Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-01-06T18:26:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Sabrina Schumacker Zanca.pdf: 5039439 bytes, checksum: 5efe72ddb5b05b30355272db0d78ee68 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T18:26:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Sabrina Schumacker Zanca.pdf: 5039439 bytes, checksum: 5efe72ddb5b05b30355272db0d78ee68 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-05-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Amazon species Duroia macrophylla Huber (Rubiaceae) produces triterpenes and alkaloids with activity against Mycobacterium tuberculosis and an indole alkaloid active against tumoral cell lines. Previous studies showed that different plant extracts had difference on the chemical composition. So, the present study aim to assess the seasonal production of secondary metabolites in Duroia macrophylla extracts, in two specimens for one year. Also, callus in vitro were obtained for phytochemical extraction and secondary metabolites production analysis. For the two plants phytochemical analysis, leaves were collected monthly from April/2013 to March/2014. Plant material was grounded and extracted with hexane and methanol, with ultrasound bath. The concentrated extracts were analyzed by thin layer chromatography (TLC) and 1H-nuclear magnetic resonance (1H-NMR). The NMR spectra were compared by principal component analysis (PCA). The in vitro tissue cultures were established from young leaves with 50% of asepsis after several assays and with different immersion times of the chemical reagents: 70% etanol, 2% sodium hypochlorite and biocide solution. In vitro explants were induced to callus formation process by adding the growth regulators kinetin and 2,4-D, on Murashige & Skoog media, and then extracted with hexane and methanol. The production of secondary metabolites was analysed by TLC and 1H-NMR. All hexane and methanol extracts of two Duroia macrophylla individuals showed evidence of the presence of alkaloids and terpenes during a year. The PCA analysis showed seasonal variation on the chemical composition of the hexane extracts of Duroia macrophylla’s leaves, where the production of alkaloids increased during the rainy season. Regarding the methanol extracts of the leaves, the extract from November showed a lower alkaloid content. Being November the flowering species period, we can infer that the plant is redirecting its biosynthetic route for the production of less polar indole alkaloids or other metabolites. D. macrophylla callus extracts showed terpenes but not alkaloids production, and showed no antioxidant, toxic and antibacterial activities in the performed assays. / A espécie amazônica Duroia macrophylla Huber (Rubiaceae) é produtora de triterpenos e alcaloides com atividades sobre Mycobacterium tuberculosis e um alcaloide com atividade tumoral. Entretanto, coletas realizadas em épocas diferentes mostraram diferença na composição química de diferentes indivíduos. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a sazonalidade da produção de metabólitos secundários em extratos de Duroia macrophylla, durante um ano, em dois espécimes. Também foram obtidos calos in vitro da espécie para extrações fitoquímicas e análise da produção dos metabólitos secundários. Para as análises fitoquímicas dos dois indivíduos foram utilizadas folhas coletadas mensalmente de abril/2013 a março/2014. O material vegetal foi submetido à extração com hexano e metanol, em banho de ultrassom. Os extratos foram concentrados e posteriormente analisados por cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H. Os espectros foram comparados por meio de uma análise de componentes principais. As culturas de tecidos in vitro foram estabelecidas com 50% de assepsia, após vários testes, a partir de explantes provindos de folhas jovens e com diferentes tempos de imersão dos reagentes químicos: etanol 70%, hipoclorito de sódio 2% e solução biocida. Depois de estabelecidos, os explantes in vitro foram induzidos ao processo de calogênese através da adição dos reguladores de crescimento cinetina e 2,4-D, em meio Murashige & Skoog. Os calos foram posteriormente extraídos com hexano e metanol e a produção dos metabólitos secundários foi avaliada por análise em CCDC e RMN de 1H. Os extratos hexânicos e extratos metanólicos obtidos dos dois indivíduos de Duroia macrophylla apresentaram indícios da presença de alcaloides e terpenos em todos os meses, durante um ano. A análise de componentes principais demonstrou que há uma variação sazonal na composição química dos extratos hexânicos de folhas de Duroia macrophylla, onde o teor de alcaloides indólicos foi maior na época mais chuvosa. Nos extratos metanólicos das folhas, o mês de novembro apresentou teores significativamente menores de alcaloides indólicos em relação aos outros meses, para os dois indivíduos estudados. Sendo o mês de novembro a época de floração da espécie, pode-se inferir que a planta está redirecionando a sua rota biossintética para a produção de alcaloides indólicos menos polares e também para a produção de outros metabólitos. Os extratos dos calos de D. macrophylla apresentaram terpenos, mas não alcaloides, e não apresentaram atividades antioxidante, tóxica e antibacteriana nos ensaios realizados.

Submitted by Márcia Silva (marcialbuquerq@yahoo.com.br) on 2017-11-21T14:28:35Z No. of bitstreams: 1 Julio Cezar de Souza OBTENÇÃO DE CALOS DE Duroia saccifera Hook. F. (Rubiaceae), ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO BIOLÓGICA DOS SEUS EXTRATOS.pdf: 2323718 bytes, checksum: 084cb7f030640340b5a3520e4920af74 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-11-21T15:26:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Julio Cezar de Souza OBTENÇÃO DE CALOS DE Duroia saccifera Hook. F. (Rubiaceae), ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO BIOLÓGICA DOS SEUS EXTRATOS.pdf: 2323718 bytes, checksum: 084cb7f030640340b5a3520e4920af74 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-11-21T15:29:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Julio Cezar de Souza OBTENÇÃO DE CALOS DE Duroia saccifera Hook. F. (Rubiaceae), ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO BIOLÓGICA DOS SEUS EXTRATOS.pdf: 2323718 bytes, checksum: 084cb7f030640340b5a3520e4920af74 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-21T15:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Julio Cezar de Souza OBTENÇÃO DE CALOS DE Duroia saccifera Hook. F. (Rubiaceae), ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO BIOLÓGICA DOS SEUS EXTRATOS.pdf: 2323718 bytes, checksum: 084cb7f030640340b5a3520e4920af74 (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Plants have a great biosynthetic potential, however, the percentage currently used is only a fraction of what plants can offer. The search for new sources of natural products and drugs derived from plants has expanded, especially on those with great therapeutic potential proven. The Rubiaceae family is perhaps the most studied plant family in the area of natural products, as several secondary metabolites have been identified with proven biological activity. The Duroia genre that belongs to Rubiaceae family has 30 species of which have been identified substances such as flavonoids, iridoids, terpenes, aromatic compounds and alkaloids. However all these substances were identified in only two species of the genus, which shows the importance of studies with other species. The Duroia saccifera was chosen as the object of this study by chemotaxonomic approach. The aim of the study was the induction and proliferation of callus in vitro, phytochemical study and evaluation of the biological activity of the extracts as an antibacterial, and antitumor antiophidic. The specie Duroia Saccifera was established in vitro from seeds collected in the reserve Adolfo Ducke in the city of Manaus - AM. The seeds were inoculated onto MS culture medium with the addition of GA3 and after 90 days of cultivation 50% of the seeds had germinated. The leaves of the seedlings obtained in vitro germination were inoculated onto MS medium with the addition of different growth regulators for callus induction. After 30 days of cultivation, it was observed that 80% of the leaves developed callus when inoculated on MS medium in the presence of 2,4-D and KIN. three callus extracts were performed: hexane extract, ethyl acetate extract and methanol extract. The hexane extracts when analyzed by nuclear magnetic resonance showed peaks indicating the presence of terpenes and steroids. As for biological activities, hexane extract had a significant activity in inhibiting phospholipase A2 Bothrops atrox venom. Regarding the antitumor activity, the hexane extract showed activity in lower concentrations against tumor type breast adenocarcinoma (MCF-7).; / As plantas possuem um grande potencial biossintético, porém, o percentual deste potencial utilizado atualmente é apenas uma fração do que as plantas podem nos oferecer. A procura por novas fontes de produtos naturais e fármacos oriundos de plantas tem se expandido, principalmente sobre aqueles com acentuado potencial terapêutico já comprovado. A família Rubiaceae é talvez a família de plantas mais estudada na área de produtos naturais, pois já foram identificados diversos metabólitos secundários com atividade biológica comprovada. O gênero Duroia que pertence a família Rubiaceae possui 30 espécies, de onde já foram identificadas substâncias como flavonoides, iridoides, terpenos, compostos aromáticos e alcaloides. Porém, todas estas substâncias foram identificadas em apenas duas espécies do gênero, o que mostra a importância de estudos com outras espécies. A espécie Duroia saccifera foi escolhida como objeto deste estudo por abordagem quimiotaxonômica. A finalidade do estudo foi a indução e multiplicação de calos in vitro, estudo fitoquímico e avaliação da atividade biológica dos extratos como antibacteriano, antiofídico e antitumoral. A espécie Duroia saccifera foi estabelecida in vitro a partir de sementes coletadas na reserva Adolfo Ducke, no município de Manaus – AM. As sementes foram inoculadas em meio de cultura MS com a adição de GA3 e após 90 dias de cultivo 50% das sementes haviam germinado. As folhas das plântulas obtidas da germinação in vitro foram inoculadas em meio MS com a adição de diferentes reguladores de crescimento para a indução de calo. Ao final de 30 dias de cultivo, foi observado que 80% das folhas desenvolveram calo quando inoculados em meio MS com a presença de 2,4-D e KIN. Foram obtidos três extratos a partir dos calos: extrato hexano, extrato acetato de etila e extrato metanol. O extrato hexano quando analisado em ressonância magnética nuclear apresentou picos que indicam a presença de terpenos e esteroides. Quanto as atividades biológicas, o extrato hexano teve uma atividade significativa na inibição da fosfolipase A2 do veneno de Bothrops atrox. Com relação a atividade antitumoral, o extrato hexano demonstrou atividade em menor concentração frente a linhagem tumoral adenocarcinoma de mama (MCF-7).