Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias. / En la producción avícola, los antimicrobianos son la principal herramienta terapéutica para el tratamiento de enfermedades bacterianas. Sin embargo, cuando las terapias farmacológicas no se realizan de forma adecuada, residuos de estos fármacos pueden permanecer en productos y subproductos de origen animal, por sobre los límites máximos residuales (LMR) establecidos, pudiendo generar diversos efectos adversos en la población. Las plumas al ser utilizadas como harina de plumas para la elaboración de piensos de otras especies productivas que van a consumo humano directo, pueden producir una reincorporación de residuos de antimicrobianos a la cadena alimenticia generando un gran riesgo para la salud pública a nivel mundial. Se realizó un estudio de depleción de concentraciones de tilosina, un antimicrobiano de amplio uso de producción aviar, en plumas y en tejidos comestibles (músculo e hígado) de pollos broiler tratados. Para la realización del estudio, se utilizaron 60 pollos broiler criados bajo condiciones controladas, a los cuales se les administró un tratamiento con una formulación farmacéutica comercial de tilosina tartrato al 80%, vía oral durante 5 días consecutivos. Se implementaron y validaron metodologías analíticas por cromatografía líquida acoplado a un detector de arreglo de fotodiodos (HPLC-DAD), para detectar y cuantificar en forma confiable y precisa el analito de interés a partir de las matrices de estudio. Las concentraciones de tilosina fueron cuantificadas a través de la ecuación del análisis de regresión lineal de las curvas de calibración en matriz fortificada. Las concentraciones en músculo e hígado fueron inferiores al límite de detección (LD) establecido para la técnica (50 μg kg-1) al día 4 post tratamiento. Mediante el estudio de depleción se estableció un tiempo de depleción para tilosina con un 95% de confianza en la matriz plumas, de 27 días. Este estudio concluye que las concentraciones en plumas permanecen en contracciones mayores y por periodos de tiempos más prolongados que en tejidos comestibles (músculo e hígado) una vez finalizado el tratamiento y respetado el periodo de resguardo establecido para tejidos comestibles. / In poultry production, antimicrobials are the main therapeutic tool for the treatment of bacterial diseases. However, when pharmacological treatments are not adequately performed, residues of these drugs may remain in products and by-products of animal origin, above established maximum residual limits (MRLs), which may lead to a number of adverse effects on the population. Feathers are used as feather meal for the elaboration of feed for other productive animals that go to direct human consumption, this can produce a reincorporation of antimicrobial residues to the food chain generating a great risk for public health at a world-wide level. A study of depletion of the concentrations of tylosin, an antimicrobial widely used in avian production, in feathers and in edible tissues (muscle and liver) of treated broiler chickens was carried out. For the study, a total of 60 broiler chickens raised under controlled conditions were given treatment with a commercial pharmaceutical formulation of 80% tylosin tartrate, orally for 5 consecutive days. Analytical methodologies were implemented and validated by liquid chromatography coupled to a photodiode array detector (HPLC-DAD), to reliably and accurately detect and quantify the analyte from the studied matrices. The tylosin concentrations were quantified through the linear regression analysis equation of the calibration curves in fortified matrix. Concentrations in muscle and liver were below the detection limit (DL) established for the technique (50 μg kg-1) at day 4 post-treatment. The depletion study established a depletion time for tylosin with 95% confidence in the feathers matrix of 27 days. This study concludes that the concentrations in feathers remain in larger contractions and for longer periods of time than in edible tissues (muscle and liver) once the treatment is finished and respecting the withdrawal time established for edible tissues. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt de Iniciación en Investigación 11140530.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias. / En la producción avícola, los antimicrobianos son la principal herramienta terapéutica para el tratamiento de enfermedades bacterianas. Sin embargo, cuando las terapias farmacológicas no se realizan de forma adecuada, residuos de estos fármacos pueden permanecer en productos y subproductos de origen animal, por sobre los límites máximos residuales (LMR) establecidos, pudiendo generar diversos efectos adversos en la población. Las plumas al ser utilizadas como harina de plumas para la elaboración de piensos de otras especies productivas que van a consumo humano directo, pueden producir una reincorporación de residuos de antimicrobianos a la cadena alimenticia generando un gran riesgo para la salud pública a nivel mundial. Se realizó un estudio de depleción de concentraciones de sulfacloropiridazina, un antimicrobiano de amplio uso de producción aviar, en plumas y en tejidos comestibles (músculo e hígado) de pollos broiler tratados. Para la realización del estudio, se consto con una totalidad de 71 pollos broiler criados bajo condiciones controladas, a los cuales se les administro un tratamiento con una formulación farmacéutica comercial de sulfacloropiridazina sodica al 10%, vía oral durante 5 días consecutivos. Se implementaron y validaron metodologías analíticas por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS/MS), para detectar y cuantificar en forma confiable y precisa el analito de interés a partir de las matrices de estudio. Las concentraciones de sulfacloropiridazina fueron cuantificadas a través de la ecuación del análisis de regresión lineal de las curvas de calibración en matriz fortificada. Las concentraciones en músculo e hígado se encontraron por debajo del LMR (100 μg kg-1) al día 7 post tratamiento. Mediante el estudio de depleción se estableció un tiempo de depleción para sulfacloropiridazina con un 95% de confianza en la matriz plumas, de 61 días. Este estudio concluye que las concentraciones en plumas permanecen en contracciones mayores y por periodos de tiempos más prolongados que en tejidos comestibles (músculo e hígado) una vez finalizado el tratamiento y respetado el periodo de resguardo establecido para tejidos comestibles. / In poultry production, antimicrobials are the main therapeutic tool for the treatment of bacterial diseases. However, when pharmacological treatments are not adequately performed, residues of these drugs may remain in products and by-products of animal origin, above established maximum residual limits (MRLs), which may lead to a number of adverse effects on the population. Feathers are used as feather meal for the elaboration of feed for other productive animals that go to direct human consumption; this can produce a reincorporation of antimicrobial residues to the food chain generating a great risk for public health at a world-wide level. A study of depletion of the concentrations of sulfacloropyridazine, an antimicrobial widely used in avian production, in feathers and in edible tissues (muscle and liver) of treated broiler chickens was carried out. For the study, a total of 71 broiler chickens raised under controlled conditions were given treatment with a commercial pharmaceutical formulation of 10% sodium sulfacloropyridazine, orally for 5 consecutive days. Analytical methodologies were implemented and validated by liquid chromatography coupled to rmass spectrometry (LC-MS/MS), to reliably and accurately detect and quantify the analyte from the studied matrices. The sulfacloropyridazine concentrations were quantified through the linear regression analysis equation of the calibration curves in fortified matrix. Concentrations in muscle and liver were below the LMR (100 μg kg-1) at day 7 post-treatment. The depletion study established a depletion time for sulfacloropyridazine with 95% confidence in the feathers matrix of 61 days. This study concludes that the concentrations in feathers remain in larger contractions and for longer periods of time than in edible tissues (muscle and liver) once the treatment is finished and respecting the withdrawal time established for edible tissues. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt de Iniciación a la Investigación 11140530.

Magister en Neurociencias / La epigenética como ciencia se dedica al estudio de la regulación de la transcripción de genes determinados, que está dada sin alteración en la secuencia de las bases nitrogenadas, siendo esta regulación marcas mitótica y meióticamente heredables. Diversas enfermedades han demostrado alteraciones en los patrones de metilación y por ende implicancia ambiental en la génesis de una patología determinada, entre estas encontramos el síndrome de Rett, Síndrome ATRX, Síndrome X frágil, e incluso publicaciones recientes han demostrado modificaciones epigenéticas en la patogenia del Alzheimer y el Parkinson. En este contexto y dada la prevalencia de enfermedades neurodegenerativas en nuestro país, y en especial de la enfermedad de Parkinson en la población chilena, es primordial evaluar la influencia ambiental que provoca la contaminación por metales en las modificaciones transcripcionales de genes puntuales y de significancia patológica y de cómo estos repercuten en la incidencia del Parkinson. Para esto se ha seleccionado una población minera del norte de nuestro país, en donde se ha descrito una gran incidencia y agregación de pacientes con enfermedad de Parkinson, los cuales comparten un factor ambiental en común: El haber estado expuestos a metales. Mi proyecto de tesis implica evaluar las diferencias en los patrones de metilación globales por medio de anticuerpos específicos para citosinas metiladas, analizando 4 grupos de trabajo: Pacientes parkinsonianos expuestos a contaminantes (trabajadores mineros), pacientes sanos expuestos a metales (trabajadores mineros), pacientes parkinsonianos sin exposición (muestras obtenidas de pacientes de Santiago) y pacientes sanos sin exposición (controles sanos de Santiago). Con esto se espera encontrar un espectro de metilación desde la muestra más metilada, (el control negativo, paciente sano sin exposición), hasta las muestras menos metiladas (pacientes parkinsonianos expuestos a metales). 5 Posteriormente se analizará el gen alfa-sinucleina (SNCA), el cual se ha descrito hipometilado en pacientes con Parkinson Idiopático (Ahmad Jowaed, 2010). Para esto se desarrollarán partidores específicos, tanto para muestras metiladas como no metiladas. Posteriormente se someterán tanto partidores como muestras a la secuenciación por bisulfito para posteriormente amplificar las muestras mediante PCR.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Hoy en día, los únicos fármacos aceptados para el tratamiento de la enfermedad de Chagas, son nifurtimox (NFX) y benznidazol (BNZ). Con el fin de conocer los efectos adversos de NFX, se realizó un estudio en 60 pacientes con enfermedad de Chagas crónica a quienes se administró el fármaco a dosis de 10mg/kg/día (sin sobrepasar los 700mg/día) por 60 días. 13 casos suspendieron la terapia, 49 (81,6%) presentaron efectos secundarios (21 pacientes urbanos y 28 rurales) y 7 (11,6%) no presentaron manifestaciones clínicas adversas por la terapia. Los efectos adversos más frecuentes fueron: náuseas, epigastralgias, “rash” cutáneos, anorexia, astenia y parestesias. Un alto porcentaje de los casos presentó baja de peso. No hubo modificación de los resultados en los exámenes de hemograma y perfil hepático por la administración del NFX. Se concluye que se debe efectuar un estricto control clínico y de laboratorio (monitoreo) al administrar el fármaco, considerando siempre co-morbilidad y criterios de inclusión-exclusión. / Today the only drugs approved for treatment of Chagas disease are nifurtimox (NFX) and benzinazole (BNZ). To know the adverse effects of NFX a study was conducted in 60 patients with chronic Chagas disease who were administered the drug at doses of 10 mg/kg/day (but not more than 700 mg/day) during 60 days. 13 cases discontinued treatment, 49 (81.6%) had side effects (21 urban and 28 rural) and 7 (11.6%) had not clinical adverse manifestations by the therapy. The most frequent adverse effects were: nauseas, epigastric pain, skin rash, anorexia, asthenia and paresthesia. A high percentage of cases presented low weight. No modification of the test scores of CBC liver profile due to NFX administration was observed. It is necessary to perform a strict clinical and laboratory control when the NFX is administered, always considering co-morbility and inclusion-exclusion criteria. / Financiamiento: Proyectos Fondecyt 1100768 - 1080445

Los solventes orgánicos tienen variados efectos nocivos en el sistema nervioso auditivo central. Producto de sus propiedades neuro y ototóxicas, la exposición a solventes orgánicos ha sido asociada a un déficit en el Procesamiento Auditivo (Central). El objetivo de este trabajo fue demostrar una asociación adversa entre la exposición ocupacional a solventes orgánicos y una disfunción auditiva central, mediante una batería de pruebas comportamentales, electroacústicas y electrofisiológicas. Para ello se comparó el rendimiento de 11 sujetos entre 23.11 y 53.4 años con un mínimo de 2 años de exposición a solventes orgánicos, con el de 11 sujetos no expuestos a solventes, pareados según edad, género y nivel educacional, mediante las siguientes pruebas: audiometría tonal liminar, emisiones otoacústicas producto de distorsión, hearing in noise test (HINT), pitch pattern sequence (PPS), dígitos dicóticos (DD), masking level difference (MLD), adaptative test of temporal resolution (ATTR), y potenciales evocados auditivos de tronco cerebral (PEAT). Los valores obtenidos fueron analizados descriptivamente, además de utilizar la prueba de Mann-Whitney U para explorar posibles diferencias significativas entre los grupos. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la prueba de emisiones otoacústicas en el oído derecho para la frecuencia 500 Hz, la prueba PPS para ambos oídos, y el puntaje promedio de la prueba HINT SRT. En el resto de las pruebas no se obtuvo diferencias significativas, pero sí un mejor rendimiento de los sujetos no expuestos en comparación con los sujetos expuestos. Se concluye que es necesario realizar más estudios al respecto para poder determinar con mayor precisión la asociación entre la exposición ocupacional a solventes orgánicos y un déficit en el Procesamiento Auditivo (Central). / Organic solvents have different adverse effects on the central auditory nervous system. Due to their oto-and neuro-toxic properties they have been associated with (central) auditory processing disorder. The aim of this study was to demonstrate an adverse association between organic solvent exposure and central auditory dysfunction evaluated through a test battery comprising behavioural, electroacoustic, and electrophysiological measures. Two groups of subjects were investigated. Eleven subjects occupationally exposed to solvents (for at least two years) aged between 23.11 and 53.4 years (study group) and 11 non-exposed subjects (control group) who were matched with the study group subjects for age, gender, and educational level. The test battery was comprised of pure-tone audiometry (PTA), distortion product otoacoustic emissions (DPOAEs), hearing-in-noise (HINT), pitch pattern sequence (PPS), dichotic digits (DD), masking level difference (MLD), adaptive tests of temporal resolution (ATTR), and auditory brainstem response (ABR) measures. Both descriptive and analytic statistics were explored to compare test results between both groups of subjects. Mann-Whitney U tests were computed to explore possible statistically significant differences between both groups of subjects. Statistically significant differences between groups were found for DPOAEs for the right ear at 500 Hz, PPS for both ears, and HINT SRT. For the remaining tests no significant differences between groups were observed. For all the tests, solvent-exposed subjects performed worse than non-exposed subjects. It is concluded that more research is needed to further evidence an association between occupational solvent exposure and (central) auditory processing disorder.

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Memoria para optar al título Profesional de Médico Veterinario / Una alteración del ambiente materno durante la gestación puede originar una readecuación fisiológica en el feto llamada “reprogramación fetal” (RF), con consecuencias funcionales adversas a largo plazo. La exposición prenatal a cadmio (Cd2+) puede generar un ambiente adverso a nivel placentario debido a que se acumula en la placenta induciendo menor peso de nacimiento de las crías. Esta hipótesis propone que la exposición a Cd2+ durante la gestación induce RF la que se manifiesta en una disfunción endotelial vascular en las crías en la edad adulta. Ratas vírgenes hembra Wistar fueron cruzadas y expuestas a Cd2+ en el agua de bebida (30 ppm de Cd2+como CdCl2) durante el período de gestación (21 días). Después del parto, las crías se mantuvieron en condiciones normales hasta la adultez (60 días). A esa edad se extrajeron los anillos aórticos y se determinó la reactividad vascular endotelio-dependiente (parámetro de función endotelial) y endotelio- independiente, y marcadores moleculares de factores de inflamación (VCAM-1) y estrés (HO-1), así como marcadores plasmáticos de angiogénesis (VEGF) y estrés oxidativo (8-isoprostano). El tejido aórtico de las ratas adultas expuestas a Cd2+ durante la gestación mostró una respuesta disminuida de relajación inducida por acetilcolina, indicando daño endotelial. Este efecto se manifestó tanto en hembras como en machos. No se detectó niveles de VEGF ni 8-isoprostano circulante ni en los animales controles ni tratados in útero. La expresión de VCAM-1 (mRNA) fue mayor en machos que en hembras y no se modificó con el tratamiento. El mRNA de HO-1 aumentó en aortas de animales tratados in útero, tanto en machos como en hembras aunque el efecto fue mayor en las hembras. No se detectó Cd2+ (ICP-MS) ni en tejidos fetales ni en leche materna aunque sí en placenta, lo que indica que este metal tóxico no traspasa la barrera placentaria ni tampoco se transfiere a las crías a través de la lactancia. Concluimos que la exposición prenatal a Cd2+ es un factor de RF porque induce, a largo plazo, una disfunción endotelial del tejido aórtico, proceso inicial característico de enfermedad cardiovascular. Se sugiere que estos efectos están mediados, en parte, por una alteración en la expresión de HO-1, gen inducible por Cd2+ y estrés, la que se genera por un efecto indirecto de Cd2+, que al acumularse en la placenta, altera su fisiología y funcionalidad. / Proyecto FONDECYT 1071110

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La comuna de Lago Ranco, Región de los Ríos, Chile, se caracteriza por tener un importante predominio de población rural, elevados niveles de pobreza, y poseer como principal actividad económica la producción pecuaria. Se encuentra ubicada en una zona volcánica por excelencia, la que alberga el segundo mayor campo geotérmico y de mayor actividad de los Andes Sur. En Junio de 2011 el Complejo Volcánico Puyehue - Cordón Caulle (CVPCC), ubicado en la sección suroriente de la comuna, hizo erupción, generando la evacuación de al menos 3500 personas. El desarrollo que tenga un evento natural adverso, se verá profundamente influenciado por la reacción de las comunidades afectadas y de las autoridades competentes. Y así esta estará determinada por la preparación previa realizada al respecto. Al enmarcar esta planificación en una perspectiva de Derechos Humanos, se acepta que debe considerar un enfoque basado en medios de subsistencia, es decir que no sólo se deben proteger las vidas humanas en riesgo, sino que es necesario resguardar los elementos de los que estas dependen. Así, en el caso de un gran número de familias pertenecientes al segmento denominado Agricultura Familiar Campesina (AFC), se debe abordar la protección de animales domésticos. Para este propósito el enfoque participativo otorga importantes contribuciones. En el presente estudio se utilizaron las herramientas de la Epidemiología Participativa (EP), para evaluar los efectos de la erupción del CVPCC en la AFC. Los resultados indican amplias repercusiones negativas en la AFC; la producción animal, elemento de relevancia en los medios de subsistencia, se vio afectada desde distintas perspectivas por la erupción del CVPCC, destacando el efecto de cenizas, directamente en la salud animal, como en la disponibilidad de alimento y agua. También se reconoció un impacto asociado a la venta de animales a bajo precio y daños ocurridos durante el proceso de evacuación. Se detectó un importante grado de incoherencia en la valoración general sobre el impacto en la producción pecuaria entre la visión de productores y autoridades, lo que acentúa la necesidad de realizar un plan participativo de Reducción de Riesgo a Desastres (RRD) y poner sus conclusiones en el centro del desarrollo socioeconómico. / Lago Ranco Commune in Region de Los Rios, Chile has a significant prevalence of rural population, high poverty levels and livestock production as the main economic activity. It is located in a quintessentially volcanic area, which has the second biggest, most active geothermal field in the South Andes. Complejo Volcánico Puyehue - Cordón Caulle (CVPCC), a complex volcano located in the southeast part of the commune, erupted in June 2011, leading to the evacuation of at least 3500 people. The development of an adverse natural event is profoundly affected by the reaction of the affected communities and the relevant authority, and the previous planning regarding it. By looking at this planning with a Human Rights Based approach, we propose that it must consider a perspective based in livelihoods. This means that not only the human lives at risk must be protected, but also the elements these lives depend on. Thus, the protection of livestock must be addressed for many families that belong to the segment labelled Peasant Family Farmers (AFC). The participatory scope provides important contributions for this protection. In this study, we used the tools of participatory epidemiology (EP) to evaluate the effects of the eruption of CVPCC on the AFC. The results indicate many negative repercussions in the AFC. The animal production, a relevant element in the AFC livelihood, was affected after the eruption of the CVPCC, especially by volcanic ash, which directly affected animal health and also the availability of food and water. The AFC were also affected by damages to property during the evacuation process and a reduced sale price of animals. We detected a high degree of inconsistency in the general assessment regarding the impact of the livestock production between the view of producers and authorities, which makes the creation of a participatory plan of Disaster Risk Reduction (RRD) more urgent, as well as placing its conclusions at the centre of socioeconomic development.

OBJETIVO: Evaluar la sensibilidad antibiótica de las bacterias causantes de ITU en gestantes que acuden al control pre natal en el HNDAC frente a los antibióticos comúnmente usados y describir las características clínicas asociadas. MATERIAL Y METODOS: Se realizo un estudio de tipo Descriptivo, Observacional, Transversal y Prospectivo, el grupo de estudio estuvo constituido por todas las gestantes que acudieron al primer control pre natal en el HNDAC entre el 01 de Enero del 2005 y el 31 de Marzo del 2005 de acuerdo con los criterios de inclusión y exclusión pre establecidos. Durante la atención en el consultorio de admisión obstetrica se registraron los datos pertinentes y se indico la realización del urocultivo. Los urocultivos positivos fueron sometidos a la prueba del antibiograma por el método de disco difusión estandarizado de Kirbi y Bauer, se evaluó y registro los resultados según las recomendaciones y estandarización de la NCCSL. Los datos se procesaron y analizaron con los programas SPSS, EPI INFO y Exel RESULTADOS: Se tomaron 653 Urocultivos resultando positivos 53 (8,1%). E.Coli fue el germen mas frecuente 67,9% seguido de E.fergusonii13,2%, Klebsiella 7.5%, Proteus7.5%. Frente al conjunto de bacterias causantes de ITU se obtuvieron los siguientes valores de sensibilidad Ampicilina 42.9%, Amoxicilina 44%, Ampicilina/Sulbactam 51%, Amoxicilina/Clavulanico 50%, Cefalexina 73,2%, Cefalotina73,5%, Cefazolina 88%, Cefadrina 75,6%, Cefuroxima 89,8%, Ceftazidima 95,9%, Ceftriaxona 95.3%, Nitrofurantoina 73.5%, Cotrimoxazol 42,6%, Amikacina 98%, Gentamicina 90%. El síntoma mas comúnmente referido fue la polaquiuria 62.3% y el 18.9% de pacientes con ITU no presentaron signo o síntoma alguno. CONCLUSIONES: Los antibióticos con mas alta sensibilidad frente al conjunto de bacterias causantes de ITU son los aminoglucósidos (Amikacina 98% y Gentamicina 90%) y las cefalosporinas de tercera generación (Ceftriaxona 95.3%, Ceftazidima 95,9%). Las Penicilinas y sulfamidas mostraron una pobre sensibilidad.

Doctor en Bioquímica / Reproduction is regulated through the integration of information that comes from the hypothalamus, hypophysis, and the ovary. There are critical hormone sensitive periods during development during which they are especially vulnerable to exposure to abnormal hormonal levels resulting from metabolic problems or environmental sources. These exposures may permanently alter the differentiation and function of reproductive organs. Several studies performed in humans and animal models have suggested that polycystic ovary syndrome (PCOS) originates during early development due to exposure to abnormal steroidal hormone levels. Supporting this, our group recently reported that the administration of a single dose of estradiol valerate (EV) to newborn rats can irreversibly program the polycystic ovary condition during adulthood. However, there is no information about how this neonatal exposure to a single dose of EV can determine the functional and structural changes seen in the adult ovary. The aim of this research was to determine if there are genes—primarily those most reported to be related to PCOS in humans—with permanently altered expression and if these expression patterns are due to modifications in the methylation pattern in their DNA sequence. A single dose (10 mg/kg) of EV was administered to neonatal rats, and PCR array and real-time PCR analyses were conducted to examine the subsequent gene expression patterns of growth factors, nuclear receptors, and coregulators. Twenty-four hours after the exposure, the EV-exposed rat ovaries expressed more androgen receptor (Ar) than did the control ovaries; in the 60-day old rats, the Ar mRNA levels decreased 6.4-fold relative to the controls. The interstitial tissue and antral follicles from the adult EV-treated rats expressed more Ar than did the control preantral follicles, suggesting a failure of the control mechanism for Ar expression in antral follicles. Using the mass-array technique, the methylation patterns of different transcription factor binding sites were found to be associated with the Ar gene. NBRE, the response element of nerve growth factor-induced B (Ngfi-b), was hypomethylated in the Ar gene from the EV-treated ovaries. There was also an increase in anti-Müllerian hormone (AMH) expression in adult ovaries (mRNA and protein) that was induced by the neonatal exposure to estradiol. The EV-treated rat ovaries had a higher level of AMH immunoreactivity in the antral follicles than did the controls; however, no significant differences were seen between the preantral follicles of the treated and control groups. The methylation pattern of the Amh gene from the ovaries of EV-treated adult rats showed differential methylation in the CpGs related to the estradiol response element (ERE) in the Amh gene. The neonatal ovary samples had hypermethylated CpGs in comparison to the 30- and 60-day old rats; the samples (granulosa cells) from the 60-day old rats had more methylation of the CpGs than did those from the 30-day old rats; thus, the methylation pattern depended on the stage of development. When we compared the EV-exposed and control rats, we found more methylation of the CpGs in the samples from the 60-day old EV-exposed rats than in those from the controls; there were no differences between the groups for the 2- and 30-day old rats. This work demonstrated that the neonatal exposure to estradiol induces an overexpression of AMH and AR in the rat ovary. The mechanism by which these changes are induced may involve an increase in the methylation of the ERE associated with the Amh gene, suggesting that the change in methylation allows ESR1 to induce Amh expression. The hypomethylation of NBRE associated with the AR gene suggests that AR expression may be induced in response to nerve growth factor or luteinizing hormone. These epigenetic modifications found in the current rat model provide a new framework for understanding the genesis of the polycystic ovary and its maintenance in humans, allowing more focus on the effects due to estrogen exposure / Die Fortpflanzung in Säugetieren wird durch Signale aus dem Hypothalamus, der Hypophyse und der Gebärmutter gesteuert. Während der Anlage der Gebärmutter in der Embryonalentwicklung gibt es ein kritisches Zeitfenster bei dem die Entwicklung durch veränderte Hormonspiegel oder andere äußere Einflüsse gestört werden kann. Dabei kann es zur permanenten Schädigung der reproduktiven Organe kommen. Studien am Menschen und in Tiermodellen legen nahe, dass das sogenannte Polyzystische Ovarialsyndrom durch erhöhte Steroidhormonspiegel verursacht wird. So konnte unsere Arbeitsgruppe kürzlich zeigen, dass bei neugeborenen Ratten die Gabe einer einzigen Dosis Estradiolvalerat (EV) ausreicht um ein Polyzystisches Ovarialsyndrom in den erwachsenen Tieren zu erzeugen. Die zugrundeliegenden Mechanismen sind allerdings bis heute nicht bekannt. Ziel dieser Arbeit war es zu untersuchen, ob die Expression bestimmter Gene in erwachsenen Ratten durch die Estradiolvaleratgabe im neonatalen Stadium permanent verändert wird und ob die veränderte Genexpression mit epigenetischen Veränderungen auf der Ebene der DNA Methylierung einhergeht. Hierzu wurden neugeborene Ratten mit einer einzigen Dosis EV (10 mg/Kg) behandelt um anschließend die Genexpression von Wachstumsfaktoren, nukleären Hormonrezeptoren und ihre Kofaktoren mittels PCR Arrays und quantitativer RT-PCR zu untersuchen. Wir konnten zeigen, dass die Ovarien von EV-behandelten Ratten das Androgenrezeptorgen (Ar) nach 24h stärker exprimierten als die Kontrollen. Nach 60 Tagen ging die ovariale Ar Expression allerdings um das 4-6-fache gegenüber unbehandelten Tieren zurück. Histologisch war die Ar Expression in antralen Follikeln und im Interstitium vom EV-behandelten adulten Tieren stärker als in preantralen Follikeln, was auf eine Störung von Regulationsmechanismen in antralen Follikeln hindeutet. Mittels MassArray-Technologie konnte außerdem gezeigt werden, dass die veränderte Ar Expression in EV-behandelten Tieren mit der verringerten DNA Methylierung einer potentiellen Transkriptionsfaktorbindestelle (NBRE: nerve growth factor-induced B response element) korreliert. Daneben war die Expression des Anti-Müller-Hormons (AMH) in Ovarien von EV-behandelten adulten Tieren sowohl auf mRNA als auch auf Proteinebene erhöht. Immunhistologisch zeigten insbesondere die antralen Follikeln von EV-behandelten adulten Tieren (nicht aber Interstitium und preantrale Follikeln) eine stärkere Färbung für AMH. Auch im Amh Gen konnten entwicklungs- und behandlungsabhängige Veränderungen der DNA Methylierung gemessen werden. Eine Bindungsstelle für den Estrogenrezeptor (ERE: estradiol response element) im Amh Gen zeigte Methylierungsunterschiede in Ovarien von adulten EV-behandelten Ratten. In normalen Tieren war der Methylierungsstatus dieser Region abhängig vom Entwicklungsstadium: im Vergleich zu 30 und 60 Tage alten Ratten war das Element in neugeborenen Ratten hypermethyliert und in Granulosazellpräperaten von 30 Tage alten Ratten weniger methyliert als in Präparaten von 60 Tage alten Tieren. Im Vergleich mit EV-behandelten Tieren zeigten Proben von 60 Tage alten Tieren eine signifikant erhöhte DNA Methylierung, während EV-behandelte neugeborene und 30 Tage alte Tiere sich nicht signifikant von den Kontrollen unterschieden. In dieser Arbeit konnte also gezeigt werden, dass bei Ratten die Gabe von Estradiol im neonatalen Stadium zu einer ovarialen Überproduktion von AMH und AR führt. Die Mechanismen die zu diesen Veränderungen führen könnten mit dem Verlust der DNA Methylierung im ERE des Amh Gens zusammenhängen, was vermutlich zu einer erhöhten ESR1-Bindung und AMH Expression führt. Die Hypomethylierung des NBRE im Ar Gen deutet darauf hin, dass hier NGF (nerve growth factor) oder LH (luteinisierende Hormon) an der veränderten Regulation beteiligt sind. Die im Rattenmodel gefundenen epigenetischen Veränderungen bieten neue Anhaltspunkte um die Entstehung und die Persistenz des Polyzystische Ovarialsyndroms im Menschen besser zu verstehen und zukünftige Forschung wird sich noch gründlicher mit den Effekten der Estrogenexposition auseinandersetzen müssen / Conicyt Mecesup Fondecyt