O conhecimento sobre a microbiota de animais marinhos fornece uma base que pode ser usada para comparação em virtude de mudanças futuras, apesar disso pouco se sabe sobre a natureza das bactérias associadas com o intestino desses animais. Esse estudo visou a obtenção de um panorama sobre a microbiota de animais marinhos selvagens recolhidos no litoral do Rio Grande do Sul através de ferramentas independentes de cultivo, como o sequenciamento de última geração e PCR quantitativa em tempo real (qPCR), que permitem a inferência sobre as bactérias pertencentes a microbiota intestinal a partir do DNA genômico total obtido diretamente da amostra. A partir do sequenciamento parcial do gene de 16S rRNA utilizando a plataforma de alta desempenho Ion Torrent PGM, seis amostras fecais de lobo-marinho-sul-americano (Arctocephalus australis) e quatro lobo-marinho- subantártico (Arctocephalus tropicalis) foram avaliadas. Verificou-se que o filo Firmicutes (86,28%) foi mais frequente nas fezes de ambas as espécies, seguido por Actinobacteria(6,74%) e Proteobacteria (3,34%), sendo Bacteroidetes e Fusobacteria os filos menos frequente. A qPCR foi empregada para quantificar as espécies de enterococos, mais frequentemente isoladas de fezes de animais (Enterocococcus faecalis, E. hirae, E. mundtti, E. faecium, E. gallinarum e E. casseliflavus), em amostras fecais de animais marinhos selvagens. A partir de DNAs totais isolados de 24 amostras fecais de lobos marinhos, tartarugas-verdes e aves marinhas, verificou-se que E. faecalis (1,82x1012 cópias/ng) foi a espécie mais frequente em todas as amostras analisadas e E. hirae (5,89x1010), E. mundtti (7,57x1010 cópias/ng), E. faecium (4,94x1009 cópias/ng), E. casseliflavus (1,22x1009 cópias/ng) e E. gallinarum (3,84x1010 cópias/ng) também demonstraram estar presentes na microbiota desses animais. / Knowledge about the marine animals microbiota provides a base that can be used for comparison due to future changes, nevertheless little is known about the nature of the bacteria associated with the animal gut. This study aimed to obtain an overview of the microbiota of wild marine animals collected in the Rio Grande do Sul coast using cultive independent methods, as the next-generation sequencing and quantitative real-time PCR ( qPCR ), which allow the inference about the bacteria belonging to the intestinal microbiota from total genomic DNA obtained directly from the sample. Using the high performance Ion Torrent PGM platform six fecal samples of South American fur seal (Arctocephalus australis) and four Subantartic fur seals (Arctocephalus tropicalis) were evaluated. It was found that the phylum Firmicutes (86.28%) was more common in faeces of both species, followed by Actinobacteria (6.74%) and Proteobacteria (3.34%), Fusobacteria and Bacteroidetes were the least frequent. The qPCR was used to quantify the Enterococci species commonly isolated from faecal samples of animal (Enterocococcus faecalis, E. hirae, E. mundtti, E. faecium, E. gallinarum e E. casseliflavus) in faecal samples or cloacal swabs / rectal wild marine animals. From total DNA isolated of 24 fecal samples from sea lions, green turtles , sea birds, it was observed that E. faecalis (1.82x1012 copy/ng) was the most common species in all samples analyzed and E. hirae (5.89x1010), E. mundtti (7.57x1010), E. faecium (4.94x1009), E. casseliflavus (1.22x1009) and E. gallinarum (3.84x1010) also shown to be present in the microflora of these animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:02:13Z : No. of bitstreams: 1 fariajunior_nb_dr_arafo.pdf: 372525 bytes, checksum: 70354f6898155c6e1ee3732f3e66788f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: Este estudo avaliou: (experimento 1) a influência de diferentes substratos na formação de biofilmes de Enterococcus faecalis; e (experimento 2) a atividade antibacteriana contra E. faecalis, pH e solubilidade dos cimentos AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex e MTA Sealer. Metodologia: (1) Biofilmes de E. faecalis foram desenvolvidos sobre dentina bovina, guta-percha, hidroxiapatita e osso bovino por 14 ou 21 dias. Após os períodos de incubação, os espécimes (n=5 por substrato por período) foram marcados pela técnica Live/Dead e observados usando microscopia confocal de varredura a laser. Quatro imagens foram obtidas para cada amostra e analisadas pelo programa bioImage_L. Os parâmetros avaliados foram biovolume (μm3) da população total e verde (células vivas) e o percentual de cobertura do substrato. (2) Para o segundo experimento, discos de cada cimento endodôntico foram preparados e armazenados por 2 ou 7 dias. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo teste de difusão em ágar (TDA) e pelo teste de contato direto sobre biofilme (TCDB, antibiofilme). No TCDB, biofilmes foram induzidos em blocos de dentina bovina por 14 dias. Os cimentos foram, então, colocados sobre os biofilmes e permaneceram em contato por 5, 10 ou 15 h. No grupo controle, nenhum cimento foi colocado sobre os biofilmes. Os blocos de dentina com o biofilme remanescente foram avaliados quantitativamente (número de unidades formadoras de colônia [UFC]). A solubilidade dos cimentos correspondeu à perda de massa (%) após 15 h de imersão em água destilada. Os valores de pH foram mensurados nos períodos de 5, 10 e 15 h. A análise estatística foi realizada por testes paramétricos e não paramétricos (p=0,05). Resultados: (1) Houve formação de biofilme em todos os grupos. Não houve diferença... / Objective: This study evaluated: (experiment 1) the influence of different substrates on the Enterococcus faecalis biofilm formation; and (experiment 2) the antibacterial activity against E. faecalis, pH and solubility of the sealers AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex and MTA Sealer. Methods: (1) E. faecalis biofilms were grown on bovine dentin, gutta-percha, hydroxyapatite and bovine bone for 14 or 21 days. After the incubation periods, the specimens (n=5 per substrate per period) were stained using the Live/Dead technique and observed using a confocal laser scanning microscope. Four confocal pictures were obtained from each sample and analyzed by the software bioImage_L. The parameters evaluated were biovolume (μm3) of total and green population (live cells) and the percentage of surface covered by microorganisms (covering grade). (2) For the second experiment, disks of each material were prepared and stored for 2 or 7 days. Antimicrobial activity was evaluated by the agar diffusion test (ADT) and the direct contact test on biofilm (DCTB, antibiofilm). For the DCTB, biofilms were grown on bovine dentin blocks for 14 days. Then, the sealers were placed on the biofilms and remained in contact for 5, 10 or 15 h. In the control group, no sealer was placed on the biofilms. The dentin blocks containing the remaining biofilms were assessed quantitatively (number of colonyforming units [CFU]). The solubility of the sealers corresponded to their mass loss (%) after 15 h immersion in distilled water. The pH values were measured at 5, 10 and 15 h. Statistical analysis was performed using parametric and non-parametric tests (p=0.05). Results: (1) There was biofilm formation in all groups. Considering the values of the covering grade there was not significant difference among the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-11. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:23Z : No. of bitstreams: 1 000843125.pdf: 3415915 bytes, checksum: 3c3dc53c547494a401c76c5c860f02ab (MD5) / Enterococcus faecium se tornou um dos mais temidos micro-organismos em infecções hospitalares, por apresentar maior facilidade em adquirir resistência aos antibióticos do que E. faecalis. Entretanto, faltam estudos voltados para o isolamento e identificação de E. faecium na cavidade bucal. Os objetivos deste trabalho foram isolar e identificar E. faecalis e E. faecium em canais radiculares com infecções endodônticas e comparar as cepas de E. faecalis e E. faecium em relação à sensibilidade aos antibióticos convencionais e à terapia fotodinâmica antimicrobiana (PDT). Além disso, essas espécies foram comparadas quanto à virulência in vivo, utilizando o modelo de infecção experimental de Galleria mellonella. As cepas de E. faecalis e E. faecium isoladas de canais radiculares foram identificadas pelo sistema Rapid ID 32 Strep e PCR multiplex. Todos os isolados identificados como E. faecalis e E. faecium, foram testadas quanto à sensibilidade aos antibióticos pelo método E-test para determinação da concentração inibitória mínima (MIC). A seguir, foram selecionadas algumas cepas de E. faecalis e E. faecium sensíveis e resistentes aos antibióticos de uso clínico na odontologia para testes de sensibilidade in vitro à terapia fotodinâmica antimicrobiana. A virulência das cepas de E. faecalis e E. faecium foram testadas in vivo no modelo de infecção experimental de G. mellonella por meio da análise da curva de sobrevivência das larvas e quantificação de UFC/mL de células bacterianas presentes na hemolinfa desses animais. Os dados de UFC/mL obtidos na terapia fotodinâmica e na infecção em G. mellonella foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Foram realizadas coletas de 38 canais radiculares de diferentes pacientes, sendo que 22 apresentaram culturas positivas para enterococcus spp.(58%).... / Enterococcus faecium has become one of the most dreaded micro-organisms in nosocomial infections, due to its greater ease in acquiring resistance to antibiotics than E. faecalis. However, lack of studies focused on the isolation and identification of E. faecium in the oral cavity. The objectives of this study was to isolate and identify E. faecalis and E. faecium in root canals with endodontic infections and to compare strains of E. faecalis and E. faecium in sensitivity to conventional antibiotics and antimicrobial photodynamic therapy (PDT). Furthermore, these species were compared for virulence in vivo, using the model of experimental infection of Galleria mellonella. The strains of E. faecalis and E. faecium isolated from root canals were identified by the Rapid ID 32 Strep system and multiplex PCR. All isolates identified as E. faecalis and E. faecium were tested for antibiotic susceptibility E-test method for determination of minimal inhibitory concentration (MIC). Next, we selected some strains of E. faecalis and E. faecium sensitive and antibiotic-resistant clinical use in dentistry for in vitro susceptibility testing to antimicrobial photodynamic therapy. The virulence of strains of E. faecalis and E. faecium were tested in in vivo experimental model of infection of G. mellonella by analysis of larval survival curve and quantitation of CFU/mL bacterial cells present in the hemolymph of these animals. Data from CFU/mL obtained in photodynamic therapy and infection in G. mellonella were subjected to analysis of variance and Tukey test. The data on the survival of G. mellonella curves were analyzed by log-rank method. Samples of 38 root canals from different patients were performed and 22 had cultures positive for Enterococcus spp. (58%). Of these patients, all showed E. faecalis and only 2 had mixed infections with E. faecalis and E. faecium 6 isolates (27%) E. faecalis resistant to ....

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-17Bitstream added on 2014-12-02T11:21:07Z : No. of bitstreams: 1 000800633.pdf: 461044 bytes, checksum: f9c8483ec74aaeb69a13040e8c9352f2 (MD5) / O presente estudo avaliou a atividade antimicrobiana, escoamento, pH e a liberação de cálcio do MTA Fillapex (MTAF) (G1) ou MTA Fillapex com 10% (em massa) de hidróxido de cálcio (HC) (MTAF10) (G2), comparados com o AH Plus (AP) (G3) e o Sealapex (SE) (G4). A atividade antimicrobiana foi realizada através de teste de difusão radial sobre Enterococos faecalis (29212). O escoamento foi realizado de acordo com a norma ISO 6876:2001. Os cimentos foram inseridos em tubos de polietileno e imersos em recipiente com água deionizada. Após 24 horas, 7, 14 e 28 dias os valores do pH e cálcio liberado foram mensurados. Os valores obtidos na liberação de cálcio foram analisados através dos testes de Kruskal Wallis e Dunn e a atividade antimicrobiana, pH e escoamento foram analisados através dos testes de ANOVA e Tukey (p=0,05). A atividade antimicrobiana foi similar entre os cimentos (p>0,05). G1 e G2 apresentaram respectivamente o maior e menor escoamento que os demais grupos (p<0,05). G2 e G4 apresentaram pH e liberação de cálcio maior que G3 (p<0,05), em todos os períodos. G1 apresentou maior pH que G3 (p<0,05), exceto no período de 7 dias (p>0,05). G4 apresentou maior pH do que G1 e G2, mas o cálcio liberado foi similar (p>0,05). G3 apresentou menor liberação de cálcio entre todos os grupos (p<0,05). A adição de 10% de HC no MTAF não alterou o pH e liberação de cálcio do cimento e reduziu o escoamento, porém fora das padronizações técnicas. / This study evaluated the antimicrobial activity, flow, pH and calcium release of MTA Fillapex (MTAF) (G1) or MTA Fillapex plus 10% in weight of calcium hydroxide powder (CH) (MTAF10) (G2), compared to AH Plus (AP) (G3) and Sealapex (SE) (G4). The flow test was performed according to ISO 6876:2001 requirements. The sealers were placed into plastic tubes and immersed in deionized water. After 24 hours, 7, 14 and 28 days the water of each tube was removed and tested to evaluate the pH values and the level of released calcium. Calcium release values were analyzed statistically by Kruskal Wallis and Dunn tests and antimicrobial activity, pH values and flow were analyzed by ANOVA and Tukey tests (α = 5%). The antimicrobial activity was similar among all groups (p>0.05). G1 presented higher flow among all sealers (p<0.05). The addition of 10% CH into MTAF reduced the flow (p<0.05), but in discordance with ISO requirements. G2 and G4 presented pH values and calcium release higher than G3 (p<0.05), in all periods. G1 presented pH value higher than G3 (p<0.05), except in 7 days period (p>0.05). G4 presented higher pH values than G1 and G2, but the calcium release was similar for all periods (p>0.05). G3 presented lower calcium release among all groups (p<0.05). The addition of 10% calcium hydroxide in MTA Fillapex caused reduction in flow and no negative interference in pH and/or calcium release. The flow obtained does not follow ISO requirements.

As bactérias do gênero Enterococcus spp. estão amplamente distribuídas na natureza, atuando como patógenos oportunistas e freqüentemente causam infecções em pacientes imunocomprometidos. Uma característica destes microrganismos é a resistência intrínseca a muitos dos antimicrobianos utilizados habitualmente no tratamento de infecções por cocos Gram positivos. Por outro lado, os Enterococos têm adquirido diferentes determinantes genéticos que conferem resistência a vários antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo determinar a freqüência da resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos (gentamicina), tetraciclina, bem como avaliar a diversidade genética das amostras, pesquisando os genes envolvidos na resistência, além de detectar o fator de virulência gelatinase em isolados clínicos e alimentares de Enterococcus spp. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana dos 52 isolados de alimentos revelaram que 7,7% (n=4) apresentaram resistência somente à tetraciclina, 5,8% (n=3) foram resistentes somente a gentamicina e 28,9% (n=15) apresentaram resistência a ambos antimicrobianos. Nos 40 isolados clínicos, 42,5% (n=17) foram resistentes a tetraciclina, 20% (n=8) resistentes a gentamicina e 17,5% (n=7) foram resistentes a ambos antimicrobianos. A pesquisa de genes de resistência em isolados alimentares revelou que 90% (n=17) dos microrganismos resistentes a tetraciclina apresentaram o gen tet(M), e 100% das amostras resistentes a gentamicina apresentaram o gene aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. Entretanto, 30% dos microrganismos sensíveis apresentaram algum dos genes de resistência. Nos isolados clínicos 95,8% (n=23) das amostras resistentes a tetraciclina apresentaram o gene tet(M) e 100% dos Enterococos resistentes a gentamicina apresentaram o gen aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. No entanto, dos isolados que se mostraram sensíveis, 37,5% apresentaram algum dos genes de resistência analisados. Ainda, foi verificado que 78% (n=49) dos microrganismos isolados de alimentos hidrolisaram a gelatina, e somente 50% (n=20) dos isolados clínicos apresentaram a mesma atividade. / Bacteria of the Enterococcus spp. genus are widely distributed in the natural environment, Enterococci are opportunistic pathogens, and often are the causal agents of infections in immunosuppressed patients. One of the remarkable characteristics of these microorganisms is the intrinsic resistance they offer against several of the antimicrobial agents routinely prescribed in the treatment of Gram-positive cocci. On the other hand, enterococci have been proved to acquire different genetic markers that lend resistance to a variety of other antimicrobial ,searching the involved genes in the resistance, besides detecting the virulence factor gelatinase in isolated of Enterococcus spp. from foods and humans samples. This study aimed to determine the frequency of antimicrobial resistance against high concentrations of aminoglycosides (gentamicin), tetracycline, as well as assess the genetic diversity of microbial strains isolated from foods and humans. Antibiotic susceptibility tests of Enterococcus spp. isolated from food showed that of the 52 isolates, 7,7% (n=4) were tetracycline resistant, 5,8% (n=3) were resistant only the gentamicin and 28,9% (n=15) was resistant to both antibiotics. Already in 40 clinical samples 42,5% (n=17) of the samples were tetracycline resistant, 20% (n=8) were gentamicin resistant and 17,5% (n=7) were resistant to both antimicrobials. The research of genes of resistance in isolates from food disclosed that in 90% (n=17) of tetraciclyn resistant Enterococcus had the tet(M) gen, and 100% gentamicin resistant samples had aac(6')-le-aph(2")-Ia gene and 30% of the sensible microorganism had presented some of the resistance genes. Already in clinical isolates 95,8% (n=23) tetraciclyn resistant samples contained the tet(M) gene and 100% of the gentamicin resistant enterococcus had presented gen aac(6')-le-aph(2")-Ia; however 37,5% enterococcus sensible had presented some of the genes of resistance in research. In this work, also it was verified that 78% (n=49) of the foods isolates produced gelatinase, and 50% (n=20) of the clinical isolates demonstrated the capacity of degradation of the gelatin substrate.

Orientador: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Banca: Evandro Watanabe / Banca: Paulo Henrique Weckwerth / Banca: Fábio Luiz Camargo Villela Berbert / Banca: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Resumo: Objetivo: Este estudo avaliou: (experimento 1) a influência de diferentes substratos na formação de biofilmes de Enterococcus faecalis; e (experimento 2) a atividade antibacteriana contra E. faecalis, pH e solubilidade dos cimentos AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex e MTA Sealer. Metodologia: (1) Biofilmes de E. faecalis foram desenvolvidos sobre dentina bovina, guta-percha, hidroxiapatita e osso bovino por 14 ou 21 dias. Após os períodos de incubação, os espécimes (n=5 por substrato por período) foram marcados pela técnica Live/Dead e observados usando microscopia confocal de varredura a laser. Quatro imagens foram obtidas para cada amostra e analisadas pelo programa bioImage_L. Os parâmetros avaliados foram biovolume (μm3) da população total e verde (células vivas) e o percentual de cobertura do substrato. (2) Para o segundo experimento, discos de cada cimento endodôntico foram preparados e armazenados por 2 ou 7 dias. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo teste de difusão em ágar (TDA) e pelo teste de contato direto sobre biofilme (TCDB, antibiofilme). No TCDB, biofilmes foram induzidos em blocos de dentina bovina por 14 dias. Os cimentos foram, então, colocados sobre os biofilmes e permaneceram em contato por 5, 10 ou 15 h. No grupo controle, nenhum cimento foi colocado sobre os biofilmes. Os blocos de dentina com o biofilme remanescente foram avaliados quantitativamente (número de unidades formadoras de colônia [UFC]). A solubilidade dos cimentos correspondeu à perda de massa (%) após 15 h de imersão em água destilada. Os valores de pH foram mensurados nos períodos de 5, 10 e 15 h. A análise estatística foi realizada por testes paramétricos e não paramétricos (p=0,05). Resultados: (1) Houve formação de biofilme em todos os grupos. Não houve diferença... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: This study evaluated: (experiment 1) the influence of different substrates on the Enterococcus faecalis biofilm formation; and (experiment 2) the antibacterial activity against E. faecalis, pH and solubility of the sealers AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex and MTA Sealer. Methods: (1) E. faecalis biofilms were grown on bovine dentin, gutta-percha, hydroxyapatite and bovine bone for 14 or 21 days. After the incubation periods, the specimens (n=5 per substrate per period) were stained using the Live/Dead technique and observed using a confocal laser scanning microscope. Four confocal pictures were obtained from each sample and analyzed by the software bioImage_L. The parameters evaluated were biovolume (μm3) of total and green population (live cells) and the percentage of surface covered by microorganisms (covering grade). (2) For the second experiment, disks of each material were prepared and stored for 2 or 7 days. Antimicrobial activity was evaluated by the agar diffusion test (ADT) and the direct contact test on biofilm (DCTB, antibiofilm). For the DCTB, biofilms were grown on bovine dentin blocks for 14 days. Then, the sealers were placed on the biofilms and remained in contact for 5, 10 or 15 h. In the control group, no sealer was placed on the biofilms. The dentin blocks containing the remaining biofilms were assessed quantitatively (number of colonyforming units [CFU]). The solubility of the sealers corresponded to their mass loss (%) after 15 h immersion in distilled water. The pH values were measured at 5, 10 and 15 h. Statistical analysis was performed using parametric and non-parametric tests (p=0.05). Results: (1) There was biofilm formation in all groups. Considering the values of the covering grade there was not significant difference among the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O conhecimento sobre a microbiota de animais marinhos fornece uma base que pode ser usada para comparação em virtude de mudanças futuras, apesar disso pouco se sabe sobre a natureza das bactérias associadas com o intestino desses animais. Esse estudo visou a obtenção de um panorama sobre a microbiota de animais marinhos selvagens recolhidos no litoral do Rio Grande do Sul através de ferramentas independentes de cultivo, como o sequenciamento de última geração e PCR quantitativa em tempo real (qPCR), que permitem a inferência sobre as bactérias pertencentes a microbiota intestinal a partir do DNA genômico total obtido diretamente da amostra. A partir do sequenciamento parcial do gene de 16S rRNA utilizando a plataforma de alta desempenho Ion Torrent PGM, seis amostras fecais de lobo-marinho-sul-americano (Arctocephalus australis) e quatro lobo-marinho- subantártico (Arctocephalus tropicalis) foram avaliadas. Verificou-se que o filo Firmicutes (86,28%) foi mais frequente nas fezes de ambas as espécies, seguido por Actinobacteria(6,74%) e Proteobacteria (3,34%), sendo Bacteroidetes e Fusobacteria os filos menos frequente. A qPCR foi empregada para quantificar as espécies de enterococos, mais frequentemente isoladas de fezes de animais (Enterocococcus faecalis, E. hirae, E. mundtti, E. faecium, E. gallinarum e E. casseliflavus), em amostras fecais de animais marinhos selvagens. A partir de DNAs totais isolados de 24 amostras fecais de lobos marinhos, tartarugas-verdes e aves marinhas, verificou-se que E. faecalis (1,82x1012 cópias/ng) foi a espécie mais frequente em todas as amostras analisadas e E. hirae (5,89x1010), E. mundtti (7,57x1010 cópias/ng), E. faecium (4,94x1009 cópias/ng), E. casseliflavus (1,22x1009 cópias/ng) e E. gallinarum (3,84x1010 cópias/ng) também demonstraram estar presentes na microbiota desses animais. / Knowledge about the marine animals microbiota provides a base that can be used for comparison due to future changes, nevertheless little is known about the nature of the bacteria associated with the animal gut. This study aimed to obtain an overview of the microbiota of wild marine animals collected in the Rio Grande do Sul coast using cultive independent methods, as the next-generation sequencing and quantitative real-time PCR ( qPCR ), which allow the inference about the bacteria belonging to the intestinal microbiota from total genomic DNA obtained directly from the sample. Using the high performance Ion Torrent PGM platform six fecal samples of South American fur seal (Arctocephalus australis) and four Subantartic fur seals (Arctocephalus tropicalis) were evaluated. It was found that the phylum Firmicutes (86.28%) was more common in faeces of both species, followed by Actinobacteria (6.74%) and Proteobacteria (3.34%), Fusobacteria and Bacteroidetes were the least frequent. The qPCR was used to quantify the Enterococci species commonly isolated from faecal samples of animal (Enterocococcus faecalis, E. hirae, E. mundtti, E. faecium, E. gallinarum e E. casseliflavus) in faecal samples or cloacal swabs / rectal wild marine animals. From total DNA isolated of 24 fecal samples from sea lions, green turtles , sea birds, it was observed that E. faecalis (1.82x1012 copy/ng) was the most common species in all samples analyzed and E. hirae (5.89x1010), E. mundtti (7.57x1010), E. faecium (4.94x1009), E. casseliflavus (1.22x1009) and E. gallinarum (3.84x1010) also shown to be present in the microflora of these animals.

As bactérias do gênero Enterococcus spp. estão amplamente distribuídas na natureza, atuando como patógenos oportunistas e freqüentemente causam infecções em pacientes imunocomprometidos. Uma característica destes microrganismos é a resistência intrínseca a muitos dos antimicrobianos utilizados habitualmente no tratamento de infecções por cocos Gram positivos. Por outro lado, os Enterococos têm adquirido diferentes determinantes genéticos que conferem resistência a vários antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo determinar a freqüência da resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos (gentamicina), tetraciclina, bem como avaliar a diversidade genética das amostras, pesquisando os genes envolvidos na resistência, além de detectar o fator de virulência gelatinase em isolados clínicos e alimentares de Enterococcus spp. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana dos 52 isolados de alimentos revelaram que 7,7% (n=4) apresentaram resistência somente à tetraciclina, 5,8% (n=3) foram resistentes somente a gentamicina e 28,9% (n=15) apresentaram resistência a ambos antimicrobianos. Nos 40 isolados clínicos, 42,5% (n=17) foram resistentes a tetraciclina, 20% (n=8) resistentes a gentamicina e 17,5% (n=7) foram resistentes a ambos antimicrobianos. A pesquisa de genes de resistência em isolados alimentares revelou que 90% (n=17) dos microrganismos resistentes a tetraciclina apresentaram o gen tet(M), e 100% das amostras resistentes a gentamicina apresentaram o gene aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. Entretanto, 30% dos microrganismos sensíveis apresentaram algum dos genes de resistência. Nos isolados clínicos 95,8% (n=23) das amostras resistentes a tetraciclina apresentaram o gene tet(M) e 100% dos Enterococos resistentes a gentamicina apresentaram o gen aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. No entanto, dos isolados que se mostraram sensíveis, 37,5% apresentaram algum dos genes de resistência analisados. Ainda, foi verificado que 78% (n=49) dos microrganismos isolados de alimentos hidrolisaram a gelatina, e somente 50% (n=20) dos isolados clínicos apresentaram a mesma atividade. / Bacteria of the Enterococcus spp. genus are widely distributed in the natural environment, Enterococci are opportunistic pathogens, and often are the causal agents of infections in immunosuppressed patients. One of the remarkable characteristics of these microorganisms is the intrinsic resistance they offer against several of the antimicrobial agents routinely prescribed in the treatment of Gram-positive cocci. On the other hand, enterococci have been proved to acquire different genetic markers that lend resistance to a variety of other antimicrobial ,searching the involved genes in the resistance, besides detecting the virulence factor gelatinase in isolated of Enterococcus spp. from foods and humans samples. This study aimed to determine the frequency of antimicrobial resistance against high concentrations of aminoglycosides (gentamicin), tetracycline, as well as assess the genetic diversity of microbial strains isolated from foods and humans. Antibiotic susceptibility tests of Enterococcus spp. isolated from food showed that of the 52 isolates, 7,7% (n=4) were tetracycline resistant, 5,8% (n=3) were resistant only the gentamicin and 28,9% (n=15) was resistant to both antibiotics. Already in 40 clinical samples 42,5% (n=17) of the samples were tetracycline resistant, 20% (n=8) were gentamicin resistant and 17,5% (n=7) were resistant to both antimicrobials. The research of genes of resistance in isolates from food disclosed that in 90% (n=17) of tetraciclyn resistant Enterococcus had the tet(M) gen, and 100% gentamicin resistant samples had aac(6')-le-aph(2")-Ia gene and 30% of the sensible microorganism had presented some of the resistance genes. Already in clinical isolates 95,8% (n=23) tetraciclyn resistant samples contained the tet(M) gene and 100% of the gentamicin resistant enterococcus had presented gen aac(6')-le-aph(2")-Ia; however 37,5% enterococcus sensible had presented some of the genes of resistance in research. In this work, also it was verified that 78% (n=49) of the foods isolates produced gelatinase, and 50% (n=20) of the clinical isolates demonstrated the capacity of degradation of the gelatin substrate.

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Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / “Evaluación de la actividad antibacteriana in vitro de nanopartículas de cobre frente a Enterococcus faecalis” Introducción La patología pulpar y periapical se origina de una infección bacteriana que invade el sistema de canales radiculares, dando una respuesta inmunoinflamatoria en el hospedero, la que posteriormente se traduce en la destrucción de los tejidos perirradiculares. Existen microorganismos que son capaces de resistir los procedimientos endodónticos, identificándose dentro de éstos a Enterococcus faecalis, responsable de fracasos de tratamiento y patología endodóntica persistente. Por esta razón, existe la medicación intracanal, la cual pretende eliminar microorganismos remanentes, dejando un agente antimicrobiano entre sesiones clínicas. En la actualidad, el medicamento más efectivo y comúnmente usado, es el hidróxido de calcio. Sin embargo, se ha observado que esta bacteria, en algunos casos, no es susceptible a su acción antimicrobiana. Las nanopartículas metálicas, como las de cobre, aparecen como una nueva alternativa de antimicrobianos, cuyo efecto ya ha sido demostrado contra algunos microorganismos orales, tales como Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Candida albicans y Streptococcus mutans. Sin embargo, no existen referencias de estudios frente a patógenos endodónticos. En el presente proyecto, se propone estudiar la actividad antibacteriana de las nanopartículas de cobre frente a Enterococcus faecalis. Materiales y métodos Se determinó la concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida de nanopartículas de cobre frente a Enterococcus faecalis, a partir del método de macrodilución. Para evaluar la efectividad antimicrobiana intracanal, se contaminaron especímenes de dientes con Enterococcus faecalis y se procedió a medicar el canal radicular con nanopartículas de cobre a distintas concentraciones. Además, se utilizó como control un grupo con hidróxido de calcio y un tercer grupo sin medicamento. Dicha medicación se dejó por 1 y 7 días; posteriormente, se sembró y realizó recuento de unidades formadoras de colonias. Resultados Las nanopartículas de cobre presentaron acción antimicrobiana frente a Enterococcus faecalis in vitro, con valores de concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida de 150 ppm y 225 ppm, respectivamente. Al ser utilizadas como medicación intracanal en un modelo in vitro, su efecto antimicrobiano a 150 ppm y 300 ppm fue equivalente a la acción de Ultracal XS®. Observaciones mediante microscopía electrónica de barrido, demostraron que las nanopartículas de cobre, además de tener un efecto bactericida, remueven bacterias de la superficie radicular y alteran su morfología. Conclusiones Mediante la determinación de los valores de concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida, se comprobó la hipótesis de que las nanopartículas de cobre presentan actividad antimicrobiana frente a la bacteria endodóntica Enterococcus faecalis. Al utilizar las nanopartículas de cobre como medicación en un modelo intracanal presentan una acción antimicrobiana equivalente a la presentada por Ultracal XS®. El Análisis por microscopía electrónica de barrido y microanálisis elemental por energía dispersiva de rayos x sugiere que además del mecanismo bactericida de las nanopartículas de cobre, tendrían una acción antimicrobiana removiendo el biofilm desde el sistema de canales radiculares mediante un efecto anti-fouling. Las actividad antimicrobiana presentada por las nanopartículas de cobre frente a Enterococcus faecalis sugiere que podría ser evaluada en el futuro como alternativa de agente antimicrobiano en procedimientos endodónticos. / Adscrito a Proyecto PRI-ODO 15-004.