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Sexagem de embriões bovinos produzidos in vitro com sêmen selecionado por PERCOLL ou SWIM-UP / Sexing in vitro produced bovine embryos with semen selected by PERCOLL or SWIM-UP

Wolf, Caroline Antoniazzi 27 February 2007 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is becoming a current issue in animal reproduction biotechnology due to economical reasons. Predetermining the sex of offspring is one example of PGD. This study aimed to determine the percentage of male and female bovine embryos in vitro produced after oocyte fertilization with Percoll density gradient centrifugation or with self-migration (swim-up) selected semen. In experiment 1, sperm selection was performed by 90%-45% discontinuous Percoll density gradient centrifugation (T1) and swim-up (T2). In experiment 2, along side the discontinuous gradient, a 67.5% continuous density gradient, and centrifugation time of 5 and 10 minutes were used. A total of 4 treatment groups was defined (TI = continuous, 5 minutes, TII = discontinuous, 5 minutes, TIII = continuous, 10 minutes and TIV = discontinuous, 10 minutes). Polymerase chain reaction (PCR) was used to determine the sex of the embryos. T1 (n=185) resulted in 48.65% (n=90) male embryos and 51.35% (n=95) female embryos and T2 (n=142) in 58.45% (n=83) male and 41.55% (n=59) female embryos. In experiment 2, the percentages of male and female embryos obtained in TI (n=93), TII (n=70), TIII (n=82) and TIV (n=82) were 49.46% (n=46) and 50.54% (n=47), 57.14% (n=40) and 42.86% (n=30), 36.59% (n=30) and 63.41% (n=52) and 48.78% (n=40) and 51.22% (n=42), respectively. There was no difference on the percentage of males and females in all treatment groups from experiments 1 and 2 when these were individually compared to the expected percentage of 50% of each sex. There was also no difference in male and female embryo percentage between treatment groups in experiments 1 and 2. / O diagnóstico genético pré-implantação (DGP) vem se destacando na área da biotecnologia da reprodução animal por motivos econômicos. Um exemplo de DGP é a predeterminação do sexo da prole. Neste estudo foi verificada a percentagem de embriões bovinos machos e fêmeas produzidos in vitro após a fertilização de oócitos com sêmen selecionado por centrifugação em gradiente de densidade de Percoll ou por migração ascendente (swim-up). No experimento 1 a seleção espermática foi realizada usando o gradiente descontínuo de Percoll de 90% e 45% (T1) e o swimup (T2). No experimento 2 foi utilizado, além do gradiente descontínuo, um gradiente contínuo de densidade de Percoll de 67,5%, e tempos de centrifugação de 5 e 10 minutos, totalizando 4 tratamentos (TI = contínuo 5 minutos, TII = descontínuo 5 minutos, TIII = contínuo 10 minutos e TIV = descontínuo 10 minutos). A sexagem dos embriões foi realizada através da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). No T1 (n=185) foram obtidos 48,65% (n=90) de embriões masculinos e 51,35% (n=95) de femininos e no T2 (n=142) 58,45% (n=83) foram machos e 41,55% (n=59) fêmeas. No experimento 2, a percentagem de embriões masculinos e femininos no TI (n=93), TII (n=70), TIII (n=82) e TIV (n=82) foi de 49,46% (n=46) e 50,54% (n=47), 57,14% (n=40) e 42,86% (n=30), 36,59% (n=30) e 63,41% (n=52), e 48,78% (n=40) e 51,22% (n=42), respectivamente. Não houve alteração na percentagem de machos e fêmeas nos tratamentos dos experimentos 1 e 2 quando estes tratamentos foram comparados individualmente com a percentagem teoricamente esperada de 50% de cada sexo. Também não houve alteração na percentagem de machos e fêmeas na comparação entre os dois tratamentos do experimento 1 e entre os quatro tratamentos do experimento 2.

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