L’androgenèse est une biotechnologie végétale utilisée pour fixer le bagage génétique des plantes en une seule génération. Elle repose sur la capacité d’un grain de pollen immature, la microspore, à restaurer sa totipotence cellulaire végétale et se dédifférencier puis s’engager dans la voie de l’embryogenèse. Or, on observe que la capacité de la microspore à s’engager dans l’embryogenèse est génétiquement variable. En dépit des nombreux avantages qu’elle présente, l’androgenèse entraîne souvent une conséquence indésirable, soit une distorsion de la ségrégation (DS) chez les populations issues de cette biotechnologie. Ma thèse porte sur l’étude (i) du transcriptome de la microspore en transition entre la voie de développement du grain de pollen et celle de l’androgenèse et (ii) de la DS pour déterminer quand la DS survient dans le processus et où elle affecte le génome. J’ai utilisé l’orge comme espèce modèle pour mon étude. L’analyse transcriptomique a été réalisée sur la microspore isolée de l’anthère à trois stades, soit avant (jour 0) et immédiatement après (jours 2 et 5) l'application d'un traitement de stress visant à induire la voie de l’androgenèse. Je me suis intéressé à deux catégories de gènes; soit les gènes exprimés exclusivement à un stade précis et les gènes exprimés différemment lors de l’initiation de l’androgenèse. J’ai pu identifier des gènes exprimés exclusivement dans la microspore au jour 0 (11), 2 (34) ou 5 (367). Au jour 5, j’ai constaté l’induction de nombreux gènes codant pour des FT et des gènes impliqués dans la synthèse ou la transduction du signal de nombreux régulateurs de croissance. L’analyse des gènes exprimés différemment m’a permis d’identifier certains processus métaboliques qui sont activés/réprimés lors du passage de la microspore du jour 0 au jour 2 et du jour 2 au jour 5. Les gènes exprimés exclusivement à un stade précis du développement pourraient servir de marqueurs moléculaires indicateurs de la performance en androgenèse pour optimiser les protocoles de culture. Ensuite, la DS a été étudiée par une approche de génotypage à l’échelle génomique. J’ai d’abord développé une méthodologie d’analyse génotypique novatrice, reproductible et précise pour étudier la fréquence allélique sur un échantillon en composite. Cette méthode m’a permis d’étudier la fréquence allélique chez 1) des échantillons de microspores (avant et après l’application d’un stress), 2) des embryons et 3) des plantes régénérées. J’ai montré que la DS survenait à la fois lors du développement des embryons et la régénération des plantes. Aucune DS n’a été observée chez les échantillons de microspores. Mes résultats montrent que la sélection engendrant la DS s’opère au cours de la culture in vitro. Toujours à l’aide de cette méthode de génotypage en composite, j’ai identifié et comparé la fréquence et l’étendue de la DS chez 12 populations de lignées haploïdes doublées (HD). Dans cette seule étude, un plus grand nombre de populations de lignées HD (12) ont été caractérisées que ce qui avait été fait dans la somme de toutes les études antérieures dans la littérature scientifique. Nous avons montré que les régions de distorsion de ségrégation différaient beaucoup quant à leur position, leur étendue et l’amplitude de la distorsion d’un croisement à l’autre. La connaissance de ces allèles permettrait de prédire le potentiel androgénique des génotypes dans un programme de sélection. Mes travaux de thèse élèvent à l’ère des «omics» la recherche chez la microspore d’orge dans le système de l’androgenèse. À une échelle sans précédent, mon étude transcriptomique explore et décrit les changements d’expression génique au cours de la transition développementale de la microspore. Mon étude génomique identifie quand s’exerce la sélection engendrant la distorsion de la ségrégation des allèles dans ce système et décrit quelles régions chromosomiques sont affectées par cette distorsion. À la lumière de mes résultats, dans le dernier chapitre, je propose certaines pistes de recherche pour poursuivre l’étude des mécanismes moléculaires dirigeant la transition développementale de la microspore en androgenèse et pour développer des outils de génotypage afin d’utiliser la DS comme un outil d’amélioration génétique. / Androgenesis is a plant biotechnology used to fix the genetic background of plants in a single generation. This is based on the ability of an immature pollen grain, the microspore, to restore its totipotency, to dedifferentiate and then to engage in the path of embryogenesis. However, it is observed that the ability of the microspore to engage in embryogenesis is genetically variable. Despite the many desirable attributes of androgenesis, an undesirable side - effect is the segregation distortion (SD) encountered in populations resulting from this biotechnology. My thesis focuses on (i) the study of the transcriptome of microspores undergoing a developmental transition from the pollen - grain pathway towards embryogenesis and (ii) to identify when SD arises in the process and in which genomic regions it occurs. I used barley as a model species for my studies. Transcriptomic analysis was performed on microspores isolated from anthers at three stages corresponding to the microspore before (day 0) and immediately after (days 2 and 5) the application of a stress treatment aimed at inducing embryogenesis. I was interested in two categories of genes: those expressed exclusively at a specific stage of microspore development and those that were differentially expressed during the initiation of androgenesis. I was able to identify genes expressed exclusively in the microspore on day 0 (11), 2 (34) or 5 (367). On day 5, I found the induction of many genes encoding transcription factors (T Fs) in addition to genes involved in the synthesis or signal transduction of many growth regulators. The analysis of differentially expressed genes allowed me to identify certain metabolic processes that were activated/repressed during microspore development from day 0 to 2 and from day 2 to 5. Genes expressed exclusively at a specific stage of development could serve as molecular markers indicative of the performance in androgenesis to optimize isolated microspore culture protocols. Then, SD was studied using a whole - genome genotyping approach. I first developed an innovative, reproducible and accurate genotypic analysis methodology to determine allelic frequency on pooled samples. This method was then used to estimate allelic frequencies in samples of microspores (before and after the application of stress), embryos and regenerated plants. I showed that SD arises during both the development of embryos and the regeneration of plants. No SD was observed in samples of microspores. My results show that the selective forces promoting SD act during in vitro culture. Still using the same genotyping method performed on pooled samples, I identified and compared the frequency and extent of SD in 12 populations of doubled haploid lines (DH). A greater number of DH (12) populations were characterized in my study alone than the sum of all previous studies in barley. I showed that segregation distortion regions greatly differ in their position, extent, and magnitude in different DH populations. Knowledge of these alleles would be useful to predict the androgenic potential of a genotype in a breeding program. My dissertation has allowed research into barley microspores, or more widely androgenesis, to enter into the “omics” era. On an unprecedented scale, my transcriptomic study explores and describes the gene expression changes that occur during the developmental transition that the microspore undergoes in the course of androgenesis. My genomic study identifies when the selection (producing SD) arises in this system and describes which chromosomal regions are affected by this distortion. In light of my findings, in the final chapter I propose some lines of research to further study the molecular mechanisms driving the developmental transition from microspores to embryos and to develop genotyping tools to use SD as a genetic improvement tool.

No description available.

Le rat Dumbo présente un aspect malformatif évoquant certains syndromes crânio-faciaux humains. La compréhension du phénotype Dumbo pourrait expliquer les événements cellulaires et moléculaires à l’origine de ces syndromes. Le données recueillies chez le rat Dumbo et comparées à celles du rat Wistar sont susceptibles de constituer de précieuses informations éventuellement transposables à l’espèce humaine.<p><p>La première étape de cette étude a consisté en des analyses morphologiques et morphométriques afin de vérifier les perturbations morphologiques communes entre les rats Dumbo et les syndromes malformatifs humains :la brièveté des os zygomatique, maxillaire, mandibulaire et la position basse des oreilles. Ces analyses ont été réalisées sur les squelettes embryonnaires âgés de 16 jours à 21 jours de rats Dumbo et Wistar à l’aide d’une coloration in toto au Bleu Alcian – Alizarine. La deuxième étape de cette étude consistait en une analyse cytogénétique. Pour ce faire, nous avons établi le caryotype du rat Dumbo et nous l’avons comparé avec le caryotype du rat Wistar. L’étape suivante fut de procéder à l’analyse histologique des malformations crânio-faciales chez le rat Dumbo en observant la chondrogenèse pendant la morphogenèse crânio-faciale. Enfin, l’examen de l’expression des gènes Msx1 sens (S) ,Msx1 antisens (AS) et Dlx1 dans l’extrémité céphalique des rats Dumbo a été réalisé par les techniques de RT–PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction method). Des estimations semi-quantitatives ont été validées en utilisant des dilutions ADNc du rat Wistar. Des densitométries de la densité d’amplicons fluorescence ont été réalisées à l’aide du logiciel VilberLourmat Bio1D software.<p><p>Les résultats obtenus ont permis de caractériser de manière précise les malformations crânio-faciales chez le rat Dumbo.<p> <p>1-\ / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

No description available.

No description available.

No description available.

Univ., Diss.--Greifswald, 2005. / Literaturverz. S. 383 - 401.

No description available.

No description available.

La transition maternelle-embryonnaire constitue une étape très importante dans le développement précoce des animaux. Elle marque la transition entre l'utilisation et la dégradation du matériel génétique maternel vers l'activation du nouveau matériel génétique embryonnaire. Ces ARNm maternels que contient l'ovocyte sont particulièrement importants durant les quelques jours où la transcription est absente, laissant le zygote utiliser ses réserve de transcrits accumulés. La transition maternelle-embryonnaire doit donc comprendre des mécanismes de contrôles suffisamment précis pour permettre la dégradation des transcrits maternels non-traduits. Ces contrôles, qui ne sont pas encore bien connus dans la littérature, font l'objet de beaucoup de recherches. Les microARNs sont de petits fragments d'ARN d'une longueur de 19 à 24 nucleotides de plus en plus étudiés pour leurs rôles dans la régulation post-transcriptionnelle des gènes et représentent un mécanisme de régulation potentiel des transcrits maternels. L'analyse des microARNs a donc été effectuée tout au long de la maturation ovocytaire jusqu'aux stades embryonnaires préimplantatoires. Une analyse préliminaire comparant un groupe de GV à un groupe de Mil par biopuce a permis de sélectionner deux candidats, soit miR-21 et miR-130a, qui possèdent tous les deux une expression différentielle (P < 0,01). Leurs formes mature et précurseur ont été quantifiées sur des pools de 20 ovocytes en stades GV, GVBD et Mil, ainsi que chez les embryons de 2, 4, 8 cellules et blastocystes, en trois réplicats biologiques (n = 3). Les quantifications ont démontré des résultats surprenants. Pour miR-130a mature, une corrélation positive (P = 0,05) du stade GV jusqu'à l'embryon de 8 cellules a été validée par un profil semblable chez le précurseur (P = 0,002). Une corrélation positive a aussi été obtenue pour miR-21 (P = 0,003) et son précurseur a démontré une augmentation significative (P = 0,05) entre le niveau d'expression observé en Mil et le niveau d'expression chez l'embryon de 2 cellules. Suite à une exposition d'une durée de 30 à 34 heures dans un milieu de culture contenant 25 pg/ml d'a-amanitine, les mêmes microARNs ont été quantifiés sur des pools d'embryons de 2 cellules. Dans tous les cas, excepté pour le précurseur de miR-130a, les résultats ont démontré une diminution significative du niveau d'expression chez les embryons traités (P < 0,05). De plus, le gène contrôle SFRS3 a aussi démontré une diminution significative. Pour toutes les quantifications, le gène H2A.1 a