107 isolats bactériens, à Gram positif et catalase négative, appartenant aux groupe des bactéries lactiques, ont été isolés à partir d'échantillons de méconium de six nouveaux-nés à l'hôpital de Roubaix, dans le nord de la France. Ces bactéries ont été identifiés par spectrométrie de masse MALDI-TOF comme étant des Enterococcus faecalis. Cette identification a été confirmée par séquençage du gène 16S. Six isolats E. faecalis 14, E. faecalis 28, E. faecalis 90, E. faecalis 97, E. faecalis 101 et E. faecalis 93, montraient une activité anti-Gram négatif et Gram positif, due à la production d'acide lactique et de bactériocines. Les bactériocines produites par E. faecalis 28 et E. faecalis 93, appelées entérocines DD28 et DD93, ont été purifiés par RP-HPLC et présentent une masse moléculaire de 5205,21 et 5204,89 Da respectivement. La combinaison des entérocines DD28 et DD93, avec l’erytromycine, a montré un effet synergique sur une souche de Staphylococcus aureus résistante a la méticiline (SARM) en culture planctonique ou sous forme de biofilms. Par ailleurs nous avons également montré que la combinaison de la ticarcilline et de la céfotaxime avec la colistine ont une activité antibactérienne forte contre les souches d’E. coli producteurs de BLSE. En outre, l'étude de l’entérocine DD14, une autre bactériocine produite par E. faecalis 14, et de la nisine en combinaison avec la colistine contre des souches d'E. coli d'origine porcine sous forme planctoniques et après formation de biofilm, a montré une activité antimicrobienne remarquable contre ces souches. / 107 bacterial isolates, assumed as lactic acid bacteria, were isolated from samples of meconium of six donors at Roubaix hospital, in the north of France. All these bacterial isolates were identified by MALDI-TOF mass spectrometry as Enterococcus faecalis. However, only six isolates among which E. faecalis 14, E. faecalis 28, E. faecalis 90, E. faecalis 97 and E. faecalis 101 and E. faecalis 93 were active against Gram negative bacteria (GNB) and Gram positive bacteria (GPB), through production of lactic acid and bacteriocin like inhibitory substances (BLIS). These antagonistic isolates were then fully identified by sequencing the 16S gene (16S rDNA). Bacteriocins produced by E. faecalis 28 and E. faecalis 93, called enterocin DD28 and DD93, were purified by RP-HPLC. These enterocins appeared to have a molecular mass, determined by mass spectrometry, of 5205.21 and 5204.89 Da respectively. Combination of the enterocin DD28 and DD93, with erythromycin showed a synergetic effect on Methicillin Resistant Staphylococcus aureus strain on planktonic and biofilm forming cultures. Otherwise combination of ticarcillin and cefotaxime with colistin, another antimicrobial compound, showed strongest anti-bacterial activity against ESBL producing E. coli. Moreover, the study about effect of enterocin DD14, bacteriocin produced from E. faecalis 14, and nisin in combination with colistin against planktonic and biofilm formation of Escherichia coli strains, from swine origin, showed remarkable antimicrobial activity against these strains.

Quatre-vingt-un isolats de levures et soixante-dix isolats de bactéries lactiques ont été obtenus à partir de matières fécales de volaille et d’enfants, respectivement. Le typage moléculaire de ces levures par la technique de GTG5-rep PCR a donné 22 groupes mais leur identification par des méthodes biochimiques (système ID-32C), et moléculaires (séquençage de l'espace intergénique ITS1-5.8-ITS2) ont abouti à l'identification de Debaryomyces hansenii (téléomorphe de Candida famata). Le criblage de l'activité antagoniste a permis de mettre en évidence l'activité anti-Listeria de la C. famata Y.5; une souche ayant aussi d'autres propriétés probiotiques. Concernant les bactéries lactiques, nous avons mis en évidence l'antagonisme de deux souches, appelées Enterococcus faecalis B3 et B20. Cet antagonisme est attribué à la production de substances extracellulaires de nature protéique "bactériocines". Les souches sont actives contre Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus dont S. aureus résistant à la méthicilline, Clostridium perfringens et Salmonella Newport. La bactériocine produite par la souche B3, appelée entérocine B3A-B3B, a été purifiée par RP-HPLC. Elle est composée de deux peptides dont les masses moléculaires prédites sont de 5,176.31 Da (B3A) et 5,182.21 Da (B3B). Outre son activité sur des souches de L; monocytogenes cultivées en mode planctonique, l’entérocine B3A-B3B présente une activité anti-biofilm sur ce pathogène alimentaire cultivé sur des lames en acier inoxydable. Le séquençage du génome d’E. faecalis B3 et sa comparaison à ceux des souches cliniques et d'une souche probiotique a permis d'établir des rapprochements génétiques. Toutefois, la souche B3 présente plusieurs caractéristiques favorables à son application comme probiotique. / Eighty-one yeasts and seventy lactic acid bacteria (LAB) isolates were selected from fecal samples of poultry and human origins, respectively. The yeast strains were clustered into 22 groups by GTG5-rep PCR, and then identified as Debaryomyces hansenii (Candida famata) species using the biochemical ID-32C system and molecular sequencing of 26S rDNA and ITS1-5.8-ITS2 rDNA. Only one yeast strain, designated as C. famata Y.5, exhibited antimicrobial activity against Listeria innocua. Further characterization of this anti-Listeria strain, permitted to unveil its probiotic potential. Regarding LAB isolates, two of them were active against Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, methicillin-resistant S. aureus (MRSA), Clostridium perfringens, and Salmonella Newport. The identification of these antagonistic LAB strains as achieved by biochemical, MALDI-TOF-MS, and molecular methods concluded to Enterococcus faecalis B3 and B20. Bacteriocin produced by strain B3, designed as enterocin B3A-B3B, was purified by RP-HPLC, and its predicted molecular mass was 5,176.31 Da (B3A) and 5,182.21 Da (B3B). Notably, B3A-B3B hampered the biofilm installation of L. monocytogenes on stainless steel slides. The sequenced whole genome of E. faecalis B3 was compared to those of clinical and probiotic E. faecalis strains. B3 strain resulted to be sensitive to most antibiotics tested, non-cytotoxic, non-hemolytic, and devoid of inflammatory effects. Moreover, it showed remarkable hydrophobicity, auto-aggregation, adhesion to Caco-2 cells, viability in simulated GIT conditions, and cholesterol assimilation. These features together introduce the E. faecalis B3 strain as a probiotic candidate.

A total descontaminação do sistema de canais radiculares e da massa dentinária é uma constante preocupação clínica. Diante disso, esta pesquisa teve o objetivo de avaliar o nível de descontaminação dentinária alcançada após irrigação com soluções de hipoclorito de sódio em diferentes concentrações valores de pH. Oitenta dentes bovinos unirradiculados foram divididos em 9 grupos experimentais diferentes. As coroas foram seccionadas e despregadas das raízes. Foram obtidos segmentos de 12mm e os canais instrumentados até a lima K120, preenchidos com EDTA 17%, durante 10 minutos. As raízes foram impermeabilizadas externamente com duas camadas de esmalte. Suspensões de Enterococcus faecalis (ATCC 29212) foram padronizadas em espectrofotômetro (3x108 UFC/mL) e depositadas em microtubos com caldo BHI e um espécime. O protocolo de contaminação seguiu a metodologia de MA et al. (2011) com adaptações. Após 5 dias, os espécimes foram fixados em um dispositivo de apoio esterilizado e irrigados durante 5 minutos com as soluções-teste estabilizadas com tampões: (G1) NaOCl 1% - pH5; (G2) NaOCl 1% - pH7; (G3) NaOCl 1% - pH10; (G4) NaOCl 2,5% - pH5; (G5) NaOCl 2,5% - pH 7; (G6) NaOCl 2,5% - pH10; (G7) NaOCl 5% - pH5; (G8) NaOCl 5% - pH7; (G9) NaOCl 5% - pH10, contendo 8 espécimes cada, além dos grupos controles. Após o tratamento com as soluções irrigadoras, metade dos espécimes é avaliada por cultura microbiológica (contagem de unidades formadoras de colônias UFC/mL das raspas de dentina retiradas das paredes dos canais) e a outra metade do mesmo grupo avaliada por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL) e corante Live & Dead. Houve diferença estatística entre diversos grupos, analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Dunn. (p<0,05) Concluiu-se que a solução de hipoclorito de sódio acidificada provocou uma redução significante no número de bactérias. Essa redução foi ainda maior quando a concentração da solução era elevada. / The complete decontamination of root canal system and dentinal mass is a constant clinical concern. Therefore, this study aimed to evaluate the level of dentin decontamination achieved after irrigation with sodium hypochlorite solutions at different concentrations and pH values. Eighty single rooted bovine teeth were divided into 9 different groups. The crowns were sectioned and separated from the roots. Then, there was obtained segments of 12mm and the root canals were instrumented until size #120 K-file and filled with 17% EDTA during 10 minutes. The roots were externally sealed with two layers of nail polish. Suspensions of Enteroccus faecalis (ATCC 29212) were standardized using a spectrophotometer (3x108 CFU/mL) and placed in microtubes containing BHI broth and one sample. The protocol of contamination followed the methodology of MA et al. (2011) with some adjustments. After five days, the samples were fixed in a sterilized device and irrigated during 5 minutes with the tested solutions stabilized by buffers substances: (G1) 1% NaOCl - pH5; (G2) 1% NaOCl - pH7; (G3) NaOCl 1% - pH10; (G4) 2.5% NaOCl - pH5, (G5) 2.5% NaOCl - pH 7, (G6) 2.5% NaOCl - pH10; (G7) 5% NaOCl - pH5; (G8 ) NaOCl 5% - pH 7 (G9) 5% NaOCl - pH10, containing 8 specimens each, and the control groups. After the treatment with the irrigating solutions, half of the specimens were evaluated by microbiological cultures (counting colony forming units CFU/mL of dentine chips removed from the wall of root canals) and the other half of the same group were evaluated by confocal laser scanning microscopy (CLSM) with fluorescent Live & Dead stain. There was statistical difference among various groups (p<0.05) by Kruskal-Wallis and Dunns test. It was concluded that the acidified sodium hypochlorite solution resulted in a significant reduction in the number of bacteria.

Introdução: O objetivo do presente estudo foi correlacionar o efeito antimicrobiano residual e a substantividade da solução de clorexidina a 2%, em dentina humana de dentes extraídos e contaminada com E. faecalis, por 48 horas, 7 e 30 dias. Metodologia: Cento e vinte e três dentes humanos extraídos foram utilizados para esse estudo. As amostras foram divididas em quatro grupos conforme a solução irrigadora utilizada (CHX 2% ou soro fisiológico) e na presença ou ausência do biofilme de Enterococcus faecalis. As amostras foram mantidas em contato com a respectiva solução durante 5 minutos. Cada grupo foi distribuído aleatoriamente em 3 subgrupos de acordo com o período de avaliação (n=10). A quantidade de CHX presente foi avaliada através de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e a viabilidade bacteriana foi analisada através de microscópio confocal a laser (CLSM). A análise estatistica foi feita através dos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney U (P<.05) e teste de correlação de Spearman (P<.01). Resultados: Houve uma correlação negativa entre o percentual de células viáveis e a quantidade de CHX remanescente (P = .000). A CHX reduziu significativamente o percentual de células viáveis em relação ao soro após 48 horas (P = .007). A diferença foi mantida no período de 7 dias (P = .001). Após 30 dias, o grupo CHX apresentou um aumento da viabilidade bacteriana tornando-se semelhante ao soro (P = .623). Simultaneamente, a quantidade de CHX reduziu significativamente após 30 dias (P = .000). Conclusão: Os resultados do presente estudo indicam que a CHX a 2% foi detectada nos periodos de 48 horas e 7 dias, mantendo reduzido o percentual de células viáveis. A presença de microrganismos na dentina humana não alterou a quantidade de CHX residual. / Introduction: The aim of this study was to correlate the bacterial viability and the presence of 2% chlorhexidine (CHX) on dentin by means of confocal laser scanning microscope (CLSM) and high-performance liquid chromatography (HPLC) for 48 hours, 7 and 30 days. Methods: One hundred twenty three extracted human teeth were used. Samples were divided into 4 groups according to the solution (CHX or saline) and the presence of Enterococus faecalis biofilm. Samples were kept in contact with 5mL of the solution for 5 minutes. Each group was divided into 3 subgroups according to the evaluation period (n = 10). Statistical analysis was performed by using the Kruskal- Wallis, Mann-Whitney U tests (P < .05) and Spearman’s Rank Correlation Coefficient (P < .01). Results: There was a negative correlation between the percentage of live cells and the amount of remaining CHX (P = .000). CHX significantly reduced the percentage of viable cells compared to saline after 48 hours (P = .007). Differences were maintained in the 7-day evaluation (P = .001). After 30 days, CHX group presented an increase of viable cells, thereby becoming similar to saline (P = .623). Simultaneously, remaining CHX significantly reduced in the 30-day specimens (P = .000). Conclusion: The results of this study indicate that 2% CHX solution was detected for 48 hours and 7 days, keeping a low percentage of viable cells. The presence of microorganisms on human dentin did not affect 2% chlorhexidine maintenance.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo principal deste estudo foi investigar a interação de 24 cepas de E. faecalis isoladas de infecções endodônticas primárias às proteínas de matriz dentinária, como também a moléculas de matriz presentes em lesões de endocardites. A análise desta interação foi feita através de técnica enzimática, com confirmação pela técnica de fluorescência. Além disto, foi realizada a confirmação do isolamento da espécie E. faecalis, através da técnica de PCR para o gene 16SrRNA e a análise da presença de genes de virulência da referida espécie microbiana para aderência às supostas proteínas de matriz incluindo às de ligação ao colágeno (ace, gelE, esp, agg e efaA). O maior padrão de interação das cepas ocorreu com a fibronectina (83,4%), seguido pelo fibrinogênio (62,5%) e colágeno humano tipo I (52%). Curiosamente, a aderência observada para o colágeno do tipo I, foi de pequena magnitude, quando comparado com a amostra padrão da ATCC 29212. As cepas ATCC 29212, A1, A43 e A68 interagiram com todas as proteínas de matriz utilizadas neste estudo. Um percentual expressivo das cepas testadas apresentou amplificação para efaA (86,9%) e para ace (73,9%). Paralelamente, todas as cepas apresentaram amplificação para gelE e foram negativas para os genes agg e esp. Adicionalmente, não houve correlação entre a detecção dos genes de virulência e a interação às proteínas de matriz, evidenciando que, mesmo com a detecção dos genes nas amostras, se faz necessário avaliar a expressão gênica por qPCR. / The main objective of this study was to investigate the interaction of 24 E. faecalis strains isolated from primary endodontic infections with dentin matrix proteins, as well as to the matrix molecules present in endocarditis lesions. The analysis of this interaction was made by enzyme assay, with confirmation by the fluorescence technique. In addition, confirmation of the isolation of the species E. faecalis was performed by PCR for 16S rRNA gene and the analysis of the presence of virulence genes for matrix proteins including type I collagen (ace, gelE, esp , agg and efA). The strains interacted mostly with fibronectin (83.4%), followed by fibrinogen (62.5%) and human collagen type I (52%). Interestingly, the adhesion to type I collagen occurred in small magnitude, when compared with the E. faecalis type strain ATCC 29212. The strains ATCC 29212, A1, A43 and A68 interacted with all matrix proteins investigated in this study. A significant percentage of the tested strains showed amplification for efaA (86.9%) and ace (73.9%). In parallel, all strains showed amplification for gelE and were negative for the genes esp and agg. Additionally, there was no correlation between the detection of virulence genes and the interaction with matrix proteins, showing that even with the detection of genes in a particular strain, it is necessary to evaluate the gene expression by qPCR.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo principal deste estudo foi investigar a interação de 24 cepas de E. faecalis isoladas de infecções endodônticas primárias às proteínas de matriz dentinária, como também a moléculas de matriz presentes em lesões de endocardites. A análise desta interação foi feita através de técnica enzimática, com confirmação pela técnica de fluorescência. Além disto, foi realizada a confirmação do isolamento da espécie E. faecalis, através da técnica de PCR para o gene 16SrRNA e a análise da presença de genes de virulência da referida espécie microbiana para aderência às supostas proteínas de matriz incluindo às de ligação ao colágeno (ace, gelE, esp, agg e efaA). O maior padrão de interação das cepas ocorreu com a fibronectina (83,4%), seguido pelo fibrinogênio (62,5%) e colágeno humano tipo I (52%). Curiosamente, a aderência observada para o colágeno do tipo I, foi de pequena magnitude, quando comparado com a amostra padrão da ATCC 29212. As cepas ATCC 29212, A1, A43 e A68 interagiram com todas as proteínas de matriz utilizadas neste estudo. Um percentual expressivo das cepas testadas apresentou amplificação para efaA (86,9%) e para ace (73,9%). Paralelamente, todas as cepas apresentaram amplificação para gelE e foram negativas para os genes agg e esp. Adicionalmente, não houve correlação entre a detecção dos genes de virulência e a interação às proteínas de matriz, evidenciando que, mesmo com a detecção dos genes nas amostras, se faz necessário avaliar a expressão gênica por qPCR. / The main objective of this study was to investigate the interaction of 24 E. faecalis strains isolated from primary endodontic infections with dentin matrix proteins, as well as to the matrix molecules present in endocarditis lesions. The analysis of this interaction was made by enzyme assay, with confirmation by the fluorescence technique. In addition, confirmation of the isolation of the species E. faecalis was performed by PCR for 16S rRNA gene and the analysis of the presence of virulence genes for matrix proteins including type I collagen (ace, gelE, esp , agg and efA). The strains interacted mostly with fibronectin (83.4%), followed by fibrinogen (62.5%) and human collagen type I (52%). Interestingly, the adhesion to type I collagen occurred in small magnitude, when compared with the E. faecalis type strain ATCC 29212. The strains ATCC 29212, A1, A43 and A68 interacted with all matrix proteins investigated in this study. A significant percentage of the tested strains showed amplification for efaA (86.9%) and ace (73.9%). In parallel, all strains showed amplification for gelE and were negative for the genes esp and agg. Additionally, there was no correlation between the detection of virulence genes and the interaction with matrix proteins, showing that even with the detection of genes in a particular strain, it is necessary to evaluate the gene expression by qPCR.

Introdução: O objetivo do presente estudo foi correlacionar o efeito antimicrobiano residual e a substantividade da solução de clorexidina a 2%, em dentina humana de dentes extraídos e contaminada com E. faecalis, por 48 horas, 7 e 30 dias. Metodologia: Cento e vinte e três dentes humanos extraídos foram utilizados para esse estudo. As amostras foram divididas em quatro grupos conforme a solução irrigadora utilizada (CHX 2% ou soro fisiológico) e na presença ou ausência do biofilme de Enterococcus faecalis. As amostras foram mantidas em contato com a respectiva solução durante 5 minutos. Cada grupo foi distribuído aleatoriamente em 3 subgrupos de acordo com o período de avaliação (n=10). A quantidade de CHX presente foi avaliada através de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e a viabilidade bacteriana foi analisada através de microscópio confocal a laser (CLSM). A análise estatistica foi feita através dos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney U (P<.05) e teste de correlação de Spearman (P<.01). Resultados: Houve uma correlação negativa entre o percentual de células viáveis e a quantidade de CHX remanescente (P = .000). A CHX reduziu significativamente o percentual de células viáveis em relação ao soro após 48 horas (P = .007). A diferença foi mantida no período de 7 dias (P = .001). Após 30 dias, o grupo CHX apresentou um aumento da viabilidade bacteriana tornando-se semelhante ao soro (P = .623). Simultaneamente, a quantidade de CHX reduziu significativamente após 30 dias (P = .000). Conclusão: Os resultados do presente estudo indicam que a CHX a 2% foi detectada nos periodos de 48 horas e 7 dias, mantendo reduzido o percentual de células viáveis. A presença de microrganismos na dentina humana não alterou a quantidade de CHX residual. / Introduction: The aim of this study was to correlate the bacterial viability and the presence of 2% chlorhexidine (CHX) on dentin by means of confocal laser scanning microscope (CLSM) and high-performance liquid chromatography (HPLC) for 48 hours, 7 and 30 days. Methods: One hundred twenty three extracted human teeth were used. Samples were divided into 4 groups according to the solution (CHX or saline) and the presence of Enterococus faecalis biofilm. Samples were kept in contact with 5mL of the solution for 5 minutes. Each group was divided into 3 subgroups according to the evaluation period (n = 10). Statistical analysis was performed by using the Kruskal- Wallis, Mann-Whitney U tests (P < .05) and Spearman’s Rank Correlation Coefficient (P < .01). Results: There was a negative correlation between the percentage of live cells and the amount of remaining CHX (P = .000). CHX significantly reduced the percentage of viable cells compared to saline after 48 hours (P = .007). Differences were maintained in the 7-day evaluation (P = .001). After 30 days, CHX group presented an increase of viable cells, thereby becoming similar to saline (P = .623). Simultaneously, remaining CHX significantly reduced in the 30-day specimens (P = .000). Conclusion: The results of this study indicate that 2% CHX solution was detected for 48 hours and 7 days, keeping a low percentage of viable cells. The presence of microorganisms on human dentin did not affect 2% chlorhexidine maintenance.

A total descontaminação do sistema de canais radiculares e da massa dentinária é uma constante preocupação clínica. Diante disso, esta pesquisa teve o objetivo de avaliar o nível de descontaminação dentinária alcançada após irrigação com soluções de hipoclorito de sódio em diferentes concentrações valores de pH. Oitenta dentes bovinos unirradiculados foram divididos em 9 grupos experimentais diferentes. As coroas foram seccionadas e despregadas das raízes. Foram obtidos segmentos de 12mm e os canais instrumentados até a lima K120, preenchidos com EDTA 17%, durante 10 minutos. As raízes foram impermeabilizadas externamente com duas camadas de esmalte. Suspensões de Enterococcus faecalis (ATCC 29212) foram padronizadas em espectrofotômetro (3x108 UFC/mL) e depositadas em microtubos com caldo BHI e um espécime. O protocolo de contaminação seguiu a metodologia de MA et al. (2011) com adaptações. Após 5 dias, os espécimes foram fixados em um dispositivo de apoio esterilizado e irrigados durante 5 minutos com as soluções-teste estabilizadas com tampões: (G1) NaOCl 1% - pH5; (G2) NaOCl 1% - pH7; (G3) NaOCl 1% - pH10; (G4) NaOCl 2,5% - pH5; (G5) NaOCl 2,5% - pH 7; (G6) NaOCl 2,5% - pH10; (G7) NaOCl 5% - pH5; (G8) NaOCl 5% - pH7; (G9) NaOCl 5% - pH10, contendo 8 espécimes cada, além dos grupos controles. Após o tratamento com as soluções irrigadoras, metade dos espécimes é avaliada por cultura microbiológica (contagem de unidades formadoras de colônias UFC/mL das raspas de dentina retiradas das paredes dos canais) e a outra metade do mesmo grupo avaliada por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL) e corante Live & Dead. Houve diferença estatística entre diversos grupos, analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Dunn. (p<0,05) Concluiu-se que a solução de hipoclorito de sódio acidificada provocou uma redução significante no número de bactérias. Essa redução foi ainda maior quando a concentração da solução era elevada. / The complete decontamination of root canal system and dentinal mass is a constant clinical concern. Therefore, this study aimed to evaluate the level of dentin decontamination achieved after irrigation with sodium hypochlorite solutions at different concentrations and pH values. Eighty single rooted bovine teeth were divided into 9 different groups. The crowns were sectioned and separated from the roots. Then, there was obtained segments of 12mm and the root canals were instrumented until size #120 K-file and filled with 17% EDTA during 10 minutes. The roots were externally sealed with two layers of nail polish. Suspensions of Enteroccus faecalis (ATCC 29212) were standardized using a spectrophotometer (3x108 CFU/mL) and placed in microtubes containing BHI broth and one sample. The protocol of contamination followed the methodology of MA et al. (2011) with some adjustments. After five days, the samples were fixed in a sterilized device and irrigated during 5 minutes with the tested solutions stabilized by buffers substances: (G1) 1% NaOCl - pH5; (G2) 1% NaOCl - pH7; (G3) NaOCl 1% - pH10; (G4) 2.5% NaOCl - pH5, (G5) 2.5% NaOCl - pH 7, (G6) 2.5% NaOCl - pH10; (G7) 5% NaOCl - pH5; (G8 ) NaOCl 5% - pH 7 (G9) 5% NaOCl - pH10, containing 8 specimens each, and the control groups. After the treatment with the irrigating solutions, half of the specimens were evaluated by microbiological cultures (counting colony forming units CFU/mL of dentine chips removed from the wall of root canals) and the other half of the same group were evaluated by confocal laser scanning microscopy (CLSM) with fluorescent Live & Dead stain. There was statistical difference among various groups (p<0.05) by Kruskal-Wallis and Dunns test. It was concluded that the acidified sodium hypochlorite solution resulted in a significant reduction in the number of bacteria.

Introdução: O objetivo do presente estudo foi correlacionar o efeito antimicrobiano residual e a substantividade da solução de clorexidina a 2%, em dentina humana de dentes extraídos e contaminada com E. faecalis, por 48 horas, 7 e 30 dias. Metodologia: Cento e vinte e três dentes humanos extraídos foram utilizados para esse estudo. As amostras foram divididas em quatro grupos conforme a solução irrigadora utilizada (CHX 2% ou soro fisiológico) e na presença ou ausência do biofilme de Enterococcus faecalis. As amostras foram mantidas em contato com a respectiva solução durante 5 minutos. Cada grupo foi distribuído aleatoriamente em 3 subgrupos de acordo com o período de avaliação (n=10). A quantidade de CHX presente foi avaliada através de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e a viabilidade bacteriana foi analisada através de microscópio confocal a laser (CLSM). A análise estatistica foi feita através dos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney U (P<.05) e teste de correlação de Spearman (P<.01). Resultados: Houve uma correlação negativa entre o percentual de células viáveis e a quantidade de CHX remanescente (P = .000). A CHX reduziu significativamente o percentual de células viáveis em relação ao soro após 48 horas (P = .007). A diferença foi mantida no período de 7 dias (P = .001). Após 30 dias, o grupo CHX apresentou um aumento da viabilidade bacteriana tornando-se semelhante ao soro (P = .623). Simultaneamente, a quantidade de CHX reduziu significativamente após 30 dias (P = .000). Conclusão: Os resultados do presente estudo indicam que a CHX a 2% foi detectada nos periodos de 48 horas e 7 dias, mantendo reduzido o percentual de células viáveis. A presença de microrganismos na dentina humana não alterou a quantidade de CHX residual. / Introduction: The aim of this study was to correlate the bacterial viability and the presence of 2% chlorhexidine (CHX) on dentin by means of confocal laser scanning microscope (CLSM) and high-performance liquid chromatography (HPLC) for 48 hours, 7 and 30 days. Methods: One hundred twenty three extracted human teeth were used. Samples were divided into 4 groups according to the solution (CHX or saline) and the presence of Enterococus faecalis biofilm. Samples were kept in contact with 5mL of the solution for 5 minutes. Each group was divided into 3 subgroups according to the evaluation period (n = 10). Statistical analysis was performed by using the Kruskal- Wallis, Mann-Whitney U tests (P < .05) and Spearman’s Rank Correlation Coefficient (P < .01). Results: There was a negative correlation between the percentage of live cells and the amount of remaining CHX (P = .000). CHX significantly reduced the percentage of viable cells compared to saline after 48 hours (P = .007). Differences were maintained in the 7-day evaluation (P = .001). After 30 days, CHX group presented an increase of viable cells, thereby becoming similar to saline (P = .623). Simultaneously, remaining CHX significantly reduced in the 30-day specimens (P = .000). Conclusion: The results of this study indicate that 2% CHX solution was detected for 48 hours and 7 days, keeping a low percentage of viable cells. The presence of microorganisms on human dentin did not affect 2% chlorhexidine maintenance.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Enterococcus faecalis foi sugerido como sendo um importante agente etiolÃgico do insucesso endodÃntico. Foi encontrado no sistema de canais radiculares em um percentual de 22% a 77% e foi associado com a formaÃÃo de estruturas chamadas biofilmes. O objetivo do presente estudo foi avaliar, in vitro, a efetividade de cimentos endodÃnticos, hipoclorito de sÃdio a 2,5% e soluÃÃo do Ãleo essencial da Lippia sidoides a 0,5% na eliminaÃÃo de biofilmes de E. faecalis. Material clÃnico foi coletado de 37 pacientes com infecÃÃes crÃnicas do canal radicular e 14 cepas de Enterococcus faecalis foram isoladas (37,8%). Biofilmes de uma cepa de coleÃÃo de cultura (ATCC) e de uma cepa clÃnica multiresistente (Isolado 12) foram incubados por 8 dias. Esse perÃodo foi selecionado baseado em estudo cronolÃgico do desenvolvimento de biofilmes de Enterococcus faecalis atravÃs de Microscopia de ForÃa AtÃmica. Foi verificado que houve uma reduÃÃo significativa no nÃmero de bactÃrias quando os biofilmes foram expostos aos cimentos endodÃnticos em relaÃÃo ao controle para as duas cepas testadas (p<0.001). Analisando a cepa ATCC, foi verificado que o cimento endodÃntico Epiphany apresentou aÃÃo similar ao cimento Endofill (p>0.05); resultado semelhante foi encontrado para o isolado 12. Quando a susceptibilidade das cepas frente aos cimentos endodÃnticos foi comparada verificou-se que o Isolado 12 foi menos susceptÃvel comparado à cepa ATCC (p<0.001). Observou-se que a soluÃÃo do Ãleo essencial de Lippia siodides a 0,5% apresentou aÃÃo similar ao hipoclorito de sÃdio a 2,5% quando os biofilmes das duas cepas foram expostos por 10 minutos a essas substÃncias (p<0.001). Comparando a susceptibilidade das duas cepas Ãs soluÃÃes testadas, nÃo houve diferenÃa entre elas (p>0.05) / Enterococcus faecalis has been suggested to be an important etiological agent in endodontic failure. It has been found in the root canal system in a perceptual ranging from 22% to 77% and it has been associated to organisms structured in biofilms. The aim of the present study was to evaluate, in vitro, the effectiveness of endodontic sealers, 2.5% sodium hypochlorite, and 0.5% Lippia sidoides essential oil in eliminating E. faecalis biofilms. Clinical material was collected from 37 patients with root canal chronic infections and 14 Enterococcus faecalis strains were isolated (37.8%). Biofilms from a reference (ATCC) and a clinical multirresistant strain (isolate 12 ) were grown for 8 days. This period was selected based on a chronological study of the Enterococcus faecalis biofilm development through Atomic Force Microscopy. It was verified that there was a significant reduction of the bacteria number when the biofilms were exposed to the endodontic sealers related to the control for the two tested strains (p<0.001). Analyzing the ATCC strain, it was seen that the Epiphany endodontic sealer presented similar action compared to Endofill (p>0.05), similar result was found for Isolate 12. When the strains susceptibilities against the sealers was compared it was verified that the isolate 12 was less susceptible than the ATCC strain (p<0.001). It was verified that the 0.5% essential oil solution of Lippia siodides presented a similar action to 2.5% sodium hypochlorite when the biofilm of ATCC strain and isolate 12 were exposed for 10 minutes to this substances (p<0.001). Comparing the susceptibility of the two strains to the solutions tested, there was no difference between them (p>0.05)