Na região nordeste é registrado o maior índice de letalidade por acidentes ofídicos do Brasil. As serpentes Bothrops erythromelas (Be) são as responsáveis pela maioria dos acidentes na região, e o veneno dessa serpente não integra o pool de antígenos utilizado pata a obtenção do soro antibotrópico (SAB). Nesse estudo avaliou-se a potência do SAB na neutralização de algumas atividades do veneno (V) de Be. Os resultados mostraram que o SAB neutraliza as atividades do VBe, mas, exceto para a atividade coagulante e letalidade, a potência do SAB foi significativamente menor, quando comparado à neutralização das mesmas atividades do veneno de B. jararaca. A utilização de um soro obtido após a inclusão do VBe ao pool de antígenos não melhorou significativamente a potência do SAB. O SAB neutralizou também o edema inflamatório induzido pelo VBe, mas a associação do SAB à dexametasona inibiu o edema quando aplicado até 45 min após o envenenamento. Nesse tempo, SAB ou dexametasona aplicados isoladamente não foram efetivos em diminuir esse edema. / In the northeast region is registered the higher lethality index by snakebites in Brazil. Bothrops erythromelas (Be) snakes are responsible for the larger number of snakebites in that region, and the venom of these snakes do not integrate the pool of antigens used to obtaining the Bothrops antivenom (BAV). In the present study, the potency of this serum in neutralizing some activities of Be venom (V) was evaluated. Results showed that BAV neutralizes BeV activities, but, except for coagulant activity and for lethality, the potency of the BAV was significantly lower, when compared to the neutralization of the same parameters of the Bothrops jararaca venom. The use of antivenom obtained after inclusion of BeV to the pool of antigens did not ameliorate the BAV potency. The BAV also neutralizes the inflammatory edema induced by BeV, but the association of BAV and dexamethasone decreased the edema when applied up to 45 min after the venom. At this time, antivenom or dexamethasone administered alone were ineffective in inhibiting this edema.

Na região nordeste é registrado o maior índice de letalidade por acidentes ofídicos do Brasil. As serpentes Bothrops erythromelas (Be) são as responsáveis pela maioria dos acidentes na região, e o veneno dessa serpente não integra o pool de antígenos utilizado pata a obtenção do soro antibotrópico (SAB). Nesse estudo avaliou-se a potência do SAB na neutralização de algumas atividades do veneno (V) de Be. Os resultados mostraram que o SAB neutraliza as atividades do VBe, mas, exceto para a atividade coagulante e letalidade, a potência do SAB foi significativamente menor, quando comparado à neutralização das mesmas atividades do veneno de B. jararaca. A utilização de um soro obtido após a inclusão do VBe ao pool de antígenos não melhorou significativamente a potência do SAB. O SAB neutralizou também o edema inflamatório induzido pelo VBe, mas a associação do SAB à dexametasona inibiu o edema quando aplicado até 45 min após o envenenamento. Nesse tempo, SAB ou dexametasona aplicados isoladamente não foram efetivos em diminuir esse edema. / In the northeast region is registered the higher lethality index by snakebites in Brazil. Bothrops erythromelas (Be) snakes are responsible for the larger number of snakebites in that region, and the venom of these snakes do not integrate the pool of antigens used to obtaining the Bothrops antivenom (BAV). In the present study, the potency of this serum in neutralizing some activities of Be venom (V) was evaluated. Results showed that BAV neutralizes BeV activities, but, except for coagulant activity and for lethality, the potency of the BAV was significantly lower, when compared to the neutralization of the same parameters of the Bothrops jararaca venom. The use of antivenom obtained after inclusion of BeV to the pool of antigens did not ameliorate the BAV potency. The BAV also neutralizes the inflammatory edema induced by BeV, but the association of BAV and dexamethasone decreased the edema when applied up to 45 min after the venom. At this time, antivenom or dexamethasone administered alone were ineffective in inhibiting this edema.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-25T20:53:39Z No. of bitstreams: 1 JacyraAntunesDosSantosGomes_DISSERT.pdf: 2709008 bytes, checksum: b8536d693075ca072ab23c36cf351557 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-02T20:59:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JacyraAntunesDosSantosGomes_DISSERT.pdf: 2709008 bytes, checksum: b8536d693075ca072ab23c36cf351557 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:59:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JacyraAntunesDosSantosGomes_DISSERT.pdf: 2709008 bytes, checksum: b8536d693075ca072ab23c36cf351557 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Os acidentes of?dicos representam um s?rio problema em sa?de p?blica nos pa?ses tropicais e subtropicais, sendo o g?nero Bothrops o maior respons?vel pelos acidentes no Brasil e em toda a Am?rica Latina (correspondendo cerca de 90 % dos casos). Os efeitos locais (dor, edema, hemorragia e necrose tecidual) e sist?micos (altera??es cardiovasculares, choque e dist?rbios da coagula??o sangu?nea) causados pela pe?onha das serpentes do g?nero Bothrops s?o devido aos in?meros componentes prot?icos e n?o-prot?icos (carboidratos, lip?dios, nucleot?deos, aminas biog?nicas e v?rios ?ons), que fazem parte da constitui??o da pe?onha. A ?nica forma de terapia cientificamente validada ? a soroterapia antiveneno, que, no entanto, n?o ? eficaz com rela??o aos efeitos locais produzidos e, al?m disso, pode ocasionar s?rias rea??es de hipersensibilidade aos pacientes. Sendo assim, a busca por novas alternativas ? soroterapia se faz importante, e nesse contexto, muitas plantas medicinais v?m se destacando pelo uso popular como antiof?dicas. Dentre essas plantas, pode-se citar a esp?cie Jatropha mollissima (Euphorbiaceae) que apresenta amplo uso popular na medicina tradicional como antiof?dica, anti-inflamat?ria, antimicrobiana e antit?rmica. Portanto, esse trabalho tem como objetivo a avalia??o do potencial neutralizante dos efeitos locais induzidos pelas pe?onhas de Bothrops erythromelas e Bothrops jararaca pelo extrato aquoso das folhas de J. mollissima. O extrato das folhas foi preparado por decoc??o, fracionado (por meio de parti??o l?quido-l?quido) e caracterizado por cromatografia em camada delgada (CCD) e Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE). A atividade antiof?dica do extrato foi avaliada nos modelos de edema de pata, peritonite, hemorragia e miotoxicidade induzidos pelas pe?onhas de B. erythromelas e B. jararaca sendo utilizados camundongos Swiss de ambos os sexos. Em todos os modelos o extrato foi avaliado pela via intraperitoneal nas doses de 50, 100 e 200 mg/kg, sendo administrado 30 minutos antes da inje??o da pe?onha (protocolo de pr?-tratamento). Manchas sugestivas da presen?a dos flavon?ides: apigenina, luteolina, orientina, isoorientina, vitexina e vitexina-2-O-ramnos?deo foram detectadas no extrato atrav?s da co-CCD. Por meio de CLAE foram identificados os flavon?ides isoorientina, orientina, vitexina e isovitexina. Todas as doses testadas do extrato de J. mollissima reduziram o edema de pata induzido pelas pe?onhas com intensidade similar ? dexametasona. O extrato aquoso das folhas de J. mollissima, em todas as doses avaliadas, inibiu a migra??o celular induzida por B. erythromelas e B. jararaca promovendo a inibi??o do recrutamento tanto de c?lulas mononucleares quanto das c?lulas polimorfonucleares. A hemorragia local induzida pela pe?onha de B. jararaca foi inibida significativamente pelo extrato. Ambas as pe?onhas foram inibidas pelo extrato na atividade miot?xica. Esses resultados indicam que o extrato aquoso das folhas de J. mollissima apresenta potencial propriedade antiof?dica sobretudo com rela??o ao efeitos locais, o que poderia justificar o uso dessa planta na medicina tradicional e na terapia complementar como antiof?dica. / Snakebites are a serious public health problem in tropical and subtropical countries and Bothrops genus is responsible for the accidents in Brazil and throughout Latin America (90% of cases). The local effects (pain, edema, hemorrhage and myonecrosis) and systemic (cardiovascular alterations, shock and blood clotting disorders) caused by the venom of Bothrops are due to the numerous protein and non-protein components, which are part of the constitution of the poison. The only form of therapy is scientifically validated antivenom serum therapy which, however, is not effective with respect to local effects produced, risk of immunological reactions, high cost and difficult access in some regions. Thus, the search for new alternatives to serum therapy becomes important, and in this context, many medicinal plants have been highlighted by the popular use as antiophidic. Among these plants, we can mention the species Jatropha mollissima (Euphorbiaceae) which has popular use in traditional medicine as antiophidic, anti-inflammatory, antimicrobial and antipyretic. Therefore, this study aims to evaluate the neutralizing potential of local effects induced by the venom of Bothrops erythromelas and Bothrops jararaca with the aqueous extract of the leaves of J. mollissima. The leaf extracts were prepared by decoction, fractionated (by liquid-liquid partition) and characterized by thin layer chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Antiophidic activity of the extract was evaluated in model of paw edema, peritonitis, bleeding and myotoxicity induced by venoms of B. jararaca and B. erythromelas. In all models, the extract was evaluated by intraperitoneal route at the doses of 50, 100 and 200 mg/kg, administered 30 minutes prior to injection of the venom (pretreatment protocol). Stains suggestive of the presence of flavonoids: apigenin, luteolin, orientin, isoorientin, vitexin and vitexin-2-O-rhamnoside were detected in the extract by co-CCD. By means of HPLC were identified isoorientin, orientin, vitexin and isovitexin. All tested doses of J. mollissima extract reduced the paw edema induced by the venom with intensity similar to dexamethasone. The aqueous extract of J. mollissima leaves on all evaluated doses, inhibited cell migration induced by B. jararaca and B. erythromelas promoting inhibition of recruitment of mononuclear cells and the polymorphonuclear cells. Local bleeding induced by B. jararaca venom was significantly inhibited by the extract. Both venoms were inhibited by the extract in myotoxic activity. These results indicate that the aqueous extract of J. mollissima leaves have snakebite potential, particularly with respect to local effects, which may justify the use of this plant in traditional medicine and complementary therapy as anti-venom serum.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Bothropoides erythromelas à responsÃvel por muitos acidentes no Nordeste do Brasil. O veneno desta serpente induz insuficiÃncia renal aguda. Rins isolados de ratos Wistar, pesando 250 a 300g, foram perfundidos durante 120 min com soluÃÃo Krebs-Henseleit contendo 6g% de albumina bovina. O veneno total de Bothropoides erythromelas foi estudado anteriormente (SOUSA, 2004) e utilizado neste estudo para posterior comparaÃÃo com os grupos tratados com as fraÃÃes PLA2 Lys 49 e Asp 49 do veneno. O veneno total (10mg/mL) e as fraÃÃes PLA2 Lys 49 e Asp 49 (5mg/mL) de B. erythromelas foram adicionados ao sistema 30 min apÃs o inÃcio de cada experimento. Os parÃmetros estudados incluÃram pressÃo de perfusÃo (PP), resistÃncia vascular renal (RVR), ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG), fluxo urinÃrio (FU), percentual de transporte tubular de sÃdio, potÃssio e cloreto (%TNa+, %TK+ e %TCl-), percentual de transporte proximal de sÃdio, potÃssio e cloreto (%pTNa+, %pTK+ e %pTCl-), excreÃÃo de sÃdio, potÃssio e cloreto (ENa+, EK+ e ECl-) e clearance osmÃtico (Cosm) (p< 0,05*). O grupo controle perfundido com albumina foi funcionalmente estÃvel por todos os 120 min. A infusÃo do veneno causou um aumento significante no FU, ENa+, ECl- e Cosm e uma diminuiÃÃo na PP, RVR, %TNa+, %TK+, %TCl-, %pTNa+, %pTK+ e %pTCl-. O RFG e a EK+ diminuÃram aos 60 min e aumentaram aos 90 e 120 min quando comparado com o grupo controle. A infusÃo de Lys 49 causou um aumento significante na PP, FU, ENa+, EK+ e Cosm e diminuiu o RFG e o %TNa+ quando comparada com o grupo controle. Lys 49 nÃo modificou os outros parÃmetros funcionais renais. A infusÃo de Asp 49 modificou apenas os parÃmetros funcionais renais %pTK+ (diminuiÃÃo) e EK+ (aumento) quando comparada ao grupo controle. Lys 49 apresentou um efeito similar ao veneno total nos parÃmetros FU, %TNa+, ENa+, EK+ e Cosm e Asp 49 nos parÃmetros %pTK+ e EK+. A anÃlise histolÃgica mostrou uma quantidade moderada de material proteinÃceo nos glomÃrulos e tÃbulos de rins perfundidos com o veneno, Lys 49 e Asp 49, bem como regiÃes focais de apoptose/necrose em rins perfundidos com Lys 49 e Asp 49. CÃlulas MDCK foram cultivadas em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 10% vv de soro bovino fetal e entÃo avaliadas na presenÃa do veneno total, Lys 49 e Asp 49 de B. erythromelas nas concentraÃÃes (100; 50; 25; 12,5; 6,25 e 3,125mg/mL). A anÃlise dos efeitos citotÃxicos em cÃlulas MDCK foi executada pelo mÃtodo MTT. O veneno promoveu efeito citotÃxico nas concentraÃÃes de 50 e 100mg/mL (IC50 =93,31mg/mL). Lys 49 promoveu efeito citotÃxico nas concentraÃÃes de 6,25; 12,5; 25; 50 e 100mg/mL (IC50 = 38,29mg/mL). Asp 49 promoveu efeito citotÃxico nas concentraÃÃes de 50 e 100mg/mL (IC50 = 158mg/mL). TambÃm foram mensurados os nÃveis de lactato desidrogenase (LDH) e nenhum aumento significante foi observado com veneno total e Asp 49. Lys 49 promoveu um aumento significante nos nÃveis de lactato desidrogenase apenas na concentraÃÃo de 100mg/mL. ApÃs o cultivo de cÃlulas MDCK com o veneno total, nas concentraÃÃes de 46,65 e 23,32mg/mL, foi realizada a reaÃÃo de polimerase em cadeia em tempo real para a avaliaÃÃo da expressÃo de genes prà (Caspase-3, Caspase-8 e Bax) e antiapoptÃticos (Bcl-XL e Mcl-1). NÃo foi realizada avaliaÃÃo da expressÃo de genes prà e antiapoptÃticos com Lys 49 e Asp 49. Na expressÃo de genes prÃ-apoptÃticos o veneno total promoveu um aumento da expressÃo de caspase-3 na concentraÃÃo de 23,32Âg/mL e de caspase-8 nas concentraÃÃes de 46,65 e 23,32Âg/mL, quando comparado com os controles positivo (DOXO) e negativo (PBS) e diminuiu a expressÃo de Bax em ambas as concentraÃÃes. Na expressÃo de genes antiapoptÃticos o veneno total promoveu induÃÃo significativa de Mcl-1 somente na concentraÃÃo de 46,65mg/mL e nÃo modificou a expressÃo de Bcl-XL, quando comparado com o controle negativo. O veneno e as fraÃÃes PLA2 Lys 49 e Asp 49 da serpente Bothropoides erythromelas à capaz de promover significativos efeitos sobre os parÃmetros de funÃÃo renal e sobre cÃlulas MDCK, com indicativo de morte celular por apoptose atravÃs da via extrÃnseca. / Bothropoides erythromelas is responsible for a great deal of snakebites in Northeastern from Brazil. The venom of this snake induces acute renal failure. Isolated kidneys from Wistar rats, weighting 250 to 300g, were perfused with Krebs-Henseleit solution containing 6g% of bovine serum albumin for 120 min. The whole venom of Bothropoides erythromelas been previously studied (SOUSA, 2004) and used in this study for comparison with the treated groups with the PLA2 fractions Lys 49 and Asp 49 of the venom. The whole venom (10mg/mL) and the fractions PLA2 Lys 49 and Asp 49 of B. erythromelas (5mg/mL) were added into the system 30 min after the beginning of each experiment. The parameters studied included perfusion pressure (PP), renal vascular resistance (RVR), glomerular filtration rate (GFR), urinary flow (UF), percent sodium, potassium and chloride tubular transport (%TNa+, %TK+ and %TCl-), percent sodium, potassium and chloride proximal transport (%pTNa+, %pTK+ and %pTCl-), sodium, potassium and chloride excretion (ENa+, EK+ e ECl-) and osmotic clearance (Cosm) (p< 0.05*). The control group perfused with albumin was functionally stable for over 120 min. The infusion of venom caused a significant increase in UF, ENa+, ECl- and Cosm and a decreased in PP, RVR, %TNa+, %TK+, %TCl-, %pTNa+, %pTK+ and %pTCl-. The GFR and the EK+ decreased at 60 min and increased at 90 and 120 min when compared with control group. The infusion of Lys 49 caused a significant increase in PP, UF, ENa+, EK+ and Cosm and decreased the GFR and the %TNa+ when compared with control group. Lys49 did not modify the others functional kidney parameters. The infusion of Asp 49 only modify the functional kidney parameters %pTK+ (decreased) and EK+ (increase) when compared with control group. Lys 49 showed a similar effect at whole venom in parameters UF, %TNa+, ENa+, EK+ and Cosm and Asp 49 in parameters %pTK+ and EK+. The histological analysis showed a mild amount of a proteinaceous substance in the renal tubules and glomeruli of kidneys perfused with the venom, Lys 49 and Asp 49, as well as focal areas of apoptosis/necrosis in perfused kidneys with Lys 49 e Asp 49. MDCK cells were cultured in RPMI 1640 medium supplemented with 10% vv fetal bovine serum and then assessed in the presence of the whole venom, Lys 49 and Asp 49 of B. erythromelas in the concentrations (100; 50; 25; 12.5; 6.25 and 3.125mg/mL). The analysis of cytotoxic effects on MDCK cells was performed by MTT method. The venom promoted cytotoxic effect in the concentrations of 50 and 100mg/mL (IC50 =93.31mg/mL). Lys 49 promoted cytotoxic effect in the concentrations of 6.25; 12.5; 25; 50 and 100 mg/mL (IC50 = 38.29mg/mL). Asp 49 promoted cytotoxic effect in the concentrations of 50 and 100 mg/mL (IC50 = 158mg/mL). Also the levels of lactic dehydrogenase (LDH) were measured and no significant increase was observed with whole venom and Asp 49. Lys 49 promoted a significant increase in the levels of LDH only in the concentration of 100mg/mL. After culture of MDCK cells with the whole venom, at concentrations of 46.65 and 23.32Âg/mL, was performed the real time polymerase chain reaction for evaluation of pro (Caspase-3, Caspase-8 and Bax) and antiapoptotic (Bcl-XL and Mcl-1) genes expression. The evaluation of pro and antiapoptotic genes expression with Lys 49 e Asp 49 did not realized. In the expression of pro-apoptotic genes the whole venom caused increase of caspase-3 at concentration of 23.32Âg/mL and of caspase-8 at concentrations of 46.65 and 23.32Âg/mL, when compared with negative (PBS) and positive (DOXO) controls and decreased the expression of Bax in both concentrations. In the expression of anti-apoptotic genes the whole venom caused significant induction of Mcl-1 only at a concentration of 46.65Âg/mL and did not modify the expression of Bcl-XL, when compared with the negative control. The venom and the fractions PLA2 Lys 49 e Asp 49 of Bothropoides erythromelas is able to promote significant effects on renal function parameters and on MDCK cells, with indications of cell death by apoptosis through the extrinsic pathway.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-01-12T15:47:41Z No. of bitstreams: 1 EmanuellyBernardesDeOliveiraDaSilva_DISSERT.pdf: 1659174 bytes, checksum: 5200a1d5bddcb328c2b32c3aac297d85 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-01-20T14:20:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EmanuellyBernardesDeOliveiraDaSilva_DISSERT.pdf: 1659174 bytes, checksum: 5200a1d5bddcb328c2b32c3aac297d85 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T14:20:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EmanuellyBernardesDeOliveiraDaSilva_DISSERT.pdf: 1659174 bytes, checksum: 5200a1d5bddcb328c2b32c3aac297d85 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Entre os tipos mais incidentes de c?ncer no Brasil, o c?ncer cervical ? o quarto tipo mais comum entre as mulheres, com mais de 99,7% dos casos associados ? infec??o pelo Papilomasv?rus Humano (HPV), tipos 16 e 18 principalmente. A resposta limitada dos tumores malignos ? quimioterapia convencional levou ao desenvolvimento de novas estrat?gias farmacol?gicas baseadas no conhecimento de novos alvos terap?uticos. Considerando a diversidade dos escorpi?es e serpentes da fauna brasileira, esses animais pe?onhentos possuem um potencial farmacol?gico em seu veneno, sendo de grande interesse na pesquisa e desenvolvimento de novos f?rmacos a partir do veneno bruto ou fra??es. Desta forma, frente a esses venenos abre-se uma expectativa na busca de novos compostos com a??o terap?utica no tratamento do c?ncer. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citot?xico e apopt?tico do veneno bruto do escorpi?o Tityus serrulatus (TSR) e das serpentes Bothrops jararaca (BJ) e Bothrops erythromelas (BE) em linhagens de carcinoma cervical SiHa e HeLa, tranformadas pelos HPV 16 e 18, respectivamente. Em rela??o ? viabilidade celular pelo m?todo de MTT, obteve-se citotoxicidade nas linhagens tumorais desafiadas com os venenos das serpentes BJ e BE quando comparada ao veneno TSR. De forma similar, o processo de morte celular, avaliada por citometria de fluxo, foi superior quando desafiados com BJ e BE. Portanto, os venenos Bothrops demonstraram uma a??o citot?xica e apopt?tica nas linhagens estudadas, de maneira dose tempo-resposta dependentes. O presente trabalho sugere, pela primeira vez, um papel citot?xico e apopt?tico dos venenos das serpentes B. jararaca e B. erythromelas em linhagens de carcinoma cervical. / Among the types of cancer incidents in Brazil, cervical cancer is the fourth most common type among women, with more than 99.7% of cases associated with infection by human papillomaviruses (HPV) types 16 and 18 mainly. The limited of malignant tumors to conventional chemotherapy response led to the development of new pharmacological strategies based on knowledge of new therapeutic targets. Considering the diversity of scorpions and snakes of Brazilian fauna, these poisonous animals have a pharmacological potential in their venom, being of great interest in the new drugs research and development from raw or fractions poison. Thus, faced with these poisons opens an expectation in the search for new compounds with therapeutic action in the treatment of cancer. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic effect and apoptosis of the poisons of the scorpion Tityus serrulatus (TSR), Bothrops jararaca (BJ) and Bothrops erythromelas (BE) in cervical carcinoma cell lines SiHa and HeLa, tranform by the respective HPV 16 and 18. In relation to cell viability by MTT method was obtained challenged cytotoxicity in tumor cell lines with the poisons of snakes BJ and BE compared to the TSR poisons. Similarly, the process of cell death was greater when challenged with BJ and BE. Therefore, Bothrops poisons showed a cytotoxic and apoptotic action on the lines studied, dose-dependent and time-response manner. This study suggests for the first time, a cytotoxic and apoptotic role of poisons of snakes B. jararaca and B. erythromelas in cervical carcinoma cell lines.