O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) desempenha um papel importante na angiogênese, induzindo a proliferação da célula endotelial, migração e sobrevivência. Com o intuito de promover a formação de novos vasos, e obter uma melhora na circulação colateral, VEGF tem sido utilizado para o tratamento de áreas de isquemia cardíaca, na doença cardiovascular. A manutenção da vitalidade pulpar com VEGF pode melhorar o prognóstico dos dentes que sofreram avulsão, prevenindo a perda precoce do dente. O propósito deste estudo foi desenvolver um modelo para se estudar o processo de revascularização da polpa dentária e avaliar o efeito do VEGF- 165 na angiogênese da polpa humana e na apoptose. Fatias de dente humano foram mantidas in vitro (cultura) com e sem VEGF (50ng/ml) durante 7 dias. Coloração de imuno-histoquímica para o Fator de Von Willebrand (Fator VIII) foi utilizada para quantificar o número de vasos sangüíneos no tecido pulpar. O número de vasos sangüíneos foi significantemente mais alto no grupo do VEGF (média -67.87) comparado ao grupo controle (média- 46.25, p< .05). O teste do Tunel foi usado para determinar o número de células apoptóticas nos grupos com e sem VEGF. Análises da expressão de VEGFR-2 por RT-PCR foram realizadas nas células endoteliais da microvasculatura da derme humana (HDMECs), células pulpares indiferenciadas (OD-21), células tipo odontoblasto de camundongo (MDPC-23) e macrófagos. A expressão de VEGFR-2 foi detectada nas HDMECs, mas não nas outras 3 linhas celulares. Quatro fatias de dente humano por camundongo imunodeprimido foram implantadas na região dorsal, subcutaneamente, pelo período de 7 dias. A vitalidade pulpar foi determinada pelas análises microscópica e imuno-histoquímica. O teste do Tunel foi usado para determinar o número de células apoptóticas. O modelo de angiogênese pulpar utilizando camundongos imunodeprimidos (SCID mouse model of pulp angiogenese) demonstrou ser um modelo viável para se estudar o processo de revascularização da polpa dentária humana. Levando-se em consideração os resultados obtidos neste estudo, sugere-se que o VEGF possa ter um efeito positivo na revascularização de dentes avulsionados. E que o modelo de angiogênese pulpar desenvolvido nesta pesquisa possa ser útil para responder a inúmeras novas questões experimentais na área de Endodontia. / The Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays na important role in angiogenesis by inducing endothelial cell proliferation, migration, and survival. To promote new vessel formation and improve collateral circulation, VEGF has been used to treat ischemic heart areas in cardiovascular disease. Maintenance of pulp vitality with VEGF may improve the outcomes of avulsed teeth, preventing premature tooth loss. The purpose of this study was to develop a model system to study the process of dental pulp revascularization, and assess the effect of VEGF-165 in the human pulp angiogenesis and apoptosis. Human tooth slices were maintained in vitro for 7 days +/- VEGF (50ng/mL). Immunohistochemistry staining for Von Willebrand?s factor (Factor VIII) was used to quantify the number of vessels in pulp tissues. There was a significantly higher number of blood vessels in the VEGF group (67.8 Mean) compared to the control group (46.2 Mean, p<0.05). Tunel Assay was used to determine the number of apoptotic cells in +/- VEGF groups. RTPCR analyses of VEGFR-2 transcripts were used on human dermal microvascular endothelial cells (HDMECs), undifferentiated pulp cells (OD-21), mouse odontoblast-like cells (MDPC-23), and macrophages. VEGFR-2 expression was detected in HDMECs but not in the other 3 cell lines. Four tooth slices per mouse were subcutaneously implanted in the dorsal region for 7 days. Pulp vitality was determined by histological and immunohistochemical analysis. Also, Tunel Assay was used to determine the number of apoptotic cells. SCID mouse model of pulp angiogenesis demonstrated to be a good model system to study revascularization of human dental pulps. Taking into account the findings of this study, it is suggested that VEGF could have a positive effect in the revascularization of avulsed teeth. It is hoped that this pulp angiogenesis model be useful to answer a number of new experimental questions in the area of Endodontics.

Apesar de sua importância clínica e epidemiológica, a fisiopatologia da préeclâmpsia ainda não foi completamente compreendida. Sabe-se que a doença constitui-se de uma fase pré-clínica e um estágio clínico. Durante a última década muito esforço tem se concentrado na identificação precoce da doença, ainda em sua fase pré-clínica. A literatura científica tem demonstrado claramente um desequilíbrio na regulação da angiogênese das gestantes com pré-eclâmpsia, marcado por níveis elevados do fator antiangiogênico soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e níveis diminuídos do fator pró-angiogênico placental growth fator (PlGF). Embora um número crescente de estudos em populações de alto risco tenha avaliado o papel desses biomarcadores no diagnóstico de pré-eclâmpsia, dados sobre sua utilização para a predição de pré-eclâmpsia superajuntada, cujo diagnóstico pode ser particularmente difícil, permanecem relativamente escassos e controversos. Com o presente estudo pretendemos avaliar o desempenho de medidas seriadas dos níveis maternos circulantes dos fatores sFlt-1 e PlGF, bem como da razão sFlt-1/PlGF, para predição de pré-eclâmpsia superajuntada e compará-lo ao seu desempenho na predição de pré-eclâmpsia em sua forma \"pura\", não superajuntada. Para este propósito, estudamos uma coorte prospectiva composta de dois braços, um de gestantes com hipertensão arterial crônica e outro de gestantes normotensas, e avaliamos os níveis séricos de sFlt-1 e de PlGF e a razão sFlt-1/PlGF nas idades gestacionais de 20, 26, 32 e 36 semanas, tendo como desfecho principal o diagnóstico de pré-eclâmpsia. Um total de 97 gestantes foram acompanhadas, 37 normotensas e 60 com hipertensão arterial crônica. Entre elas, 4 (10,8%) desenvolveram pré-eclâmpsia e 14 (23,3%) desenvolveram pré-eclâmpsia superajuntada. Para predição de pré-eclâmpsia, a análise ROC (Receiver Operating Characteristics) apresentou área sob a curva (AUC - area under curve) de 0,83 (IC 95% = 0,68-0,99, P = 0,035) para dosagem de PlGF com 20 semanas e AUC = 0,92 (IC 95% = 0,81 - 1,00, P = 0,007) para a razão sFlt-1/PlGF com 26 semanas de gestação. A variação percentual dos níveis de PlGF entre 26 e 32 semanas de gestação apresentou AUC = 0,96 (IC de 95% = 0,89-1,00, P = 0,003). Para a predição de pré-eclâmpsia superajuntada, a razão sFlt-1/PIGF na idade gestacional de 32 semanas apresentou AUC = 0,69 (IC de 95% = 0,53-0,85, P = 0,039). Entre 20 e 26 semanas de gestação, a variação percentual do PIGF e da razão sFlt-1/PlGF apresentaram, respectivamente, AUC = 0,74 (IC de 95% = 0,58-0,90, P = 0,018) e AUC = 0,71 (IC 95% = 0,52-0,91, P = 0,034). Por nossos resultados podemos concluir que, embora os níveis de PlGF e a razão sFlt-1/ PlGF tenham apresentado bons desempenhos na predição de pré-eclâmpsia, é preciso ter cuidado ao usá-los para a predição de pré-eclâmpsia superajuntada. Nessas gestantes, a dosagem dos fatores angiogênicos apresenta capacidade de predição menor e mais tardia. Avaliações seriadas dos fatores podem melhorar o desempenho dos testes para predição de pré-eclâmpsia superajuntada em idades gestacionais mais precoces / Despite being a major public health problem, the pathophysiology of preeclampsia is incompletely understood. Preeclampsia progression comprises a pre-clinical stage and a clinical stage. During the last decade much work has focused on identifying the pre-clinical stage of preeclampsia. Many researchers have clearly demonstrated an anti-angiogenic imbalance that is marked by higher levels of soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and lower levels of placental growth factor (PlGF) in the subjects who develop preeclampsia compared with those who do not. Although a growing number of studies in the high-risk population have shown the role of these biomarkers in diagnosing preeclampsia, superimposed preeclampsia, which can be a challenging diagnosis, remains partially understudied and the literature regarding this subject continues to be relatively scarce as well as controversial. By this study, we aimed to evaluate the performance of serial measurements of maternal circulating sFlt-1 and PlGF levels for the prediction of superimposed preeclampsia in chronic hypertensive subjects and to compare it to the prediction of preeclampsia in normotensive control subjects. For this purpose, we evaluated a two-armed prospective cohort of women with normotensive and chronic hypertensive pregnancies and assessed the serum levels of sFlt-1 and PlGF and the sFlt-1/PlGF ratio at gestational ages of 20, 26, 32 and 36 weeks, having preeclampsia as the primary outcome to be predicted. A total of 97 women were followed-up, 37 in the normotensive group and 60 in the chronic hypertensive group. Among them, 4 (10.8%) women developed preeclampsia and 14 (23.3%) developed superimposed preeclampsia. For predicting preeclampsia, PlGF at 20 gestational weeks presented an AUC=0.83 (CI 95% = 0.68 - 0.99, P=0.035) and the sFlt-1/PlGF ratio at 26 gestational weeks presented an AUC=0.92 (CI95% = 0.81 - 1.00, P=0.007). The percent change of the PlGF levels between 26 and 32 gestational weeks presented an AUC=0.96 (CI 95% = 0.89 - 1.00, P=0.003). For predicting superimposed preeclampsia, the sFlt-1/PlGF ratio at 32 gestational weeks presented an AUC=0.69 (CI 95% = 0.53 - 0.85, P=0.039). Between 20 and 26 gestational weeks, the percent change of PlGF and the sFlt-1/PlGF ratio presented, respectively, an AUC=0.74 (CI 95% = 0.58 - 0.90, P=0.018) and an AUC=0.71 (CI 95% = 0.52 - 0.91, P=0.034). By our results, we concluded that, although the PlGF level and the sFlt-1/PlGF ratio present good performances in the prediction of preeclampsia, caution is required when using them for the prediction of superimposed preeclampsia. Sequential assessments slightly improve the test performances for predicting superimposed preeclampsia at earlier gestational ages

Objetivo: Avaliar o efeito do Meloxicam sobre a expressão do VEGF e de seus receptores durante o reparo alveolar pós-exodontia em ratos. Material e Método: Foi realizada a exodontia do incisivo superior direito em 180 ratos Wistar, machos, com 60 dias de idade, subdivididos em dois grupos: 1) Grupo controle (n=90): os animais receberam injeção intraperitoneal de 0,1 ml de solução 0.9% NaCl diariamente, durante 7 dias; e 2) Grupo experimental (n=90): os animais receberam injeção diária de 3mg/kg de massa corporal de Meloxicam em solução 0.9%NaCl, durante 7 dias. Após 3, 7, 10, 14, 21 e 30 dias, os alvéolos foram coletados, fixados em formol a 10% em tampão fosfato, radiografados e processados histologicamente. Para o PCR-RT, as peças foram colocadas em Trizol® e armazenadas a -80ºC e para o Western blotting armazenado a -80ºC. Cortes histológicos semi-seriados (250m de intervalo entre os cortes) de todo o alvéolo no sentido transversal foram obtidos e corados pela hematoxilina e eosina. Avaliou-se nesses cortes pelo método morfométrico de volumetria de pontos a densidade de volume de tecido ósseo (%TO), tecido conjuntivo (%TC), coágulo sanguíneo (%Coa) e vaso sanguíneo (%VS). Os dados obtidos foram submetidos ao teste t para comparação entre os grupos por período e a ANOVA seguido do teste de Tukey para comparação entre períodos dentro de cada grupo, adotando nível de significância de p<0,05. Resultados: A análise radiográfica mostrou ocorrência com o transcorrer do tempo alterações no contorno da cortical óssea e redução no tamanho do alvéolo, além de um pequeno aumento na radiodensidade na região central do alvéolo. Morfologicamente, o grupo experimental exibiu em todos os períodos analisados, um atraso no processo de reparo em relação ao controle, exibindo maior quantidade de coágulo sanguíneo com lenta substituição por tecido conjuntivo e menor reabsorção da cortiça óssea alveolar e da formação/remodelação óssea. Na análise morfométrica a %TO no grupo controle foi de 0.817, 0.255, 0.368, 0.409 e 0.453 vezes maior em relação ao grupo experimental nos períodos de 3, 7, 10, 14 e 21 dias, respectivamente. Quanto a %Coa, os valores no grupo controle foram 0,097, 0,611, 1,189 e 1.497 vezes menor em relação ao grupo experimental nos períodos de 7, 10, 14 e 21 dias,respectivamente. A %VS no grupo controle apresentou 0,328 e 0,439 vezes maiores em relação ao grupo experimental nos períodos de 10 e 14 dias, respectivamente. A %TC não apresentou diferença estatística entre os grupos. As imunomarcações para VEGF e VEGFR-1 foram observadas em osteoblastos e osteócitos na cortical alveolar, e em fibroblastos no interior do alvéolo, com diferença estatisticamente significante apenas para VEGFR-1, onde a imunomarcação no grupo controle foi 0,544; 0,325 e 0,325 vezes maior em relação ao grupo experimental nos períodos de 3, 7 e 10 dias, respectivamente. As análises do PCR-RT para VEGF no grupo controle foi 1,274 vezes maior no período de 10 dias em relação ao grupo experimental. Na expressão de RNAm para VEGFR-1, o grupo controle foi 1,431; 0,951 e 0,845 vezes maior nos períodos de 3, 10 e 30 dias, respectivamente, em relação ao grupo experimental e VEGFR-2 no grupo controle de 4,649 e 0,790 vezes maior nos períodos de 3 e 7 dias, respectivamente. A expressão protéica do VEGF no grupo controle foi 0,365; 1,056; 2,187 e 0,350 vezes maior nos períodos de 3; 7; 10 e 14 dias em relação ao grupo experimental. Conclusões: Com base nos resultados obtidos foi possível concluir que o uso do antiinflamatório Meloxicam, administrado diariamente por 7 dias, altera a expressão do RNAm e das proteínas do VEGF e de seus receptores VEGFR, além de atrasar o processo de reparo e de remodelação óssea alveolar pós-exodontia. / Objective: To evaluate the effect of Meloxicam on the expression of VEGF and its receptors during the post-extraction alveolar healing in rats. Material and Methods: The extraction of the right upper incisor was made in 180 male Wistar rats, aged 60 days old. The sample was divided in: 1) Control group (n=90) - the rats received intraperitoneal injection of 0.1 ml of 0.9% NaCl daily for 7 days, and 2) experimental group (n=90) - the rats received intraperitoneally 3mg/kg body weight of Meloxicam in 0.9% NaCl solution daily for 7 days. At 3, 7, 10, 14, 21 and 30 days later, the alveolar samples were collected, fixed in 10% formaldehyde in phosphate buffer, radiographed and histologically processed. For RT-PCR, the samples were placed in Trizol and stored at -80° and for Western blotting stored at -80°. Transversal semi-serial histological sections (with 250 um interval) of the whole alveolus were obtained and stained with hematoxylin and eosin. In these sections the volume density of bone tissue (% TO), connetive tissue (% CT), blood clot (Coa%) and blood vessel (% VS) was evaluated by point counting volumetry morphometric method. The obtained data were compared between groups for period by \"t\" test and between periods within each group by ANOVA and Tukey test, with a p<0.05 significance level. Results: a) The radiographic analysis showed changes in the contour of the cortical alveolar bone , reduction in size of the alveolus, and a small increase in radiodensity in their central region ; b) Morphologically the experimental group showed, in all periods, a delay in the repair process as compared to control, displaying greater amount of blood clot with slow replacement by connective tissue and lower cortical alveolar bone resorption and bone formation / remodeling c) In morphometric analysis the %TO in the control group were 0.817, 0.255, 0.368, 0.409 and 0.453 times higher than the experimental group during periods of 3, 7, 10, 14 and 21 days , respectively. The %Coa, the values in the control group were 0,097, 0,611, 1,189 and 1.497 times lower than in the experimental group on days 7, 10, 14 and 21 days respectively. The %VS in the control group showed 0.328 and 0.439 times higher than in the experimental group on days 10 and 14 days respectively. The% CT showed no statistical difference between groups. d) The imumunostaining for VEGF and VEGFR-1 were observed in osteoblasts and osteocytes in the cortical alveolar, and fibroblasts within the alveolus, which was statistically significant only for VEGFR-1, where the immunostaining in the control group was 0,544; 0,325 and 0,325 times higher than the experimental group during periods of 3, 7 and 10 days respectively e) The RT-PCR analysis for VEGF in the control group was 1.274 times higher within 10 days compared to the experimental group. In the expression of mRNA for VEGFR-1, the control group was 1,431; 0,951 and 0,845times higher in periods of 3, 10 and 30 days, respectively, compared to the experimental group and VEGFR-2 was 4.64 and 0.79 times higher in periods of 3 and 7 days, respectively, and f) The protein expression of VEGF in the control group was 0,365; 1,056; 2,187 and 0,350 times higher in periods of 3, 7, 10, 14 and 21 days compared to the experimental group. Conclusions: Based on the present results it was concluded that the use of Meloxicam, antiinflammatory administered daily for 7 days, alters the expression of mRNA and protein of VEGF and its receptors VEGFR, and slows the process of repair and remodeling post extraction alveolar

O sistema cardiovascular está estrutural e funcionalmente disposto de modo “circular”. Situações de obstrução do fluxo sanguíneo determinam o aparecimento de mecanismos que visam suplantar tais interrupções e manter a circularidade íntegra. À nível molecular, o principal elemento envolvido nestes mecanismos é o Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). A expressão do VEGF quando há oclusão arterial está bem documentada, faltando elementos com relação à oclusão venosa. Neste estudo objetivamos verificar se a oclusão à nível arterial determina uma expressão do VEGF diferente daquela que ocorre se a oclusão acontecer à nível venoso. Para isso randomizamos dois grupos de ratos de experimentação. Em um grupo realizamos a oclusão da aorta infra-renal e em outro a oclusão da veia cava infra-renal. Posteriormente medimos a expressão do VEGF através da contagem do número de células marcadas imunoistoquimicamente no omento destes ratos. O resultado demonstrou que a expressão do VEGF, quando analisada pelo método proposto foi igual no grupo da oclusão venosa e no grupo da oclusão arterial. / The cardiovascular system is structurally and functionally circular. Situations in which there is obstruction to blood flow trigger mechanisms to bypass these blockages and maintenance the integrity of the circularity. At the molecular level the main factor involved is the Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). The VEGF expression associated with arterial occlusion is well documented but is lacking evidence when venous occlusion occurs. This study aimed to verify if the expression of VEGF when an occlusion occurs at venous level is the same or different from that caused at the arterial level. Two groups of rats were randomized by infra-renal aortic occlusion or inferior vena cava occlusion. VEGF was measured by counting the immunohistochemistry method marked cells at the omentum level. It was demonstrated that the VEGF expression is the same in the venous group obstruction as the arterial obstruction group.

INTRODUÇÃO: O impacto do aumento de expressão do fator de crescimento endotelial no curso da Leucemia Mielóide Crônica (LMC) ainda é desconhecido, porém há relatos de que estes pacientes apresentam maior densidade vascular em medula óssea do que em indivíduos saudáveis, principalmente em crise blástica. Outro fator recentemente associado ao aumento da angiogênese é a expressão anormal da proteína hsecurina, que, por sua vez, inibi uma protease denominada separase, responsável pela separação das cromátides irmãs durante a anáfase da mitose. Por esses motivos, quantificamos células endoteliais circulantes e VEGF em portadores de LMC como marcador de angiogênese e expressão do gene hsecurina. MÉTODOS: Realizamos análise prospectiva e consecutiva de uma coorte de 31 pacientes com LMC em fase crônica ao diagnóstico, 23 em crise blástica, 30 em fase acelerada, atendidos no ambulatório de Hematologia da FMUSP e 50 indivíduos saudáveis, doadores de plaquetas por aférese, para quantificação da porcentagem de células endoteliais circulantes e subtipos pelo método de citometria de fluxo no laboratório de Imunopatologia HC/FMUSP. Desta coorte 25 pacientes em fase crônica, 14 em crise blástica, 26 em fase acelerada e 32 indivíduos saudáveis foram analisados para os genes hsecurina e VEGF por PCR quantitativo em tempo real. RESULTADOS: A mediana da porcentagem das células endoteliais circulantes foi de 0, 0146% em LMC em crise blástica e 0,0059% no grupo controle, p < 0,01 às custas das células endoteliais maduras (p < 0,01). A mediana de células endoteliais circulantes em crise blástica foi de 0, 0146%, superior à da fase acelerada (0,0059%), p < 0,01 com predomínio de células endoteliais maduras (p < 0,01). Em relação à expressão do gene VEGF observamos aumento estatisticamente significativo nas fases crônica (p < 0,01), acelerada (p < 0,01) e crise blástica (p = 0,04). Encontramos aumento significativo da expressão do gene hsecurina na crise blástica da doença, com mediana de 0,390 em relação aos grupos controle com mediana de 0,125 (p < 0,01) e fase acelerada, com mediana de 0,230 (p = 0,04). Os pacientes na fase crônica da doença apresentaram mediana de 0,260 e p = 0,03 quando comparados com o grupo controle. CONCLUSÃO: Observamos neste estudo que a quantificação de CEC é uma ferramenta útil para predizer e identificar precocemente a progressão da LMC para fase blástica, diferentemente da variável VEGF que foi elevado em todas as fases da doença. A expressão do gene hSecurina na fase crônica da doença foi significantemente alta, demonstrando provável relação com a elevação da taxa de proliferação celular. Entretanto, estudos complementares do gene hSecurina deverão ser realizados na crise blástica da LMC, para entendermos com precisão o real significado nesta fase da doença. / INTRODUCTION: The impact of the increased expression of vascular endothelial growth factor in the course of chronic myeloid leukemia (CML) is still unknown, but there are reports that those patients have higher vascular density in bone marrow than healthy individuals, particularly in blast crisis. Another factor recently associated with increased angiogenesis is the abnormal expression of protein hSecurin, which, in turn, inhibits a protease called separase, responsible for the separation of sister chromatids during the anaphase of mitosis. For these reasons, we quantified circulating endothelial cells and VEGF in patients with CML as a marker of angiogenesis and hSecurin gene expression. METHODS: We performed a prospective analysis of consecutive cases in a cohort of 31 patients with CML in chronic phase at diagnosis, 23 in blast crisis, 30 in accelerated phase who attended the outpatient Hematology FMUSP ward, and 50 healthy subjects, platelet apheresis donors, for quantification of the percentage of circulating endothelial cells and subtypes through the flow cytometry method, at HC/FMUSP Immunopathology laboratory. In this cohort, 25 patients in chronic phase, 14 in blast crisis, 26 in accelerated phase, and 32 healthy subjects were tested for the genes VEGF and hSecurin by quantitative real-time PCR. RESULTS: The median percentage of circulating endothelial cells was 0.0146% in CML in blast crisis and 0.0059% in the control group, p <0.01 at the expense of mature endothelial cells (p <0.01). The median circulating endothelial cells in blast crisis was 0.0146% higher than in accelerated phase (0.0059%), p <0.01 with predominance of mature endothelial cells (p <0.01). Regarding the expression of the VEGF gene, a statistically significant increase was observed in chronic phase (p <0.01), accelerated (p <0.01) and blast crisis (p = 0.04). We found a significant increase in hSecurin gene expression in blast crisis disease, with a median of 0.390 compared to control groups, with a median of 0.125 (p <0.01) and accelerated phase, with a median of 0.230 (p = 0.04). Patients with chronic disease had a median of 0.260 and p = 0.03 compared with the control group. CONCLUSION: In this study, we observed that the quantification of CPB is a useful tool to predict and identify the early progression of CML to blast phase, unlike the VEGF variable, which was elevated in all stages of the disease. The expression of hSecurin gene in chronic phase was significantly higher, demonstrating a likely relationship with the increased cell proliferation rate. However, further studies of hSecurin gene should be made in the blastic crisis of CML to understand precisely the real meaning at this stage of the disease.

As neoplasias tireoidianas são importante causa de morbi-mortalidade. A patogênese da disseminação neoplásica pelo organismo é um complexo e intrigante processo pelo qual grande parte das neoplasias malignas se dissemina, a partir de um sítio de origem, para diferentes partes do organismo, utilizando como vias preferenciais os sistemas vasculares venoso e linfático. A expressão dos fatores de crescimento endotelial vascular e de seus receptores (VEGFs e VEGFRs) estão relacionados à angiogênese e linfangiogênese tumoral participando do diagnóstico, avaliação prognostica e tratamento de neoplasias malignas. O papel da angiogênese e da linfangiogênese na patogênese dos cânceres de tireóide ainda não foi completamente desvendado. Os diferentes padrões de comportamento dos tumores tireoidianos e de suas metástases variam de acordo com o tipo de tumor e ainda não foi completamente explorado se diferenças na expressão dos VEGFs e VEGFRs influenciam a metástase tumoral ou determinam um comportamento mais agressivo. Na presente tese, avaliamos a expressão imuno-histoquímica dos VEGFs e VEGFRs e a densidade vascular sanguínea e linfática nos bócios adenomatosos, tireoidites linfocitárias e adenomas foliculares, bem como nos carcinomas papilíferos e foliculares e suas regiões adjacentes. Posteriormente, correlacionamos nossos achados com os dados clínico-patológicos. Observamos que há um crescimento gradual na intensidade da expressão dos VEGFs e VEGFRs a partir do tecido tireoidiano com fenótipo normal, lesões proliferativas benignas e neoplasias malignas. Nos carcinomas, apesar da profusa expressão dos VEGFs e VEGFRs detectamos correlação estatisticamente significativa apenas do VEGF-D e VEGF-R3 com um pior estadiamento tumoral nos carcinomas papilíferos. A densidade vascular sanguínea foi superior a densidade vascular linfática em todas as lesões estudadas sendo que os carcinomas foliculares apresentaram a maior densidade vascular sanguínea e as tireoidites linfocitárias a maior densidade vascular linfática. Nos carcinomas papilíferos uma menor densidade vascular sanguínea está associada a invasão vascular e a diferença de perfil linfangiogênico entre adenomas foliculares e carcinomas foliculares pode ser uma nova ferramenta na diferenciação destas categorias diagnósticas / The thyroid neoplasms are important causes of morbi-mortality. The pathogenesis of the neoplastic dissemination through the organism is a complex and intriguing process by which many malignancies spreads from a site of origin to different parts of the body, using as preferential routes the venous and lymphatic vascular systems. The expression of vascular endothelial growth factors and their receptors (VEGFs and VEGFRs) are related to tumor angiogenesis and lymphangiogenesis participating in the diagnosis, prognostic evaluation and treatment of malignant neoplasms. The role of angiogenesis and lymphangiogenesis in the pathogenesis of thyroid cancers has not been completely elucidated. The different patterns of behavior of thyroid tumors and their metastases vary with the tumoral type and have not yet been fully explored whether differences in the expression of VEGFs and VEGFRs influence tumor metastasis or determine a more aggressive behavior. In this thesis, we evaluated the immunohistochemical expression of VEGFs and VEGFRs and the blood and lymphatic vascular density in goiter, thyroiditis and follicular adenomas and in papillary and follicular carcinomas and their adjacent regions. Afterward, we correlated our findings with the clinical pathological data. We observe that there is a gradual increase in intensity of expression of VEGFs and VEGFRs from normal thyroid tissue, proliferative lesions, benign and malignant neoplasms. In carcinomas, despite the profuse expression of VEGFs and VEGFRs we detected only statistically significant correlation of VEGF-D and VEGF-R3 with a worse tumor staging in papillary carcinomas. The blood vessel density was higher than lymphatic vascular density in all lesions studied. The follicular carcinomas showed the highest blood vessel density and thyroiditis the largest lymphatic vascular density. In the papillary carcinomas a lower blood vessel density was associated with vascular invasion and the different lymphangiogenic profiles between follicular adenomas and follicular carcinomas may be a new tool in differentiating these diagnostic categories

A irradiação laser em baixa intensidade (LLLT) pode promover acelerada epitelização, maior grau de vascularização e aumento da síntese de colágeno nas feridas cirúrgicas. Porém, poucas são as evidências demonstrando que a LLLT influencie diretamente na expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Este estudo investigou e correlacionou a cinética de expressão de RNAm para VEGF-A165 durante o processo de reparo tecidual de feridas em língua de ratos, irradiadas (grupo GIII) ou não irradiadas (grupo GII) com o laser diodo GaAlAs. Foram realizadas pesagens sistemáticas (dias 0, 1, 2, 4 e 6) para estudar os padrões de crescimento e desenvolvimento dos animais. Animais não operados (grupo controle, GI) foram utilizados para posteriores comparações estatísticas dos valores de variação de peso (análise de variância a um critério, teste de Tukey, p<0,05). Após a cirurgia (dia 0), duas sessões de irradiação laser foram realizadas, uma logo após o procedimento operatório (laser infravermelho, 35 J/cm2) e a segunda, 48h após o início do experimento (laser vermelho visível, 5 J/cm2). Os animais foram sacrificados 1, 3, 5 e 7 dias após a cirurgia, para obtenção de amostras de tecido lingual através de biópsia. O RNA total foi extraído pela utilização do método guanidino-isotiocianato-fenol-clorofórmio. Após a transcrição reversa ? reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), os resultados da eletroforese horizontal permitiram avaliar a razão da expressão de RNAm para GAPDH e VEGF-A165 nos grupos GI, GII e GIII (análise de variância a dois critérios, teste de Tukey, p<0,05). A média de variação de peso dos animais do grupo GII foi ao mesmo tempo maior que a do grupo GIII e menor que a do grupo GI em todos os dias de análise, observando-se diferença estatisticamente significativa (p<0,05). Apenas durante o sexto dia, não foram observadas diferenças significativas entre as médias de variação de peso dos grupos GII e GIII (p=0,220) e GI e GII (p=0,409). Os valores da expressão de RNAm para VEGF-A165 no grupo GII foram estatisticamente maiores que os do grupo GI (p=0,0285) e GIII (p=0,0101) no primeiro dia de análise. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos GI, GII e GIII quando comparados nos demais períodos de tempo. Portanto, o laser diodo GaAlAs foi capaz de biomodular a expressão do RNAm para VEGF-A165 durante o primeiro dia do processo de reparo tecidual de feridas em língua de ratos. / Low level laser therapy (LLLT) can promote accelerated epithelization, greater of vascularization and increase of collagen synthesis in surgical wounds. However, few evidences proved that LLLT directly influence in the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). This study investigated and correlated the kinetic of expression of mRNA VEGF-A165 during the tissue repair of wounds in tongues of irradiated (group GIII) or not irradiated rats (group GII) with GaAlAs diode laser. Systematic weighings were performed on days 0, 1, 2, 4 and 6 to study the growth and development standards of the rats, using not operated animals (control group, GI) for future statistical comparisons (one-way ANOVA and Tukey\'s test, p<0.05). Two sessions of laser irradiation were accomplished, the first one right after the surgical procedure (infrared laser, 35 J/cm2) and the second one, 48h after of the beginning of the experiment (visible red laser, 5 J/cm2). The animals were sacrificed on days 1, 3, 5 and 7 and samples of tongue tissue were obtained. The total RNA was extracted by using of guanidine-isotiocianate-phenol-chloroform method. After the reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR), the results of horizontal electrophoresis permitted to assess the ratio of mRNA GAPDH and VEGF-A165 expression for groups GI, GII and GIII (two-way ANOVA, Tukey\'s test, p<0.05). The weight variation of animals of group GII was both greater than that of animals of group GIII and lower of than that of animals of group GI in daily analysis, observing statistically significant differences (p<0.05). Only during the sixth day, significant differences between the averages of weight variation of the groups GII and GIII (p=0.220) and GI and GII (p=0.409) were not observed. The expression of mRNA VEGF-A165 in group GII was statistically greater than that of group GI (p=0.0285) and GIII (p=0.0101) in the first day. Significant differences among the groups GI, GII and GIII were not observed in other time periods. Therefore, GaAlAs diode laser was able to modulate the expression of mRNA VEGF-A165 during the first day of tissue repair process of wounds in rat tongues.

A revascularização linfática é um desafio e o estabelecimento de novas estratégias terapêuticas podem melhorar a qualidade de vida de pessoas que sofrem de distúrbios linfáticos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de tratamento com VEGFC exógeno na melhoria da vascularização linfática de uma maneira dependente do tempo em membros pélvicos (MP) de camundongos após a remoção do linfonodo inguinal. O linfonodo inguinal esquerdo foi removido cirurgicamente para mimetizar patologias com diminuição da vascularização linfática. Densidade vascular linfática (Vv) e de comprimento (Lv) foram avaliadas por imunohistoquímica, seguidas de estereologia, após a cirurgia com ou sem o tratamento com VEGFC exógeno. O grupo controle não foi manipulado, mas recebeu soro fisiológico em vez de tratamento com VEGFC exógeno. As expressões do VEGFC e FLT4 local foram avaliadas por qPCR. Houve efeito do tempo sobre Vv e Lv no Grupo Cirurgia e diferença significativa entre os grupos Controle e Cirurgia nas três regiões estudadas (região proximal, média e distal) do MP esquerdo (MPE). A Lv mostrou diferença significativa entre os grupos Controle e Cirurgia somente na região média do MPE. A Vv e a Lv para o Grupo Tratamento foram maiores do que os outros grupos em todas as regiões do MPE. A expressão gênica do VEGFC e do FLT4 apresentou efeito do tempo em todas as regiões do MPE para os grupos Cirurgia e Tratamento. Ambas as expressões gênicas do VEGFC e do FLT4 apresentaram diferença significativa entre os grupos Controle e Cirurgia, entre os grupos Cirurgia e Tratamento e entre os grupos Controle e Tratamento. Os resultados mostraram que os camundongos são bons modelos experimentais para o uso de VEGFC exógeno como terapia de revascularização linfática, e o tratamento com VEGFC exógeno aumenta vascularização linfática já após 3 dias de dano linfático. / Lymphatic revascularization is a challenge and the establishment of new therapeutic strategies may improve quality of life from those suffering from lymphatic disorders. The objective of this study was to verify the VEGFC treatment capacity in improving lymphatic vascularization in a time-dependent manner in mouse hind limb (HL) after removal of inguinal lymphnode. The left inguinal lymphnode was surgically removed to mimetize pathologies with decreased lymphatic vascularization. Lymphatic vascular density (Vv) and length (Lv) were evaluated by immunohistochemistry followed by stereology after surgery and/or VEGFC treatment. Control group was not manipulated but received saline instead of VEGFC treatment. VEGFC and FLT4 local expression were assessed by qPCR. There was effect of time over Vv and Lv in the SG and significant difference between CG and SG in the three studied regions (proximal, medium and distal region) of the left HL (LHL). The Lv showed significant difference between CG and SG only in the medium region. The Vv and the Lv for TG were higher than the other groups in all regions of LHL. VEGFC and FLT4 gene expression presented time effect in all regions of the LHL for SG and TG. Both VEGFC and FLT4 gene expression presented significant difference between CG and SG, between SG and TG, and between CG and TG. The results show that mice are good experimental models for VEGFC use as therapy for lymphatic revascularization, and VEGFC treatment increased the lymphatic vasculature already after 3 days of lymphatic damage.

Angiogenesis, the process of new vessel formation, appears to be a central mechanism that underlies the development of haemangiomas. Recently, intralesional bleomycin injection was used to treat paediatric haemangiomas with very good results. The purpose of this study was to determine whether there was significant systemic circulatory spill-over of bleomycin in haemangioma patients treated with intralesional bleomycin to determine safety of use. Furthermore, in order to elucidate bleomycin’s mechanism of action in inducing haemangioma regression, this study aimed at determining the effects of bleomycin on aspects of angiogenesis, namely, endothelial cell migration, growth and apoptosis, and comparing these effects with those of drugs previously reported to inhibit various aspects of the angiogenic process (mitomycin C, 2-methoxyestradiol, taxol, vincristine, vinblastine, colchicine, nocodazole and cytochalasin D). Lastly, the effects of bleomycin, mitomycin C, 2-methoxyestradiol, taxol, vincristine, vinblastine, colchicine, nocodazole and cytochalasin D were studied in an animal haemangioma model. A rapid and highly sensitive high performance liquid chromatographic (HPLC) method was developed. Blood samples were collected from four haemangioma patients before and after (over a 24 hour period) intralesional bleomycin (IB) therapy. As a control, blood samples were also collected at identical time intervals from four patients undergoing intravenous (IV) bleomycin chemotherapy for various malignant tumours. The HPLC method was used to quantitate bleomycin fractions in patient samples. The mean bleomycin concentration detected in plasma samples obtained from IB treated patients was 0.00 ìg/ml for both bleomycin A<Sub>2 and B2 over the 24-hour period following therapy. Plasma bleomycin A2 and B2 levels of 360.79 and 158.85 ìg/ml respectively were detected in samples obtained from cancer patients treated with bleomycin IV. These findings indicate that the low levels detected may translate to a significantly lesser risk of pulmonary fibrosis following IBI. The effect of drugs on endothelial cell migration was analyzed by wounding a confluent monolayer of cells and determining the number of cells that had migrated from the wound edge. Endothelial cell growth was determined in cells treated with various drug concentrations while apoptosis was examined using hematoxylin and eosin staining, DNA fragmentation assay and acridine orange staining. The effect of test drugs on in vitro angiogenesis was determined on endothelial cells induced to form capillary-like tubes in collagen gel. Test drugs were then evaluated for antitumour activity in an animal haemangioma model. Data demonstrated that test drugs inhibited endothelial cell migration, with the exception of mitomycin C. All test drugs induced a reduction in the percentage of viable endothelial cell in a dose-dependant manner, and also induced endothelial cell apoptosis. The drugs inhibited angiogenesis in vitro and inhibited tumour development in vivo with varying potency. In general, results from this study indicated that there was negligible systemic spill-over of bleomycin following IB administration in patients with haemangiomas, suggesting a much lesser risk of developing bleomycin-induced pulmonary fibrosis. This study also showed that test drugs inhibited angiogenesis in vitro and haemangioma development in vivo in a mouse model. Taken together, these observations demonstrate that bleomycin may inhibit haemangioma growth by inhibiting angiogenesis. In addition, mitomycin C, 2-methoxyestradiol, taxol, vincristine, vinblastine, colchicine, nocodazole and cytochalasin D may have potential in the treatment of haemangiomas of infancy, and should be investigated further in a murine haemangioma model to determine effective dose schedules. / Thesis (PhD)--University of Pretoria, 2009. / Physiology / unrestricted

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francislaine.pdf: 394781 bytes, checksum: a0d56232957fee86543512d568bcec4c (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Tea is an extremely popular drink, being the second most commonly consumed in the world. People ingest teas on average two to three times a day, the majority being derived from the Camellia sinensis plant. The beneficial health effects of the consumption of tea from this plant are well known, such as the prevention of cancer, cardiovascular disease and osteoporosis. Despite this, little is known about the action of white tea on reproduction. It is important to evaluate the possible consequences of consumption on luteal and endometrial development since the main catechin, epigallocatechin gallate (EGCG), present in the tea influences the gene expression of VEGF in tumors and this is an important angiogenic factor in the reproductive organs. This study aimed to verify the effects of prolonged intake of white tea on the relative abundance of VEGF mRNA and its receptors, as well as in cell proliferation in the endometrium of superovulated rats. For this purpose, the rats were divided into two groups, control group (n = 30), which received water, and white tea intake group (n = 30). The ovaries and uteri were collected from 10 animals in each group at the end of every month, for three consecutive months, stored in Trizol in a freezer at -80 ° C and the relative abundance of VEGF mRNA, Flt-1 and KDR were subsequently evaluated. In addition, the uteri were histologically analyzed using the silver staining method to detect cell proliferation. The data were evaluated for the assumption of normality (Shapiro-Wilk) and statistical comparisons were performed using the unpaired t test between groups at different collection moments (p <0.05). The relative abundance of VEGF mRNA and its receptors was changed by the tea consumption and there were a lower number of nucleolar organizer regions in endometrial cells. It was concluded that prolonged consumption of white tea interferes the expression of the VEGF system genes in the corpus luteum and decreases cell proliferation in the endometrium of Wistar rats. / O chá é uma das bebidas mais populares e a segunda mais consumida no mundo. A população ingere chás em média, de duas a três vezes ao dia, sendo em sua maioria oriundos da planta Camellia sinensis. São bem conhecidos os efeitos benéficos para a saúde do consumo dos chás provenientes dessa planta, como a prevenção de câncer, de doença cardiovascular e da osteoporose. Apesar disso, pouco se sabe sobre a ação do chá branco na reprodução, sendo importante avaliar as possíveis consequências do seu consumo no desenvolvimento luteal e endometrial. Visto que a principal catequina, a epigalocatequina galato (EGCG) presente neste chá influencia a expressão gênica do Vegf em tumores e este é um importante fator angiogênico dos órgãos reprodutivos, este estudo teve como objetivo verificar o efeito da ingestão do chá branco sobre a abundância relativa do mRNA do Vegf e dos seus receptores,sobre a proliferação celular do endométrio de ratas superovuladas. Para tanto, as ratas foram distribuídas em dois grupos, grupo controle (n=30) que recebeu água e grupo com ingestão de chá branco (n=30). Os ovários e os úteros foram coletados ao final de cada mês de ingestão de chá branco ou água de 10 animais de cada grupo, durante três meses consecutivos, sendo os ovários armazenados em trizol no freezer a -80ºC e posteriormente a abundância relativa de mRNA do Vegf, do Flt-1 e do Kdr foram avaliadas. Além disso, os úteros foram analisados histologicamente pelo método de coloração de prata para detecção de proliferação celular. Os dados foram avaliados quanto ao pressuposto de normalidade (Shapiro-Wilk) e as comparações estatísticas foram realizadas por meio dos testes t não pareado entre os grupos nos diferentes momentos de colheitas (p<0,05). A abundância relativa de mRNA do Vegf e dos seus receptores foi alterada pelo consumo de chá e houve um menor número de regiões organizadoras de nucléolo nas células do endométrio. Conclui-se que a ingestão prolongada de chá branco altera a expressão dos genes do sistema Vegf no corpo lúteo e diminui a proliferação celular do endométrio de ratas Wistar.