Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2009-03-11T18:36:36Z No. of bitstreams: 1 2008_Dissertacao_LigiaLima.pdf: 440019 bytes, checksum: 602236ab63e58ec63af04d27d3c518ef (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2009-03-20T17:26:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_Dissertacao_LigiaLima.pdf: 440019 bytes, checksum: 602236ab63e58ec63af04d27d3c518ef (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-20T17:26:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_Dissertacao_LigiaLima.pdf: 440019 bytes, checksum: 602236ab63e58ec63af04d27d3c518ef (MD5) / O presente estudo avaliou diferentes sistemas de refrigeração do sêmen ovino, através da aferição e comparação das curvas obtidas assim como seus efeitos sobre a qualidade espermática. Foram avaliados a motilidade, vigor, defeitos morfológicos, viabilidade e estado acrossomal através da coloração dupla trypan-blue/giemsa, ao final dos 90 min de refrigeração, e após a descongelação. Para as análises pós-descongelação foram utilizados os mesmos parâmetros acrescidos da avaliação da integridade da membrana plasmática (IMP) visualizada através das sondas fluorescentes IP e DIC em microscopia de fluorescência e da avaliação do teste de exaustão ao final quatro horas de incubação do sêmen a 37ºC. A refrigeração do sêmen foi realizada em refrigerador doméstico e em balcão, a fim de se controlar a queda de temperatura dos dois equipamentos, as palhetas foram dispostas entre bolsas plásticas contendo água aquecida a 32ºC, constituindo quatro sistemas RS (refrigerador sem bolsa), RC (refrigerador com bolsa), BS (balcão sem bolsa) e BC (balcão com bolsa). Os diferentes protocolos resultaram quatro taxas médias de refrigeração -1,4ºC/min, -0,4ºC/min, - 2,9ºC/min e -0,45ºC/min, para RS, RC, BS e BC; respectivamente. Após a refrigeração do sêmen observou-se diferença significativa entre os tratamentos no parâmetro motilidade espermática (P<0,05), com o tratamento BS apresentado a menor percentagem de células móveis (58,1%). As percentagens de espermazóides vivos com acrossoma íntegro e mortos com acrossoma íntegro apresentaram diferença significativa entre os tratamentos (P<0,05), o tratamento BS obteve a menor média (85,3%) de vivos íntegros e também a maior média de mortos íntegros (14,1%) diferindo dos demais ao final da refrigeração. Houve diferença significativa na percentagem de defeitos morfológicos após a refrigeração (P<0,05), sendo que o tratamento BS foi o que apresentou maior média (15,4%) de defeitos, os sistemas RC (11,5%) e BC (11,1%) apresentaram as menores médias, o RS (13,6%) não diferiu dos demais. Para os demais parâmetros espermáticos pós-refrigeração não foram observadas diferenças significativas. Em relação ao sêmen pós-descongelação, para todos os parâmetros avaliados não foram observadas diferenças significativas. Ao final do teste de exaustão, após quatro horas de incubação, também não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos. Com base nos resultados concluiu-se que a as diferentes taxas de refrigeração, afetaram o sêmen no final da fase de refrigeração. As avaliações pós-descongelação não evidenciaram diferenças significativas entre os protocolos de refrigeração ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to evaluate the influence of different types of cooling systems upon the post-thawing quality of ram semen, through the measurement and comparison of cooling rates. The parameters were motility, vigor, morphology damages, viability and acrossomal state through the use of Trypan-blue/giemsa coloration, at the end of the 90 minutes of cooling and post-thawing. With regard to the analysis of post- thawed semen, the same parameters were used, in addition to the assessment of the integrity of the plasmatic membrane using de fluorescent stains propidium iodide (PI) and carboxifluorescein diacetate (CFDA), and the resistant test through incubation of semen at 37º C during 4 hours. The semen refrigeration was carried out in a domestic refrigerator and in a horizontal freezer. To control the fall of temperature of the two equipments, the straws were disposed between plastic bags containing water at 32ºC, creating four combinations of cooling procedure: RS (refrigerator without bag), RC (refrigerator with bag), BS (horizontal refrigerator without bag) and BC (horizontal refrigerator with bag). The different protocols resulted in four cooling rates: -1.4ºC/min, -0.4ºC/min, -2.9°C/min and -0.45ºC/min, for RS, RC, BS and BC, respectively. At the end of cooling period, there was a significant difference among the treatments on the sperm motility (P<0.05), the BS treatment showed the lowest percentage of sperm motility (58.1%). The percentage of live spermatozoa with intact acrosome was different (P<0.05) among treatments, the BS treatment had the lower mean (85.3%). The percentage of dead spermatozoa with intact acrosome was different (P<0.05), the BS treatment had the highest mean (14.1%). There was a significant difference on the percentage of morphological defects at the end of cooling (P<0.05); the BS treatment had the highest mean (15.4%), the systems RC (11.5%) and BC (11.1%) resulted in the lower means and the RS (13.6%) was identical to others. To the other sperm parameters post-cooling, there were not differences. Regarding frozen-thawed semen, there were no parameters with differences. At the end of the resistant test period, there was no significant difference among the treatments. On basis of these results, it was concluded that the different cooling rates only affected ram semen at the end of cooling stage. The evaluation of frozen-thawed semen does not show any effect on the differents cooling protocols

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-08T16:56:50Z No. of bitstreams: 1 2008_DanieleOgaFutino.pdf: 344538 bytes, checksum: d57e476051f680fd9bf2ae927cc6d356 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-09-22T16:00:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DanieleOgaFutino.pdf: 344538 bytes, checksum: d57e476051f680fd9bf2ae927cc6d356 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-22T16:00:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DanieleOgaFutino.pdf: 344538 bytes, checksum: d57e476051f680fd9bf2ae927cc6d356 (MD5) Previous issue date: 2008-05 / A crescente demanda por biotécnicas reprodutivas em cães tem despertado grande interesse no desenvolvimento de protocolos de congelação de sêmen canino que, associados à correta identificação do momento ótimo para a inseminação, resultem em taxas de fertilidade próximas às da inseminação artificial com sêmen fresco ou resfriado. A grande vantagem da congelação do sêmen é a sua viabilidade por tempo indeterminado. O crioprotetor de eleição na congelação do sêmen canino é o glicerol, entretanto a busca por crioprotetores alternativos tem sido crescente. O presente trabalho objetivou comparar a eficiência da metil-formamida (MF) e da dimetil-formamida (DF) em relação ao glicerol (GL) como crioprotetores na congelação do sêmen canino. Para o experimento, foram utilizados pools de amostras de sêmen de cinco cães da Polícia Federal, coletadas por manipulação digital. Cada pool foi fracionado em três amostras, sendo cada uma delas submetida a um dos três crioprotetores, sempre à concentração final de 3% em diluidor Tris-gema. Cada tratamento foi repetido cinco vezes. O sêmen foi avaliado subjetivamente quanto à motilidade total e progressiva, vigor e morfologia logo após a coleta do sêmen, formação do pool, diluição, resfriamento e descongelação. As alíquotas foram resfriadas e equilibradas a 4°C por uma hora e meia e envasadas em palhetas de 0,5m?. Em seguida, procedeu-se a congelação, expondo-se as palhetas ao vapor de nitrogênio líquido por 15 minutos seguido de imersão e armazenamento no nitrogênio líquido. As palhetas foram acondicionadas em botijão criogênico por um período mínimo de sete dias antes da descongelação. A descongelação foi feita em banho-maria a 37°C durante um minuto, permanecendo a esta temperatura durante 30 minutos para a realização do teste hiposmótico (HOST). A longevidade espermática foi feita realizando-se o teste de termorresistência (TTR). A análise estatística foi realizada utilizando-se análises de variância (ANOVA) e teste PLSD de Fischer. As amostras de sêmen fresco apresentaram características físicas e morfológicas dentro da normalidade (93,60±7,60%, 90,40±8,70%, 4,8±0,44 e 90,25±3,17% para motilidade total, motilidade progressiva, vigor e morfologia normal, respectivamente). Após a descongelação, foram observadas diferenças significativas (P<0,05) entre GL e DF em relação à motilidade total e progressiva e vigor. Em relação à MF, não houve diferenças significativas em relação ao GL ou à DF em nenhum parâmetro avaliado. As médias para motilidade total, motilidade progressiva, vigor e morfologia normal na pós-descongelação foram 69,00±5,47%, 61,00±7,41%, 2,9±0,54% e 57,10±5,01% para o GL, 59,00±8,94%, 50,00±10,00%, 2,5±0,70 e 66,90±7,74% para a MF e 44,00±21,03%, 37,00±19,87%, 2,1±0,65 e 61,10±5,59% para a DF, respectivamente. No teste HOST o GL apresentou-se superior à MF e DF (57,80±12,47%, 35,80±18,47% e 34,40±9,40%, porcentagens médias de células com membranas íntegras para GL, MF e DF, respectivamente). Durante o TRT, não houve diferenças entre o GL e a MF e ambos mostraram-se superior à DF. De acordo com os resultados encontrados, pode-se concluir que a MF apresenta resultados semelhantes ao GL, e, portanto pode ser considerada uma alternativa como crioprotetor na criopreservação de sêmen canino. Testes comparando diferentes concentrações da MF são necessários visando seu melhor desempenho como crioprotetor. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Due to an increasing demand for canine reproductive biotechnologies, it has been crescent interests for improving freezing protocols employed for canine semen which, associated to a correct identification of optimal breeding time, results on fertility rates close to those achieved with artificial insemination with fresh or cooled semen. The unlimited viability of cryopreserved semen is the greatest advantage of this technique. Glycerol is the most commonly used cryoprotectant for dog sperm however the search for alternative cryoprotectants has increased. The aim of the present work was to compare the efficiency of methyl-formamide (MF), dimethyl-formamide (DF) and glycerol (GL) as cryoprotectants in canine semen cryopreservation. Five dogs were used in the experiment. Ejaculates were collected, pooled and divided into three aliquots and each one was submitted to one of the three cryoprotectants, with final concentration of 3% in egg yolk-TRIS extender. Treatments were repeated five times. Semen was subjectively evaluated for total and progressive motility, vigor and morphology immediately after each of the following procedures: semen collection, pool formation, dilution, chilling and freezing/thawing. Sperm membrane functional integrity was assessed by hypo-osmotic swelling test (HOST), ans longevity was assessed using the thermoresistance test (TRT). Fresh semen showed normal physical and morphological characteristics. After thawing, differences were observed between semen frozen using GL and DF regarding total and progressive motility and bigot (P<0.05) but not between MF and GL or MF and DF. Means for total motility, progressive motility, vigor and morphologically normal spermatozoa were respectively 69,00±5,47%, 61,00±7,41%, 2,9±0,54% e 57,10±5,01% for GL, 59,00±8,94%, 50,00±10,00%, 2,5±0,7 and 66,90±7,7% for MF and 4,00±21,03%, 37,00±19,87%, 2,1±0,65 and 61,10±5,59% for DF. On HOST, GL was superior to MF and DF (57,80±12,47%, 35,80±18,47% and 34,40±9,40%, respectively). During TRT, both GL and MF were superior to DF, with no differences between GL and MF. In conclusion, the use of MF as cryoprotectant showed results similar to GL, except on HOST, and can br considered as an alternative in canine semen cryopreservation. Further studies testing different concentrations of MF may improve its effects on cryopreservation of canine semen.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThiberioSC_DISSERT.pdf: 700205 bytes, checksum: 7a5563445307116480b9ce4be88608c4 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / We evaluated the effect of centrifugation and the use of Tris-based extender supplemented with different sugars as well as different rates of thawing on the kinematic pattern of motility and other characteristics of frozen-thawed semen from captive collared peccaries. Semen from 13 collared were collected by electroejaculation and evaluated subjectively for motility, vigor and by computer analysis (CASA). Other features such as sperm viability, membrane integrity and morphology of spermatozoa were also evaluated. Semen was divided into four portions: two were subjected to centrifugation and then diluted in a tris plus fructose and the other in tris supplemented with glucose, the other two forms were immediately diluted in the same way. Egg yolk (20%) and glycerol (6%) were added to all groups. The samples were frozen in liquid nitrogen and thawed using two thawing rates (37ºC/1min and 55°C/7s). The results showed a reduction in total motility immediately after the dilution using both extenders and interference in some kinematic parameters such as BCF, LIN and STR for the samples centrifuged, , in addition, an increase in the number of total and secondary morphological defects were observed in centrifuged samples, independent to the sugar used (P <0.05). No significant differences among the extenders supplemented with fructose or glucose were verified at any time (P> 0.05). Furthermore, no interaction between the supplementation of sugar and thawing rates were observed for any semen parameter evaluated (P> 0.05). In conclusion, it is not necessary to centrifuge the semen from collared prior to the procedure of freezing and thawing, which can be achieved through a Tris-based extender supplemented with either fructose or glucose, as well as using different thawing rates (37ºC/1min and 55°C/7s). / Avaliou-se o efeito da centrifugação e da utilização de diluentes a base Tris suplementados com diferentes açúcares além de diferentes taxas de descongelação sobre os padrões cinemáticos de motilidade e outras características do sêmen congeladodescongelado de catetos em cativeiro. O sêmen de 13 catetos foi coletado por eletroejaculação e avaliados subjetivamente e através de análise computadorizada (CASA) para motilidade, vigor. Outras características como viabilidade espermática, integridade da membrana e morfologia dos espermatozóides também foram avaliadas. O sêmen foi dividido em quatro alíquotas: duas foram submetidas à centrifugação e em seguida diluídas, uma em tris acrescido de frutose e a outra em tris acrescido de glicose, as outras duas forma imediatamente diluídas da mesma forma. Gema de ovo (20%) e glicerol (6%) foram adicionados para todos os grupos. As amostras foram congeladas em nitrogênio líquido e descongeladas usando duas taxas de descongelação (37ºC/1min e 55ºC/7s). Os resultados demonstraram uma redução na motilidade total imediatamente após a diluição em ambos diluentes para as amostras centrifugadas, bem como em alguns parâmetros cinemáticos como BCF, LIN e STR além do aumento no número de alterações morfológicas totais e secundarias independente do açúcar utilizado (P<0,05), tendo em vista não ter apresentado diferenças entre os diluentes suplementados com frutose ou glicose em nenhum momento (P> 0,05). Além disso, nenhuma interação entre a suplementação de açúcar e as taxas de descongelação foi observada para qualquer parâmetro seminal avaliado (P> 0,05). Em conclusão, não é necessário centrifugar o ejaculado de catetos antes dos procedimentos de congelação e descongelação, para os quais pode-se utilizar um diluente a base de Tris suplementado tanto com frutose ou glicose, bem como utilizando taxas de descongelação diferentes (37ºC/1min e 55ºC/7s).

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaAS_DISSERT.pdf: 968116 bytes, checksum: 38354f5cda3df8e97f62e2dd173a7ba1 (MD5) Previous issue date: 2011-12-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study aimed to test the use of powdered coconut water (ACP ®-116C) based extender in the cryopreservation of semen collared peccary, plus different concentrations of egg yolk and glycerol, as well as seeking to draw up a protocol of cryopreservation by testing different freezing curves, volumes straws for storage and post-thawing temperatures. In the first experiment, ejaculates from twelve animals were fractionated into aliquots that were diluted in Tris plus 10% egg yolk and 3% glycerol or ACP-116C ® added different concentrations of egg yolk (10 or 20%) and glycerol (1.5 and 3%), placed in liquid nitrogen and thawed after a month at 37 ° C for one minute, and their semen parameters were further evaluated for sperm motility, vigor, viability, morphology and acrosome membrane integrity and functional, place showed that ACP-116C ® plus 20% egg yolk and 3% glycerol, showed the best motility and vigor after thawing than when compared with Tris diluent (p <0.05). In the second experiment, we used the ACP-116C ® plus 20% egg yolk and 3% glycerol. After dilution the samples were divided into two aliquots, to different freezing curves freezing, slow curve (A) and fast curve (B) . The samples were packed in straws of 0.25 and 0.5ml for a week, and thawed at 37°C/ 1 min and 70°C/8s, and evaluated as in the previous experiment. There were no differences between the curves and volumes straws post thawing (p> 0.05). However, differences were observed between the volume straws and the rate of thawing at 70°C/8s (p <0.05). In conclusion, we recommend cryopreservation of collared peccary semen from ACP ® 116C plus 20% of egg yolk and 3% glycerol, using the fast curve freezing , which allows maximizing the time during the process, storage of samples in straws of 0.25 or 0.5 mL, and thawing at 37°C/60s. / Esse estudo teve como objetivo testar o uso da água de coco em pó (ACP-116C ®) como diluente na criopreservação de sêmen de catetos, acrescido de diferentes concentrações de gema de ovo e glicerol, bem como, buscar elaborar um protocolo de criopreservação, testando-se diferentes curvas de congelação, volumes de palheta para armazenamento e temperaturas de descongelação. No primeiro experimento, os ejaculados de doze animais foram fracionados em alíquotas que foram diluídas em Tris acrescido de 10% gema de ovo e 3% de glicerol ou em ACP-116C ® adicionado de diferentes concentrações de gema de ovo (10 ou 20%) e glicerol (1,5 e 3%), acondicionadas em nitrogênio líquido e descongeladas após um mês a 37ºC por um minuto, e seus parâmetros seminais foram posteriormente avaliados para a motilidade espermática, vigor, viabilidade, morfologia e integridade da membrana acrossômica e funcional, onde verificou-se que ACP-116C ® acrescido de 20% gema de ovo e 3% de glicerol, proporcionou melhores resultados de motilidade e vigor após a descongelação do que quando comparado com diluente Tris (p <0,05). No segundo experimento, utilizou-se o ACP-116C ® acrescido de 20% gema de ovo e 3% de glicerol como diluente. Após a diluição as amostras foram divididas em duas alíquotas, destinadas a diferentes curvas de congelação, curva lenta (A) e curva rápida (B). As amostras foram acondicionadas em palhetas de 0,25 e 0,5mL, durante uma semana, e descongeladas a 37ºC/1min e 70ºC/8s, e avaliadas como no experimento anterior. Não foram verificadas diferenças entre as curvas de congelação e volumes de palheta (p> 0,05). Porém, foram verificadas diferenças entre o volume das palhetas e a taxa de descongelação a 70 ºC/8s (p <0,05). Em conclusão, recomenda-se a criopreservação do sêmen de cateto em ACP®-116C, acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, usando a curva de congelação rápida (B) que permite a maximização do tempo durante o processo, o armazenamento das amostras em palhetas de 0,25 ou 0,5mL, e descongelação a 37°C/60s.