Orientador: Hermes Pretel / Resumo: O objetivo desse estudo foi realizar a caracterização morfo-fisicoquimica e avaliar a resposta histopatológica e a biodegradação de AH indicados para preenchimento dérmico: DMC-Facial 12,5% (D12) e RennovaFill (RF) e aumento volumétrico de tecido: DMC-Facial 15% (D15) e RennovaLift (RL). A caracterização foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV), espéctroscopia dispersiva de raios X (EDX) e infra vermelha com transformada de Fourier (FT-IR) e reometria dinâmica oscilatória. Para avaliação da resposta histopatológica e da biodegradação foi implantado 0,1 mL de cada AH no plano sub-dérmico do dorso de 25 ratos Hostsman, aleatóriamente distribuidos em 5 grupos (n=5), de acordo com o tempo de implantação dos AH (7, 14, 30, 60 e 120 dias). Um examinador experiente (HP), calibrado e cego para os AHs utilizados analisou os cortes. Modelo loglinear e teste de quiquadrado (χ2) foram utilizados para avaliar a associação entre os AH e a intensidade da resposta histopatológica e biodegradação para p<0,05. A hipótese nula (H0) foi rejeitada pois tanto na caracterização morfo-fisicoquimica quanto na avaliação da resposta histopatológica e da biodegradação mostraram diferenças signficatica entre os Ahs testados. Pode-se concluir que: 1) AH com a mesma indicação clínica diferem tanto nas características morfo-fisicoquimica com na resposta inflamatória provocada e no padrão de biodegradação. 2) O nível de resposta histopatológica depende do AH utilizado. 3) Uma morfologia es... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The aim of this study was to perform the morpho-physicochemical characterization and to evaluate the histopathological response and biodegradation of AH indicated for dermal filling: DMC-Facial 12.5% (D12) and RennovaFill (RF) and tissue lifting: DMC-Facial 15% (D15) and RennovaLift (RL). The characterization was performed by scanning electron microscopy (SEM), X-ray dispersive (EDX) and Fourier transform infra red spectroscopy (FT-IR) and oscillatory dynamic rheometry. To evaluate the histopathological response and biodegradation, 0.1 mL of each HA was implanted in the dorsal subdermal plane of 25 male Hostsman rats, randomly distributed in 5 groups (n = 5), according to the time of implantation of AH: 7, 14, 30, 60 and 120 days). Slides were analyzed by a experienced examiner (HP), calibrated and blinded for the AH used. Loglinear model and chi-square statistical test (χ2) were used to evaluate the association between AH and the intensity of histopathological response and biodegradation for p <0.05. Results: The null hypothesis (H0) was rejected because both the morpho-physicochemically characterization and the histopathological analysis showed significant differences between the tested AHs. It can be concluded that: 1) AH with the same clinical indication differ in the morpho-physicochemical characteristics, in the inflammatory response and in the biodegradation pattern. 2) The level of histopathological response depends on the AH used. 3) A structural morphology characteristic of D12 and D15, formed by chambers separated by thin septa, with sharp and irregular borders, causes a greater inflammatory response, 4) All HA tested stimulated the fibroblast and collagen neoformation. 5)...(Complete abstract electronic access below) / Mestre

A classe Chondrichthyes é representada por animais de esqueleto cartilaginoso e calcificação prismática. Eles são divididos em duas subclasses, Elasmobranchii (tubarões e raias) e Holocephali (quimeras), que têm uma história evolutiva de mais de 400 milhões de anos. Devido à grande adaptabilidade destes animais em diferentes habitats, eles desenvolveram sofisticadas habilidades sensoriais, como os sistemas mecanorreceptor da linha lateral e eletrossensorial. A maior ordem de tubarões, a Carcharhiniformes tem a maioria dos representantes ocorrendo no Brasil. Entre eles, destacamos o tubarão-azul (Prionace glauca), pelágico oceânico, espécie de grande porte e cosmopolita, e um pequeno tubarão pelágico costeiro, o tubarão-frango (Rhizoprionodon lalandii), representantes dessa ordem com grande importância econômica pela sua pesca. Dada a diversidade morfológica e funcional dos sistemas sensoriais, em resposta a variações ecológicas e filogenéticas, o objetivo deste estudo foi descrever as estruturas morfológicas da linha lateral e das ampolas de Lorenzini, os dentículos dérmicos e os nervos associados à elas, em P. glauca e R. lalandii, utilizando documentação textual e fotográfica de estruturas macroscópicas, e métodos de microscopia, como microscopias de luz, eletrônica e imunofluorescência. Histologicamente, o neuromasto, principal unidade celular da linha lateral mostrou-se semelhante em ambas as espécies, e em P. glauca, esta célula foi encontrada desde o período intra-uterino. Em P. glauca, foi relatado um novo tipo de canal sensorial associado à linha lateral. A ampola de Lorenzini de R. lalandii revelou-se mais organizada do que em P. glauca, devido à quantidade e estruturação dos alvéolos. Os dentículos dérmicos de R. lalandii são mais especializados em várias regiões, particularmente as que envolvem os poros sensoriais. Em relação às características microscópicas dos nervos, eles se assemelham estruturalmente aos dos vertebrados superiores. Para a imunofluorescência, a colocalização foi realizada por tripla marcação dos núcleos dos nervos (DAPI), com receptor de membrana (P2X7), fibras inibidoras (NOS) e células gliais (GFAP), nos nervos da linha lateral e oftálmico superficial. Em ambas as espécies, a distribuição dos nervos foi uniforme. Em suma, as características estudadas em P. glauca são muito semelhantes às encontradas em R. lalandii, no entanto, devido ao hábito da vida oceânica, outras estratégias sensoriais seriam mais relevantes para a sua sobrevivência neste ambiente. As características microscópicas de R. lalandii demonstraram a relação adaptativa com a ecologia da espécie. Seu estilo de vida costeiro demonstrou maior especialização em certos sistemas sensoriais, contribuindo para melhor adaptação em determinados ambientes, uma vez que a morfologia e a organização dos sistemas sensoriais estão diretamente ligadas ao estilo de vida dos indivíduos. / The class of Chondrichthyes is represented by animals with cartilaginous skeleton with prismatic calcification. They are divided into two subclasses, Elasmobranchii (sharks, skates and rays) and Holocephali (chimaeras), which have an evolutionary history of more than 400 million years. Due to their great adaptability in different habitats, they have developed sophisticated sensorial abilities, such as mechanosensory lateral line and electrosensory systems. The largest order of sharks, the Carcharhiniformes has most of the representatives in Brazil. Among them, we highlight the blue shark (Prionace glauca), oceanic pelagic, large and cosmopolitan specie, and a small coastal pelagic shark, the sharpnose shark (Rhizoprionodon lalandii), species with economical importance. Given the morphological and functional diversity of sensory systems, in response to ecological and phylogenetic variations, the aims of this study is to describe the morphological structures of the lateral line and ampullae of Lorenzini, the dermal denticles and nerves associated with them, in P. glauca and R. lalandii, using textual and photographic documentation of macroscopic structures, and microscopic methods, such as light and electronic microscopies and immunofluorescence. Histologically, the neuromast, main cell unit of lateral line system was similar in both species, and in P. glauca, this cell was found since the intrauterine period. In P. glauca, a new type of sensorial canal associated with the lateral line was reported. The ampullae of Lorenzini of R. lalandii proved to be more organized than in P. glauca, because of the amount and structure of the alveoli. The dermal denticles in R. lalandii were more specialized in various regions, particularly those involving sensory pores. Regarding the microscopic characteristics of the nerves, they resemble structurally to the superior vertebrates. For immunofluorescence, the colocalization was performed by triple labeling the nuclei (DAPI) of the nerves, with a membrane receptor (P2X7), inhibitory fibers (NOS) and glial cells (GFAP) in lateral line and superficial ophthalmic nerves. In both species, the distribution of nerves was uniform. In short, the characteristics studied in P. glauca are very similar to those found in R. lalandii, however, due to the habit of oceanic life, other sensory strategies are most relevant to their survival in this environment. Microscopic features of R. lalandii demonstrated the adaptive relationship with the ecology of the species. Its coastal way of life showed greater specialization in certain sensory and attachments systems, contributing to better adapt in certain environments, since the morphology and organization of sensory systems are directly linked to the lifestyle of individuals.

Orientador: Silvana Artioli Schellini / Resumo: OBJETIVO: Avaliar a eficiência da injeção de ácido hialurônico (AH) ou de soro fisiológico (SF), aplicados no subcutâneo da pálpebra inferior de portadores de ectrópio cicatricial, visando à correção não cirúrgica do mal posicionamento palpebral. MÉTODOS: este foi um estudo prospectivo, intervencionista, envolvendo 23 pálpebras de 15 portadores de ectrópio cicatricial, divididos aleatoriamente em dois grupos: G1 (13 pálpebras) no qual foram feitas quatro aplicações de 4ml de SF (Cloreto de Sódio 0,9%, Equiplex, Goiás, Brasil), associado a 1ml de cloridrato de lidocaína a 2,0% sem vasoconstritor (Xylestesin®, Cristália, São Paulo, Brasil), em intervalos de uma semana entre as aplicações; e G2 (10 pálpebras) que receberam aplicação de 1 ml de AH (Restylane® Lidocaine, Q med, Uppsala, Suécia) em aplicação única. Foram avaliadas as variáveis demográficas dos participantes, as queixas, o grau do ectrópio, o grau de flacidez palpebral, a localização do ectrópio, além de avaliações quantitativas realizadas utilizando-se a fotodocumentação sistematizada dos olhos dos pacientes, 30 dias após a primeira aplicação no G1 e 7 e 30 dias após as aplicações do G2. As imagens obtidas foram transferidas para um computador e avaliadas utilizando-se o programa Image J, avaliando-se a distância da pálpebra inferior até o reflexo corneano (DMR2), distância limbo-margem (LM), ângulo da comissura interna (AI) e externa (AE), área total (AT), lateral (AL) e medial (AM). As áreas a serem avaliadas for... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: PURPOSE: Evaluate the efficiency of injection of hyaluronic acid (HA) or saline solution (SF) applied to the lower eyelid subcutaneous, aiming at the non-surgical correction of cicatricial ectropion. METHODS: This was a prospective study involving 23 eyelids of 15 patients with cicatricial ectropion, randomly divided into two groups: G1 (13 eyelids) with four applications of 4ml of SF (Sodium Chloride 0.9%, Equiplex, Goiás , Brazil), associated to 1ml of lidocaine hydrochloride 2% without vasoconstrictor (Xylestesin®, Cristália, São Paulo, Brazil), with a one-week interval between applications; and G2 (10 eyelids) which received single application of 1 ml of AH (Restylane® Lidocaine, Q med, Uppsala, Sweden). Demographic variables, complaints, ectropion degree, eyelid flaccidity degree, ectropion location, and quantitative assessments using the systematized photodocumentation of patients eyelids 30 days after the first application in G1 and 7 and 30 days after applications in G2 were studied. The images were transferred to a computer and evaluated using the Image J program and the distance between the lower eyelid margin to corneal reflex (DMR2), limbus margin distance (LM), internal angle (IA) and external angle (EA), total (TA), lateral (LA) and medial areas (MA) were analyzed. The area measurements were delimited by a line between the two commissures and along the lid margin of the lower eyelid. The evaluations were done without traction and with traction downward of the lo... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Laryssa Kataki De Oliveira Veloso (laryssakataki@hotmail.com) on 2018-06-15T13:25:57Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO LARYSSA FINAL.pdf: 1251310 bytes, checksum: 43a08fca6a961ece3b6833de3671f737 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-06-18T20:28:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 veloso_lko_me_bot.pdf: 1251310 bytes, checksum: 43a08fca6a961ece3b6833de3671f737 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-18T20:28:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 veloso_lko_me_bot.pdf: 1251310 bytes, checksum: 43a08fca6a961ece3b6833de3671f737 (MD5) Previous issue date: 2018-05-30 / OBJETIVO: Avaliar a eficiência da injeção de ácido hialurônico (AH) ou de soro fisiológico (SF), aplicados no subcutâneo da pálpebra inferior de portadores de ectrópio cicatricial, visando à correção não cirúrgica do mal posicionamento palpebral. MÉTODOS: este foi um estudo prospectivo, intervencionista, envolvendo 23 pálpebras de 15 portadores de ectrópio cicatricial, divididos aleatoriamente em dois grupos: G1 (13 pálpebras) no qual foram feitas quatro aplicações de 4ml de SF (Cloreto de Sódio 0,9%, Equiplex, Goiás, Brasil), associado a 1ml de cloridrato de lidocaína a 2,0% sem vasoconstritor (Xylestesin®, Cristália, São Paulo, Brasil), em intervalos de uma semana entre as aplicações; e G2 (10 pálpebras) que receberam aplicação de 1 ml de AH (Restylane® Lidocaine, Q med, Uppsala, Suécia) em aplicação única. Foram avaliadas as variáveis demográficas dos participantes, as queixas, o grau do ectrópio, o grau de flacidez palpebral, a localização do ectrópio, além de avaliações quantitativas realizadas utilizando-se a fotodocumentação sistematizada dos olhos dos pacientes, 30 dias após a primeira aplicação no G1 e 7 e 30 dias após as aplicações do G2. As imagens obtidas foram transferidas para um computador e avaliadas utilizando-se o programa Image J, avaliando-se a distância da pálpebra inferior até o reflexo corneano (DMR2), distância limbo-margem (LM), ângulo da comissura interna (AI) e externa (AE), área total (AT), lateral (AL) e medial (AM). As áreas a serem avaliadas foram delimitadas por uma linha que une as duas comissuras e outra linha que coincide com a margem da pálpebra inferior. As avaliações foram feitas sem tração e com tração da pálpebra inferior para baixo. Todos os dados foram transferidos para a planilha Excel, sendo realizada a análise comparativa antes e após as aplicações nos dois grupos. RESULTADOS: Os grupos foram semelhantes quanto a idade, sexo, cor da pele e grau do ectrópio. Houve melhora signficativa dos sintomas nos indivíduos de G2 após a aplicação de AH. Apos a injeção, o G1 apresentou redução significativa de AI com e sem tração, AE com tração, LM sem tração e AM com tração. No G2, após as injeções as medidas AI sem tração, AE, DMR2, AT e AM com e sem tração, LM e AL com tração apresentaram alterações significativas (p<0,05). A comparação das medidas realizadas no G2 após sete e 30 dias mostrou estabilidade dos resultados obtidos com a injeção de AH. CONCLUSÃO: A aplicação de AH na pálpebra inferior de portadores de ectrópio cicatricial mostrou melhora parcial do mal posicionamento palpebral. A aplicação de SF não foi efetiva no tratamento do ectrópio cicatricial. / PURPOSE: Evaluate the efficiency of injection of hyaluronic acid (HA) or saline solution (SF) applied to the lower eyelid subcutaneous, aiming at the non-surgical correction of cicatricial ectropion. METHODS: This was a prospective study involving 23 eyelids of 15 patients with cicatricial ectropion, randomly divided into two groups: G1 (13 eyelids) with four applications of 4ml of SF (Sodium Chloride 0.9%, Equiplex, Goiás , Brazil), associated to 1ml of lidocaine hydrochloride 2% without vasoconstrictor (Xylestesin®, Cristália, São Paulo, Brazil), with a one-week interval between applications; and G2 (10 eyelids) which received single application of 1 ml of AH (Restylane® Lidocaine, Q med, Uppsala, Sweden). Demographic variables, complaints, ectropion degree, eyelid flaccidity degree, ectropion location, and quantitative assessments using the systematized photodocumentation of patients eyelids 30 days after the first application in G1 and 7 and 30 days after applications in G2 were studied. The images were transferred to a computer and evaluated using the Image J program and the distance between the lower eyelid margin to corneal reflex (DMR2), limbus margin distance (LM), internal angle (IA) and external angle (EA), total (TA), lateral (LA) and medial areas (MA) were analyzed. The area measurements were delimited by a line between the two commissures and along the lid margin of the lower eyelid. The evaluations were done without traction and with traction downward of the lower eyelid. All data were transferred to the Excel spreadsheet and comparative analysis was performed before and after the applications in the two groups. RESULTS The groups were similar according to age, sex, skin color and degree of ectropion. There was a significant improvement in G2 individuals after the application of AH. After injections G1 presented a significant reduction of AI with and without traction, EA with traction, LM without traction and AM with traction. The G2 after injections showed AI measurements without traction, EA, DMR2, TA and MA with and without traction, LM and LA with traction with significant alterations (p <0.05). The comparison of the G2 measurements obtained after 7 and 30 days showed stability of the results obtained with the AH injection. CONCLUSION: The application of AH in the lower eyelid of patients with cicatricial ectropion resulted in partial improvement of palpebral malposition. The application of SF was not effective in the treatment of cicatricial ectropion.

A classe Chondrichthyes é representada por animais de esqueleto cartilaginoso e calcificação prismática. Eles são divididos em duas subclasses, Elasmobranchii (tubarões e raias) e Holocephali (quimeras), que têm uma história evolutiva de mais de 400 milhões de anos. Devido à grande adaptabilidade destes animais em diferentes habitats, eles desenvolveram sofisticadas habilidades sensoriais, como os sistemas mecanorreceptor da linha lateral e eletrossensorial. A maior ordem de tubarões, a Carcharhiniformes tem a maioria dos representantes ocorrendo no Brasil. Entre eles, destacamos o tubarão-azul (Prionace glauca), pelágico oceânico, espécie de grande porte e cosmopolita, e um pequeno tubarão pelágico costeiro, o tubarão-frango (Rhizoprionodon lalandii), representantes dessa ordem com grande importância econômica pela sua pesca. Dada a diversidade morfológica e funcional dos sistemas sensoriais, em resposta a variações ecológicas e filogenéticas, o objetivo deste estudo foi descrever as estruturas morfológicas da linha lateral e das ampolas de Lorenzini, os dentículos dérmicos e os nervos associados à elas, em P. glauca e R. lalandii, utilizando documentação textual e fotográfica de estruturas macroscópicas, e métodos de microscopia, como microscopias de luz, eletrônica e imunofluorescência. Histologicamente, o neuromasto, principal unidade celular da linha lateral mostrou-se semelhante em ambas as espécies, e em P. glauca, esta célula foi encontrada desde o período intra-uterino. Em P. glauca, foi relatado um novo tipo de canal sensorial associado à linha lateral. A ampola de Lorenzini de R. lalandii revelou-se mais organizada do que em P. glauca, devido à quantidade e estruturação dos alvéolos. Os dentículos dérmicos de R. lalandii são mais especializados em várias regiões, particularmente as que envolvem os poros sensoriais. Em relação às características microscópicas dos nervos, eles se assemelham estruturalmente aos dos vertebrados superiores. Para a imunofluorescência, a colocalização foi realizada por tripla marcação dos núcleos dos nervos (DAPI), com receptor de membrana (P2X7), fibras inibidoras (NOS) e células gliais (GFAP), nos nervos da linha lateral e oftálmico superficial. Em ambas as espécies, a distribuição dos nervos foi uniforme. Em suma, as características estudadas em P. glauca são muito semelhantes às encontradas em R. lalandii, no entanto, devido ao hábito da vida oceânica, outras estratégias sensoriais seriam mais relevantes para a sua sobrevivência neste ambiente. As características microscópicas de R. lalandii demonstraram a relação adaptativa com a ecologia da espécie. Seu estilo de vida costeiro demonstrou maior especialização em certos sistemas sensoriais, contribuindo para melhor adaptação em determinados ambientes, uma vez que a morfologia e a organização dos sistemas sensoriais estão diretamente ligadas ao estilo de vida dos indivíduos. / The class of Chondrichthyes is represented by animals with cartilaginous skeleton with prismatic calcification. They are divided into two subclasses, Elasmobranchii (sharks, skates and rays) and Holocephali (chimaeras), which have an evolutionary history of more than 400 million years. Due to their great adaptability in different habitats, they have developed sophisticated sensorial abilities, such as mechanosensory lateral line and electrosensory systems. The largest order of sharks, the Carcharhiniformes has most of the representatives in Brazil. Among them, we highlight the blue shark (Prionace glauca), oceanic pelagic, large and cosmopolitan specie, and a small coastal pelagic shark, the sharpnose shark (Rhizoprionodon lalandii), species with economical importance. Given the morphological and functional diversity of sensory systems, in response to ecological and phylogenetic variations, the aims of this study is to describe the morphological structures of the lateral line and ampullae of Lorenzini, the dermal denticles and nerves associated with them, in P. glauca and R. lalandii, using textual and photographic documentation of macroscopic structures, and microscopic methods, such as light and electronic microscopies and immunofluorescence. Histologically, the neuromast, main cell unit of lateral line system was similar in both species, and in P. glauca, this cell was found since the intrauterine period. In P. glauca, a new type of sensorial canal associated with the lateral line was reported. The ampullae of Lorenzini of R. lalandii proved to be more organized than in P. glauca, because of the amount and structure of the alveoli. The dermal denticles in R. lalandii were more specialized in various regions, particularly those involving sensory pores. Regarding the microscopic characteristics of the nerves, they resemble structurally to the superior vertebrates. For immunofluorescence, the colocalization was performed by triple labeling the nuclei (DAPI) of the nerves, with a membrane receptor (P2X7), inhibitory fibers (NOS) and glial cells (GFAP) in lateral line and superficial ophthalmic nerves. In both species, the distribution of nerves was uniform. In short, the characteristics studied in P. glauca are very similar to those found in R. lalandii, however, due to the habit of oceanic life, other sensory strategies are most relevant to their survival in this environment. Microscopic features of R. lalandii demonstrated the adaptive relationship with the ecology of the species. Its coastal way of life showed greater specialization in certain sensory and attachments systems, contributing to better adapt in certain environments, since the morphology and organization of sensory systems are directly linked to the lifestyle of individuals.

Processos fotodinâmicos aplicados a sistemas biológicos têm sido utilizados in vitro e in vivo como uma modalidade terapêutica seletiva e não invasiva em diversas áreas da saúde, incluindo a Medicina Regenerativa. Neste trabalho, propomos o seu estudo na reparação e regeneração tecidual, pela utilização de um fármaco fotossensibilizante associado a um sistema de veiculação e sua ação fotobiológica, monitorada pela atividade celular (sistemas 2D e 3D). Para superar limitações do modelo celular convencional em monocamada, tais como baixa interação célula-célula e célula-matriz extracelular, propomos o uso de modelos tridimensionais de pele (denominados equivalentes dérmicos). Desta forma, algumas condições existentes in vivo podem ser mimetizadas in vitro, conduzindo à observação de um comportamento mais próximo à situação real. Os equivalentes dérmicos foram preparados através do cultivo celular em uma matriz de colágeno tipo I, que foi extraído de tendões da cauda de ratos Wistar. Foram escolhidas duas linhagens celulares para a padronização dos modelos tridimensionais: fibroblastos NIH/3T3 (ATCC® CRL-1658TM) e células-tronco humanas HBMS (Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells, ATCC® PCS-500-012TM). Os ED produzidos foram monitorados por um período de 14 dias para o estudo do perfil de cinética de contração e também observamos a formação da matriz tridimensional de colágeno através da microscopia óptica. O perfil de contração observado é mais acentuado nos primeiros dias e tende a se estabilizar no final do período analisado. Fatores como concentração celular e de colágeno interferem nesta cinética. Estudos de histologia, microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia confocal também foram realizados para melhor caracterizar o modelo. Em uma segunda etapa deste trabalho, estudos de fotobiomodulação foram conduzidos nestes modelos celulares, associando-se o uso de fotoprocessos com luz visível de baixa intensidade (doses 70, 140 e 300 mJ/cm2) e o fármaco fotossensibilizante ftalocianina de cloro alumínio (ClAlPc), veiculado em um sistema de liberação nanoestruturado clássico do tipo nanoemulsão. A expressão de metaloproteinases de matriz (MMPs), enzimas associadas a eventos biológicos de remodelação da matriz extracelular, foi avaliada através da técnica de zimografia. / Photodynamic Process applied to biological systems has been used in vitro and in vivo as selective and noninvasive modality in several areas including Regenerative Medicine. In this research project, we propose to study wound healing and tissue regeneration, induced by the use of a photosensitizer drug into 2D and 3D cellular models. In order to perform experiments with high level of biological complexity, we propose to use three-dimensional tissue models (called dermal equivalents). The aim is to mimic in vitro, the conditions existing in in vivo, such as cell-cell contact and cell-extracellular matrix interactions, which cannot be observed in monolayer cultures. The dermal equivalents were obtained combing fibroblasts cells NIH /3T3 (ATCC® CRL-1658TM) or Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells (ATCC® PCS-500-012TM) with collagen matrix. Collagen type I was obtained from tail tendons of Wistar rats. The three-dimensional model was monitored over 14 days and to study the kinetic contraction, the diameter of each disc was measured. Also, the collagen matrix was evaluated by bright field microscopy. The classical profile observed is more pronounced in the early days and tends to stabilize at the end of the period. This kinetic can be modified by the concentration of cells and collagen. Histological analyses, scanning electron microscopy (SEM) and confocal microscopy were also important to describe this model. Second, photobiology tests were performed, combining low-intensity laser (70, 140 e 300 mJ/cm2) and a classical Chloro Aluminum Phthalocyanine photosensitizer drug encapsulated into polymeric nanoemulsion. Matrix metalloproteinases (MMPs) expression in the cell culture was evaluated by zymography. These are endopeptidases associated with wound healing and remodeling processes.

Este trabalho investigou, pela primeira vez, a influência do CH na modulação do metabolismo e proliferação de fibroblastos dérmicos humanos (FDHs) derivados de áreas fotoprotegida e fotoexposta, cultivados em modelo de monocamada. Além disto, foram investigados os efeitos da suplementação com CH na secreção de colágeno tipo I, em modelo de cultura 3D de equivalente dérmico, derivado de matriz produzida exclusivamente por FDHs. O tratamento com CH não influenciou a proliferação celular dos fibroblastos derivados de ambas as áreas, porém modulou expressivamente o metabolismo dos FDHs cultivados em monocamada, elevando o conteúdo de pró-colágeno I e colágeno I e diminuindo a atividade de metaloproteinases de matriz (MMP) 1 e 2. Concentrações menores de CH foram suficientes para estimular as células de área fotoexposta, sugerindo efeitos mais pronunciados do CH nestas células. Este estudo é uma contribuição importante para compreensão dos efeitos biológicos do CH nas células da pele e viabilidade do seu uso como ingrediente funcional de suplementos alimentares. / This study investigated, for the first time, the influence of CH on the extracellular matrix metabolism and proliferation of human dermal fibroblasts (HDFs) derived from sun-protected and sun-exposed body sites, cultured in monolayer in vitro model. Moreover, CH effects on the secretion of type I collagen were investigated in dermal equivalent 3D model derived from dermal matrix produced exclusively by HDFs. CH treatment did not affect cellular proliferation of either cell cultures, but notably modulated cell metabolism in monolayer model, increasing the content of procollagen I and collagen I and decreasing metalloproteinase activity (MMP) 1 and 2. These effects were confirmed in the human dermal equivalent model. Lower concentrations of CH were enough to stimulate sun-exposed-derived HDFs, suggesting more pronounced effect in these cells. This study presents an important contribution to understanding the biological effects of CH in skin cells and viability of its use as a functional ingredient in food supplements.

Este trabalho investigou, pela primeira vez, a influência do CH na modulação do metabolismo e proliferação de fibroblastos dérmicos humanos (FDHs) derivados de áreas fotoprotegida e fotoexposta, cultivados em modelo de monocamada. Além disto, foram investigados os efeitos da suplementação com CH na secreção de colágeno tipo I, em modelo de cultura 3D de equivalente dérmico, derivado de matriz produzida exclusivamente por FDHs. O tratamento com CH não influenciou a proliferação celular dos fibroblastos derivados de ambas as áreas, porém modulou expressivamente o metabolismo dos FDHs cultivados em monocamada, elevando o conteúdo de pró-colágeno I e colágeno I e diminuindo a atividade de metaloproteinases de matriz (MMP) 1 e 2. Concentrações menores de CH foram suficientes para estimular as células de área fotoexposta, sugerindo efeitos mais pronunciados do CH nestas células. Este estudo é uma contribuição importante para compreensão dos efeitos biológicos do CH nas células da pele e viabilidade do seu uso como ingrediente funcional de suplementos alimentares. / This study investigated, for the first time, the influence of CH on the extracellular matrix metabolism and proliferation of human dermal fibroblasts (HDFs) derived from sun-protected and sun-exposed body sites, cultured in monolayer in vitro model. Moreover, CH effects on the secretion of type I collagen were investigated in dermal equivalent 3D model derived from dermal matrix produced exclusively by HDFs. CH treatment did not affect cellular proliferation of either cell cultures, but notably modulated cell metabolism in monolayer model, increasing the content of procollagen I and collagen I and decreasing metalloproteinase activity (MMP) 1 and 2. These effects were confirmed in the human dermal equivalent model. Lower concentrations of CH were enough to stimulate sun-exposed-derived HDFs, suggesting more pronounced effect in these cells. This study presents an important contribution to understanding the biological effects of CH in skin cells and viability of its use as a functional ingredient in food supplements.