showed that tranexamic acid group bled 30% less than the placebo group (p=O, 013). However we could not find significant reduction in use of blood products ar in the number of transfused patients. Analyzing the complications (such as myocardial infarction, renal failure ar stroke) we also could not find any statistical difference, between both groups. In conclusion, 4gof the tranexamic acid given prophylacticly reduced postoperative bleeding after primary coronary artery bypass operation without increasing the rate of complications / Mestrado / Mestre em Cirurgia

Made available in DSpace on 2019-03-30T00:12:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-07-18 / Background and objectives: Orthotopic liver transplantation (OLT) is a highly complex procedure and can offer also difficult intraoperative control of patients with coagulopathy. This study aimed to evaluate the coagulation process during the intraoperative period in patients with prothrombotic clinical profile undergoing liver transplantation. Methods: The study of the prospective and observational was held at the General Hospital of Fortaleza, which included 19 patients underwent OLT from October 2014 to December 2015, of both sexes and aged from 18 years. Three samples were taken during the procedure to analyze coagulation, fibrinolysis, the presence of heparin and guide the use of antifibrinolytic agents and blood products through the tests of thromboelastometry (EXTEM, APTEM, FIBTEM, INTEM and HEPTEM). The first sample was taken at the beginning of surgery (BS); the second sample at the beginning of the portal vein anastomosis - anhepatic phase (AP); the third sample at the beginning of the biliary shunt - neohepatic phase (NP). In the tests of thromboelastometry was dosed, also in each phase, the hemoglobin. Results: The average hemoglobin was higher BS in relation to AP and NP, with statistical significance (p < 0.05). The parameters of EXTEM (CT and MCF), FIBTEM (A10 and MCF), and INTEM (MCF) analyzed, tended to anticoagulation during the liver transplant, without statistical significance. Since EXTEM parameters as CFT in AP relative to the BS and the alpha angle in the AP and NP with respect to the BS as well as the CFT on NP with respect to the BS and the alpha angle in the NP than the BS and AP tended the anticoagulation along the OLT, with statistical significance (p < 0.05). The ML was significantly higher (p < 0.05) in BS and AP with respect to NP when analyzed by EXTEM and also the BS in relation to the AP and NP, when analyzed by APTEM. There was extension, with statistical significance (p < 0.05), CT in INTEM the NP against the BS and AP and extension of CT in HEPTEM the NP in relation to BS and AP, without statistical significance. As, too, occurred reduction of the TCHEPITEM / CTINTEM the NP in relation to BS and AP, with no statistical significance. The frequency of protamine administration was higher in the NP in relation to BS and AP, with no statistical significance Conclusion: In spite of the patients had clinical profile seen as pro-coagulants, the ROTEM® the analysis indicates that on average, the group tended to anticoagulation independently transfusion of blood products during surgery. The fibrinolysis was more pronounced at the beginning of transplantation and in the sample evaluated, the diagnosis of the presence of heparin and or heparinoids was superior in neohepatic phase being corrected with protamine. Key words: Liver Transplantation; Coagulation Disorders; Thromboelastometry. / Introdução e objetivo: O transplante ortotópico de fígado (TOF) é um procedimento altamente complexo, podendo oferecer também difícil controle intraoperatório dos pacientes que apresentam coagulopatia. O presente estudo teve como objetivo avaliar o processo de coagulação durante o intraoperatório em pacientes com perfil clínico pró-trombótico submetidos a transplante de fígado. Métodos: O estudo do tipo prospectivo e observacional foi realizado no Hospital Geral de Fortaleza-CE. Foram estudados 19 pacientes submetidos ao TOF no período de outubro de 2014 a dezembro de 2015, de ambos os sexos e com idade a partir de 18 anos. Foram coletadas três amostras durante o procedimento (no início da cirurgia ¿ IC, no inicio da anastomose da veia porta na fase anepática ¿ FA e no início da anastomose das vias biliares na fase neohepática - FN) para analisar coagulação, fibrinólise, presença de heparina e guiar o uso de produtos sanguíneos e antifibrinolíticos; através dos ensaios da tromboelastometria (EXTEM, APTEM, FIBTEM, INTEM e HEPTEM) com o uso do ROTEM®. Foi dosada, também, em cada fase, a hemoglobina. Resultados: A média de hemoglobina foi maior na fase IC em relação às fases FA e FN, com significância estatística (p < 0,05). Os parâmetros do EXTEM (CT e MCF), FIBTEM (A10 e MCF), e INTEM (MCF) analisados, apresentaram tendência a hipocoagulação ao longo do transplante hepático, sem significância estatística. Já parâmetros do EXTEM como CFT na FA em relação ao IC e o ângulo alfa nas FA e FN em relação ao IC, assim como, O CFT na FN em relação ao IC e o ângulo alfa na FN em relação ao IC e FA apresentaram tendência a hipocoagulação ao longo do TOF, com significância estatística (p < 0,05). A ML foi significativamente maior (p < 0.05) no IC e FA em relação à FN quando analisado pelo EXTEM e, também, no IC em relação às FA e FN, quando analisado pelo APTEM. Houve prolongamento, com significância estatística (p < 0,05), do CT no INTEM na FN em relação ao IC e FA e prolongamento do CT no HEPTEM na FN em relação ao IC e FA, mas sem significância estatística. Assim como, também, ocorreu redução da relação CTHEPITEM / CTINTEM na FN em relação ao IC e FA, sem significância estatística. A frequência da administração de protamina foi maior na FN em relação ao IC e FA, sem significância estatística Conclusão: Apesar dos pacientes apresentarem perfil clínico tido como pró-coagulantes, a análise do ROTEM® indica que, na média, o grupo apresentou tendência à hipocoagulação, independentemente da transfusão de produtos sanguíneos durante a cirurgia. A fibrinólise foi mais acentuada no início do transplante e na casuística avaliada, o diagnóstico da presença de heparina e ou heparinóides foi superior na fase neohepática, sendo corrigido com protamina. Palavras-chave: Transplante Hepático; Alterações da Coagulação; Tromboelastometria.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2467_1.pdf: 2771788 bytes, checksum: 00240fc2a70cca8a881ac92a974f8453 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O destino dos resíduos sólidos descartados pelas populações vem se tornando um grave problema ambiental e social. Muitas vezes, esses resíduos são descartados nos denominados lixões sem qualquer cuidado ou técnica especial, representando riscos sanitários e ambientais. Uma das soluções para esse problema é a disposição desses resíduos em aterros sanitários. Nestes locais, a água que é drenada pelo aterro, dissolve várias substâncias poluentes, resultando no lixiviado. Esse líquido contém altas concentrações de substâncias orgânicas e inorgânicas, e possui um potencial de poluição que pode ser cerca de 200 vezes maior do que o esgoto doméstico, razão pela qual deve ser tratado antes de ser lançado em cursos de água. De modo geral o lixiviado de aterros de resíduos sólidos, quando submetidos aos sistemas convencionais de tratamentos de efluentes líquidos (lagoa aeróbia, anaeróbia e facultativa), ainda apresenta concentrações de poluentes, principalmente de carga orgânica, que representam riscos de impactos ambientais e riscos à saúde pública. Entre as alternativas para o tratamento de lixiviado de aterros sanitários está o uso da técnica de coagulação/floculação como um tratamento físico-químico. O uso da radiação ionizante tem sido considerada para o tratamento de efluentes desde a década de 1970. A coagulação/floculação é muito utilizada no tratamento de efluentes, sendo empregada para remover altas concentrações de poluentes orgânicos principalmente compostos não-biodegradáveis e metais pesados. A radiação gama, como um tipo de radiação ionizante, baseia-se na oxidação de matéria orgânica e no melhoramento da biodegradabilidade do efluente. Este trabalho utilizou como efluente a ser tratado, os lixiviados gerados no Aterro da Muribeca-PE. Foi determinada a melhor dosagem de hidróxido de cálcio através de três planejamentos fatoriais 24, um para cada cal estudada. Em seguida, após obter as condições otimizadas do processo de coagulação/floculação, esse lixiviado, já pré-tratado, foi submetido ao tratamento com radiação gama. Para tanto foi realizado um novo planejamento fatorial 22. Para análise dos resultados dos planejamentos experimentais fatorial, Diagramas de Pareto com nível de significância de 95% foram empregados para ilustrar as estimativas dos efeitos principais lineares e de segunda ordem, em valor absoluto, dos fatores em relação às variáveis respostas estudadas. A significância dos efeitos foram testadas por análise de variância (ANOVA). Pode-se concluir que a coagulação/floculação com cal pode remover ao mesmo tempo a cor e a turbidez, com valores significativos para o parâmetro cor acima de 80%. Enquanto que os processos conjugados de coagulação/floculação e radiação gama proporcionaram uma maior eficiência na redução da DQO

Antitrombina (AT), uma proteína membro da família dos inibidores de serino proteases, é uma glicoproteína que co-existe em duas isoformas, a e b, que se diferenciam pelo conteúdo de glicosilação e pela afinidade por glicosaminoglicanos (GAG), um grupo de polissacarídeos polisulfatados, dentre as quais se destaca a heparina. AT é ativada quando ligada a GAGs, tornando-se assim capaz de inibir, com alta eficiência, proteases da cascata de coagulação como trombina e fXa. Essas enzimas formam complexos ternários com heparina e AT, sendo cada uma subsequentemente inibidas preferencialmente por um mecanismo de ação distinto: [1] baseado em mudanças conformacionais (fXa), ou pelo [2] mecanismo de ponte (trombina). Adicionalmente, já foi observado que heparina isoladamente pode modular a atividade catalítica de fIIa e fXa. Considerando a falta de dados estruturais a respeito dos efeitos da glicosilação sobre a estrutura e flexibilidade de AT, bem como sobre o reconhecimento heparina-AT, e que as bases moleculares da inibição alostérica de fIIa e fXa por GAGs não é bem compreendida, o presente trabalho visa caracterizar o reconhecimento molecular de heparina por essas proteínas, através de dinâmica molecular (DM). Os resultados obtidos indicam que a heparina interage de forma diferente nas glicoformas de AT devido a uma interferência da glicana ligada à Asn135. Da mesma forma, diferentes arranjos do GAG na superfície de trombina e fXa podem estar relacionadas às suas diferentes susceptibilidades aos mecanismos de ação de heparina, uma vez que sua orientação na superfície de fIIa, mas não fXa, permite uma interação adequada com AT em complexos ternários. Nesse contexto, foi observado, durante as simulações, que heparina inibiu alostericamente trombina e fXa, promovendo mudanças na conformação da tríade catalítica das proteases, e ativou AT, promovendo rearranjos intramoleculares entre seus elementos de estrutura secundária. Em ambos os casos, as vias de transmissão de sinal associadas a essas mudanças de atividade foram traçadas pela primeira vez nesse trabalho. De forma geral, os resultados obtidos conferem novas evidências de que a glicosilação tem um papel crucial na ativação diferencial de a- e b-AT por heparina, e que a orientação de GAGs na superfície de trombina e fXa é o que determina o mecanismo de sua modulação por heparina. / Antithrombin (AT), a member of the serpin protease inhibitors family, is a glycoprotein that co-exists in two isoforms, a and b, which differ in their amount of glycosylation and affinity for glycosaminoglycans (GAG), a group of sulphated polysaccharides, as heparin. AT is activated when bound to GAGs, becoming capable to inhibit coagulation cascade serine proteases like thrombin and fXa. Such enzymes form ternary complexes with heparin and AT, being subsequently inhibited by two distinct mechanisms of action: [1] the conformational change-based mechanism or the [2] bridge mechanism. In addition, heparin binding itself was also observed to modulate the catalytic activity of both fIIa and fXa. Considering the lack of structural information regarding the effect of glycosylation over the structure and flexibility of AT, as well as in heparin-AT recognition, and that the molecular basis of the allosteric inhibition of fIIa and fXa, promoted by such GAG, is not fully understood, the current work intends to characterize the molecular recognition of heparin by such proteins through molecular dynamics (MD) simulations. The obtained results indicate that heparin binds differently on AT glycoforms due to an interference of Asn135-linked glycan. As well, distinct arrangements of the polysaccharide on the surface of thrombin and fXa may be related to their diverse susceptibilities to heparin mechanisms of action, as heparin orientation observed on the surface of fIIa, but not fXa, allows for an adequate long chain heparin binding to AT in ternary complexes. In this context, heparin was observed to allosterically inhibit thrombin and fXa by promoting changes in the proteases catalytic triad conformation, but to activate AT by promoting intramolecular rearrangements on its secondary structure elements. In both cases, the signal transmission pathways associated with such activity changes were traced by the present work for the first time. Altogether, the obtained results provide new evidences that glycosylation play a central role on the differential activation of a- and b-AT by heparin, and that GAGs orientation on the surface of thrombin and fXa determine the mechanism of their modulation by heparin.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:54:37Z : No. of bitstreams: 1 schiller_ss_me_botfm.pdf: 1300643 bytes, checksum: 5da313fa7cb803ecb1619240b07b9fb7 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / Universidade Estadual de Maringa / A hemofilia é uma doença hemorrágica hereditária, relacionada ao cromossomo X, caracterizada pela deficiência de fator VIII (hemofilia A) ou fator IX (hemofilia B). As hemofilias caracterizam-se clinicamente pelo aparecimento de sangramentos e manifestações hemorrágicas que acontecem sem associação com traumas evidentes. O acompanhamento de um paciente hemofílico implica uma série de providências, além da terapêutica de substituição feita com produtos derivados do sangue que contém o fator deficiente, VIII ou IX. Atualmente, a complicação mais temida secundária ao tratamento de reposição dos hemofílicos é o aparecimento de anticorpos neutralizantes que se ligam a epítopos do fator VIII responsáveis pela formação do complexo protrombinase, causando impacto tanto no sucesso quanto no custo do tratamento destes pacientes. Os riscos para o desenvolvimento desses anticorpos são multifatorias e envolvem fatores genéticos e ambientais. Dentre eles, parecem estar implicados a mutação genética para o fator VIII, alelos do sistema HLA, genes reguladores da produção de citocinas, o tipo e severidade da hemofilia, etnia e história familiar de presença do inibidor, idade do primeiro tratamento, modo de administração do tratamento e o tipo de concentrado de fator utilizado. Em pacientes com inibidores neutralizantes, terapias alternativas são necessárias, como uso de concentrado de complexo protrombínico ativado ou fator VII recombinante ativado. A análise laboratorial é de vital importância para o diagnóstico das hemofilias e para a escolha correta do tratamento a ser utilizado. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi disponibilizar no Hemocentro Regional de Maringá, exames de triagem e diagnóstico das hemofilias, bem como a pesquisa e dosagem de inibidores de fator VIII e IX. Para a padronização e validação das técnicas laboratoriais foram coletadas... / Haemophilia is a inherited hemorrhagia disorder, related to the X chromosome, characterized by the deficiency of factor VIII (haemophilia A) or factor IX (haemophilia B). The haemophilias are clinically characterized by bleeding and hemorrhagic manifestations appearance which happen without evident traumatism association. The attendance of a haemophilic patient involves a series of providences, besides the replacement therapy with blood derived products which contain the deficient factor, VIII or IX. At present, the most feared complication secondary to the haemophilic replacement treatment is the appearing of neutralizing antibodies that binds to factor VIII epitopes responsible for the prothrmonbinase formation, causing impact either in the success or in the cost of these patients treatment. The risks of development these antibodies are multifactorials involving genetic and environmental factors. Among them, it seems to be implicated factor VIII genetic mutation, HLA system alleles, cytokine production regulating genes, haemophilia s type and severity, ethnicity and family history of inhibitors presence, age of first treatment, mode of treatment administration and type of factor concentrate used. In patients with neutralizing inhibitors, alternative therapies are necessary such as the use of activated prothrombin complex concentrate or activated recombinant factor VII. The laboratory analysis is essential for the haemophilias diagnosis and for the connect choise of treatment to be used. This way, the purpose of this study was to provide to the Hemocentro Regional de Maringá, haemophilia s screening and diagnosis assays, as well as the screening and determination of factor VIII and IX inhibitors. For the standardization and validation of the laboratory technics donors blood samples from the Hemocentro Regional de Maringá were collected in order to perform... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Izolete Aparecida Thomazini Santos / Banca: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Tatiana Takahashi Higa / Resumo: A hemofilia é uma doença hemorrágica hereditária, relacionada ao cromossomo X, caracterizada pela deficiência de fator VIII (hemofilia A) ou fator IX (hemofilia B). As hemofilias caracterizam-se clinicamente pelo aparecimento de sangramentos e manifestações hemorrágicas que acontecem sem associação com traumas evidentes. O acompanhamento de um paciente hemofílico implica uma série de providências, além da terapêutica de substituição feita com produtos derivados do sangue que contém o fator deficiente, VIII ou IX. Atualmente, a complicação mais temida secundária ao tratamento de reposição dos hemofílicos é o aparecimento de anticorpos neutralizantes que se ligam a epítopos do fator VIII responsáveis pela formação do complexo protrombinase, causando impacto tanto no sucesso quanto no custo do tratamento destes pacientes. Os riscos para o desenvolvimento desses anticorpos são multifatorias e envolvem fatores genéticos e ambientais. Dentre eles, parecem estar implicados a mutação genética para o fator VIII, alelos do sistema HLA, genes reguladores da produção de citocinas, o tipo e severidade da hemofilia, etnia e história familiar de presença do inibidor, idade do primeiro tratamento, modo de administração do tratamento e o tipo de concentrado de fator utilizado. Em pacientes com inibidores neutralizantes, terapias alternativas são necessárias, como uso de concentrado de complexo protrombínico ativado ou fator VII recombinante ativado. A análise laboratorial é de vital importância para o diagnóstico das hemofilias e para a escolha correta do tratamento a ser utilizado. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi disponibilizar no Hemocentro Regional de Maringá, exames de triagem e diagnóstico das hemofilias, bem como a pesquisa e dosagem de inibidores de fator VIII e IX. Para a padronização e validação das técnicas laboratoriais foram coletadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Haemophilia is a inherited hemorrhagia disorder, related to the X chromosome, characterized by the deficiency of factor VIII (haemophilia A) or factor IX (haemophilia B). The haemophilias are clinically characterized by bleeding and hemorrhagic manifestations appearance which happen without evident traumatism association. The attendance of a haemophilic patient involves a series of providences, besides the replacement therapy with blood derived products which contain the deficient factor, VIII or IX. At present, the most feared complication secondary to the haemophilic replacement treatment is the appearing of neutralizing antibodies that binds to factor VIII epitopes responsible for the prothrmonbinase formation, causing impact either in the success or in the cost of these patients treatment. The risks of development these antibodies are multifactorials involving genetic and environmental factors. Among them, it seems to be implicated factor VIII genetic mutation, HLA system alleles, cytokine production regulating genes, haemophilia s type and severity, ethnicity and family history of inhibitors presence, age of first treatment, mode of treatment administration and type of factor concentrate used. In patients with neutralizing inhibitors, alternative therapies are necessary such as the use of activated prothrombin complex concentrate or activated recombinant factor VII. The laboratory analysis is essential for the haemophilias diagnosis and for the connect choise of treatment to be used. This way, the purpose of this study was to provide to the Hemocentro Regional de Maringá, haemophilia s screening and diagnosis assays, as well as the screening and determination of factor VIII and IX inhibitors. For the standardization and validation of the laboratory technics donors blood samples from the Hemocentro Regional de Maringá were collected in order to perform... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Antitrombina (AT), uma proteína membro da família dos inibidores de serino proteases, é uma glicoproteína que co-existe em duas isoformas, a e b, que se diferenciam pelo conteúdo de glicosilação e pela afinidade por glicosaminoglicanos (GAG), um grupo de polissacarídeos polisulfatados, dentre as quais se destaca a heparina. AT é ativada quando ligada a GAGs, tornando-se assim capaz de inibir, com alta eficiência, proteases da cascata de coagulação como trombina e fXa. Essas enzimas formam complexos ternários com heparina e AT, sendo cada uma subsequentemente inibidas preferencialmente por um mecanismo de ação distinto: [1] baseado em mudanças conformacionais (fXa), ou pelo [2] mecanismo de ponte (trombina). Adicionalmente, já foi observado que heparina isoladamente pode modular a atividade catalítica de fIIa e fXa. Considerando a falta de dados estruturais a respeito dos efeitos da glicosilação sobre a estrutura e flexibilidade de AT, bem como sobre o reconhecimento heparina-AT, e que as bases moleculares da inibição alostérica de fIIa e fXa por GAGs não é bem compreendida, o presente trabalho visa caracterizar o reconhecimento molecular de heparina por essas proteínas, através de dinâmica molecular (DM). Os resultados obtidos indicam que a heparina interage de forma diferente nas glicoformas de AT devido a uma interferência da glicana ligada à Asn135. Da mesma forma, diferentes arranjos do GAG na superfície de trombina e fXa podem estar relacionadas às suas diferentes susceptibilidades aos mecanismos de ação de heparina, uma vez que sua orientação na superfície de fIIa, mas não fXa, permite uma interação adequada com AT em complexos ternários. Nesse contexto, foi observado, durante as simulações, que heparina inibiu alostericamente trombina e fXa, promovendo mudanças na conformação da tríade catalítica das proteases, e ativou AT, promovendo rearranjos intramoleculares entre seus elementos de estrutura secundária. Em ambos os casos, as vias de transmissão de sinal associadas a essas mudanças de atividade foram traçadas pela primeira vez nesse trabalho. De forma geral, os resultados obtidos conferem novas evidências de que a glicosilação tem um papel crucial na ativação diferencial de a- e b-AT por heparina, e que a orientação de GAGs na superfície de trombina e fXa é o que determina o mecanismo de sua modulação por heparina. / Antithrombin (AT), a member of the serpin protease inhibitors family, is a glycoprotein that co-exists in two isoforms, a and b, which differ in their amount of glycosylation and affinity for glycosaminoglycans (GAG), a group of sulphated polysaccharides, as heparin. AT is activated when bound to GAGs, becoming capable to inhibit coagulation cascade serine proteases like thrombin and fXa. Such enzymes form ternary complexes with heparin and AT, being subsequently inhibited by two distinct mechanisms of action: [1] the conformational change-based mechanism or the [2] bridge mechanism. In addition, heparin binding itself was also observed to modulate the catalytic activity of both fIIa and fXa. Considering the lack of structural information regarding the effect of glycosylation over the structure and flexibility of AT, as well as in heparin-AT recognition, and that the molecular basis of the allosteric inhibition of fIIa and fXa, promoted by such GAG, is not fully understood, the current work intends to characterize the molecular recognition of heparin by such proteins through molecular dynamics (MD) simulations. The obtained results indicate that heparin binds differently on AT glycoforms due to an interference of Asn135-linked glycan. As well, distinct arrangements of the polysaccharide on the surface of thrombin and fXa may be related to their diverse susceptibilities to heparin mechanisms of action, as heparin orientation observed on the surface of fIIa, but not fXa, allows for an adequate long chain heparin binding to AT in ternary complexes. In this context, heparin was observed to allosterically inhibit thrombin and fXa by promoting changes in the proteases catalytic triad conformation, but to activate AT by promoting intramolecular rearrangements on its secondary structure elements. In both cases, the signal transmission pathways associated with such activity changes were traced by the present work for the first time. Altogether, the obtained results provide new evidences that glycosylation play a central role on the differential activation of a- and b-AT by heparin, and that GAGs orientation on the surface of thrombin and fXa determine the mechanism of their modulation by heparin.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T03:43:01Z No. of bitstreams: 1 2008_KarimeBicasRochaIannini.pdf: 3591521 bytes, checksum: d0c696cfb74ae3f2e258a100c055f39e (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-01T22:10:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_KarimeBicasRochaIannini.pdf: 3591521 bytes, checksum: d0c696cfb74ae3f2e258a100c055f39e (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-01T22:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_KarimeBicasRochaIannini.pdf: 3591521 bytes, checksum: d0c696cfb74ae3f2e258a100c055f39e (MD5) Previous issue date: 2008-12-15 / Relatos clínicos descrevem a existência de alterações do sistema fibrinolítico em pacientes com doenças da tireóide. Apesar de alguns resultados controversos, em geral, relata-se um risco elevado de sangramento em pacientes com hipotireoidismo e de trombose no hipertireoidismo. O papel do hormônio tireoideano (T3) na capacidade fibrinolítica ainda não está completamente estabelecido. O inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-1) – inibidor fisiológico dos ativadores de plasminogênio (tipo tecidual e uroquinase) – é um importante inibidor do sistema fibrinolítico. Consequentemente, altas concentrações plasmáticos de PAI-1 correlacionam-se com doenças trombóticas, enquanto baixas concentrações correlacionam-se com a tendência ao sangramento. Considerando que o T3, ao se ligar ao receptor do hormônio tireoideano (TR), regula a transcrição de vários genes, o objetivo desse estudo é o de analisar o efeito do T3 sobre a atividade transcricional do promotor do gene PAI-1. Foi comparada a ação dos receptores do hormônio tireoideano (TRα e TRβ) sobre a atividade transcricional do PAI-1 em células pró-monocíticas humanas (U937) e em células mesangiais humanas. Os resultados revelaram que o promotor do PAI-1 é significativamente estimulado pelo TR não-ligado e que o tratamento com T3 diminuiu a atividade do promotor de uma maneira dose-dependente. Em células U937, o tratamento com T3 (10-7 M) em células transfectadas com TRα e TRβ inibiram o promotor do PAI-1 em aproximadamente 70% e 40%, respectivamente, com um IC50 de 3,07 x 10-10 M (TRα) e 3,81 x 10-10 M (TRβ). Além disso, o T3 reverteu a ativação do promotor do PAI-1 causado pelo éster de forbol PMA (12-miristato 13-acetato forbol) por meio da repressão direta do promotor do PAI-1 pelo TR ligado. Foi demonstrado que essa regulação depende do domínio de ligação ao DNA (DBD) do TR. Foram identificados dois possíveis elementos responsivos ao TR no promotor do PAI-1 entre o nucleotídeo -422 e -389, que contém uma seqüência TTTGGG, e entre o nucleotídeo -346 e -286, que contêm uma seqüência DR-4. O TR se liga como heterodímero às seqüências de DNA citadas. Além disso, a regulação negativa exercida pelo T3 requer uma superfície intacta de ligação a co-ativadores no TR. Esse efeito parece guardar relação com as anormalidades da coagulação observadas nos pacientes com disfunções da tireóide. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Various coagulation abnormalities occur in patients with thyroid hormones (TH) disorders. Patients with hypothyroidism are particularly at risk of hemorrhage. In contrast, in hyperthyroidism, there is a tendency to thrombotic complications development. However, the role of TH in the fibrinolytic capacity is not well established, and published data remain conflicting. Plasminogen activator inhibitor (PAI)-1, a physiological inhibitor of plasminogen activators (urokinase and tissue types), is an important repressor of the fibrinolytic system. Consequently, high plasma levels of PAI-1 correlate to thrombotic disease, while low levels implies a bleeding tendency. In this study, we investigated whether PAI-1 gene expression is directly controlled by TH levels and whether the gene expression control depends on recruitment of cofactors. We compared the action of thyroid hormone receptors (TRα and TRβ) in regulating the activity of human PAI-1 promoter through transfections in human mesangial cells and human leukemic monocyte lymphoma cells (U937). Our results showed that the human PAI-1 promoter is significantly stimulated by unliganded TRs and TH treatment decreased the PAI-1 promoter activity in a hormone-dependent manner. In U937 cells, the addition of T3 (10-7M) in cells co-transfected with TRα and TRβ inhibit PAI-1 promoter in almost 70% and 40%, respectively, with an IC50 of 3,07 x 10-10 M (TRα) and 3,81 x 10-10 M (TRβ). In addition, we found that T3 reverses the activation of the PAI-1 promoter caused by phorbol 12-myristate 13-acetate through the direct repression of the PAI-1 promoter by liganded TR. Our results show that this regulation requires de DNA-binding domain of the TR. We shower two possible TR inhibitory elements in the PAI-1 promoter between –346 and – 286, a DR-4 sequence, and -422 and – 389, a TTTGGG sequence. Furthermore, the negative regulation exerted by TR requires an intact co-activator-binding surface. This effect may be important to explain the coagulation abnormlities observed in patients with thyroid hormones disorders.

Antitrombina (AT), uma proteína membro da família dos inibidores de serino proteases, é uma glicoproteína que co-existe em duas isoformas, a e b, que se diferenciam pelo conteúdo de glicosilação e pela afinidade por glicosaminoglicanos (GAG), um grupo de polissacarídeos polisulfatados, dentre as quais se destaca a heparina. AT é ativada quando ligada a GAGs, tornando-se assim capaz de inibir, com alta eficiência, proteases da cascata de coagulação como trombina e fXa. Essas enzimas formam complexos ternários com heparina e AT, sendo cada uma subsequentemente inibidas preferencialmente por um mecanismo de ação distinto: [1] baseado em mudanças conformacionais (fXa), ou pelo [2] mecanismo de ponte (trombina). Adicionalmente, já foi observado que heparina isoladamente pode modular a atividade catalítica de fIIa e fXa. Considerando a falta de dados estruturais a respeito dos efeitos da glicosilação sobre a estrutura e flexibilidade de AT, bem como sobre o reconhecimento heparina-AT, e que as bases moleculares da inibição alostérica de fIIa e fXa por GAGs não é bem compreendida, o presente trabalho visa caracterizar o reconhecimento molecular de heparina por essas proteínas, através de dinâmica molecular (DM). Os resultados obtidos indicam que a heparina interage de forma diferente nas glicoformas de AT devido a uma interferência da glicana ligada à Asn135. Da mesma forma, diferentes arranjos do GAG na superfície de trombina e fXa podem estar relacionadas às suas diferentes susceptibilidades aos mecanismos de ação de heparina, uma vez que sua orientação na superfície de fIIa, mas não fXa, permite uma interação adequada com AT em complexos ternários. Nesse contexto, foi observado, durante as simulações, que heparina inibiu alostericamente trombina e fXa, promovendo mudanças na conformação da tríade catalítica das proteases, e ativou AT, promovendo rearranjos intramoleculares entre seus elementos de estrutura secundária. Em ambos os casos, as vias de transmissão de sinal associadas a essas mudanças de atividade foram traçadas pela primeira vez nesse trabalho. De forma geral, os resultados obtidos conferem novas evidências de que a glicosilação tem um papel crucial na ativação diferencial de a- e b-AT por heparina, e que a orientação de GAGs na superfície de trombina e fXa é o que determina o mecanismo de sua modulação por heparina. / Antithrombin (AT), a member of the serpin protease inhibitors family, is a glycoprotein that co-exists in two isoforms, a and b, which differ in their amount of glycosylation and affinity for glycosaminoglycans (GAG), a group of sulphated polysaccharides, as heparin. AT is activated when bound to GAGs, becoming capable to inhibit coagulation cascade serine proteases like thrombin and fXa. Such enzymes form ternary complexes with heparin and AT, being subsequently inhibited by two distinct mechanisms of action: [1] the conformational change-based mechanism or the [2] bridge mechanism. In addition, heparin binding itself was also observed to modulate the catalytic activity of both fIIa and fXa. Considering the lack of structural information regarding the effect of glycosylation over the structure and flexibility of AT, as well as in heparin-AT recognition, and that the molecular basis of the allosteric inhibition of fIIa and fXa, promoted by such GAG, is not fully understood, the current work intends to characterize the molecular recognition of heparin by such proteins through molecular dynamics (MD) simulations. The obtained results indicate that heparin binds differently on AT glycoforms due to an interference of Asn135-linked glycan. As well, distinct arrangements of the polysaccharide on the surface of thrombin and fXa may be related to their diverse susceptibilities to heparin mechanisms of action, as heparin orientation observed on the surface of fIIa, but not fXa, allows for an adequate long chain heparin binding to AT in ternary complexes. In this context, heparin was observed to allosterically inhibit thrombin and fXa by promoting changes in the proteases catalytic triad conformation, but to activate AT by promoting intramolecular rearrangements on its secondary structure elements. In both cases, the signal transmission pathways associated with such activity changes were traced by the present work for the first time. Altogether, the obtained results provide new evidences that glycosylation play a central role on the differential activation of a- and b-AT by heparin, and that GAGs orientation on the surface of thrombin and fXa determine the mechanism of their modulation by heparin.

Orientador: Joyce Maria Annichino Bizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T10:40:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_SamiraLauarde_M.pdf: 3056331 bytes, checksum: 92bcf11fc11441be9622f1aadd165094 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Não informado / Abstract: Although clinically important abnormalities of hemostasis are unusual in patients with thyroid disease, coagulation and fibrinolytic systems are, nonetheless affected by hormone alterations. Patients with hypothyroidism may present abnormal bleeding. The precise nature of the "ohemostatic defect was explained by a decrease in several coagulation factors, an increase in fibrinolytic activity and an abnormal platelet adhesiveness. If the hypercoagulable state contributes to increase the risk of thromboembolic complications in hypothyroid patients, the relatively increased fibrinolytic activity in such patients probably has a protective role. Although precise statistics are not available, thromboembolic disorders do not seem to be common in patients with hyperthyroidism. These' patients showed a specific elevation of the factors VIII and von Willebrand and a reduction in plasma fibrinolytic activity. Maybe, hyperdynamic circulation may counterbalance these potential hypercoagulable changes. One of the hypothesis for elevated anti-hemophilic factor activity in hyperthyroidism is based on the fact that epinephrine infusion in normal subjects is followed by elevated levels of hemostasis changes that have been reported and not yet adequately explained. The aim of this study was to evaluate components of contact phase, coagulation, natural factor VIII activity, and hyperthyroid subjects which have an increased sensitivity to the etfects of cathecolamines. An experimental model with dogs before and after hypothyroidism induction was performed in order to study the importance of the f3 adrenergic receptors in levels of factor VIII and von Willebrand. During the clinic phase ofthis study, we analyzed 33 untreated hyperthyroid patients (mean age 39:!:13 years old), 20 hypothyroid patients (mean age 23:t6 years). Ali patients were female. Twenty nine female euthyroid subjects (mean age 48:!:18 years) were the control Group. The following was analyzed: activated Partial Thromboplastin Time (APTT), Prothrombin Time (TP), Thrombin Time (TT), Factors V, Vil, VIll , XI and XII, Fibrinogen, Protein C (PC), Protein S (PS), Cl-inhibitor (C 1), alpha 2-macroglobulin (alpha-2), prealbumin and von Willebrand factor, Plasmatic prekallikrein (PK), triiodothyronine (T3 ), tetraiodothyronine (T 4) total and tree, TSH and TSHus. Only ~actor XII and the a. 2-macroglobulin were decreased during the contact phase in hypothyroid patients. We do not believe that tlfts decrease in factor XII levels is due to the reduction on protein synthesis. We have determined other coagulation factors; they are more sensitive to alterations in hepatic proteins synthesis, like factor Vil and PK. They were not altered in hypothyroid patients. The decrease of a. 2 macroglobulin in hypothyroid patients could represent a regulatory mechanism against fybrinolysis. Both factor VIII and von Willebrand were increased in hyperthyroid patients. These factors were similar in the hypothyroid and the control group. Final common pathway parameters and fibrinogen did not show a significant difference between the three groups...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Medicina