O Cancro Cítrico (CC), causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri ( Xac) é uns dos mais graves problemas fitossanitário da citricultura paulista. A partir da introdução da Lagarta Minadora dos Citros (LMC), Phyllocnistis citrella, o comportamento do CC mudou drasticamente, tornando-se mais severo. Para compreender a interação de Xac e da LMC em Limão Tahiti foram conduzidos, em condições controladas, três experimentos: (A) influência da via de penetração de Xac (estômato, ferimento mecânico e injúria de LMC das fases ovo, 1º ínstar, 3º ínstar e pupa) e das concentrações de inóculo de 10 1 , 10 2 , 10 4 e 10 6 UFC/mL na infecção de Xac; (B) efeito da idade do ferimento mecânico, da injúria de LMC e da folha intacta no progresso do CC; (C) influência da temperatura e do período de molhamento no desenvolvimento do CC. No experimento A, a concentração mínima de inóculo para causar CC via penetração de Xac por estômato foi de 10 4 UFC/mL; 10 2 UFC/mL para via ferimento mecânico e injúria de LMC na fase ovo e 1º ínstar; e 10 1 UFC/mL para via injúria fase 3º ínstar e pupa. A injúria da fase 3º ínstar e pupa proporcionaram maior severidade em relação às outras vias de penetração nas concentrações testadas (aproximadamente 6 vezes maior que a severidade em folha intacta a 10 6 UFC/mL). As severidades em folha com ferimento mecânico e com injúria da fase ovo e 1º ínstar não diferiram da folha intacta. No experimento B, o ferimento mecânico entre 0 e 6 dias após o ferimento da folha (0 a 6 dias de idade), injúria de LMC entre 0 e 32 dias após a ovoposição de P. citrella na folha (0 a 32 dias de idade) e folha intacta entre 0 e 35 dias após a emissão da folha (0 a 35 dias de idade) foram suscetíveis a Xac. A severidade decresceu linearmente com o aumento da idade do ferimento e da folha intacta. A severidade, em relação à idade de injúria, variou em função do modelo Beta generalizado, com ponto de inflexão aos 18 dias. A máxima severidade estimada em folha com injúria foi 10 vezes maior que em folha intacta. No experimento C, observou-se que para os menores intervalos de aparecimento de lesões e 100% de incidência de CC, as condições ótimas foram de 25 a 35ºC com período mínimo de molhamento de 4 horas. O modelo Beta-monomolecular ajustou-se bem à variação da severidade em função da temperatura e da duração do molhamento foliar. As temperaturas mínima e máxima estimadas foram de 14,9 e 42ºC. A máxima severidade estimada foi determinada para o molhamento de 24 horas a 31,7ºC. Em geral, a injúria de LMC nas fases acima de 3º ínstar influenciou na infecção de Xac possibilitando infecções mesmo em baixas concentrações de inóculo (10 células/mL) e durante um longo período (32 dias). Em folhas com injúria de LMC, a severidade de CC pode ser 10 vezes maior que em folha intacta. As condições favoráveis para a infecção de Xac são de 25 a 35ºC e a bactéria não demanda longos períodos de molhamento foliar (acima de 4 horas). Por esses resultados, conclui-se que a LMC tem papel relevante na epidemiologia do CC. / The Asiatic Citrus Canker (ACC), caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri ( Xac) is one of the most serious problems of citrus in São Paulo State, Brazil. After the introduction of Citrus Leafminer (CLM), Phyllocnistis citrella, the behavior of ACC changed drastically, becoming more severe. To understand the interaction of Xac and CLM on Tahiti Lime, it were, under controlled conditions, carried three experiments: (A) influence of the way of Xac penetration (stomata, mechanical wound and CLM injury of the stage: egg, 1st instar, 3rd instar and pupa) and of the inoculum concentrations of 10 1 , 10 2 , 10 4 and 10 6 CFU/mL in the Xac infection; (B) effect of the age of mechanical wound, of CLM injury and of unwounded leaf in the progress of the ACC; (C) influence of the temperature and of the period of leaf wetness in the development of the ACC. In the experiment A, the minimum inoculum concentration to cause ACC by penetration of Xac through stomata was of 10 4 CFU/mL; 10 2 CFU /mL by mechanical wound and CLM injury of egg stage and 1st instar; and 10 1 CFU /mL by injury of 3rd instar and pupa stage. The injury of 3rd instar and pupa stage have generated higher severity in relation to other ways of penetration on all concentrations (about 6 times more than the severity in unwounded leaf on 10 6 CFU /mL). The severities in leaf with mechanical wound and with injury of egg stage and 1st instar have not differed from the unwounded leaf. In the experiment B, the mechanical wound between 0 and 6 days (0-6 days of age), the CLM injury between 0 and 32 days after eggs laying of P. citrella (0-32 days of age) and unwounded leaf between 5 and 35 days (5-35 days of age) have shown susceptibility to Xac. The severity decreased linearly with increasing age of the wound and age of unwounded leaf. In relation to age of injury, the severity varied in function of generalized Beta model and the inflection point was 18 days. The maximum severity in leaf with injury was 10 times bigger than in unwounded leaf. In the experiment C, the optimum conditions appearance of lesions and 100% of incidence were 25-35ºC under minimum wetness duration of 4 hours. The Beta-monomolecular function provided a good description of severity variation in relation to the temperature and duration of leaf wetness. The estimated minimum and maximum temperatures were 14.9 and 42ºC. The estimated maximum severity was determined under wetness of 24 hours and 31.7ºC. In general, the LMC injury (up to 3rd instar stage) has influenced in the Xac infection, it has increased the efficiency of bacterium penetration still on low inoculum concentration and it has allowed Xac infection for long period (32 days). In leaf with CLM injury, the severity can be 10 times bigger than in unwounded leaf. The Xac infection is favored under 25-35ºC and the Xac does not demand long periods of leaf wetness (more than 4 hours).

O Cancro Cítrico (CC), causado por Xanthomonas axonopodis pv. citri ( Xac) é uns dos mais graves problemas fitossanitário da citricultura paulista. A partir da introdução da Lagarta Minadora dos Citros (LMC), Phyllocnistis citrella, o comportamento do CC mudou drasticamente, tornando-se mais severo. Para compreender a interação de Xac e da LMC em Limão Tahiti foram conduzidos, em condições controladas, três experimentos: (A) influência da via de penetração de Xac (estômato, ferimento mecânico e injúria de LMC das fases ovo, 1º ínstar, 3º ínstar e pupa) e das concentrações de inóculo de 10 1 , 10 2 , 10 4 e 10 6 UFC/mL na infecção de Xac; (B) efeito da idade do ferimento mecânico, da injúria de LMC e da folha intacta no progresso do CC; (C) influência da temperatura e do período de molhamento no desenvolvimento do CC. No experimento A, a concentração mínima de inóculo para causar CC via penetração de Xac por estômato foi de 10 4 UFC/mL; 10 2 UFC/mL para via ferimento mecânico e injúria de LMC na fase ovo e 1º ínstar; e 10 1 UFC/mL para via injúria fase 3º ínstar e pupa. A injúria da fase 3º ínstar e pupa proporcionaram maior severidade em relação às outras vias de penetração nas concentrações testadas (aproximadamente 6 vezes maior que a severidade em folha intacta a 10 6 UFC/mL). As severidades em folha com ferimento mecânico e com injúria da fase ovo e 1º ínstar não diferiram da folha intacta. No experimento B, o ferimento mecânico entre 0 e 6 dias após o ferimento da folha (0 a 6 dias de idade), injúria de LMC entre 0 e 32 dias após a ovoposição de P. citrella na folha (0 a 32 dias de idade) e folha intacta entre 0 e 35 dias após a emissão da folha (0 a 35 dias de idade) foram suscetíveis a Xac. A severidade decresceu linearmente com o aumento da idade do ferimento e da folha intacta. A severidade, em relação à idade de injúria, variou em função do modelo Beta generalizado, com ponto de inflexão aos 18 dias. A máxima severidade estimada em folha com injúria foi 10 vezes maior que em folha intacta. No experimento C, observou-se que para os menores intervalos de aparecimento de lesões e 100% de incidência de CC, as condições ótimas foram de 25 a 35ºC com período mínimo de molhamento de 4 horas. O modelo Beta-monomolecular ajustou-se bem à variação da severidade em função da temperatura e da duração do molhamento foliar. As temperaturas mínima e máxima estimadas foram de 14,9 e 42ºC. A máxima severidade estimada foi determinada para o molhamento de 24 horas a 31,7ºC. Em geral, a injúria de LMC nas fases acima de 3º ínstar influenciou na infecção de Xac possibilitando infecções mesmo em baixas concentrações de inóculo (10 células/mL) e durante um longo período (32 dias). Em folhas com injúria de LMC, a severidade de CC pode ser 10 vezes maior que em folha intacta. As condições favoráveis para a infecção de Xac são de 25 a 35ºC e a bactéria não demanda longos períodos de molhamento foliar (acima de 4 horas). Por esses resultados, conclui-se que a LMC tem papel relevante na epidemiologia do CC. / The Asiatic Citrus Canker (ACC), caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri ( Xac) is one of the most serious problems of citrus in São Paulo State, Brazil. After the introduction of Citrus Leafminer (CLM), Phyllocnistis citrella, the behavior of ACC changed drastically, becoming more severe. To understand the interaction of Xac and CLM on Tahiti Lime, it were, under controlled conditions, carried three experiments: (A) influence of the way of Xac penetration (stomata, mechanical wound and CLM injury of the stage: egg, 1st instar, 3rd instar and pupa) and of the inoculum concentrations of 10 1 , 10 2 , 10 4 and 10 6 CFU/mL in the Xac infection; (B) effect of the age of mechanical wound, of CLM injury and of unwounded leaf in the progress of the ACC; (C) influence of the temperature and of the period of leaf wetness in the development of the ACC. In the experiment A, the minimum inoculum concentration to cause ACC by penetration of Xac through stomata was of 10 4 CFU/mL; 10 2 CFU /mL by mechanical wound and CLM injury of egg stage and 1st instar; and 10 1 CFU /mL by injury of 3rd instar and pupa stage. The injury of 3rd instar and pupa stage have generated higher severity in relation to other ways of penetration on all concentrations (about 6 times more than the severity in unwounded leaf on 10 6 CFU /mL). The severities in leaf with mechanical wound and with injury of egg stage and 1st instar have not differed from the unwounded leaf. In the experiment B, the mechanical wound between 0 and 6 days (0-6 days of age), the CLM injury between 0 and 32 days after eggs laying of P. citrella (0-32 days of age) and unwounded leaf between 5 and 35 days (5-35 days of age) have shown susceptibility to Xac. The severity decreased linearly with increasing age of the wound and age of unwounded leaf. In relation to age of injury, the severity varied in function of generalized Beta model and the inflection point was 18 days. The maximum severity in leaf with injury was 10 times bigger than in unwounded leaf. In the experiment C, the optimum conditions appearance of lesions and 100% of incidence were 25-35ºC under minimum wetness duration of 4 hours. The Beta-monomolecular function provided a good description of severity variation in relation to the temperature and duration of leaf wetness. The estimated minimum and maximum temperatures were 14.9 and 42ºC. The estimated maximum severity was determined under wetness of 24 hours and 31.7ºC. In general, the LMC injury (up to 3rd instar stage) has influenced in the Xac infection, it has increased the efficiency of bacterium penetration still on low inoculum concentration and it has allowed Xac infection for long period (32 days). In leaf with CLM injury, the severity can be 10 times bigger than in unwounded leaf. The Xac infection is favored under 25-35ºC and the Xac does not demand long periods of leaf wetness (more than 4 hours).

A mancha preta dos citros causada pelo fungo Guignardia citricarpa Kiely [Phyllosticta citricarpa (McAlp.) Van der Aa], possui duas formas de infecção, conídios e ascósporos. Informações a respeito da importância dos conídios na epidemiologia da doença são escassas ou controversas. Visando uma maior compreensão sobre o patossistema citros-G. citricarpa (P. citricarpa), os objetivos desta dissertação foram: elaborar e validar uma escala diagramática para avaliação da severidade da mancha preta em folhas de citros; verificar o efeito da temperatura e da duração do período de molhamento na formação de apressórios formados a partir de conídios; observar por meio de microscopia eletrônica de varredura a germinação de conídios e a formação de apressórios sobre folhas destacadas de limão 'Siciliano' submetidas a diferentes temperaturas e períodos de molhamento. A escala diagramática com níveis de severidade de 1; 3; 6; 12; e 24% de área foliar lesionada foi validada por dois grupos de avaliadores, com e sem experiência na quantificação de doenças. Comparada com a avaliação sem escala, o uso da escala proporcionou melhor precisão e acurácia tanto para avaliadores experientes como inexperientes, quando considerada a estimativa média dos mesmos. Na maioria dos casos, os desvios entre estimativas e severidade atual da doença foram mais evidentes para os níveis de severidade entre 5 e 15%. A reprodutibilidade das avaliações resultou em valores de R 2 mais uniformes para a maioria dos avaliadores experientes. Diferenças consideráveis de precisão foram observadas entre avaliadores inexperientes. O efeito da temperatura (10 o C - 40 o C) e da duração do molhamento (4 - 48 h) na formação de apressórios formados a partir de conídios de G. citricarpa (P. citricarpa) foi avaliado sob condições "in vitro" e sobre a superfície de folhas de limão 'Siciliano'. A formação de apressórios ocorreu em todas as temperaturas a partir de 12 horas de molhamento, sendo os extremos de temperatura (10 o C e 40 o C) menos favoráveis à formação de apressórios. A temperatura mínima para formação de apressórios, estimada pela função beta generalizada foi de 3 o C e a máxima de 48,4 o C, ambas para 48 horas de molhamento. A formação de apressórios foi consideravelmente favorecida pela duração do período de molhamento, com o máximo de apressórios formados a 24 horas de molhamento, para a maioria das temperaturas. O período de molhamento constituído de 48 horas foi essencial para que os esporos submetidos a temperaturas de 10 o C e 40 o C, formassem apressórios. A superfície de resposta obtida pela multiplicação das funções beta generalizada e monomolecular apresentou um ajuste satisfatório para os dados observados na estimativa da porcentagem relativa de apressórios formados (R 2 =0,75). As amostras observadas em microscopia eletrônica de varredura possibilitaram a aquisição de imagens de conídios e apressórios sobre a superfície de folhas de limão 'Siciliano' em todas as combinações de temperatura e molhamento avaliadas. / Citrus black spot caused by Guignardia citricarpa Kiely [Phyllosticta citricarpa (McAlp.) van der Aa] presents two infection forms, conidia and ascospores. Information regarding the importance of the conidia in the epidemiology of the disease is scarce and controversial. Seeking a better understanding on the pathosystem citrus-G. citricarpa (P. citricarpa), the objectives of this dissertation were: elaborate and validate a diagrammatic scale for assessments of the citrus black spot; verify the effect of the temperature and of the wetness duration in the appressorium formation; observe through scanning electron microscopy the germination and formation of appressorium on outstanding lemon 'Siciliano' leaves submitted to different temperatures and wetness duration. The diagrammatic scale with severity levels of 1; 3; 6; 12; and 24% of diseased leaf area was validated by two groups of raters, with experience and without experience in the quantification of diseases. The scale provided better precision and accuracy for both experienced and inexperienced raters, considering the estimates average of them. In the majority of cases, the bias between estimated and actual disease severity were more evident for disease severity levels between 5 and 15%. The reproducibility of assessments resulted in R 2 with more uniforms values for the majority of the experienced raters, considerable differences of precision were observed among inexperienced raters. The effect of the temperature (10 o C - 40 o C) and of the wetness duration (4 - 48 h) in the germination of conidia and appressoria formation of G. citricarpa (P. citricarpa), was assessed "in vitro" and on the surface of lemon 'Siciliano' leaves. The appressoria formation occurred in all the temperatures starting from 12 hours of wetness. The extreme temperatures (10 o C and 40 o C) were less favorable to the apressorium formation. The minimum temperature for appressorium formation, estimated by generalized beta function was of 3 o C and the maximum of 48,4 o C, both for 48 hours of wetness. The appressorium formation was favored considerably by the wetness duration period, with the maximum of apressoria formed at 24 hours of wetness, for majority of the temperatures. The wetness duration period constituted of 48 hours was essential so that the spores submitted to temperatures of 10 o C and 40 o C, formed appressorium. The response surface obtained by the multiplication of the generalized beta and monomolecular functions provided a close fit to observed data in the estimate of the relative percentage of formed appressorium (R 2 =0,75). The samples observed in scanning electron microscopy made possible the acquisition of images of conidia and appressoria on the surface of lemon 'Siciliano' leaves in all the temperature combinations and wetness evaluated.

A mancha preta dos citros causada pelo fungo Guignardia citricarpa Kiely [Phyllosticta citricarpa (McAlp.) Van der Aa], possui duas formas de infecção, conídios e ascósporos. Informações a respeito da importância dos conídios na epidemiologia da doença são escassas ou controversas. Visando uma maior compreensão sobre o patossistema citros-G. citricarpa (P. citricarpa), os objetivos desta dissertação foram: elaborar e validar uma escala diagramática para avaliação da severidade da mancha preta em folhas de citros; verificar o efeito da temperatura e da duração do período de molhamento na formação de apressórios formados a partir de conídios; observar por meio de microscopia eletrônica de varredura a germinação de conídios e a formação de apressórios sobre folhas destacadas de limão 'Siciliano' submetidas a diferentes temperaturas e períodos de molhamento. A escala diagramática com níveis de severidade de 1; 3; 6; 12; e 24% de área foliar lesionada foi validada por dois grupos de avaliadores, com e sem experiência na quantificação de doenças. Comparada com a avaliação sem escala, o uso da escala proporcionou melhor precisão e acurácia tanto para avaliadores experientes como inexperientes, quando considerada a estimativa média dos mesmos. Na maioria dos casos, os desvios entre estimativas e severidade atual da doença foram mais evidentes para os níveis de severidade entre 5 e 15%. A reprodutibilidade das avaliações resultou em valores de R 2 mais uniformes para a maioria dos avaliadores experientes. Diferenças consideráveis de precisão foram observadas entre avaliadores inexperientes. O efeito da temperatura (10 o C – 40 o C) e da duração do molhamento (4 – 48 h) na formação de apressórios formados a partir de conídios de G. citricarpa (P. citricarpa) foi avaliado sob condições "in vitro" e sobre a superfície de folhas de limão 'Siciliano'. A formação de apressórios ocorreu em todas as temperaturas a partir de 12 horas de molhamento, sendo os extremos de temperatura (10 o C e 40 o C) menos favoráveis à formação de apressórios. A temperatura mínima para formação de apressórios, estimada pela função beta generalizada foi de 3 o C e a máxima de 48,4 o C, ambas para 48 horas de molhamento. A formação de apressórios foi consideravelmente favorecida pela duração do período de molhamento, com o máximo de apressórios formados a 24 horas de molhamento, para a maioria das temperaturas. O período de molhamento constituído de 48 horas foi essencial para que os esporos submetidos a temperaturas de 10 o C e 40 o C, formassem apressórios. A superfície de resposta obtida pela multiplicação das funções beta generalizada e monomolecular apresentou um ajuste satisfatório para os dados observados na estimativa da porcentagem relativa de apressórios formados (R 2 =0,75). As amostras observadas em microscopia eletrônica de varredura possibilitaram a aquisição de imagens de conídios e apressórios sobre a superfície de folhas de limão 'Siciliano' em todas as combinações de temperatura e molhamento avaliadas. / Citrus black spot caused by Guignardia citricarpa Kiely [Phyllosticta citricarpa (McAlp.) van der Aa] presents two infection forms, conidia and ascospores. Information regarding the importance of the conidia in the epidemiology of the disease is scarce and controversial. Seeking a better understanding on the pathosystem citrus-G. citricarpa (P. citricarpa), the objectives of this dissertation were: elaborate and validate a diagrammatic scale for assessments of the citrus black spot; verify the effect of the temperature and of the wetness duration in the appressorium formation; observe through scanning electron microscopy the germination and formation of appressorium on outstanding lemon 'Siciliano' leaves submitted to different temperatures and wetness duration. The diagrammatic scale with severity levels of 1; 3; 6; 12; and 24% of diseased leaf area was validated by two groups of raters, with experience and without experience in the quantification of diseases. The scale provided better precision and accuracy for both experienced and inexperienced raters, considering the estimates average of them. In the majority of cases, the bias between estimated and actual disease severity were more evident for disease severity levels between 5 and 15%. The reproducibility of assessments resulted in R 2 with more uniforms values for the majority of the experienced raters, considerable differences of precision were observed among inexperienced raters. The effect of the temperature (10 o C - 40 o C) and of the wetness duration (4 – 48 h) in the germination of conidia and appressoria formation of G. citricarpa (P. citricarpa), was assessed "in vitro" and on the surface of lemon 'Siciliano' leaves. The appressoria formation occurred in all the temperatures starting from 12 hours of wetness. The extreme temperatures (10 o C and 40 o C) were less favorable to the apressorium formation. The minimum temperature for appressorium formation, estimated by generalized beta function was of 3 o C and the maximum of 48,4 o C, both for 48 hours of wetness. The appressorium formation was favored considerably by the wetness duration period, with the maximum of apressoria formed at 24 hours of wetness, for majority of the temperatures. The wetness duration period constituted of 48 hours was essential so that the spores submitted to temperatures of 10 o C and 40 o C, formed appressorium. The response surface obtained by the multiplication of the generalized beta and monomolecular functions provided a close fit to observed data in the estimate of the relative percentage of formed appressorium (R 2 =0,75). The samples observed in scanning electron microscopy made possible the acquisition of images of conidia and appressoria on the surface of lemon 'Siciliano' leaves in all the temperature combinations and wetness evaluated.