Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Organofosforados y carbamatos son plaguicidas de amplio uso en la agroindustria y en forma doméstica. Su mecanismo de acción se basa en la inhibición de la acetilcolinesterasa, enzima de vital importancia en el funcionamiento normal del sistema nervioso. Un descenso en su actividad puede provocar diferentes manifestaciones neurológicas como: debilidad muscular, convulsiones y mortalidad. De todos los animales afectados por estos compuestos, las aves son uno de los grupos más susceptibles a su toxicidad. El objetivo de este estudio fue investigar la posible exposición de la avifauna a pesticidas inhibidores de colinesterasas usando al jilguero (Carduelis barbatus) como especie indicadora. El estudio fue realizado en Chile central, en una zona con aplicación de plaguicidas y en un sitio libre de fumigaciones. Los eventos de aplicación de plaguicida no causaron diferencias significativas en la actividad promedio de colinesterasa plasmática, cuando se comparó las muestras sanguíneas tomadas previo a la aplicación con las posteriores (p > 0,05). Sin embargo, los niveles promedio de actividad enzimática de los jilgueros capturados en el sitio de aplicación fueron significativamente más bajos (p < 0,05) que los del sitio libre de fumigación.

Durante esta tesis se trabajó con seis especies vegetales entre quince recolectadas en la zona del Salitral de la Vidriera, con pocos o ningún antecedente de estudios fitoquímicos o de actividad biológica. Los extractos etanólicos de estas especies presentaron actividad inhibitoria de las enzimas acetilcolinesterasa (ACE) y/o butirilcolinesterasa (BuCE) de muy buena a moderada. Llevando a cabo un fraccionamiento bioguiado fue posible el aislamiento e identificación de los metabolitos secundarios responsables de la actividad. A partir de los extractos de H. jamesonii y H. tubispathus (Amaryllidaceae), fue posible la identificación de quince alcaloides mediante CG-EM. De H. tubispathus se logró además, el aislamiento de tres alcaloides mayoritarios: hippeastidina (6), licorina (8), y 3-O-demetilhippeastidina (16), constituyendo el primer reporte de datos espectroscópicos completo de los compuestos 6 y 16. El alcaloide aislado, hippeastidina, resultó ser el componente más activo de H. tubispathus. De las quenopodiáceas estudiadas, H. olivascens y A. patagonica, se aislaron ácidos grasos en grandes cantidades de los subextractos menos polares, siendo el ácido palmítico (17) el mayoritario. De H. olivascens también fue posible el aislamiento del alcaloide salsolina (20), de la fracción diclorometánica, y del osmolito glicinbetaína (21) de la fracción más polar. Por otra parte, la fracción más activa de A. patagónica resultó contener fosfatidilcolinas, compuestos con antecedentes de actividades relacionadas con la patología de la EA. De la especie endémica F. bidentis (Asteraceae) se obtuvo 3-sulfato de 6- metoxikaempferol (22) a partir del subextracto acuoso que había mostrado la mejor inhibición de ACE. Este flavonoide sulfatado, cuya caracterización espectroscópica se presenta en este trabajo por primera vez, fue sometido a modificaciones químicas sencillas obteniendo los derivados 23-25. Si bien no se obtuvo una mejora en la actividad de 22, se determinó la importancia del grupo sulfato en la inhibición de la enzima. Por último, los flavonoides activos luteolina (26) y apigenina (27) fueron aislados de la especie L. salsa (Verbenaceae) mediante fraccionamiento bioguiado de su extracto etanólico. Su presencia en esta especie es reportada en este trabajo por primera vez. / Six species, from fifteen collected in Salitral de la Vidriera area, were selected and studied in this thesis. All of them, with few or none previous phytochemical or biological activity records in the literature. Ethanolic extracts from this species showed high to moderate acetyl- (AChE) and/or butyryl-cholinesterase (BuChE) inhibitory activity. The isolation and identification of the active metabolites were achieved by bioassay-guided fractionation. From ethanolic extracts of H. jamesonii and H. tubispathus (Amaryllidaceae) fifteen alkaloids were identified using GC-MS. In addition, major alkaloids from H. tubispathus were isolated: hippeastidine (6), lycorine (8) and 3-Odemethylhippeastidine (16). Alkaloids 6 and 16 were completely characterized by spectroscopic methods for the first time. Hippeastidine (6), was found to be the most active constituent in H. tubispathus. From the studied chenopodiaceaes, H. olivascens and A. patagonica, fatty acids were isolated in large quantities, with palmitic acid (17) as the major one. In addition, from H. olivascens, salsoline (20), an alkaloid, was obtained from its dichloromethane subextract and glycinbetaine (21), an osmolyte, from its more polar fraction. Moreover, the most active fraction from A. patagonica contained phosphatidylcholines, compounds with history in AD pathology related activities. From the endemic species F. bidentis (Asteraceae), the flavonoid 6- methoxykaempherol-3-sulfate (22) was obtained from aqueous sub-extract. This sulfated flavonoid, whose spectroscopic data is presented here for the first time, was subjected to simple chemical modifications leading to derivatives 23-25. Even though this modification did not improve the activity elicited by 22, the importance of sulfate group in the enzyme inhibition was determined. Finally, active flavonoids luteolin (26) and apigenin (27) were isolated from Lippia salsa (Verbenaceae) by bioassay-guided fractionation of its ethanolic extract. Its presence in this species is reported in this work for the first time.

Se realizó la determinación de la actividad de la colinesterasa sérica en 134 muestras biológicas (109 muestras de agricultores que trabajan con pesticidas inhibidores de la colinesterasa y 25 de un grupo de control (grupo no expuesto a los pesticidas)) y el análisis toxicológico en 300 muestras de productos vegetales [coliflor (Brassica oleracea var. botrytis), tomate (Lycopersicon esculentum), apio (Apium graveolens), lechuga (Lactuca sativa L.), maracuyá (Passiflora edulis)] procedentes de la localidad de Carapongo, distrito de Lurigancho - Chosica, Lima - Perú. La cuantificación de la actividad de la colinesterasa sérica se realizó empleando la técnica de Ellman modificada mediante espectrofotometría de luz ultra violeta. El análisis de plaguicidas se realizó por cromatografía en capa fina (CCF). El valor promedio de actividad de la colinesterasa sérica en los agricultores que trabajan con los pesticidas fue de 1827,18 mU/mL D.E. +/- 269,99 (valor máximo: 2540,09 mU/mL; valor mínimo: 1294,54 mU/mL) y en el grupo control fue de 2263,92 mU/mL D.E. +/- 216,40 (valor máximo: 2771,01 mU/mL; valor mínimo: 1959,30 mU/mL); Valor normal de actividad de la colinesterasa sérica: 1800 – 3600 mU/mL. 55,05 % de los agricultores que trabajan con los pesticidas presentaron valores por debajo de los niveles normales de actividad de la colinesterasa sérica (58,89 % de los varones y el 36,84 % de las mujeres). El grupo de agricultores cuyos tiempos de trabajo es superior a los 40 años era el que tenía el nivel promedio de actividad de colinesterasa sérica más bajo (1596,99 mU/mL). Los plaguicidas detectados en las muestras de productos vegetales antes de la cosecha fueron: metamidofos (24,67 %), clorpirifos (15,33 %), metomilo (14,67 %) y dimetoato (8,67 %), también se encontraron las combinaciones: metamidofos/metomilo (11,33 %) dimetoato/metomilo (6,67 %), metamidofos/clorpirifos (11,99 %), metamidofos/dimetoato (6,67 %). / -- The determination of the activity of seric cholinesterase in 134 biological samples (109 samples of farmers that work with cholinesterase inhibitor pesticides and 25 of a control group (non exposed group to pesticides)) and the toxicological analysis in 300 samples of vegetable products [cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis), tomato (Lycopersicon esculentum), celery (Apium graveolens), lettuce (Lactuca sativa L.), passion fruit (Passiflora edulis)] were realized in Carapongo, district of Lurigancho – Chosica, Lima - Peru. Quantification of activity of seric cholinesterase was realized applying the Ellman modified technique by ultra violet light spectrophotometry. The pesticide analysis was realized by thin layer chromatography (TLC). The average value of activity of seric cholinesterase in farmers that work with the pesticides was 1827,18 mU/mL D.E. +/- 269,99 (maximun value: 2540,09 mU/mL; minimum value: 1294,54 mU/mL) and in the control group was 2263,92 mU/mL D.E. +/- 216,40 (maximun value: 2771,01 mU/mL; minimum value: 1959,30 mU/mL); Normal level of activity of seric cholinesterase: 1800 – 3600 mU/mL. 55,05 % of the group of farmers that work with the pesticides presented values under normal levels of activity of seric cholinesterase (58,89 % of men and 36,84 % of women). The group of farmers that have been working for more than 40 years had the lowest average level of activity of seric cholinesterase (1596,99 mU/mL). The pesticides detected in vegetable samples before harvest were: methamidophos (24,67 %), chlorpyrifos (15,33 %) methomyl (14,67 %) and dimethoate (8,67 %), also the combinations: methamidophos/methomyl (11,33 %), dimetoathe/methomyl (6,67 %), methamidophos/chlorpyrifos (11,99 %) methamidophos/dimethoate (6,67 %).

Se realizó la determinación de la actividad de la colinesterasa sérica en 134 muestras biológicas (109 muestras de agricultores que trabajan con pesticidas inhibidores de la colinesterasa y 25 de un grupo de control (grupo no expuesto a los pesticidas)) y el análisis toxicológico en 300 muestras de productos vegetales [coliflor (Brassica oleracea var. botrytis), tomate (Lycopersicon esculentum), apio (Apium graveolens), lechuga (Lactuca sativa L.), maracuyá (Passiflora edulis)] procedentes de la localidad de Carapongo, distrito de Lurigancho - Chosica, Lima - Perú. La cuantificación de la actividad de la colinesterasa sérica se realizó empleando la técnica de Ellman modificada mediante espectrofotometría de luz ultra violeta. El análisis de plaguicidas se realizó por cromatografía en capa fina (CCF). El valor promedio de actividad de la colinesterasa sérica en los agricultores que trabajan con los pesticidas fue de 1827,18 mU/mL D.E. +/- 269,99 (valor máximo: 2540,09 mU/mL; valor mínimo: 1294,54 mU/mL) y en el grupo control fue de 2263,92 mU/mL D.E. +/- 216,40 (valor máximo: 2771,01 mU/mL; valor mínimo: 1959,30 mU/mL); Valor normal de actividad de la colinesterasa sérica: 1800 – 3600 mU/mL. 55,05 % de los agricultores que trabajan con los pesticidas presentaron valores por debajo de los niveles normales de actividad de la colinesterasa sérica (58,89 % de los varones y el 36,84 % de las mujeres). El grupo de agricultores cuyos tiempos de trabajo es superior a los 40 años era el que tenía el nivel promedio de actividad de colinesterasa sérica más bajo (1596,99 mU/mL). Los plaguicidas detectados en las muestras de productos vegetales antes de la cosecha fueron: metamidofos (24,67 %), clorpirifos (15,33 %), metomilo (14,67 %) y dimetoato (8,67 %), también se encontraron las combinaciones: metamidofos/metomilo (11,33 %) dimetoato/metomilo (6,67 %), metamidofos/clorpirifos (11,99 %), metamidofos/dimetoato (6,67 %). / The determination of the activity of seric cholinesterase in 134 biological samples (109 samples of farmers that work with cholinesterase inhibitor pesticides and 25 of a control group (non exposed group to pesticides)) and the toxicological analysis in 300 samples of vegetable products [cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis), tomato (Lycopersicon esculentum), celery (Apium graveolens), lettuce (Lactuca sativa L.), passion fruit (Passiflora edulis)] were realized in Carapongo, district of Lurigancho – Chosica, Lima - Peru. Quantification of activity of seric cholinesterase was realized applying the Ellman modified technique by ultra violet light spectrophotometry. The pesticide analysis was realized by thin layer chromatography (TLC). The average value of activity of seric cholinesterase in farmers that work with the pesticides was 1827,18 mU/mL D.E. +/- 269,99 (maximun value: 2540,09 mU/mL; minimum value: 1294,54 mU/mL) and in the control group was 2263,92 mU/mL D.E. +/- 216,40 (maximun value: 2771,01 mU/mL; minimum value: 1959,30 mU/mL); Normal level of activity of seric cholinesterase: 1800 – 3600 mU/mL. 55,05 % of the group of farmers that work with the pesticides presented values under normal levels of activity of seric cholinesterase (58,89 % of men and 36,84 % of women). The group of farmers that have been working for more than 40 years had the lowest average level of activity of seric cholinesterase (1596,99 mU/mL). The pesticides detected in vegetable samples before harvest were: methamidophos (24,67 %), chlorpyrifos (15,33 %) methomyl (14,67 %) and dimethoate (8,67 %), also the combinations: methamidophos/methomyl (11,33 %), dimetoathe/methomyl (6,67 %), methamidophos/chlorpyrifos (11,99 %) methamidophos/dimethoate (6,67 %).

Determina las condiciones de aplicación que afectan los niveles de colinesterasa, y que generan un riesgo neurotóxico por el uso de carbamatos y organofosforados a los agricultores de tomate. La técnica que se utiliza es la espectrofotometría. El examen de colinesterasa se realiza a los pacientes expuestos a los insecticidas organofosforados y carbamatos. Se utiliza el método cinético - espectrofotométrico (405 nm a 37°C). Mediante análisis factorial, prueba de Kruskal Wallis y de correlaciones se determina las variables que más afectan los niveles de colinesterasa. Para el análisis neurotoxicologica se aplica el cuestionario Psychologisch Neurologischeò Fragebogen (PNF) a cada uno de los agricultores, lo que nos permite determinar la presencia de alteraciones clínicas, conductuales y neurológicas de los trabajadores expuestos a plaguicidas organofosforados y carbamatos. / Tesis