Made available in DSpace on 2015-04-22T22:14:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO-CYNTHIA PINTO.PDF: 1386521 bytes, checksum: cd8c6e6b087f4a1705287014f9b5ac34 (MD5) Previous issue date: 2009-07-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Human rotavirus constitutes one of the most important causes of diarrheic disease in children less than five years in the whole world. In 2006, the National Program of Immunization of Health Minister introduced a monovalent vaccine against rotavirus objecting the reduction of prevalence of rotaviruses. With the object of verifying the occurrence of genotypes of human rotavirus in children of 0 the 12 months vaccinated and non vaccinated residents in the city of Manaus in Amazon, had been analyzed during a year (may/2007 may/2008), a total of 294 feces diarrheic samples that had been colleted of children attended hospital of children in the city of Manaus. This analyzes was carried through by the detention of the viral genome through the techniques of PAGE (Polyacrilamide Gel Eletrophoresis) and RT-PCR (Reverse transcription Polymerase Chain Reaction). Through the PAGE method can be observed a positivity of 9.5% of the human rotavirus samples, and of these samples 36% were of vaccinated children against rotavirus. All of the positive samples of human rotavirus had been typed by the method of RT-PCR with use of specific primers for genotypes G (G1, G2, G3, G4 and G9) and genotypes P (P[8], P[4], P[6], P[9] e P[10]). By the typing, it was detected genotype G in 42.9% of the positive samples for rotavirus with detection only of genotype G2 and genotype P was detected in 94% of positive samples with detection only of P[4]. The combinations of genotypes G and P appeared in 50% of the positive samples for G and P, and all of these combinations were G2P[4]. It was observed that 17% of the positive samples for genotype G and 0,6% of the positive sample for genotype P had not presented characteristics for none of searched genotypes G and P. The number of positive samples for human rotavirus had been similar in such a way in children of the masculine sex how much in children of the feminine sex, being that these samples had predominated in children with age between 7 and 12 months. The positive samples of human rotavirus had been found in every months of had lasted the study with exception of august of 2007 and march of 2008. The vaccination reduce the human rotavirus incidence in children that had been take the two doses of vaccine, perhaps the emergency of the genotype G2P[4] observed in this study could not be associated to the vaccine. / Os rotavírus humanos constituem uma das mais importantes causas de doença diarréica em crianças menores de cinco anos no mundo. Em 2006, o Programa Nacional de Imunização do Ministério da Saúde introduziu uma vacina monovalente contra o rotavírus visando à redução da prevalência das rotaviroses. Com o objetivo de verificar a ocorrência de rotaviroses em crianças de 0 a 12 meses vacinadas e não vacinadas atendidas nos pronto-socorros infantis do município de Manaus no Amazonas, foram analisadas durante 13 meses (maio/2007 a maio/2008), um total de 294 amostras de fezes diarréicas coletadas de crianças atendidas em prontos socorros infantis do município de Manaus. Esta análise foi realizada pela detecção do genoma viral através das técnicas de EGPA (Eletroforese em Gel de Poliacrilamida) e RT-PCR (Reação da Polimerase em Cadeia com Transcriptase Reversa). Por meio do método da EGPA pode-se observar uma positividade de 9,5% das amostras para rotavírus humano, sendo que destas amostras, 36% eram de crianças vacinadas contra rotavírus. Todas as amostras positivas na EGPA para rotavírus humano foram tipadas pelo método de RT-PCR com utilização de primers específicos para os genótipos G (G1, G2, G3, G4 e G9) e genótipos P (P[8], P[4], P[6], P[9] e P[10]). Pela tipagem foi detectado o genótipo G em 42,9% das amostras positivas para rotavírus com detecção apenas do genótipo G2 e o genótipo P foi detectado em 94% das amostras positivas para rotavírus com aparecimento apenas do genótipo P[4]. As combinações dos genótipos G e P apareceram em 50% das amostras positivas para G e P, sendo todas da combinação G2P[4]. Foi observado que 17% das amostras positivas para o genótipo G e 0,6% das amostras positivas para o genótipo P não apresentaram características de nenhum dos genótipos G e P pesquisados. O número de amostras positivas para rotavírus humano foi semelhante tanto em crianças do sexo masculino quanto em crianças do sexo feminino, sendo que estas amostras predominaram em crianças de 7 a 12 meses. As amostras positivas para rotavírus humano, assim como para os genótipos G e P foram encontradas em todos os meses do estudo, com exceção de agosto de 2007 e março de 2008. A vacinação reduz a incidência de rotavírus humano em crianças que tomaram as duas doses da vacina, porém a emergência do genótipo G2P[4] observada neste estudo pode não estar associada à vacina.

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Para proporcionar um maior conhecimento sobre a circulação e diversidade genética dos RVA genótipo G2, realizamos a análise temporal da circulação deste genótipo ao longo de 31 anos e a análise dos genes estruturais e não estruturais de amostras que circularam ao longo de 20 anos na região norte do Brasil. A avaliação temporal da circulação de diferentes genótipo que circularam nesta região permitiu observar que o tipo G2 de RVA apresentou ao longo desses anos um padrão cíclico de ocorrência que o fez emergir em um cenário de pós implantação da vacina, sugerindo uma flutuação natural devido a variações naturais ocorridas ao longo do tempo. Análises filogenéticas mostraram que para as linhagens de VP7 G2 existe uma continua evolução, responsável por uma rotatividade na circulação de linhagens, sendo detectada duas linhagens e três sublinhagens ao longo de 20 anos. Três substituições importantes nas regiões antigênicas de VP7 (A87T, D96N e S213D) foram identificadas em amostras que circularam a partir dos anos 90. Estas modificações podem ter aumentado a capacidade das cepas de circular em ambientes onde há cobertura vacinal para RVA. Todas as cepas G2P[4] para as quais foram analisados os 11 segmentos gênicos apresentaram uma constelação gênica DS-1-like: I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2, apesar de que diversas variantes virais circularam no período estudado. Não foram observadas diferenças nos sítios antigênicos das proteínas VP8* e VP7 entre amostras que circularam no período anterior e posterior à introdução da vacina. Para os genes VP2 e VP3 foi evidenciado em algumas amostras uma forte correlação com genes de origem animal. Este estudo fornece evidências da diversidade genética existente no genótipo G2 de RVA, sugerindo que este tipo apresenta características naturais de flutuação e que sua emergência após o período de implantação da vacina está mais diretamente associado a características ecológicas do vírus do que a uma pressão vacinal. / Rotavirus group A (RVA) is the most important cause of diarrhea, accounting for about 40% of morbidity and mortality related to this disease in children around the world before the introduction of the vaccine. After the introduction of the vaccine against the RVA in Brazil in 2006 genotype G2RVA he rose again, being detected in up to 82% of children under five years of age performed post vaccination studies, leading to questions about the protection afforded by the vaccine facing the G2 type, as well as the occurrence of a selective pressure vaccine. Little is known about the evolution and diversity of G2 genotype and the possible influence of the vaccine on this. To provide a better understanding of the flow and genetic diversity of RVA genotype G2, we perform the time of circulation analysis of genotype over 31 years and analysis of structural and non-structural genes from samples that have circulated over 20 years in northern region of Brazil. The temporal assessment of movement of different genotype circulating in this region has observed that the G2 type RVA presented over the years a cyclical pattern of occurrence that did emerge in a post deployment of the vaccine scenario, suggesting a natural fluctuation due to variations natural occurring over time. Phylogenetic analyzes showed that for VP7 lines G2 there is a continuous, responsible for a movement of rotation in the lines being detected two lines and three sublineages over 20 years. Three important substitutions in antigenic regions of VP7 (A87T, D96N and S213D) were identified in samples that circulated from the 90. These changes may have increased the capacity of the circulating strains in environments where there is vaccine coverage for RVA. All G2P[4] strains analyzed revealed a DS-1-like genome constellation: I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2. However, several viral variants circulated during the study period. No differences were observed in the antigenic sites of the VP8 * and VP7 proteins between samples that circulated in the period before and after the introduction of the vaccine. For VP2 and VP3 genes was evident in some samples a strong correlation with animal genes. This study provides evidence of genetic diversity in G2 genotype RVA, suggesting that this type has natural characteristics fluctuation and its emergence after the implementation period of the vaccine is more directly associated with ecological characteristics of the virus than a vaccine pressure.